用于治疗COVID-19的ACE2靶向组合物和方法与流程 专利技术说明

有机化合物处理,合成应用技术用于治疗covid-19的ace2靶向组合物和方法1.本技术要求以下的权益：2020年4月13日提交的美国临时申请no.63/008,988；2020年4月29日提交的美国临时申请no.63/017,159；2020年5月22日提交的美国临时申请no.63/028,627；2020年5月22日提交的美国临时申请no.63/028,639；2020年5月26日提交的美国临时申请no.63/029,765；和2020年5月26日提交的美国临时申请no.63/029,772，所有这些的内容均通过引用并入本文。2.在本技术通篇，引用了多个出版物。这些出版物的公开内容在此均通过引用并入本技术中，以便更全面地描述本发明所属领域的技术水平。3.序列表4.本技术包含已经以ascii格式电子提交并且在此通过引入整体并入的序列表。在2021年5月21日创建的所述ascii拷贝被命名为maddon-4pct_sl.txt并且大小为27,481字节。技术领域5.本发明涉及可用于治疗性和预防性地解决sars-cov-2感染的单克隆抗体和相关的工程改造病毒。背景技术：6.自covid-19爆发以来，全世界已经(并将继续)集中致力于开发有效的抗sars-cov-2治疗性和预防性措施。迄今为止，这种初期的努力已经产生了一些有效的疫苗，但在其他方面几乎没有成功。至少由于这个原因，迫切需要有效的方法来治疗和预防sars-cov-2感染。技术实现要素：7.本发明提供了单克隆抗体，其(i)与人血管紧张素转换酶2(human angiotensin converting enzyme 2，hace2)的胞外部分特异性地结合；(ii)特异性地抑制sars-cov-2与hace2的胞外部分的结合；并且(iii)不显著抑制hace2切割血管紧张素ii和/或基于mca的合成肽的能力。8.本发明还提供了分离的核酸分子，其编码(i)本发明的单克隆抗体的完整轻链或轻链的一部分，和/或(ii)本发明的单克隆抗体的完整重链或重链的一部分。本发明还提供了重组载体，其包含与rna转录的启动子有效连接的本发明的核酸分子。本发明还提供了宿主载体系统，其在合适的宿主细胞中包含一种或更多种本发明的载体。9.本发明还提供了组合物，其包含(i)本发明的单克隆抗体，和(ii)可药用载体。10.本发明还提供了用于降低人对象被sars-cov-2感染的可能性的方法，其包括向所述对象施用预防有效量的本发明的单克隆抗体。本发明还提供了用于治疗被sars-cov-2感染的人对象的方法，其包括向所述对象施用治疗有效量的本发明的单克隆抗体。11.本发明提供了(a)重组aav载体，其包含编码本发明的单克隆抗体的重链和/或轻链的核酸序列；(b)重组aav颗粒，其包含本发明的重组aav载体；和(c)组合物，其包含(i)多个本发明的aav颗粒和(ii)可药用载体。12.本发明提供了(a)用于降低人对象被sars-cov-2感染的可能性的方法，其包括向所述对象施用预防有效量的本发明的aav颗粒；和(b)用于治疗被sars-cov-2感染的人对象的方法，其包括向所述对象施用治疗有效量的本发明的aav颗粒。13.最后，本发明提供了(a)第一药盒，其在分开的隔室中包含(i)稀释剂和(ii)本发明的单克隆抗体的混悬剂；(b)第二药盒，其在分开的隔室中包含(i)稀释剂和(ii)冻干形式的本发明的单克隆抗体；和(c)第三药盒，其在分开的隔室中包含(i)稀释剂和(ii)多个本发明的重组aav颗粒的混悬剂。附图说明14.图115.该图示出了hace2的氨基酸序列，以及编码它的核酸序列(tipnis,et al.)。附图按展示顺序分别公开了seq id no 11至12。16.图217.该图示出了人tmprss2(genbank登录号u75329)的核苷酸和预测的氨基酸序列。潜在的起始甲硫氨酸密码子和翻译终止密码子是粗体并带有下划线。捕获序列带有下划线(例如从第740位核苷酸延伸至955位的捕获序列hmc26a01)。所预测多肽的不同结构域带有虚下划线(例如srcr结构域从第148位氨基酸残基延伸至第242位)。内含子的位置用箭头表示。(图和文本改编自a.paoloni-giacobino,et al.的图1。)附图按展示顺序分别公开了seq id no 13至14。18.图319.该图示出了sars-cov-2rbd的特征。其示出了sars-cov-2、sars-cov和mers-cov突刺(s)蛋白的rbd的多重序列比对。genbank登录号为qhr63250.1(sars-cov-2s)、ay278488.2(sars-cov s)和afs88936.1(mers-cov s)。sars-cov-2与sars-cov之间的可变氨基酸残基以深灰色(青色)突出显示，并且sars-cov-2、sars-cov与mers-cov之中的保守残基以浅灰色(黄色)突出显示。星号代表完全保守残基，冒号代表高度保守残基，并且句号代表低保守残基。(图和文本改编自tai,et al.的图1(a))。附图按展示顺序分别公开了seq id no 15至17。20.图421.该图示出了包含在aav抗体载体中的表达盒的示意图。具体实施方式22.本发明提供了用于抑制和治疗sars-cov-2感染的某些抗体和编码单克隆抗体的重组病毒载体、相关病毒颗粒和相关方法。23.定义24.在本技术中，使用的某些术语将具有如下所述的含义。25.就单克隆抗体而言，本文中使用的“施用”意指通过任何适合于该目的的已知方法将抗体递送至对象的身体。具体的施用方式包括但不限于静脉内施用、肌内施用和皮下施用。类似地，就重组病毒颗粒而言，本文中使用的“施用”意指通过任何已知的适合于该目的的方法将颗粒递送至对象的身体。具体的施用方式包括但不限于静脉内施用、肌内施用和皮下施用。26.在本发明中，可使用一种或更多种常规使用的可药用载体来配制单克隆抗体。这样的载体是本领域技术人员公知的。例如，可注射药物递送系统包括含盐(例如，氯化钠和磷酸钠)的溶液。在一个具体实施方案中，可注射药物递送系统包含在多用途小瓶中的冻干粉末形式的单克隆抗体(例如，100mg、200mg、300mg、400mg或500mg)，然后将其在例如0.9％氯化钠注射液(usp)中重构和稀释。在另一个具体实施方案中，可注射药物递送系统包含在一次性小瓶中的混悬剂形式的单克隆抗体(例如，100mg/50ml、200mg/50ml、300mg/50ml、400mg/50ml或500mg/50ml)，然后将其取出并在例如0.9％氯化钠注射液(usp)中稀释。可注射药物递送系统还包括混悬剂、凝胶剂、微球和聚合物注射剂，并且可包含赋形剂，例如溶解度改变剂(例如，乙醇、丙二醇和蔗糖)和聚合物(例如，聚己内酯和plga)。27.另外，在本发明中，可使用一种或更多种常规使用的可药用载体来配制重组病毒颗粒。这样的载体是本领域技术人员公知的。例如，可注射药物递送系统包括含盐(例如，氯化钠和磷酸钠)和表面活性剂(例如，泊洛沙姆(poloxamer))的溶液。在一个具体实施方案中，可注射药物递送系统包含氯化钠(例如，180mm)、磷酸钠(例如，10mm)和泊洛沙姆(例如，0.001％泊洛沙姆188)的水溶液。可注射药物递送系统还包括混悬剂、凝胶剂、微球和聚合物注射剂，并且可包含赋形剂，例如溶解度改变剂(例如，乙醇、丙二醇和蔗糖)和聚合物(例如，聚己内酯和plga)。28.本文中使用的，术语“抗体”包括但不限于(a)包含两条重链(即h链，例如μ、δ、γ、α和ε)和两条轻链(即l链，例如λ和κ)并且识别抗原的免疫球蛋白分子；(b)多克隆和单克隆免疫球蛋白分子；(c)其单价(例如fab)和二价片段，以及(d)其双特异性形式。免疫球蛋白分子可来源于任何通常已知的类别，包括但不限于iga、分泌型iga、igg和igm。igg亚类也是本领域技术人员公知的，并且包括但不限于人igg1、igg2、igg3和igg4(在本发明中，优选igg2、igg4或igg2与igg4的组合)。抗体可以是天然存在的和非天然存在的二者。此外，抗体包括嵌合抗体、全合成抗体、单链抗体(例如，scfv)及其片段。抗体可包含例如全部或部分恒定区(例如fc区)和可变区，或者仅包含可变区(负责抗原结合)。抗体可以是人的、人源化的、嵌合的或非人的。用于设计和制备人抗体和人源化抗体的方法是公知的(参见，例如，chiu和gilliland；lafleur,et al.)。抗体包括但不限于本文中定义的本发明的单克隆抗体。29.本文中使用的，“cdr3”应意指互补决定区3。30.本文中使用的关于抗体的“效应物功能”包括但不限于抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity，adcc)、抗体依赖性细胞吞噬作用(antibody-dependent cellular phagocytosis，adcp)和补体结合(complement fixation)。31.本文中使用的，本发明的单克隆抗体与包含给定氨基酸残基的hace2“表位”结合，前提是例如该残基直接接触(例如，通过氢键)抗体互补位中的至少一个氨基酸残基。32.本文中使用的，已经“暴露于”sars-cov-2的对象包括，例如，经历高风险事件的对象(例如，他/她中的一者接触了受感染人对象的体液，例如通过吸入含病毒唾液的飞沫(droplet)或接触含病毒的表面)。在一个实施方案中，这种暴露发生在接受对象预防前两周、一周、五天、四天、三天、两天、一天、六小时、两小时、一小时或30分钟。33.本文中使用的，“人血管紧张素转换酶2”在本文中也称为“hace2”，应意指(i)具有图1中所示的氨基酸序列的蛋白质；或(ii)其天然存在的人变体。34.本文中使用的，“人对象”可以是任何年龄、性别或共病(co-morbidity)状态。在一个实施方案中，对象是男性，而在另一个中，对象是女性。在另一个实施方案中，对象具有共病(例如，患有糖尿病、哮喘和/或心脏病)。在另一个实施方案中，对象不具有共病。在另一个实施方案中，对象比60岁更年幼。在另一个实施方案中，对象为至少60岁、至少65岁、至少70岁、至少75岁、至少80岁、至少85岁或至少90岁。35.本文中使用的，“人tmprss2”在本文中也称为“htmprss2”，应意指(i)具有图2中所示的氨基酸序列的蛋白质；或(ii)其天然存在的人变体。人tmprss2在本领域中也称为epitheliasin和跨膜蛋白酶丝氨酸2。htmprss2切割sars-cov-2s蛋白。不希望被任何特定的htmprss2功能的理论所束缚，认为htmprss2在“s1/s2”切割位点(即氨基酸残基r685与s686之间)和“s2”切割位点(即氨基酸残基r815与s816之间)处切割sars-cov-2s蛋白。参见，例如，coutard,et al.。36.本文中使用的，如果病毒存在于对象中，则对象被病毒“感染”。存在于对象中包括但不限于，存在于对象的至少一些细胞中，和/或存在于对象的至少一些细胞外液中。在一个实施方案中，存在于对象细胞中的病毒正在复制。暴露于病毒的对象可能被或可能不被病毒感染。37.在igg4中“抑制半抗体(half antibody)形成”的重链修饰例如在c.dumet,et al.中描述。它们包括但不限于以下，并根据eu索引进行编号：(i)s228p；(ii)突变组合s228p/r409k；和(iii)k447del和突变组合s228p/k447del。解决重链错配问题的相关重链修饰包括，例如，在m.godar,et al.和wo/1996/027011中描述的“结进孔”(knobs-into-holes，kih)修饰。38.就单克隆抗体而言，本文中使用的“长血清半衰期”是至少五天的血清半衰期(优选如在人体内测量，但其也可例如在小鼠、大鼠、兔和猴(例如恒河猴(rhesus monkey)、食蟹猴(cynamolgous macaques)和狨猴(marmosets))中测量)。在一个优选实施方案中，如果单克隆抗体的半衰期为至少15天、至少20天、至少25天、至少30天、至少35天、至少40天、至少45天、至少50天、至少55天、至少60天、至少65天、至少70天、至少75天、至少80天、至少85天、至少90天、至少95天或至少100天，则其具有长血清半衰期。在另一个优选实施方案中，如果单克隆抗体的半衰期为15天至20天、20天至25天、25天至30天、30天至35天、35天至40天、40天至45天、45天至50天、50天至55天、55天至60天、60天至65天、65天至70天、70天至75天、75天至80天、80天至85天、85天至90天、90天至95天、95天至100天，或超过100天，则其具有长血清半衰期。c.dumet,et al.和g.j.robbie,et al中描述了相对于相应的野生型igg重链提高半衰期的igg重链修饰的一些实例(例如提高抗体与fcrn结合的那些)。它们包括但不限于以下，并根据eu索引进行编号：(i)第252、254、256、309、311、433、434和/或436位的点突变，包括“yte”突变组合m252y/s254t/t256e(美国专利no.7,083,784)(ii)“ls”突变组合m428l/n434s(wo/2009/086320)；(iii)“ql”突变组合t250q/m428l；和(iv)突变组合m428l/v308f和q311v/n434s。39.本文中使用的，具有“低效应物功能”的单克隆抗体包括但不限于(i)不具有效应物功能(例如，由于不具有fc结构域)的单克隆抗体，和(ii)具有拥有比野生型igg1抗体的效应物功能更低的效应物功能的部分(例如，经修饰fc结构域)的单克隆抗体。具有低效应物功能的单克隆抗体包括，例如，单克隆igg4抗体(例如，具有重链的单克隆igg4抗体，所述重链被工程改造以相对于野生型igg4重链降低效应物功能)。c.dumet,et al.中描述了相对于野生型igg4重链降低效应物功能的igg4重链修饰的一些实例。它们包括但不限于以下，并根据eu索引进行编号：(i)l235e(wo/1994/028027)；(ii)l235a、f234a和g237a(wo/1994/029351和wo/1995/026403)；(iii)d265a(美国专利no.7,332,581)；(iv)l328替换、a330r和f243l(wo/2004/029207)；(v)igg2/igg4形式，其中igg2(多至t260)与igg4连接(wo/2005/007809)；(vi)f243a/v264a组合(wo/2011/149999)；(vii)e233p/f234a/l235a/g236del/g237a组合(wo/2017/079369)；和(viii)s228p/l235e组合。40.本文中使用的hace2的“正常功能”包括但不限于以下中的至少一种：(i)将血管紧张素ii转化为血管紧张素-(1-7)(即，通过酶促切割血管紧张素ii的c端苯丙氨酸残基以形成血管紧张素-(1-7))的能力；(ii)切割[des-arg]-缓激肽(也称为[des-arg9]-缓激肽)的能力；(iii)水解aβ-43产生aβ-42的能力；(iv)将血管紧张素i转化为血管紧张素-(1-9)的能力；(v)切割神经降压素(neurotensin)的能力；(vi)切割运动升压素(kinetensin)的能力；(vii)切割基于mca的合成肽的能力；(viii)切割艾帕素-13(apelin-13)的能力；和(ix)切割强啡肽(dynorphin)a1-13的能力。在一个实施方案中，hace2的正常功能意指(i)将血管紧张素ii转化为血管紧张素-(1-7)的能力；(ii)切割[des-arg]-缓激肽的能力；(iii)水解aβ-43产生aβ-42的能力；(iv)将血管紧张素i转化为血管紧张素-(1-9)的能力；(v)切割神经降压素的能力；(vi)切割运动升压素的能力；(vii)切割基于mca的合成肽的能力；(viii)切割艾帕素-13的能力；和(ix)切割强啡肽a1-13的能力。在一个优选实施方案中，hace2的正常功能意指将血管紧张素ii转化为血管紧张素-(1-7)的能力。举例来说，根据已知方法使用已知试剂，hace2活性可使用血管紧张素ii作为底物来测量，以产生血管紧张素-(1-7)，如以下实施例中所述。hace2活性也可使用基于mca的合成肽(例如，mc-ala/dnp荧光共振能量转移(fluorescence resonance energy transfer，fret)肽，其在被hace2切割后产生mc-ala)根据已知方法使用已知试剂来测量，如以下实施例中所述。[0041]本文中使用的，本发明的单克隆抗体的“预防有效量”包括但不限于(i)5mg、10mg、15mg、20mg、25mg、30mg、35mg、40mg、45mg、50mg、60mg、70mg、80mg、90mg、100mg、150mg、200mg、250mg、300mg、350mg、400mg、450mg或500mg；(ii)5mg至20mg、20mg至50mg、50mg至100mg、100mg至200mg、200mg至300mg、300mg至400mg或400mg至500mg；(iii)1mg/kg、2mg/kg、3mg/kg、4mg/kg、5mg/kg、6mg/kg、7mg/kg、8mg/kg、9mg/kg、10mg/kg、15mg/kg、20mg/kg、25mg/kg、30mg/kg、35mg/kg、40mg/kg、45mg/kg或50mg/kg；或(iv)1mg/kg至10mg/kg、10mg/kg至20mg/kg、20mg/kg至30mg/kg、30mg/kg至40mg/kg或40mg/kg至50mg/kg。在优选实施方案中，预防有效量的单克隆抗体以单一的一次性剂量施用。在另一个实施方案中，预防有效量的单克隆抗体在数天、数周或数月的时间内以两个或更多个剂量施用(例如，每天两次，持续一或两周；每天一次，持续一或两周；每隔一天，持续两周；每周三次，持续两周；每周两次，持续两周；每周一次，持续两周；两次施用间隔两周；每月一次；每两个月一次；每三个月一次；每四个月一次；每年两次；或每年一次)。[0042]本文中使用的，本发明的重组病毒颗粒(例如，重组aav颗粒)的“预防有效量”包括但不限于(i)每kg体重1×1010至5×1010个颗粒(也称为“病毒基因组”或“vg”)、5×1010至1×1011个颗粒/kg、1×1011至5×1011个颗粒/kg、5×1011至1×1012个颗粒/kg、1×1012至5×1012个颗粒/kg、5×1012至1×1013个颗粒/kg、1×1013至5×1013个颗粒/kg、或5×1013至1×1014个颗粒/kg；或(ii)1×1010个颗粒/kg、5×1010个颗粒/kg、1×1011个颗粒/kg、5×1011个颗粒/kg、1×1012个颗粒/kg、5×1012个颗粒/kg、1×1013个颗粒/kg、5×1013个颗粒/kg或1×1014个颗粒/kg、5×1014个颗粒/kg或1×1015个颗粒/kg。在优选实施方案中，预防有效量的病毒颗粒以单一的一次性剂量施用。在另一个实施方案中，预防有效量的病毒颗粒在数月或数年的时间内以两个或更多个剂量施用。[0043]本文中使用的，“重组aav(腺相关病毒)颗粒”，也称为“raav颗粒”，包括但不限于aav衣壳蛋白(例如，vp1、vp2和/或vp3)和包含编码外源蛋白(例如，抗体重链)的核酸的载体，其以允许aav颗粒感染靶细胞的方式位于一对aav反向末端重复序列之间。优选地，重组aav颗粒不能够在其靶细胞内复制。aav血清型可以是适用于基因治疗的任何aav血清型，例如aav1、aav2、aav3、aav4、aav5、aav6、aav7、aav8、aav9、aav10、aavrh10、aav11、aav12、lk01、lk02或lk03。[0044]本文中使用的，“降低人对象被病毒感染的可能性”包括但不限于将这样的可能性降低至少10％、至少20％、至少30％、至少40％、至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％、至少95％或至少99％。优选地，降低人对象被病毒感染的可能性意指防止对象被病毒感染。类似地，“降低”人对象出现病毒感染的症状的“可能性”包括但不限于将这样的可能性降低至少10％、至少20％、至少30％、至少40％、至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％、至少95％或至少99％。优选地，降低人对象出现病毒感染的症状的可能性意指防止对象出现症状。[0045]本文中使用的，如果(i)单克隆抗体抑制完整hace2(即，包括胞外部分、跨膜部分和胞内部分的全长hace2)切割底物的能力小于90％,和/或(ii)单克隆抗体抑制hace2(例如，重组可溶性hace2)的胞外部分切割底物的能力小于90％，则其不“显著地抑制hace2切割底物的能力”。在一个实施方案中，如果单克隆抗体抑制完整hace2切割底物的能力小于90％，则其不显著抑制hace2切割底物的能力。在另一个实施方案中，如果单克隆抗体抑制hace2的胞外部分切割底物的能力小于90％，则其不显著抑制hace2切割底物的能力。优选地，如果单克隆抗体抑制hace2(即完整hace2和/或其胞外部分)切割底物的能力小于80％、小于70％、小于60％、小于50％、小于40％、小于30％、小于20％、小于10％、小于5％或小于1％，则其不显著抑制该能力。举例来说，如果单克隆抗体抑制hace2(即完整hace2和/或其胞外部分)切割血管紧张素ii的能力小于90％、小于80％、小于70％、小于60％、小于50％、小于40％、小于30％、小于20％、小于10％、小于5％或小于1％，则其不显著抑制该能力。再举例来说，如果单克隆抗体抑制hace2(即完整hace2和/或其胞外部分)切割des-arg-缓激肽的能力小于90％、小于80％、小于70％、小于60％、小于50％、小于40％、小于30％、小于20％、小于10％、小于5％或小于1％，则其不显著抑制该能力。再举例来说，如果单克隆抗体抑制hace2(即完整hace2和/或其胞外部分)切割神经降压素的能力小于90％、小于80％、小于70％、小于60％、小于50％、小于40％、小于30％、小于20％、小于10％、小于5％或小于1％，则其不显著抑制该能力。再举例来说，如果单克隆抗体抑制hace2(即完整hace2和/或其胞外部分)切割运动升压素的能力小于90％、小于80％、小于70％、小于60％、小于50％、小于40％、小于30％、小于20％、小于10％、小于5％或小于1％，则其不显著抑制该能力。再举例来说，如果单克隆抗体抑制hace2(即完整hace2和/或其胞外部分)切割基于mca的合成肽(优选mca-apk(dnp))的能力小于90％、小于80％、小于70％、小于60％、小于50％、小于40％、小于30％、小于20％、小于10％、小于5％或小于1％，则其不显著抑制该能力。再举例来说，如果单克隆抗体抑制hace2(即完整hace2和/或其胞外部分)切割艾帕素-13的能力小于90％、小于80％、小于70％、小于60％、小于50％、小于40％、小于30％、小于20％、小于10％、小于5％或小于1％，则其不显著抑制该能力。再举例来说，如果单克隆抗体抑制hace2(即完整hace2和/或其胞外部分)切割强啡肽a1-13的能力小于90％、小于80％、小于70％、小于60％、小于50％、小于40％、小于30％、小于20％、小于10％、小于5％或小于1％，则其不显著抑制该能力。[0046]本文中使用的，如果单克隆抗体具有以下中的至少一种，则其与hace2的胞外部分“特异性地结合”：(i)以大于其与任何其他人细胞表面蛋白结合的亲和力与hace2的胞外部分结合；或(ii)以至少500μm的亲和力与hace2的胞外部分结合。优选地，如果单克隆抗体执行上述(i)和(ii)两项，则其与hace2的胞外部分特异性地结合。在一个优选实施方案中，单克隆抗体以至少100μm、至少10μm、至少1μm、至少500nm、至少300nm、至少200nm、至少100nm、至少50nm、至少20nm、至少10nm、至少5nm、至少1nm、至少0.5nm、至少0.1nm、至少0.05nm或至少0.01nm的亲和力与hace2(即与其胞外部分)结合。[0047]本文中使用的，如果单克隆抗体具有以下中的至少一种，则其“特异性地抑制”sars-cov-2与hace2的胞外部分的结合：(i)降低这样的结合大于其降低sars-cov-2与任何其他人细胞表面蛋白的结合；或(ii)使这样的结合降低至少两倍。优选地，如果单克隆抗体执行上述(i)和(ii)两项，则其特异性地抑制sars-cov-2与hace2的胞外部分的结合。在一个优选实施方案中，单克隆抗体使sars-cov-2与hace2的胞外部分的结合降低至少10、至少20、至少50、至少100、至少1,000、至少10,000、至少100,000或至少1,000,000倍。[0048]本文中使用的，如果单克隆抗体具有以下中的至少一种，则其“特异性地抑制”sars-cov-2s1蛋白受体结合结构域片段(也称为rbd(例如，由s氨基酸残基331至524组成的蛋白质))与hace2的胞外部分的结合：(i)降低这样的结合大于其降低sars-cov-2s1蛋白受体结合结构域片段与任何其他人细胞表面蛋白的结合；或(ii)使这样的结合降低至少两倍。优选地，如果单克隆抗体执行上述(i)和(ii)两项，则其特异性地抑制sars-cov-2s1蛋白受体结合结构域片段与hace2的胞外部分的结合。在一个优选实施方案中，单克隆抗体使sars-cov-2s1蛋白受体结合结构域片段与hace2的胞外部分的结合降低至少10、至少20、至少50、至少100、至少1,000、至少10,000、至少100,000或至少1,000,000倍。[0049]本文中使用的，如果单克隆抗体具有以下中的至少一种，则其“特异性地抑制”sars-cov-2进入hace2+/htmprss2+人细胞：(i)降低这样的进入大于其降低sars-cov-2进入hace2-/htmprss2-人细胞；或(ii)使这样的进入降低至少两倍。优选地，如果单克隆抗体执行上述(i)和(ii)两项，则其特异性地抑制sars-cov-2进入hace2+/htmprss2+人细胞。在一个优选实施方案中，单克隆抗体使sars-cov-2进入hace2+/htmprss2+人细胞降低至少10、至少20、至少50、至少100、至少1,000、至少10,000、至少100,000或至少1,000,000倍。[0050]本文中使用的，如果单克隆抗体具有以下中的至少一种，则其“特异性地抑制”携带sars-cov-2s蛋白的假病毒(例如复制缺陷型sars-cov-2假病毒)进入hace2+/htmprss2+人细胞：(i)降低这样的进入大于其降低携带sars-cov-2s蛋白的假病毒进入hace2-/htmprss2-人细胞；或(ii)使这样的进入降低至少两倍。优选地，如果单克隆抗体执行上述(i)和(ii)两项，则其特异性地抑制携带sars-cov-2s蛋白的假病毒进入hace2+/htmprss2+人细胞。在一个优选实施方案中，单克隆抗体使携带sars-cov-2s蛋白的假病毒进入hace2+/htmprss2+人细胞降低至少10、至少20、至少50、至少100、至少1,000、至少10,000、至少100,000或至少1,000,000倍。[0051]本文中使用的，术语“对象”包括但不限于哺乳动物，例如人、非人灵长类、狗、猫、马、绵羊、山羊、牛、兔、猪、仓鼠、大鼠和小鼠。本发明的方法是针对这些非人实施方案设想的，因为进行必要的修改其针对本发明中的人对象。[0052]本文中使用的，如果人对象在合适的潜伏期之后表现出一种或更多种已知在sars-cov-2感染的人对象中出现的症状，则该对象具有sars-cov-2感染的“症状”。这样的症状包括但不限于对象中可检测的sars-cov-2，以及患有covid-19的患者所表现出的那些症状。covid-19相关症状包括但不限于发热、咳嗽、呼吸短促、持续疼痛或胸部压力、新的意识模糊或无法唤醒和/或嘴唇或面部发青。[0053]本文中使用的，“基于mca的合成肽”是在一端附着有mca(即(7-甲氧基香豆素-4-基)乙酰基)部分并且在另一端附着有荧光猝灭部分(例如2,4-二硝基苯基，其也称为dnp或dnp)的肽。在其酶促切割(例如，通过hace2)之后，经切割肽的含mca的部分从含荧光猝灭部分的部分中释放出来。这进而导致目前未猝灭的含mca的部分发射更强的可检测荧光信号。因此，可被hace2切割的基于mca的合成肽可作为底物，允许对hace2活性及其抑制进行基于荧光的简易测量。在一个实施方案中，基于mca的合成肽包含共有序列pro-x(1至3个残基)-pro-疏水残基(例如，mca-pro-x(1至3个残基)-pro-疏水残基-dnp)，由此hace2在脯氨酸和疏水残基之间切割。在另一个实施方案中，基于mca的合成肽是mca-yvadapk-dnp(也称为mca-yvadapk(dnp))(seq id no：1)。在一个优选实施方案中，基于mca的合成肽是mca-apk-dnp(也称为mca-apk(dnp))。在另一个优选实施方案中，基于mca的合成肽是在下述的390ace2活性测定试剂盒*荧光测定*(anaspec)中使用的mc-ala/dnp荧光共振能量转移(fret)肽。在另一个优选实施方案中，基于mca的合成肽是在下述血管紧张素ii转化酶(angiotensin ii converting enzyme，ace2)活性测定试剂盒(荧光测定)(biovision)中使用的ace2底物。[0054]本文中使用的，本发明的单克隆抗体的“治疗有效量”包括但不限于(i)5mg、10mg、15mg、20mg、25mg、30mg、35mg、40mg、45mg、50mg、60mg、70mg、80mg、90mg、100mg、150mg、200mg、250mg、300mg、350mg、400mg、450mg或500mg；(ii)5mg至20mg、20mg至50mg、50mg至100mg、100mg至200mg、200mg至300mg、300mg至400mg或400mg至500mg；1mg/kg、2mg/kg、3mg/kg、4mg/kg、5mg/kg、6mg/kg、7mg/kg、8mg/kg、9mg/kg、10mg/kg、15mg/kg、20mg/kg、25mg/kg、30mg/kg、35mg/kg、40mg/kg、45mg/kg或50mg/kg；或(iv)1mg/kg至10mg/kg、10mg/kg至20mg/kg、20mg/kg至30mg/kg、30mg/kg至40mg/kg或40mg/kg至50mg/kg。在优选实施方案中，治疗有效量的单克隆抗体以单一的一次性剂量施用。在另一个实施方案中，治疗有效量的单克隆抗体在数天、数周或数月的时间内以两个或更多个剂量施用(例如，每天两次，持续一或两周；每天一次，持续一或两周；每隔一天，持续两周；每周三次，持续两周；每周两次，持续两周；每周一次，持续两周；两次施用间隔两周；每月一次；每两个月一次；每三个月一次；每四个月一次；每年两次；或每年一次)。[0055]本文中使用的，主题重组病毒颗粒(例如，重组aav颗粒)的“治疗有效量”包括但不限于(i)每kg体重1×1010至5×1010个颗粒(也称为“病毒基因组”或“vg”)、5×1010至1×1011个颗粒/kg、1×1011至5×1011个颗粒/kg、5×1011至1×1012个颗粒/kg、1×1012至5×1012个颗粒/kg、5×1012至1×1013个颗粒/kg、1×1013至5×1013个颗粒/kg、或5×1013至1×1014个颗粒/kg；或(ii)1×1010个颗粒/kg、5×1010个颗粒/kg、1×1011个颗粒/kg、5×1011个颗粒/kg、1×1012个颗粒/kg、5×1012个颗粒/kg、1×1013个颗粒/kg、5×1013个颗粒/kg或1×1014个颗粒/kg、5×1014个颗粒/kg或1×1015个颗粒/kg。在优选实施方案中，治疗有效量的病毒颗粒以单一的一次性剂量施用。在另一个实施方案中，治疗有效量的病毒颗粒在数月或数年的时间内以两个或更多个剂量施用。[0056]本文中使用的，“治疗”患有病症的对象(例如，被sars-cov-2感染并且具有该感染的症状的对象)包括但不限于，(i)减缓、停止或逆转一种或更多种病症的症状的进展，(ii)减缓、停止或逆转这样的症状下的病症的进展，(iii)降低或消除该症状复发的可能性，和/或(iv)减缓该病症的进展、降低或消除该病症。在优选实施方案中，治疗患有病症的对象包括(i)逆转一种或更多种病症的症状的进展，(ii)逆转这样的症状下的病症的进展，(iii)防止该症状的复发，和/或(iv)消除该病症。对于被sars-cov-2感染但没有感染症状的对象，“治疗”该对象还包括，但不限于，降低该对象出现感染症状的可能性，并且优选地，防止该对象出现感染症状。[0057]本发明实施方案[0058]本发明提供了某些抗hace2单克隆抗体。本发明还提供了当将其引入对象时，导致这些抗体的长期表达的重组病毒颗粒(优选重组aav颗粒)。这些抗体和病毒颗粒允许预防和治疗sars-cov-2感染。本发明的重组病毒可以是任何适合于病毒介导的基因治疗的病毒，包括但不限于aav、腺病毒、甲病毒、疱疹病毒、逆转录病毒/慢病毒或痘苗病毒。[0059]特别地，本发明提供了单克隆抗体，其(i)与人血管紧张素转换酶2(hace2)的胞外部分特异性地结合；(ii)特异性地抑制sars-cov-2与hace2的胞外部分的结合(例如，通过sars-cov-2s1蛋白受体结合结构域的结合)；并且(iii)不显著抑制hace2切割血管紧张素ii和/或基于mca的合成肽的能力。[0060]本发明还提供了单克隆抗体，其(i)与人血管紧张素转换酶2(hace2)的胞外部分特异性地结合；(ii)特异性地抑制sars-cov-2与hace2的胞外部分的结合(例如，通过sars-cov-2s1蛋白受体结合结构域)；(iii)特异性地抑制sars-cov-2s1蛋白受体结合结构域片段(例如，由s氨基酸残基331至524组成的蛋白质)与hace2的胞外部分的结合；(iv)特异性地抑制sars-cov-2进入hace2+/htmprss2+人细胞；(v)特异性地抑制携带sars-cov-2s蛋白的假病毒(例如复制缺陷型sars-cov-2假病毒)进入hace2+/htmprss2+人细胞；并且(vi)不显著抑制hace2切割血管紧张素ii和/或基于mca的合成肽的能力。[0061]本发明还提供了单克隆抗体，其(i)与人血管紧张素转换酶2(hace2)的胞外部分特异性地结合；(ii)特异性地抑制sars-cov-2与hace2的胞外部分的结合(例如，通过sars-cov-2s1蛋白受体结合结构域)；(iii)特异性地抑制sars-cov-2s1蛋白受体结合结构域片段(例如，由s氨基酸残基331至524组成的蛋白质)与hace2的胞外部分的结合；(iv)特异性地抑制sars-cov-2进入hace2+/htmprss2+人细胞；并且(vi)不显著抑制hace2切割血管紧张素ii和/或基于mca的合成肽的能力。[0062]本发明还提供了单克隆抗体，其(i)与人血管紧张素转换酶2(hace2)的胞外部分特异性地结合；(ii)特异性地抑制sars-cov-2与hace2的胞外部分的结合(例如，通过sars-cov-2s1蛋白受体结合结构域)；(iii)特异性地抑制sars-cov-2s1蛋白受体结合结构域片段(例如，由s氨基酸残基331至524组成的蛋白质)与hace2的胞外部分的结合；(v)特异性地抑制携带sars-cov-2s蛋白的假病毒(例如复制缺陷型sars-cov-2假病毒)进入hace2+/htmprss2+人细胞；并且(vi)不显著抑制hace2切割血管紧张素ii和/或基于mca的合成肽的能力。[0063]本发明还提供了单克隆抗体，其(i)与人血管紧张素转换酶2(hace2)的胞外部分特异性地结合；(ii)特异性地抑制sars-cov-2与hace2的胞外部分的结合(例如，通过sars-cov-2s1蛋白受体结合结构域)；(iv)特异性地抑制sars-cov-2进入hace2+/htmprss2+人细胞；并且(vi)不显著抑制hace2切割血管紧张素ii和/或基于mca的合成肽的能力。[0064]本发明还提供了单克隆抗体，其(i)与人血管紧张素转换酶2(hace2)的胞外部分特异性地结合；(iii)特异性地抑制sars-cov-2s1蛋白受体结合结构域片段(例如，由s氨基酸残基331至524组成的蛋白质)与hace2的胞外部分的结合；(v)特异性地抑制携带sars-cov-2s蛋白的假病毒(例如复制缺陷型sars-cov-2假病毒)进入hace2+/htmprss2+人细胞；并且(vi)不显著抑制hace2切割血管紧张素ii和/或基于mca的合成肽的能力。[0065]上述六种单克隆抗体在本文中共同和单独地称为本发明的单克隆抗体。sars-cov-2假病毒及其制备和使用方法是已知的，sars-cov-2s1蛋白受体结合结构域(rbd)片段也是已知的。参见，例如shang,et al.和hoffman,et al.(cell 2020)。[0066]在一个优选实施方案中，本发明的单克隆抗体不显著抑制hace2切割血管紧张素ii(即将血管紧张素ii转化为血管紧张素-(1-7))的能力。这种抑制可根据以下实施例部分中的方法来测量。本发明该实施方案的一个具体实例是单克隆抗体，其(i)以50nm的亲和力与hace2的胞外部分结合；(ii)使sars-cov-2与hace2的胞外部分的结合降低100,000倍；并且(iii)抑制20％的hace2切割血管紧张素ii的能力。[0067]在第二实施方案中，本发明的单克隆抗体不显著抑制hace2切割des-arg-缓激肽的能力。这种抑制可根据以下实施例部分中的方法来测量。本发明该实施方案的一个具体实例是单克隆抗体，其(i)以50nm的亲和力与hace2的胞外部分结合；(ii)使sars-cov-2与hace2的胞外部分的结合降低100,000倍；并且(iii)抑制20％的hace2切割des-arg-缓激肽的能力。[0068]在第三实施方案中，本发明的单克隆抗体不显著抑制hace2切割神经降压素的能力。这种抑制可根据以下实施例部分中的方法来测量。本发明该实施方案的一个具体实例是单克隆抗体，其(i)以50nm的亲和力与hace2的胞外部分结合；(ii)使sars-cov-2与hace2的胞外部分的结合降低100,000倍；并且(iii)抑制20％的hace2切割神经降压素的能力。[0069]在第四实施方案中，本发明的单克隆抗体不显著抑制hace2切割运动升压素的能力。这种抑制可根据以下实施例部分中的方法来测量。本发明该实施方案的一个具体实例是单克隆抗体，其(i)以50nm的亲和力与hace2的胞外部分结合；(ii)使sars-cov-2与hace2的胞外部分的结合降低100,000倍；并且(iii)抑制20％的hace2切割运动升压素的能力。[0070]在第五实施方案中，本发明的单克隆抗体不显著抑制hace2切割基于mca的合成肽的能力。这种抑制可根据以下实施例部分中的方法来测量。本发明该实施方案的一个具体实例是单克隆抗体，其(i)以50nm的亲和力与hace2的胞外部分结合；(ii)使sars-cov-2与hace2的胞外部分的结合降低100,000倍；并且(iii)抑制20％的hace2切割基于mca的合成肽(优选mca-apk(dnp))的能力。[0071]在第六实施方案中，本发明的单克隆抗体不显著抑制hace2切割艾帕素-13的能力。这种抑制可根据以下实施例部分中的方法来测量。本发明该实施方案的一个具体实例是单克隆抗体，其(i)以50nm的亲和力与hace2的胞外部分结合；(ii)使sars-cov-2与hace2的胞外部分的结合降低100,000倍；并且(iii)抑制20％的hace2切割艾帕素-13的能力。[0072]在第七实施方案中，本发明的单克隆抗体不显著抑制hace2切割强啡肽a1-13的能力。这种抑制可根据以下实施例部分中的方法来测量。本发明该实施方案的一个具体实例是单克隆抗体，其(i)以50nm的亲和力与hace2的胞外部分结合；(ii)使sars-cov-2与hace2的胞外部分的结合降低100,000倍；并且(iii)抑制20％的hace2切割强啡肽a1-13的能力。[0073]在本发明的另一个优选实施方案中，本发明的单克隆抗体与不包含正常功能所需的hace2氨基酸残基的表位结合。因此，在一个实施方案中，本发明的单克隆抗体不与hace2上包含选自以下的氨基酸残基的表位特异性地结合：arg273、his345、pro346、his374、glu375、his378、glu402、his505和tyr515。以下实施方案是示例性的。(i)本发明的单克隆抗体不与hace2上包含arg273的表位特异性地结合。(ii)本发明的单克隆抗体不与hace2上包含his345的表位特异性地结合。(iii)本发明的单克隆抗体不与hace2上包含pro346的表位特异性地结合。(iv)本发明的单克隆抗体不与hace2上包含his374的表位特异性地结合。(v)本发明的单克隆抗体不与hace2上包含glu375的表位特异性地结合。(vi)本发明的单克隆抗体不与hace2上包含his378的表位特异性地结合。(vii)本发明的单克隆抗体不与hace2上包含glu402的表位特异性地结合。(viii)本发明的单克隆抗体不与hace2上包含his505的表位特异性地结合。(ix)本发明的单克隆抗体不与hace2上包含tyr515的表位特异性地结合。[0074]在另一个实施方案中，本发明的单克隆抗体不与hace2上包含选自以下的氨基酸残基的表位特异性地结合：第19至102位残基、第290至397位残基和第417至430位残基。以下实施方案是示例性的。(i)本发明的单克隆抗体不与hace2上包含第19至102位残基内的氨基酸残基的表位特异性地结合。(ii)本发明的单克隆抗体不与hace2上包含第290至397位残基内的氨基酸残基的表位特异性地结合。(iii)本发明的单克隆抗体不与hace2上包含第417至430位残基内的氨基酸残基的表位特异性地结合。[0075]在另一个实施方案中，本发明的单克隆抗体不与hace2上包含选自以下的氨基酸残基的表位特异性地结合：第103至289位残基、第398至416位残基和第431至615位残基。以下实施方案是示例性的。(i)本发明的单克隆抗体不与hace2上包含第103至289位残基内的氨基酸残基的表位特异性地结合。(ii)本发明的单克隆抗体不与hace2上包含第398至416位残基内的氨基酸残基的表位特异性地结合。(iii)本发明的单克隆抗体不与hace2上包含第431至615位残基内的氨基酸残基的表位特异性地结合。[0076]在另一个实施方案中，本发明的单克隆抗体与hace2上包含选自以下的氨基酸残基的表位特异性地结合：第1至18位残基、第417至430位残基和第616至740位残基。以下实施方案是示例性的。(i)本发明的单克隆抗体与hace2上包含第1至5位残基内的氨基酸残基的表位特异性地结合。(ii)本发明的单克隆抗体与hace2上包含第5至10位残基内的氨基酸残基的表位特异性地结合。(iii)本发明的单克隆抗体与hace2上包含第10至15位残基内的氨基酸残基的表位特异性地结合。(iv)本发明的单克隆抗体与hace2上包含第15至18位残基内的氨基酸残基的表位特异性地结合。(v)本发明的单克隆抗体与hace2上包含第417至420位残基内的氨基酸残基的表位特异性地结合。(vi)本发明的单克隆抗体与hace2上包含第420至425位残基内的氨基酸残基的表位特异性地结合。(vii)本发明的单克隆抗体与hace2上包含第425至430位残基内的氨基酸残基的表位特异性地结合。(viii)本发明的单克隆抗体与hace2上包含第616至620位残基内的氨基酸残基的表位特异性地结合。(ix)本发明的单克隆抗体与hace2上包含第620至625位残基内的氨基酸残基的表位特异性地结合。(x)本发明的单克隆抗体与hace2上包含第625至630位残基内的氨基酸残基的表位特异性地结合。(xi)本发明的单克隆抗体与hace2上包含第630至635位残基内的氨基酸残基的表位特异性地结合。(xii)本发明的单克隆抗体与hace2上包含第635至640位残基内的氨基酸残基的表位特异性地结合。(xiii)本发明的单克隆抗体与hace2上包含第640至645位残基内的氨基酸残基的表位特异性地结合。(xiv)本发明的单克隆抗体与hace2上包含第645至650位残基内的氨基酸残基的表位特异性地结合。(xv)本发明的单克隆抗体与hace2上包含第650至655位残基内的氨基酸残基的表位特异性地结合。(xvi)本发明的单克隆抗体与hace2上包含第655至660位残基内的氨基酸残基的表位特异性地结合。(xvii)本发明的单克隆抗体与hace2上包含第660至665位残基内的氨基酸残基的表位特异性地结合。(xviii)本发明的单克隆抗体与hace2上包含第665至670位残基内的氨基酸残基的表位特异性地结合。(xix)本发明的单克隆抗体与hace2上包含第670至675位残基内的氨基酸残基的表位特异性地结合。(xx)本发明的单克隆抗体与hace2上包含第675至680位残基内的氨基酸残基的表位特异性地结合。(xxi)本发明的单克隆抗体与hace2上包含第680至685位残基内的氨基酸残基的表位特异性地结合。(xxii)本发明的单克隆抗体与hace2上包含第685至690位残基内的氨基酸残基的表位特异性地结合。(xxiii)本发明的单克隆抗体与hace2上包含第690至695位残基内的氨基酸残基的表位特异性地结合。(xxiv)本发明的单克隆抗体与hace2上包含第695至700位残基内的氨基酸残基的表位特异性地结合。(xxv)本发明的单克隆抗体与hace2上包含第700至705位残基内的氨基酸残基的表位特异性地结合。(xxvi)本发明的单克隆抗体与hace2上包含第705至710位残基内的氨基酸残基的表位特异性地结合。(xxvii)本发明的单克隆抗体与hace2上包含第710至715位残基内的氨基酸残基的表位特异性地结合。(xviii)本发明的单克隆抗体与hace2上包含第715至720位残基内的氨基酸残基的表位特异性地结合。(xxix)本发明的单克隆抗体与hace2上包含第720至725位残基内的氨基酸残基的表位特异性地结合。(xxx)本发明的单克隆抗体与hace2上包含第725至730位残基内的氨基酸残基的表位特异性地结合。(xxxi)本发明的单克隆抗体与hace2上包含第730至735位残基内的氨基酸残基的表位特异性地结合。(xxxii)本发明的单克隆抗体与hace2上包含第735至740位残基内的氨基酸残基的表位特异性地结合。[0077]在另一个实施方案中，本发明的单克隆抗体与hace2上包含选自第19至416位残基的氨基酸残基的表位特异性地结合。以下实施方案是示例性的。(i)本发明的单克隆抗体与hace2上包含第19至25位残基内的氨基酸残基的表位特异性地结合。(ii)本发明的单克隆抗体与hace2上包含第26至30位残基内的氨基酸残基的表位特异性地结合。(iii)本发明的单克隆抗体与hace2上包含第31至35位残基内的氨基酸残基的表位特异性地结合。(iv)本发明的单克隆抗体与hace2上包含第36至40位残基内的氨基酸残基的表位特异性地结合。(v)本发明的单克隆抗体与hace2上包含第41至45位残基内的氨基酸残基的表位特异性地结合。(vi)本发明的单克隆抗体与hace2上包含第46至50位残基内的氨基酸残基的表位特异性地结合。(vii)本发明的单克隆抗体与hace2上包含第51至55位残基内的氨基酸残基的表位特异性地结合。(viii)本发明的单克隆抗体与hace2上包含第56至60位残基内的氨基酸残基的表位特异性地结合。(ix)本发明的单克隆抗体与hace2上包含第61至65位残基内的氨基酸残基的表位特异性地结合。(x)本发明的单克隆抗体与hace2上包含第66至70位残基内的氨基酸残基的表位特异性地结合。(xi)本发明的单克隆抗体与hace2上包含第71至75位残基内的氨基酸残基的表位特异性地结合。(xii)本发明的单克隆抗体与hace2上包含第76至80位残基内的氨基酸残基的表位特异性地结合。(xiii)本发明的单克隆抗体与hace2上包含第81至85位残基内的氨基酸残基的表位特异性地结合。(xiv)本发明的单克隆抗体与hace2上包含第86至90位残基内的氨基酸残基的表位特异性地结合。(xv)本发明的单克隆抗体与hace2上包含第91至95位残基内的氨基酸残基的表位特异性地结合。(xvi)本发明的单克隆抗体与hace2上包含第96至100位残基内的氨基酸残基的表位特异性地结合。(xvii)本发明的单克隆抗体与hace2上包含第101至105位残基内的氨基酸残基的表位特异性地结合。(xviii)本发明的单克隆抗体与hace2上包含第106至110位残基内的氨基酸残基的表位特异性地结合。(xix)本发明的单克隆抗体与hace2上包含第111至115位残基内的氨基酸残基的表位特异性地结合。(xx)本发明的单克隆抗体与hace2上包含第116至120位残基内的氨基酸残基的表位特异性地结合。(xxi)本发明的单克隆抗体与hace2上包含第121至125位残基内的氨基酸残基的表位特异性地结合。(xxii)本发明的单克隆抗体与hace2上包含第126至130位残基内的氨基酸残基的表位特异性地结合。(xxiii)本发明的单克隆抗体与hace2上包含第131至135位残基内的氨基酸残基的表位特异性地结合。(xxiv)本发明的单克隆抗体与hace2上包含第136至140位残基内的氨基酸残基的表位特异性地结合。(xxv)本发明的单克隆抗体与hace2上包含第141至145位残基内的氨基酸残基的表位特异性地结合。(xxvi)本发明的单克隆抗体与hace2上包含第146至150位残基内的氨基酸残基的表位特异性地结合。(xxvii)本发明的单克隆抗体与hace2上包含第151至155位残基内的氨基酸残基的表位特异性地结合。(xxviii)本发明的单克隆抗体与hace2上包含第156至160位残基内的氨基酸残基的表位特异性地结合。(xxix)本发明的单克隆抗体与hace2上包含第161至165位残基内的氨基酸残基的表位特异性地结合。(xxx)本发明的单克隆抗体与hace2上包含第166至170位残基内的氨基酸残基的表位特异性地结合。(xxxi)本发明的单克隆抗体与hace2上包含第171至175位残基内的氨基酸残基的表位特异性地结合。(xxxii)本发明的单克隆抗体与hace2上包含第176至180位残基内的氨基酸残基的表位特异性地结合。(xxxiii)本发明的单克隆抗体与hace2上包含第181至185位残基内的氨基酸残基的表位特异性地结合。(xxxiv)本发明的单克隆抗体与hace2上包含第186至190位残基内的氨基酸残基的表位特异性地结合。(xxxv)本发明的单克隆抗体与hace2上包含第191至195位残基内的氨基酸残基的表位特异性地结合。(xxxvi)本发明的单克隆抗体与hace2上包含第196至200位残基内的氨基酸残基的表位特异性地结合。(xxxvii)本发明的单克隆抗体与hace2上包含第201至205位残基内的氨基酸残基的表位特异性地结合。(xxxviii)本发明的单克隆抗体与hace2上包含第206至210位残基内的氨基酸残基的表位特异性地结合。(xxxix)本发明的单克隆抗体与hace2上包含第211至215位残基内的氨基酸残基的表位特异性地结合。(xl)本发明的单克隆抗体与hace2上包含第216至220位残基内的氨基酸残基的表位特异性地结合。(xli)本发明的单克隆抗体与hace2上包含第221至225位残基内的氨基酸残基的表位特异性地结合。(xlii)本发明的单克隆抗体与hace2上包含第226至230位残基内的氨基酸残基的表位特异性地结合。(xliii)本发明的单克隆抗体与hace2上包含第231至235位残基内的氨基酸残基的表位特异性地结合。(xliv)本发明的单克隆抗体与hace2上包含第236至240位残基内的氨基酸残基的表位特异性地结合。(xlv)本发明的单克隆抗体与hace2上包含第241至245位残基内的氨基酸残基的表位特异性地结合。(xlvi)本发明的单克隆抗体与hace2上包含第246至250位残基内的氨基酸残基的表位特异性地结合。(xlvii)本发明的单克隆抗体与hace2上包含第251至255位残基内的氨基酸残基的表位特异性地结合。(xlviii)本发明的单克隆抗体与hace2上包含第256至260位残基内的氨基酸残基的表位特异性地结合。(xlix)本发明的单克隆抗体与hace2上包含第261至265位残基内的氨基酸残基的表位特异性地结合。(l)本发明的单克隆抗体与hace2上包含第266至270位残基内的氨基酸残基的表位特异性地结合。(li)本发明的单克隆抗体与hace2上包含第271至275位残基内的氨基酸残基的表位特异性地结合。(lii)本发明的单克隆抗体与hace2上包含第276至280位残基内的氨基酸残基的表位特异性地结合。(liii)本发明的单克隆抗体与hace2上包含第281至285位残基内的氨基酸残基的表位特异性地结合。(liv)本发明的单克隆抗体与hace2上包含第286至290位残基内的氨基酸残基的表位特异性地结合。(lv)本发明的单克隆抗体与hace2上包含第291至295位残基内的氨基酸残基的表位特异性地结合。(lvi)本发明的单克隆抗体与hace2上包含第296至300位残基内的氨基酸残基的表位特异性地结合。(lvii)本发明的单克隆抗体与hace2上包含第301至305位残基内的氨基酸残基的表位特异性地结合。(lviii)本发明的单克隆抗体与hace2上包含第306至310位残基内的氨基酸残基的表位特异性地结合。(lix)本发明的单克隆抗体与hace2上包含第311至315位残基内的氨基酸残基的表位特异性地结合。(lx)本发明的单克隆抗体与hace2上包含第316至320位残基内的氨基酸残基的表位特异性地结合。(lxi)本发明的单克隆抗体与hace2上包含第321至325位残基内的氨基酸残基的表位特异性地结合。(lxii)本发明的单克隆抗体与hace2上包含第326至330位残基内的氨基酸残基的表位特异性地结合。(lxiii)本发明的单克隆抗体与hace2上包含第331至335位残基内的氨基酸残基的表位特异性地结合。(lxiv)本发明的单克隆抗体与hace2上包含第336至340位残基内的氨基酸残基的表位特异性地结合。(lxv)本发明的单克隆抗体与hace2上包含第341至345位残基内的氨基酸残基的表位特异性地结合。(lxvi)本发明的单克隆抗体与hace2上包含第346至350位残基内的氨基酸残基的表位特异性地结合。(lxvii)本发明的单克隆抗体与hace2上包含第351至355位残基内的氨基酸残基的表位特异性地结合。(lxviii)本发明的单克隆抗体与hace2上包含第356至360位残基内的氨基酸残基的表位特异性地结合。(lxix)本发明的单克隆抗体与hace2上包含第361至365位残基内的氨基酸残基的表位特异性地结合。(lxx)本发明的单克隆抗体与hace2上包含第366至370位残基内的氨基酸残基的表位特异性地结合。(lxxi)本发明的单克隆抗体与hace2上包含第371至375位残基内的氨基酸残基的表位特异性地结合。(lxxii)本发明的单克隆抗体与hace2上包含第376至380位残基内的氨基酸残基的表位特异性地结合。(lxxiii)本发明的单克隆抗体与hace2上包含第381至385位残基内的氨基酸残基的表位特异性地结合。(lxxiv)本发明的单克隆抗体与hace2上包含第386至390位残基内的氨基酸残基的表位特异性地结合。(lxxv)本发明的单克隆抗体与hace2上包含第391至395位残基内的氨基酸残基的表位特异性地结合。(lxxvi)本发明的单克隆抗体与hace2上包含第396至400位残基内的氨基酸残基的表位特异性地结合。(lxxvii)本发明的单克隆抗体与hace2上包含第401至405位残基内的氨基酸残基的表位特异性地结合。(lxxviii)本发明的单克隆抗体与hace2上包含第406至410位残基内的氨基酸残基的表位特异性地结合。(lxxix)本发明的单克隆抗体与hace2上包含第411至416位残基内的氨基酸残基的表位特异性地结合。[0078]在另一个实施方案中，本发明的单克隆抗体与hace2上包含选自第431至615位残基的氨基酸残基的表位特异性地结合。以下实施方案是示例性的。(i)本发明的单克隆抗体与hace2上包含第431至435位残基内的氨基酸残基的表位特异性地结合。(ii)本发明的单克隆抗体与hace2上包含第436至440位残基内的氨基酸残基的表位特异性地结合。(iii)本发明的单克隆抗体与hace2上包含第441至445位残基内的氨基酸残基的表位特异性地结合。(iv)本发明的单克隆抗体与hace2上包含第446至450位残基内的氨基酸残基的表位特异性地结合。(v)本发明的单克隆抗体与hace2上包含第451至455位残基内的氨基酸残基的表位特异性地结合。(vi)本发明的单克隆抗体与hace2上包含第456至460位残基内的氨基酸残基的表位特异性地结合。(vii)本发明的单克隆抗体与hace2上包含第461至465位残基内的氨基酸残基的表位特异性地结合。(viii)本发明的单克隆抗体与hace2上包含第466至470位残基内的氨基酸残基的表位特异性地结合。(ix)本发明的单克隆抗体与hace2上包含第471至475位残基内的氨基酸残基的表位特异性地结合。(x)本发明的单克隆抗体与hace2上包含第476至480位残基内的氨基酸残基的表位特异性地结合。(xi)本发明的单克隆抗体与hace2上包含第481至485位残基内的氨基酸残基的表位特异性地结合。(xii)本发明的单克隆抗体与hace2上包含第486至490位残基内的氨基酸残基的表位特异性地结合。(xiii)本发明的单克隆抗体与hace2上包含第491至495位残基内的氨基酸残基的表位特异性地结合。(xiv)本发明的单克隆抗体与hace2上包含第496至500位残基内的氨基酸残基的表位特异性地结合。(xv)本发明的单克隆抗体与hace2上包含第501至505位残基内的氨基酸残基的表位特异性地结合。(xvi)本发明的单克隆抗体与hace2上包含第506至510位残基内的氨基酸残基的表位特异性地结合。(xvii)本发明的单克隆抗体与hace2上包含第511至515位残基内的氨基酸残基的表位特异性地结合。(xviii)本发明的单克隆抗体与hace2上包含第516至520位残基内的氨基酸残基的表位特异性地结合。(xix)本发明的单克隆抗体与hace2上包含第521至525位残基内的氨基酸残基的表位特异性地结合。(xx)本发明的单克隆抗体与hace2上包含第526至530位残基内的氨基酸残基的表位特异性地结合。(xxi)本发明的单克隆抗体与hace2上包含第531至535位残基内的氨基酸残基的表位特异性地结合。(xxii)本发明的单克隆抗体与hace2上包含第536至540位残基内的氨基酸残基的表位特异性地结合。(xxiii)本发明的单克隆抗体与hace2上包含第541至545位残基内的氨基酸残基的表位特异性地结合。(xxiv)本发明的单克隆抗体与hace2上包含第546至550位残基内的氨基酸残基的表位特异性地结合。(xxv)本发明的单克隆抗体与hace2上包含第551至555位残基内的氨基酸残基的表位特异性地结合。(xxvi)本发明的单克隆抗体与hace2上包含第556至560位残基内的氨基酸残基的表位特异性地结合。(xxvii)本发明的单克隆抗体与hace2上包含第561至565位残基内的氨基酸残基的表位特异性地结合。(xxviii)本发明的单克隆抗体与hace2上包含第566至570位残基内的氨基酸残基的表位特异性地结合。(xxix)本发明的单克隆抗体与hace2上包含第571至575位残基内的氨基酸残基的表位特异性地结合。(xxx)本发明的单克隆抗体与hace2上包含第576至580位残基内的氨基酸残基的表位特异性地结合。(xxxi)本发明的单克隆抗体与hace2上包含第581至585位残基内的氨基酸残基的表位特异性地结合。(xxxii)本发明的单克隆抗体与hace2上包含第586至590位残基内的氨基酸残基的表位特异性地结合。(xxxiii)本发明的单克隆抗体与hace2上包含第591至595位残基内的氨基酸残基的表位特异性地结合。(xxxiv)本发明的单克隆抗体与hace2上包含第596至600位残基内的氨基酸残基的表位特异性地结合。(xxxv)本发明的单克隆抗体与hace2上包含第601至605位残基内的氨基酸残基的表位特异性地结合。(xxxvi)本发明的单克隆抗体与hace2上包含第606至610位残基内的氨基酸残基的表位特异性地结合。(xxxvii)本发明的单克隆抗体与hace2上包含第611至615位残基内的氨基酸残基的表位特异性地结合。[0079]在另一个实施方案中，本发明的单克隆抗体与hace2上包含选自以下的氨基酸残基的表位特异性地结合：ser19、gln24、thr27、phe28、lys31、his34、glu35、glu37、asp38、tyr41、gln42、leu45、leu79、met82、tyr83、gln325、glu329、asn330、lys353、gly354、asp355和arg357。以下实施方案是示例性的。(i)本发明的单克隆抗体与hace2上包含残基ser19的表位特异性地结合。(ii)本发明的单克隆抗体与hace2上包含残基gln24的表位特异性地结合。(iii)本发明的单克隆抗体与hace2上包含残基thr27的表位特异性地结合。(iv)本发明的单克隆抗体与hace2上包含残基phe28的表位特异性地结合。(v)本发明的单克隆抗体与hace2上包含残基lys31的表位特异性地结合。(vi)本发明的单克隆抗体与hace2上包含残基his34的表位特异性地结合。(vii)本发明的单克隆抗体与hace2上包含残基glu35的表位特异性地结合。(viii)本发明的单克隆抗体与hace2上包含残基glu37的表位特异性地结合。(ix)本发明的单克隆抗体与hace2上包含残基asp38的表位特异性地结合。(x)本发明的单克隆抗体与hace2上包含残基tyr41的表位特异性地结合。(xi)本发明的单克隆抗体与hace2上包含残基gln42的表位特异性地结合。(xii)本发明的单克隆抗体与hace2上包含残基leu45的表位特异性地结合。(xiii)本发明的单克隆抗体与hace2上包含残基leu79的表位特异性地结合。(xiv)本发明的单克隆抗体与hace2上包含残基met82的表位特异性地结合。(xv)本发明的单克隆抗体与hace2上包含残基tyr83的表位特异性地结合。(xvi)本发明的单克隆抗体与hace2上包含残基gln325的表位特异性地结合。(xvii)本发明的单克隆抗体与hace2上包含残基glu329的表位特异性地结合。(xviii)本发明的单克隆抗体与hace2上包含残基asn330的表位特异性地结合。(xix)本发明的单克隆抗体与hace2上包含残基lys353的表位特异性地结合。(xx)本发明的单克隆抗体与hace2上包含残基gly354的表位特异性地结合。(xxi)本发明的单克隆抗体与hace2上包含残基asp355的表位特异性地结合。(xxii)本发明的单克隆抗体与hace2上包含残基arg357的表位特异性地结合。在一个优选实施方案中，本发明的单克隆抗体与hace2上包含残基lys31的表位特异性地结合。在另一个优选实施方案中，本发明的单克隆抗体与hace2上包含残基lys353的表位特异性地结合。[0080]在另一个实施方案中，本发明的单克隆抗体包含重链cdr3，其包含选白以下的氨基酸序列：(i)cakdrgyssswyggfdyw(seq id no：2)；(ii)carhtwwkgagffdhw(seq id no：3)；(iii)cargtrflewslpldvw(seq id no：4)；(iv)cattenpnprw(seq id no：5)；(v)cattedpyprw(seq id no：6)；(vi)caraspntgwhfdhw(seq id no：7)；(vii)cattmnpnprw(seq id no：8)；和(viii)caaiayeegvyr-wdw(seq id no：9)。以下实施方案是示例性的。(i)本发明的单克隆抗体包含含有氨基酸序列cakdrgyssswyggfdyw(seq id no：2)的重链cdr3。(ii)本发明的单克隆抗体包含含有氨基酸序列carhtwwkgagf-fdhw(seq id no：3)的重链cdr3。(iii)本发明的单克隆抗体包含含有氨基酸序列cargtrflewslpldvw(seq id no：4)的重链cdr3。(iv)本发明的单克隆抗体包含含有氨基酸序列cattenpnprw(seq id no：5)的重链cdr3。(v)本发明的单克隆抗体包含含有氨基酸序列cattedp-yprw(seq id no：6)的重链cdr3。(vi)本发明的单克隆抗体包含含有氨基酸序列caraspntgwhfdhw(seq id no：7)的重链cdr3。(vii)本发明的单克隆抗体包含含有氨基酸序列cattmnpnprw(seq id no：8)的重链cdr3。(viii)本发明的单克隆抗体包含含有氨基酸序列caaiayeegvyrwdw(seq id no：9)的重链cdr3。[0081]在一个优选实施方案中，本发明的单克隆抗体是人源化单克隆抗体，并优选是人单克隆抗体。[0082]在第一优选的实施方案中，本发明的单克隆抗体具有低效应物功能。在第二优选的实施方案中，本发明的单克隆抗体具有长血清半衰期。在第三优选的实施方案中，本发明的单克隆抗体是igg4抗体。在第四优选的实施方案中，本发明的单克隆抗体包含抑制半抗体形成的重链修饰。在第五优选的实施方案中，本发明的单克隆抗体(i)具有低效应物功能；(ii)具有长血清半衰期；(iii)是igg4抗体；和(iv)包含抑制半抗体形成的重链修饰。[0083]在另一个优选实施方案中，本发明的单克隆抗体是抗原结合片段或单链抗体。[0084]本发明的单克隆抗体的以下八个实施方案是示例性的。在本发明的第一实施方案中，本发明的单克隆抗体是人源化或人igg4抗体，其(i)具有血清半衰期延长突变组合m252y/s254t/t256e(yte)(根据eu索引编号)；(ii)具有半抗体形成抑制突变s228p或k447del，或突变组合s228p/k447del(根据eu索引编号)；和(iii)具有效应物功能降低的l235e突变(根据eu索引编号)。[0085]在本发明的第二实施方案中，本发明的单克隆抗体是人源化或人igg4抗体，其(i)具有血清半衰期延长突变组合m252y/s254t/t256e(yte)(根据eu索引编号)；(ii)具有半抗体形成抑制突变s228p或k447del，或突变组合s228p/k447del(根据eu索引编号)；和(iii)具有一个或更多个效应物功能降低的突变l235a、f234a和g237a(根据eu索引编号)。[0086]在本发明的第三实施方案中，本发明的单克隆抗体是人源化或人igg4抗体，其(i)具有血清半衰期延长突变组合m252y/s254t/t256e(yte)(根据eu索引编号)；(ii)具有半抗体形成抑制突变s228p或k447del，或突变组合s228p/k447del(根据eu索引编号)；和(iii)具有效应物功能降低的d265a突变(根据eu索引编号)。[0087]在本发明的第四实施方案中，本发明的单克隆抗体是人源化或人igg4抗体，其(i)具有血清半衰期延长突变组合m252y/s254t/t256e(yte)(根据eu索引编号)；(ii)具有半抗体形成抑制突变s228p或k447del，或突变组合s228p/k447del(根据eu索引编号)；和(iii)具有一个或更多个效应物功能降低的突变a330r、f243l和l328替换(根据eu索引编号)。[0088]在本发明的第五实施方案中，本发明的单克隆抗体是人源化或人igg4抗体，其(i)具有血清半衰期延长突变组合m252y/s254t/t256e(yte)(根据eu索引编号)；(ii)具有半抗体形成抑制突变s228p或k447del，或突变组合s228p/k447del(根据eu索引编号)；和(iii)具有效应物功能降低的igg2/igg4形式，其中igg2(多至t260)与igg4连接(根据eu索引编号)。[0089]在本发明的第六实施方案中，本发明的单克隆抗体是人源化或人igg4抗体，其(i)具有血清半衰期延长突变组合m252y/s254t/t256e(yte)(根据eu索引编号)；(ii)具有半抗体形成抑制突变s228p或k447del，或突变组合s228p/k447del(根据eu索引编号)；和(iii)具有效应物功能降低的f243a/v264a突变组合(根据eu索引编号)。[0090]在本发明的第七实施方案中，本发明的单克隆抗体是人源化或人igg4抗体，其(i)具有血清半衰期延长突变组合m252y/s254t/t256e(yte)(根据eu索引编号)；(ii)具有半抗体形成抑制突变s228p或k447del，或突变组合s228p/k447del(根据eu索引编号)；和(iii)具有效应物功能降低的e233p/f234a/l235a/g236del/g237a突变组合(根据eu索引编号)。[0091]在本发明的第八实施方案中，本发明的单克隆抗体是人源化或人igg4抗体，其(i)具有血清半衰期延长突变组合m252y/s254t/t256e(yte)(根据eu索引编号)；(ii)具有半抗体形成抑制突变s228p或k447del，或突变组合s228p/k447del(根据eu索引编号)；和(iii)具有效应物功能降低的s228p/l235e突变组合(根据eu索引编号)。[0092]在上述八个实施方案中的每一个的优选实施方案中，本发明的单克隆抗体具有“结进孔(knobs-into-holes)”(kih)修饰，以防止重链错配。在上述八个实施方案中每一个的另一优选实施例中，本发明的单克隆抗体包含两个不同的重链和两个相同的轻链。在上述八个实施方案中的每一个的另一优选实施方案中，其中抗体包含两个不同的重链和两个相同的轻链，一个重链包含嵌合fc形式，所述嵌合fc形式通过接触区消除(ablate)与蛋白质a的结合。这种技术称为fcδadp，描述于m.godar,et al.和a.d.tustian,et al.中。[0093]本发明的单克隆抗体的以下另外两个实施方案是示例性的。在本发明的第一实施方案中，本发明的单克隆抗体是人源化igg4抗体，其(i)具有血清半衰期延长突变组合m252y/s254t/t256e(yte)(根据eu索引编号)；(ii)具有半抗体形成抑制突变s228p或k447del，或突变组合s228p/k447del(根据eu索引编号)；和(iii)具有效应物功能降低的突变、突变组合或改变，选自l235e、l235a、f234a、g237a、d265a、a330r、f243l、l328替换、f243a/v264a、e233p/f234a/l235a/g236del/g237a、s228p/l235e以及igg2/igg4形式，其中igg2(多至t260)与igg4(根据eu索引编号)连接。[0094]在本发明的第二实施方案中，本发明的单克隆抗体是人igg4抗体，其(i)具有血清半衰期延长突变组合m252y/s254t/t256e(yte)(根据eu索引编号)；(ii)具有半抗体形成抑制突变s228p或k447del，或突变组合s228p/k447del(根据eu索引编号)；和(iii)具有效应物功能降低的突变、突变组合或改变，选自l235e、l235a、f234a、g237a、d265a、a330r、f243l、l328替换、f243a/v264a、e233p/f234a/l235a/g236del/g237a、s228p/l235e、和igg2/igg4形式，其中igg2(多至t260)与igg4(根据eu索引编号)连接。[0095]在上述两个实施方案中的每一个的优选实施方案中，本发明的单克隆抗体具有“结进孔”(kih)修饰，以防止重链错配。在上述两个实施方案中每一个的另一优选实施方案中，本发明的单克隆抗体包含两个不同的重链和两个相同的轻链。在上述两个实施方案中的每一个的另一优选实施方案中，其中抗体包含两个不同的重链和两个相同的轻链，一个重链包含嵌合fc形式，所述嵌合fc形式通过接触区消除与蛋白质a的结合(即fcδadp技术)。[0096]本发明提供编码以下的分离的核酸分子：(i)本发明的单克隆抗体的完整轻链或轻链的一部分，和/或(ii)本发明的单克隆抗体的完整重链或重链的一部分。在一个实施方案中，本核酸分子是dna分子，例如cdna分子。[0097]本发明还提供重组载体，例如质粒或病毒载体，其包含与rna转录的启动子有效地连接的本核酸分子。[0098]本发明还提供了宿主载体系统，其在合适的宿主细胞(例如细菌细胞、昆虫细胞、酵母细胞或哺乳动物细胞，例如杂交瘤细胞(参见，例如chiu和gilliland；kohler和milstein))中包含一种或更多种本载体。[0099]本发明提供包含以下的组合物：(i)本发明的单克隆抗体和(ii)可药用载体。[0100]本发明还提供了用于降低人对象感染sars-cov-2的可能性的方法，包括向对象施用预防性有效量的本发明的单克隆抗体。在该方法的优选实施方案中，对象已暴露于sars-cov-2。[0101]本发明还提供用于治疗感染sars-cov-2的人对象的方法，包括向对象施用治疗有效量的本发明的单克隆抗体。在该方法的一个实施方案中，对象有sars-cov-2感染的症状。在另一个实施方案中，对象无sars-cov-2感染症状。[0102]本发明提供包含编码本发明的单克隆抗体的重链和/或轻链的核酸序列的重组aav载体。[0103]结合对象载体，“编码”蛋白质(例如抗体重链)的核酸序列有效地对其编码(即，以允许其在被包含含有核酸序列的载体的病毒颗粒感染的细胞中表达的方式)。另外，本发明的重组病毒载体不限于关于外源蛋白编码序列的任何特定配置。例如，在对象重组aav载体的一个实施方案中，使用“单载体”方法，其中单个重组aav载体包括编码重抗体链和轻抗体链二者的核酸序列。在另一个实施方案中，使用“双载体”方法，其中一个重组aav载体包括编码重抗体链的核酸序列，而第二个重组aav载体包括编码轻抗体链的核苷酸序列(参见，例如s.p.fuchs,et al.(2016))。[0104]本发明还提供包含本重组aav载体和aav衣壳蛋白的重组aav颗粒。[0105]本发明还提供组合物，其包含(i)多个本aav颗粒和(ii)可药用载体。[0106]本发明提供了用于降低人对象感染sars-cov-2的可能性的方法，包括向对象施用预防有效量的本aav颗粒。[0107]在本发明预防方法的一个实施方案中，对象已暴露于sars-cov-2。在另一个实施方案中，对象未暴露于sars-cov-2。[0108]本发明提供了用于治疗感染sars-cov-2的人对象的方法，包括向对象施用治疗有效量的本aav颗粒。[0109]在本治疗方法的一个实施方案中，对象有sars-cov-2感染的症状。在另一个实施方案中，对象无sars-cov-2感染症状。[0110]本发明还提供了试剂盒，其在分开的隔室中包含(a)稀释剂和(b)作为悬浮液或冻干形式的本发明的单克隆抗体。[0111]最后，本发明提供了试剂盒，其在分开的隔室中包含(a)稀释剂和(b)多个本重组aav颗粒的悬浮液。在一个实例中，对象试剂盒包含(i)单剂量小瓶，其含有在合适溶液(例如，无菌水、氯化钠、磷酸钠和泊洛沙姆188(poloxamer 188)的溶液)中的对象颗粒(也称为病毒基因组)的浓缩溶液，以及(ii)一个或更多个小瓶的合适稀释剂(例如无菌水、氯化钠、磷酸纳和泊洛沙姆188的溶液)。[0112]对本载体、颗粒和方法进行必要修改以用于合适的重组非avv病毒(例如慢病毒、腺病毒、α病毒、疱疹病毒或痘苗病毒)，因为它们用于本发明中的重组aav病毒。[0113]通过参考下面的实施例将更好地理解本发明，但本领域技术人员将容易地理解，详细的具体实施例仅是本发明的示例，如随附的权利要求中更全面地描述的那样。[0114]实施例[0115]实施例1–用于ace2功能的biovision测定试剂盒[0116]biovision,inc.销售血管紧张素ii转换酶(ace2)活性测定试剂盒(荧光)(https://www.biovision.com/angiotensin-ii-converting-enzyme-ace2-activity-assay-kit-fluorometric.html)。该试剂盒可用于测量抗体抑制hace2裂解血管紧张素ii的能力的程度。[0117]biovision提供了关于其检测试剂盒的以下背景信息，已在此处编辑。血管紧张素ii转换酶(ace2)是锌基金属蛋白酶，是肾素-血管紧张素系统(renin-angiotensin system，ras)的一部分，其通过裂解血管紧张素ii的c末端氨基酸残基将其转化为血管紧张素1-7，从而控制血压调节。ace2是人冠状病毒(如sars和hcov-nl63)的受体。它在肺、肾和心脏的血管内皮细胞上表达。ace2是心血管和冠状病毒诱导疾病的潜在治疗靶标。biovision的试剂盒将有助于这一领域的研究。它利用活性ace2的能力裂解合成的基于mca的肽底物以释放游离荧光团。释放的mca可以使用荧光微孔板阅读器轻松量化。biovision还提供了ace2特异性抑制剂，其可将ace2活性与其他蛋白水解活性区分开来。该试剂盒可检测低至0.4mu，是简单的并可用于高通量形式形式。[0118]biovision的试剂盒具有以下规格：(i)cat#-k897-100；(ii)大小-100次测定；(iii)检测方法-荧光(ex/em＝320/420nm)；(iv)物种反应性-哺乳动物；(v)应用-检测组织/细胞裂解物和酶制剂中的ace2活性；(vi)特征和优点-简单的一步反应/只需1至2小时/非辐射荧光检测/htp适用；(vii)试剂盒组件-ace2测定缓冲液/ace2稀释缓冲液和ace2裂解缓冲液/ace2阳性对照、ace2底物、ace2抑制剂(22mm)和mca标准品(1mm)；(viii)储存条件‑‑20℃；和(ix)装运条件-凝胶包装。[0119]实施例2–ace2功能的sensolyte测定试剂盒[0120]anaspec销售390ace2活性测定试剂盒*荧光*(“sensolyte试剂盒”)(https://www.anaspec.com/products/product.asp？id＝43987)。该试剂盒可用于测量抗体抑制hace2裂解血管紧张素ii的能力的程度。[0121]anaspec提供了关于其sensolyte检测试剂盒的以下信息，其已在此处编辑。所述试剂盒为用于使用mc-ala/dnp荧光共振能量转移(fluorescence resonance energy transfer，fret)肽的高通量筛选ace2酶抑制剂和诱导剂提供了方便的分析方法。在fret肽中，dnp淬灭mc-ala的荧光。在被ace2裂解成两个单独的片段之后，mc-ala的荧光被恢复，并且可以在激发/发射＝330/390nm下被监测。该测定可检测ace2的亚纳克水平活性。测定采用方便的96孔微孔板形式进行。[0122]sensolyte试剂盒还具有以下规格：(i)cat#-as-72086；(ii)大小-100次测定；(iii)储存条件‑‑20℃。[0123]实施例3–hace2功能的基于血管紧张素ii的质谱测定[0124]该方法(“质谱测定”)可用于使用质谱定量测量hace2活性。特别是，它可以用来测量抗体抑制hace2裂解血管紧张素ii以及其他底物的能力的程度。所述方法改编自donoghue,et al.中描述的ace2测定。[0125]酶反应以15μl进行。在有或没有hace2的情况下，在室温下向每个管添加10μl缓冲液(10mmol/l tris，ph 7.0)。本方法中使用的hace2是根据donoghue,et al.制备的重组可溶性hace2。向每个管中添加5微升纯化血管紧张素ii(sigma)，使得最终浓度为5μmol/l。(该质谱测定也可以使用除血管紧张素ii以外的肽底物(例如，去精氨酸缓激肽、神经降压素、运动升压素(kinetensin)、艾帕素-13(apelin-13)和强啡肽a1-13(dynorphin a 1-13))。)将赖诺普利(lisinopril)或卡托普利(captopril)(sigma)添加至一些反应，使得最终浓度为6.6μmol/l。赖诺普利和卡托普利都不抑制hace2活性，并且因此这些化合物可以作为对照，以确保测得的血管紧张素ii裂解是由于hace2活性。对于反应和对照实验，将管在37℃下孵育30分钟。通过添加1μl低ph值maldi基质化合物(乙腈和水的1:1混合物中的10g/lα-氰基-4羟基肉桂酸)来淬灭每个反应的一部分(1μl)。将一微升所得溶液施用于maldi板的表面。然后将板风干并插入voyager elite生物光谱仪maldi飞行时间(time-of-flight，tof)质谱仪(perseptive biosystems)的样品导入端口。将所得信号以1ghz的频率进行数字化，并累积64次扫描。使用来自空载体转染的纯化条件培养基来控制单个实验中底物转化为产物的程度的可变性。对于串联质谱测序，使用配备正交电喷雾源(z喷雾)的混合四极飞行时间质谱仪(q-tof-ms)(micromass uk limited)。将四极设置为将选定m/z的先驱离子传递到六极碰撞池(collision cell)(q2)，并使用tof分析仪获得产物离子谱。将氩以35ev的碰撞能量和25v的锥能量(cone energy)引入q2。[0126]实施例4–hace2功能的基于血管紧张素ii的hplc测定[0127]该方法(“hplc测定”)可用于使用hplc定量测量hace2活性。特别是，它可以用来测量抗体抑制hace2裂解血管紧张素ii以及其他底物的能力的程度。所述方法改编自tipnis,et al.中所述的“aceh”测定。[0128]蛋白质和酶测定。蛋白质浓度是以牛血清白蛋白为标准，使用二喹啉甲酸测定法(smith,et al.)测定的。hace2活性的测定以总体积100μl进行，含有100mm tris-hcl、ph 7.4、20μg蛋白质和100μm血管紧张素ii作为底物。(该hplc测定也可以使用除血管紧张素ii以外的肽底物(例如，去精氨酸缓激肽、神经降压素和运动升压素、阿片灵-13和强啡肽a1-13)。)在适当的情况下，添加抑制剂，使最终浓度为10μm赖诺普利、10μm卡托普利、10μm依拉普利拉、100μm琥珀酸苄酯或10mm edta。edta抑制hace2活性，但赖诺普利、卡托普利、依拉普利拉和琥珀酸苄酯(羧肽酶a抑制剂)均不抑制hace2活性。因此，可将这些化合物用作对照，以确保测得的血管紧张素ii裂解是由于hace2活性。反应在37℃下进行，持续2小时，并由加热至100℃持续5分钟来停止反应，然后以11,600x g离心10分钟。羧肽酶a测定在室温下进行30分钟，每次测定使用0.1单位的酶。[0129]裂解产物的hplc分析。将肽水解产物使用反相hplc(μbondapak c-18反相柱，waters)分离，而uv探测器设置为214nm。所有分离均在室温下进行，流速为1.5ml/分钟。流动相a由0.08％(v/v)的磷酸组成，并且流动相b由在0.08％(v/v)磷酸中的40％(v/v)乙腈组成。使用15分钟内11％b至100％b的线性溶剂梯度，其中5分钟在最终条件下，以及8分钟再平衡。将血管紧张素ii的产物通过基质辅助激光解吸电离/飞行时间质谱进行收集和分析。[0130]实施例5–测量可溶性rbd蛋白与可溶性hace2的相互作用[0131]在本发明的优选实施方案中，测量可溶性rbd蛋白(sars-cov-2的代替物)与可溶性hace2(hace2胞外部分的代替物)的相互作用可用于直接测量(i)单克隆抗体与hace2的胞外部分的结合，以及(ii)单克隆抗体抑制sars-cov-2与hace2胞外部分结合的能力。[0132]以下分析hace2结合抑制的方法来自suryadevara,et al.。将384孔微孔板的孔用1μg/ml纯化的重组sars-cov-2s2pecto蛋白在4℃下包被过夜。将板用2％脱脂奶粉和2％正常山羊血清在dpbs-t中封闭1小时。对于筛选测定，将纯化的单克隆抗体在封闭缓冲液中从10μg/ml开始稀释两倍，一式三份，添加至孔中(每孔20μl)，并在环境温度下孵育1小时。将带有c末端flag标签肽的重组hace2以2μg/ml以5μl/孔体积添加至孔(hace2的最终浓度为0.4μg/ml)，无需洗涤抗体，并随后在环境温度下孵育40分钟。将板洗涤，并使用hrp缀合的抗flag抗体(sigma-aldrich，目录号a8592，批号slbv3799，1:5,000稀释)和tmb底物检测结合hace2。将无抗体的ace2结合作为对照。在减去背景信号后，在每次稀释的检测抗体存在的情况下获得的人ace2结合信号表示为无抗体时人ace2结合的百分比。对于剂量响应测定，将纯化单克隆抗体的连续稀释一式三份施用于孔，并如上详细所述检测单克隆抗体结合。在抗体浓度对数转换之后，使用s形剂量-响应非线性回归分析确定s2pecto蛋白与人ace2结合的单克隆抗体抑制的ic50值。[0133]本实施例中使用的试剂可以根据该参考文献制备和/或商业购买(例如，来自lakepharma,inc.,worcester,ma)。另外，相关试剂盒可商购获得。例如，(i)sars-cov-2刺突-ace2相互作用抑制剂筛选测定试剂盒可从cayman chemical(ann arbor，mi)获得；以及(ii)sars-cov-2刺突：ace2抑制剂筛选测定试剂盒，ace2抑制剂筛选测定试剂盒和刺突rbd(sars-cov-2)：ace2抑制剂筛选测定试剂盒均可从bps bioscience获得。(san diego,ca)。[0134]实施例6–抗体表达盒[0135]图4示出了用于编码本抗hace2单克隆抗体的目标raav载体的表达盒的示意图。所述盒具有以下结构：5’itr—cag—抗体重链—弗林蛋白酶f2a—抗体轻链—sv40 polya—3’itr。[0136]这些盒的组分包括：cmv增强子/鸡β-肌动蛋白启动子和内含子(或cag)；sv40聚腺苷酸化信号(或sv40 polya)；抗体的重链和轻链；和弗林蛋白酶f2a自加工肽切割位点。表达盒侧翼为aav血清型2反向末端重复序列(inverted terminal repeat，itr)。在含有双顺反子单链aav(ssaav)载体的盒中，使用来自fmd的f2a自加工肽从一个开放阅读框表达重链和轻链二者。添加细胞蛋白酶弗林蛋白酶的弗林蛋白酶切割序列“rkrr”(seq id no:10)用于去除f2a自加工后留在重链c末端的氨基酸。在本发明的一个实施方案中，目标raav载体具有内含子，而在另一个实施方案中，目标raav载体不具有内含子。缩写：cmv，巨细胞病毒；sv40，猿猴病毒40；和fmd，口蹄疫病毒。[0137]实施例7–raav产生[0138]可以根据已知方法产生目标raav。例如，在一种这样的方法中，用选择的raav载体质粒和两种辅助质粒转染hek-293细胞以允许产生感染性aav颗粒。在收获经转染的细胞和细胞培养上清液之后，通过三个连续的cscl离心步骤纯化raav。通过实时pcr评估载体基因组数，并通过电子显微镜和银染sds-page验证制剂的纯度(mueller,et al.)。[0139]参考文献[0140]p.maddon，et al.，u.s.patent no.6,451,313.[0141]w.dall’acqua，et al.，u.s.patent no.7,083,784.[0142]w.olson，et al.，u.s.patent no.7,122,185.[0143]l.presta，et al.，u.s.patent no.7,332,581.[0144]v.m.litwin，et al.，u.s.patent no.7,345,153.[0145]r.s.mclvor，et al.，u.s.patent no.9,827,295.[0146]p.hotez，et al.，u.s.patent application no.20160376321.[0147]d.ballon，et al.，u.s.patent publication no.20170067028.[0148]g.buchliss，et al.，u.s.patent publication no.20190038724.[0149]j.zhou，et al.，u.s.patent 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