五指毛桃组织培养方法及补骨脂素制备方法与流程 专利技术说明

农业,林业,园林,畜牧业,肥料饲料的机械,工具制造及其应用技术1.本发明涉及组织培养相关技术领域。更具体地说，本发明涉及一种五指毛桃组织培养方法及补骨脂素制备方法。背景技术：2.补骨脂素为呋喃香豆素类化合物，具有抗菌、抗病毒、抑制肿瘤、抗凝、免疫调节、激素样等多种药理作用。五指毛桃中含有补骨脂素，但含量不高，如果能够提升五指毛桃植株中补骨脂素含量，必将会提升其药用价值，并增加经济效益。技术实现要素：3.本发明的一个目的是提供一种五指毛桃组织培养方法及补骨脂素制备方法，该培养方法能够提升五指毛桃植株中补骨脂素含量，使其能够较好地用于补骨脂素制备。4.为了实现本发明的这些目的和其它优点，根据本发明的一个方面，本发明提供了五指毛桃组织培养方法，包括：取五指毛桃组培苗进行生根培养，生根培养基包括1/2ms、萘乙酸；其中，在生根培养阶段，利用光强为100～120μmol/(m2·s)的红光照射。5.进一步地，所述萘乙酸的浓度为0.8～1.2mg/l。6.进一步地，生根培养15～25天。7.进一步地，所述生根培养基由1/2ms、1mg/l的吲哚丁酸租成，生根培养20天，在生根培养阶段利用光强为110μmol/(m2·s)的led红光照射，并保持温度为25℃，湿度为40％。8.进一步地，还包括扩繁培养，扩繁培养基包括ms、6-苄氨基嘌呤和吲哚乙酸。9.进一步地，6-苄氨基嘌呤的浓度为0.8～1.2ml/l。10.进一步地，吲哚乙酸的浓度为0.15～0.25ml/l。11.根据本发明的另一个方面，还提供了补骨脂素制备方法，包括：利用所述的五指毛桃组织培养方法得到五指毛桃植株；对五指毛桃植株进行萃取，得到补骨脂素。12.本发明至少包括以下有益效果：13.本发明对五指毛桃组培苗进行生根培养，培养过程中由于100～120μmol/(m2·s)的红光和生根培养基的协同作用，提升了五指毛桃内补骨脂素的含量，从而提升了五指毛桃的药用价值和经济价值；通过对得到的五指毛桃组培苗进行萃取，可以制备较多补骨脂素。14.本发明的其它优点、目标和特征将部分通过下面的说明体现，部分还将通过对本发明的研究和实践而为本领域的技术人员所理解。具体实施方式15.下面结合实施例对本发明做进一步的详细说明，以令本领域技术人员参照说明书文字能够据以实施。16.应当理解，本文所使用的诸如“具有”、“包含”以及“包括”术语并不排除一个或多个其它元件或其组合的存在或添加。17.本技术的实施例提供了五指毛桃组织培养方法，包括：取五指毛桃组培苗进行生根培养，生根培养基包括1/2ms、萘乙酸；其中，在生根培养阶段，利用光强为100～120μmol/(m2·s)的红光照射，优选为110μmol/(m2·s)红光；通过生根培养基和110μmol/(m2·s)红光的协同作用，五指毛桃植株具有较稳定的生理性状，补骨脂素含量也得到大幅度提升。18.在另一些实施例中，所述萘乙酸的浓度为0.8～1.2mg/l，优选为1mg/l。19.在另一些实施例中，生根培养15～25天，优选为20天。20.在另一些实施例中，所述生根培养基由1/2ms、1mg/l的吲哚丁酸租成，生根培养20天，在生根培养阶段利用光强为110μmol/(m2·s)的led红光照射，并保持温度为25℃，湿度为40％；可选地，当五指毛桃扩繁接种可分出较大植株时，即可将其转移至生根培养基；实验室内温度恒温25℃，湿度保持在40％左右，在超净工作台进行无菌操作，在移植时将原来扩繁长势好的五指毛桃用镊子取出放于无菌盘中，剪去过长的叶子即可整株转移至生根培养基中。21.在另一些实施例中，还包括扩繁培养，扩繁培养基包括ms、6-苄氨基嘌呤和吲哚乙酸；可选地，在生根培养之前还包括扩繁培养，恒温25℃，湿度保持在40％左右，在超净工作台进行无菌操作，用镊子将五指毛桃从旧的培养基中取出，放在无菌的不锈钢碟子上，对五指毛桃进行分株，分好后将分出的小植株扦插入扩繁培养基中，一瓶约放置4～5株，扩繁好的培养基盖上盖子。22.在另一些实施例中，6-苄氨基嘌呤的浓度为0.8～1.2ml/l，优选为1ml/l。23.在另一些实施例中，吲哚乙酸的浓度为0.15～0.25ml/l，优选为2ml/l。24.本技术的实施例还提供了补骨脂素制备方法，包括：利用所述的五指毛桃组织培养方法得到五指毛桃植株；对五指毛桃植株进行萃取，得到补骨脂素，可选地，用乙醚萃取，萃取过程中用超声处理；上述实施例的五指毛桃组织培养方法得到的五指毛桃植株具有较高的补骨脂素含量，对五指毛桃植株进行萃取可得到较多的补骨脂素；可选地，萃取方法为：将样品用烘干机烘干，研磨成粉末，过筛(4号筛)后精密称量样品粉末，向样品内加入乙醚(分析ar)，进行超声提取(300w，25khz)30min。提取结束后对提取液进行抽滤，抽滤过程加入少量乙醚，分次进行洗涤。抽滤结束后将滤液合并放入旋蒸瓶，旋蒸至干。向旋蒸瓶内加入甲醇(分析ar)分次进行溶解，并倒入容量瓶中，溶解至旋蒸瓶瓶壁洁净后，用甲醇定容容量瓶，摇晃混合均匀即得。25.以下以具体实施例说明。26.实施例：27.生根培养基由1/2ms、1mg/l的吲哚丁酸租成，生根培养20天，在生根培养阶段利用光强为110μmol/(m2·s)的led红光照射，并保持温度为25℃，湿度为40％。28.对比例：29.改变光质比，形成对比例，即对比例1＝自然光、对比例2＝全蓝光、实施例＝全红光、对比例3＝红蓝比3:1、对比例4＝红蓝比1:1、对比例5＝红蓝比1:3，对比例1～5的其它条件与实施例相同。30.结论：31.对实施例和对比例1～5培养得到的五指毛桃植株进行检测，结果如下。32.1、生理生化指标。33.可溶性总蛋白：在不同光质比下进行培养的五指毛桃植株，其体内可溶性总蛋白的变化范围为7.7370-13.0560g/l，其中红蓝光质比等于1的光照下含量较多，红蓝光质比等于3的含量较少；34.脱落酸：在不同光质比下进行培养的五指毛桃植株，其体内脱落酸的变化范围为0.8598-0.8890μg/l，其中红蓝光质比等于0.3的光照下含量较多，全红光的含量较少；35.玉米素：在不同光质比下进行培养的五指毛桃植株，其体内玉米素的变化范围为0.5566-0.5967ng/l，其中红蓝光质比等于3的光照下含量较多，红蓝光质比等于1的含量较少；36.赤霉素：在不同光质比下进行培养的五指毛桃植株，其体内赤霉素的变化范围为0.1078-0.1430pg/l，其中红蓝光质比等于0.3的光照下含量较多，自然光照下的含量较少；37.茉莉酸甲酯：在不同光质比下进行培养的五指毛桃植株，其体内茉莉酸甲酯的变化范围为0.7558-0.7972pmol/l，其中红蓝光质比等于3的光照下含量较多，全红光的含量较少；38.油菜素甾：在不同光质比下进行培养的五指毛桃植株，其体内油菜素甾醇的变化范围为1.7458-1.8847ng/l，其中全红光照下含量较多，自然光照下的含量较少；39.可溶性糖：在不同光质比下进行培养的五指毛桃植株，其体内可溶性糖的变化范围为22.5997-63.1316mg/g鲜重，其中全红光照下含量较多，红蓝光质比等于0.3的含量较少；40.丙二醛：在不同光质比下进行培养的五指毛桃植株，其体内丙二醛的变化范围为32.1849-48.8032nmol/g鲜重，其中全蓝光照下含量较多，红蓝光质比等于3的含量较少；41.综上，相比于对比例，实施例的组培苗生长情况最好，虽然它的农艺性状不是最出色的，但是生理性状是最稳定的。42.表1不同红蓝光质比的led光源对五指毛桃组培苗生化指标的处理结果[0043][0044]2、补骨脂素是五指毛桃内含量最高的有效成分，该成分的含量可作为五指毛桃的重要质量指标。参见表2，不同红蓝光比例的led灯处理下的五指毛桃组培苗中，补骨脂素的含量范围为1.395005-2.612746mg/ml，其中含量的最高的为全红光照，即实施例。[0045]表2不同红蓝光质比的led光源对五指毛桃组培苗补骨脂素含量的处理结果[0046][0047]这里说明的设备数量和处理规模是用来简化本发明的说明的。对本发明五指毛桃组织培养方法及补骨脂素的制备方法的应用、修改和变化对本领域的技术人员来说是显而易见的。[0048]尽管本发明的实施方案已公开如上，但其并不仅仅限于说明书和实施方式中所列运用，它完全可以被适用于各种适合本发明的领域，对于熟悉本领域的人员而言，可容易地实现另外的修改，因此在不背离权利要求及等同范围所限定的一般概念下，本发明并不限于特定的细节和这里示出与描述的实施例。









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