针对疾病的蛋白质组学筛查的制作方法

有机化合物处理,合成应用技术针对疾病的蛋白质组学筛查1.相关申请的交叉引用2.本技术要求2020年3月3日提交的美国临时专利申请号62/984,744的优先权，所述申请通过引用整体并入本文，如同在本文中完整阐述一样。3.关于联邦政府资助的研究或开发的声明4.本发明根据由美国国立卫生研究院授予的批准号hd098180和批准号ai123135在政府支持下进行。政府拥有本发明的某些权利。5.关于序列表的声明6.与本技术相关的序列表以文本格式提供，代替纸质副本，并且特此通过引用并入说明书中。含有序列表的文本文件的名称为2g85039_st25.txt。文本文件是201kb，于2021年3月2日创建，并且经由efs-web以电子方式提交。技术领域7.本公开提供了针对原发性免疫缺陷病症(pidd)的临床诊断和新生儿筛查。pidd包括x连锁慢性肉芽肿病(x-cgd)、x连锁淋巴细胞增生综合征(xlp1；sh2d1a缺乏症)、家族性噬血细胞性淋巴组织细胞增多症2(fhl2)、共济失调毛细血管扩张症(at)、普通变异型免疫缺陷(cvid；b细胞功能障碍)、严重联合免疫缺陷(scid)、腺苷脱氨酶(ada)缺乏症和细胞质分裂付出蛋白8(dock8)缺乏症。所公开的测定可以从在出生时，以及其他来源和时间点已经常规收集的干血斑检测这些病症。另外，血小板(cd42)、自然杀伤(nk)细胞(cd56)和t细胞(cd3ε和cd3δ)的细胞特异性标志物可被用作次要标志物来为疾病的诊断提供支持。对这些病症的早期检测将大大改善患者结果，因为一旦出现症状，这些病症中的每一种都可能是致命的。背景技术：8.有许多疾病都有有效的治疗方法。然而，对于这些疾病中的许多疾病，一旦出现症状，该疾病就已经致命或导致不可逆转的损伤。此类疾病的实例包括原发性免疫缺陷病症(pidd)。9.原发性免疫缺陷病症(pidd)，也称为先天性免疫缺陷(iei)，是一组超过416种罕见的遗传病，其中免疫系统的组分缺失或功能不当。pidd的实例包括x连锁慢性肉芽肿病(x-cgd)、x连锁淋巴细胞增生综合征(xlp1；sh2d1a缺乏症)、家族性噬血细胞性淋巴组织细胞增多症2(fhl2)、共济失调毛细血管扩张症、普通变异型免疫缺陷(cvid；b细胞功能障碍)、严重联合免疫缺陷(scid)、腺苷脱氨酶(ada)缺乏症、细胞质分裂付出蛋白8(dock8)缺乏症。对pidd的早期检测在控制和预防潜在危及生命的感染和慢性后遗症方面极为重要。10.如果可在临床症状出现之前做出诊断，则将显著增强pidd的治疗。新生儿筛查(nbs)是针对美国每年出生的400万婴儿的标准公共预防性强制性筛查测试。nbs通常涉及在出生后24至48小时执行的血液测试。筛查使用沉积在滤纸上的几滴来自新生儿脚后跟的血液。含有干血斑(dbs)的纸张可储存，直到进行测试为止。11.为了进行nbs评估，从dbs取出干血冲孔，并且执行实验室测试以检测血液中是否存在特定物质(称为标志物或生物标志物)，所述物质指示出生时不明显但在以后的生活中导致严重健康问题的病症。尽管所筛查的病症因国家而异，但大多数国家筛查苯丙酮尿症、原发性先天性甲状腺功能减退症、囊性纤维化和镰状细胞病。nbs已被证明在改善患者结果和避免受影响个体的长期残疾方面非常有效，同时降低医疗费用。12.scid最近已添加至nbs组(nbs panel)中。不幸的是，对于大多数其他危及生命但可治疗的“非scid”免疫缺陷，目前尚无可用的广泛基础的成本有效的筛查方法。13.许多疾病没有被筛查，即使它是有益的，原因之一是实验室测试无法可靠地测量与疾病相关的标志物。这种无能为力的一个原因是病症与浓度极低或对目标病症无特异性的标志物相关。在这种情况下，可能难以在标志物水平与患者状态之间可靠地建立关系。14.与选择性反应监测质谱联合的肽免疫亲和富集(免疫-srm)是能够精确定量低丰度标志物的方法。免疫-srm的使用通常涉及以下步骤：(i)选择指示病症存在或不存在的靶蛋白；(ii)用酶处理将包含所述靶蛋白(如果存在)的生物样本，以将所述生物样本中的所有蛋白质消化为称为肽的较小片段；(iii)富集源自靶蛋白的选定肽标志物，以及(iv)在质谱仪中分析和定量所富集的目标肽。15.最近，jung等人(j.proteome res.2017；16:862–871)描述了使用免疫-srm来定量来自dbs的与威尔逊病(wilson disease)相关的蛋白质标志物atp7b。这是首次证明免疫-srm可用于从储存的dbs可靠地检测低丰度标志物，从而为使用所述方法筛查更广泛的病症提供了可能性。16.特征肽标志物和与它们结合的抗体已被开发用于通过免疫-srm诊断scid、was、xla、胱氨酸病和wd(pct/us2019/054856)。17.然而，此类测定的许多方面取决于正在诊断的病症、每种病症可用的生物标志物、开发可富集目标肽的分子实体的能力，以及每种目标肽在质谱仪中的行为。所有这些方面以及更多方面都需要仔细考虑和实验，以实现能够可靠地检测病症的测定。在特定实施方案中，在临床症状出现之前使用dbs用nbs组进行病症的诊断。技术实现要素：18.本公开描述了可用于筛查受试者(例如，新生儿)的x连锁慢性肉芽肿病(x-cgd)、x连锁淋巴细胞增生综合征(xlp1；sh2d1a缺乏症)、家族性噬血细胞性淋巴组织细胞增多症2(fhl2)、共济失调毛细血管扩张症(at)、普通变异型免疫缺陷(cvid；b细胞功能障碍)、严重联合免疫缺陷(scid)、腺苷脱氨酶(ada)缺乏症和细胞质分裂付出蛋白8(dock8)缺乏症的多重测定的开发。在特定实施方案中，所述方法包括鉴定患有x连锁或il2rg缺陷型scid的个体。通过在毁灭性且经常致命性的临床症状出现之前可靠地诊断这些病症，所述测定可显著改善受影响个体的结果。在特定实施方案中，血小板(cd42)、自然杀伤(nk)细胞(cd56)和t细胞(cd3epsilon(cd3ε)和cd3delta(cd3δ))的细胞特异性标志物可被用作次要标志物来为疾病的诊断提供支持。在特定实施方案中，cd3ε和cd3δ可以用作诊断scid的主要标志物。所述测定可使用已经作为现有新生儿筛查(nbs)程序的一部分常规收集的干血斑(dbs)来检测与这些病症相关的标志物的存在或不存在。在特定实施方案中，从受试者获得的颊拭子样本、外周单个核血细胞(pbmc)样本或白血细胞(wbc)样本可用于所述测定。19.本公开描述了与可以使用与选择性反应监测质谱联合的肽免疫亲和富集(免疫-srm)可靠地检测和定量的病症中的每种病症相关的肽。本公开还提供了可用于富集肽的高亲和力抗体。附图说明20.本文提交的一些附图在彩色情况下可以更好理解。申请人将附图的彩色版本视为原始提交的一部分，并且保留在以后的诉讼中呈递附图的彩色图像的权利。21.图1.用于x连锁慢性肉芽肿病(x-cgd)、x连锁淋巴细胞增生综合征(xlp1；sh2d1a缺乏症)、家族性噬血细胞性淋巴组织细胞增多症2(fhl2)、共济失调毛细血管扩张症(at)、普通变异型免疫缺陷(cvid；b细胞功能障碍)、严重联合免疫缺陷(scid)、腺苷脱氨酶(ada)缺乏症、细胞质分裂付出蛋白8(dock8)缺乏症的与选择性反应监测质谱联合的肽免疫亲和富集(免疫-srm-ms)所使用的蛋白质靶标和肽序列，以及血小板(cd42)、自然杀伤(nk)细胞(cd56)和t细胞(cd3epsilon(cd3ε)和cd3delta(cd3δ))的次要标志物。在特定实施方案中，cd3ε和cd3δ可用作诊断scid的主要标志物。还示出总质量、母离子质量、子y离子质量和子b离子质量。22.图2.例示免疫-srm-ms的过程的示意图。23.图3.具有选定跃迁的每种靶标肽的片段光谱。24.图4.特征肽的内源性多反应监测(mrm)迹线。25.图5a、图5b.每种特征肽的线性度曲线。(图5a)高fmol范围图表示整个分析的浓度范围。(图5b)低fmol范围图表示来自图5a的图的放大的低浓度区域。26.图6.患者信息，包括所有特征肽的测量的浓度、诊断、遗传信息和当前治疗。n/a＝不可用。27.图7a、图7b.血小板标志物cd42 128和cd42 154的免疫-srm分析示出血小板水平的相应变化。****p《0.001。28.图8a-8c.x-cgd、dock8缺乏症和ada缺乏症患者中主要特征肽cybb 509、dock8 1272和ada 93的免疫-srm分析。*p《0.05。29.图9.在pidd患者的dbs中发现的nk细胞标志物cd56 122的水平。30.图10a-10c.使用ht和标准免疫-srm进行的pidd患者鉴定的比较。***＝p《0.005。31.图11.本公开的示例性序列，包括：32.33.34.35.36.具体实施方式37.有许多疾病都有有效的治疗方法。然而，对于这些疾病中的许多疾病，一旦出现症状，该疾病就已经致命或导致不可逆转的损伤。原发性免疫缺陷病症(pidd)就是这类很好的实例。38.原发性免疫缺陷病症(pidd)，也称为先天性免疫缺陷(iei)，是一组超过416种罕见的遗传病，其中免疫系统的组分缺失或功能不正常。虽然个别罕见，但pidd的合并发病率估计为约1/1200(tangye等人，journal of clinical immunology,2020,出版中；mccusker,c.,j.upton和r.warrington,primary immunodeficiency.allergy,asthma,and clinical immunology:official journal of the canadian society of allergy and clinical immunology,2018.14(增刊2):第61-61页；kobrynski等人，j clin immunol,2014.34(8):第954-61页)。一旦得到诊断和适当治疗，患者经常可以过上相对正常的生活(kaveri等人，clin exp immunol,2011.164增刊2:第2-5页；raje,n.和c.dinakar,immunology and allergy clinics of north america,2015.35(4):第599-623页)。根据病症，也可以利用造血干细胞移植(hsct)、酶替代疗法(ert)或基因疗法进行治愈性治疗(raje,n.和c.dinakar,immunology and allergy clinics of north america,2015.35(4):第599-623页；aydin等人，j clin immunol,2015.35(2):第189-98页；gaspar等人，blood,2009.114(17):第3524-32页；moratto等人，blood,2011.118(6):第1675-84页；parta等人，journal of clinical immunology,2017.37(6):第548-558页；staal等人，frontiers in pediatrics,2019.7(443)；ferrua等人，lancet haematol,2019.6(5):第e239-e253页)。几乎无处不在，pidd的早期检测在控制和预防可能危及生命的感染和慢性后遗症方面极为重要(grunebaum等人，jama,2006.295(5):第508-18页；kanariou等人curr opin hematol,2018.25(1):第7-12页)。39.早期干预受到临床上难以诊断pidd和缺乏直接的群体筛查工具的限制。实验室评价通常由复发和/或慢性感染的迹象引出。在临床评价之后，诊断确认所需的实验室测试往往涉及技术要求高的分析，包括免疫细胞亚群分析、蛋白质表达和/或患者白血细胞中的酶活性(bonilla等人，journal of allergy and clinical immunology,2015.136(5):第1186-1205页.e78)。目前不可能从干血斑(dbs)执行这些临床诊断，因为所有测试都需要全血或分离的外周血单个核细胞(pbmc)样本。基因测序最常用作最终确认(bonilla等人，journal of allergy and clinical immunology,2015.136(5):第1186-1205页.e78)。40.使用通过足跟棒较小侵入性地采集的样本进行的操作简单的质谱测定将允许快速筛查疑似pidd。基于串联质谱法(ms/ms)的蛋白质组学测定的灵敏度和特异性可被用来靠地测量dbs提取物中极低丰度的肽并从而量化它们所代表的蛋白质(collins等人，frontiers in immunology,2018.9(2756)；collins等人，frontiers in immunology,2020.11；dewilde等人，clin chem,2008.54(12):1961-8)。此外，能够使用dbs检测pidd患者的测定将适用于新生儿筛查(nbs)并且允许在潜在致命感染发作之前鉴定患者。对于严重联合免疫缺陷(scid)和一些形式的无丙种球蛋白血症，确实存在针对来自dbs的t细胞受体切除环(trec)和κ缺失元件重组环(krec)的新生儿筛查。然而，trec/krec分析经常遗漏几个scid亚型(例如ada、zap70和mhc缺乏症)，并且由于筛查方法的缺乏，目前不存在针对其他pidd的nbs(kwan等人，jama,2014.312(7):第729-38页；chan和puck,j allergy clin immunol,2005.115(2):第391-8页；baker等人，jallergy clin immunol,2009.124(3):第522-7页；chase等人，curr opin allergy clin immunol,2010.10(6):第521-5页；la marca等人，jallergy clin immunol,2013.131(6):第1604-10页)。尽管如此，最近的进展已经证明能够筛查与腺苷脱氨酶(ada)缺乏型scid和嘌呤核苷磷酸化酶缺乏症相关的代谢物，以及免疫细胞谱的表观遗传标志物(la marca等人，journal of pharmaceutical and biomedical analysis,2014.88:第201-206页；baron等人，sci transl med,2018.10(452)；la marca等人，journal of allergy and clinical immunology,2014.134(1):第155-159页.e3)。41.scid是由参与抗感染免疫细胞(诸如t细胞和b细胞)的发育和功能的不同基因的突变引起的一组罕见病症。scid中涉及了十几种基因。scid最经常以常染色体隐性模式遗传，其中特定基因的两个拷贝(一个是从母亲那里遗传而一个是从父亲那里遗传)都含有缺陷。x连锁或il2rg缺陷型scid(x-scid)主要影响男性并且是由位于x染色体上的编码白细胞介素(il)受体亚基共同γ链(il2rg)的基因突变引起的。该受体亚基由至少六种不同的白细胞介素受体复合物(包括il2、il4、il7、il9、il15和il21的受体复合物)共有。il2rg基因的突变通过阻滞对淋巴细胞的发育和功能很重要的多种细胞因子途径，导致免疫系统出现严重缺陷。患有这种类型的scid的男性具有异常生长和发育的白血细胞。因此，它们具有少量t细胞和自然杀伤细胞，并且它们的b细胞不起作用。scid患者通常在生命早期受到严重的细菌、病毒或真菌感染，并且经常罹患肺部瘢痕、慢性腹泻和发育停滞(failure to thrive)。除非婴儿接受免疫恢复治疗，诸如造血干细胞移植、基因疗法或酶疗法，否则所述疾患通常在生命的一两年之内是致命的。42.常染色体隐性scid的最著名形式是由腺苷脱氨酶(ada)缺乏症引起的，其中婴儿缺乏t细胞存活所必需的ada酶。患有scid的人几乎都缺乏对细菌、病毒和真菌的所有免疫保护，因此容易出现可危及生命的反复和持续感染。大多数患有ada缺乏症的个体在出生后前6个月内被诊断患有scid。随着时间的推移，受影响的个体可发展出慢性肺损伤、营养不良和其他健康问题。ada是嘌呤分解所必需的一种酶。当前的治疗选择包括酶替代疗法、异基因造血干细胞移植(hsct)和自体基因疗法。43.x连锁慢性肉芽肿病(x-cgd)是cgd的最常见形式，是一种增加身体对某些细菌和真菌引起的感染的易感性的遗传性pidd。cgd患者具有有缺陷的中性粒细胞，该有缺陷的中性粒细胞不能抗感染，因为这些细胞不能产生过氧化氢。在感染或炎症部位形成称为肉芽肿的免疫细胞团。这些严重感染可包括皮肤或骨感染以及内脏器官脓肿。患有cgd的儿童往往在出生时很健康，但在婴儿期或幼儿期发展出严重感染。x-cgd是由cybb基因突变引起的，该基因编码一种称为细胞色素b-245β链的蛋白质(也称为p91-phox)。细胞色素b-245连同其他亚基一起形成称为nadph氧化酶的酶复合物，其在免疫系统中起着至关重要的作用。针对cgd的治疗选择包括防治性抗生素和抗真菌药物、干扰素-γ注射和急性感染的激进性管理。骨髓移植可以治愈cgd；然而，这种疗法复杂并且必须小心选择移植候选者和供体。44.x连锁淋巴细胞增生综合征(xlp1；sh2d1a缺乏症)是一种特征在于免疫系统对爱泼斯坦-巴尔病毒(epstein-barr virus，ebv)感染的反应有缺陷的罕见的遗传性pidd，并且可能导致严重的、危及生命的肝炎，血液和身体分泌物中异常低水平的抗体或免疫球蛋白(低丙种球蛋白血症)，和/或某些类型淋巴样组织的恶性肿瘤(b细胞淋巴瘤)。xlp1是由sh2d1a基因突变引起的，该基因编码在t细胞和b细胞的双向刺激中起主要作用的蛋白质。如果在ebv暴露之前鉴定出了受影响个体，建议输注含ebv抗体的免疫球蛋白(静脉输注丙种球蛋白)，以帮助预防危及生命的感染性单核细胞增多症和其他症状的发作。在ebv暴露之后被诊断患有xlp的受影响个体中，治疗可包括帮助预防机会性感染的抗生素药物和/或静脉丙种球蛋白疗法。发展b细胞淋巴瘤的受影响患者可用手术、放射和/或化学疗法进行治疗。45.家族性噬血细胞性淋巴组织细胞增多症2(fhl2)是其中免疫系统产生过多激活免疫细胞(淋巴细胞)(包括t细胞、自然杀伤细胞、b细胞和巨噬细胞(组织细胞))的病症。还会产生过量的称为细胞因子的免疫系统蛋白质。这种免疫系统的过度激活会导致发烧并损伤肝脏和脾脏，引起这些器官肿大。骨髓中的造血细胞也在称为噬红细胞作用的过程中受到破坏。结果，受影响个体出现贫血和血小板数量减少。血小板减少可导致容易瘀伤和异常出血。fhl2是由prf1基因突变引起的，该基因编码在t细胞和自然杀伤(nk)细胞中发现的穿孔蛋白，该穿孔蛋白参与细胞破坏和免疫系统的调节。异基因造血细胞移植可以治愈fhl2。依玛鲁单抗被fda批准为对患有原发性噬血细胞性淋巴组织细胞增多症的成人和儿童患者的治疗。46.共济失调毛细血管扩张症(at)是一种罕见的遗传病症，其会影响神经系统、免疫系统和其他身体系统。这种病症的特征在于从幼儿期开始出现协调运动进行性困难(共济失调)，以及在眼睛和皮肤表面出现小簇扩大血管(称为毛细血管扩张)。受影响个体免疫系统减弱，容易发生肺部感染，并且发展癌症的风险增加。受影响个体的血液中倾向于具有大量称为甲胎蛋白(afp)的蛋白质。共济失调毛细血管扩张症是由atm基因突变引起的，该基因编码在dna损伤后调节细胞分裂方面发挥作用的酶。共济失调毛细血管扩张症的治疗旨在控制症状并且包括：用抗生素药物的疗法、支气管和肺的体位引流法以及对于呼吸道感染的丙种球蛋白注射；避免过度暴露于阳光以控制毛细血管扩张的扩散和严重程度；维生素e疗法；施用药物地西泮(valium)以帮助口齿不清和不自觉的肌肉收缩；和物理疗法。47.普通变异型免疫缺陷(cvid；b细胞功能障碍)是pidd最常见的形式之一。它的特征在于抗体缺乏，抗体缺乏使免疫系统无法抵御细菌和病毒，引起反复且严重的感染，这些感染主要影响耳朵、鼻窦和呼吸道。大约25％患有cvid的患者患有可影响血细胞的自身免疫病症，导致白细胞或血小板数量低、贫血、关节炎和诸如内分泌病症的其他疾患。在一些形式的cvid中，患者在肺、淋巴结、肝脏、皮肤或其他器官中发展出肉芽肿。cvid有许多遗传起源，但通常以b细胞功能失调、减少或不存在为特征。cvid的治疗包括免疫球蛋白替代、预防性抗生素以及自身免疫疾病和肉芽肿病的管理。48.细胞质分裂付出蛋白8(dock8)缺乏症是一种遗传性病症，其特征在于免疫球蛋白e水平升高、嗜酸性粒细胞(抗病白血细胞的类型)水平增加以及复发性葡萄球菌和病毒感染。dock8是一种参与调节细胞肌动蛋白骨架的蛋白质并且也可以是一种肿瘤抑制因子，因为dock8在许多癌症中丢失并且患有dock8缺乏症的人容易发展恶性肿瘤。dock8缺乏症的治疗集中于预防和治疗感染并且包括：广谱抗生素；局部抗生素；全身性抗生素，包括甲氧苄氨嘧啶(trimethoprim)/磺胺甲噁唑(sulfamethoxazole)、青霉素和头孢菌素及抗真菌药；改善白血细胞功能的色甘酸钠；用于皮肤疾患的异维a酸(isotretinoin)；静脉免疫球蛋白；干扰素γ；奥马珠单抗(omalizumab)；环孢素a；hsct；骨髓移植；和手术治疗。49.cd42，也称为糖蛋白ib(gpib)，是血小板上gpib-v-ix复合物的一种组分。gpib-v-ix复合物结合血管假性血友病因子(vwf)以允许血管损伤部位的血小板粘附和血小板栓形成。50.cd56，也称为神经细胞粘附分子(ncam)，是在神经元、神经胶质和骨骼肌表面表达的亲同种抗原的结合糖蛋白。具体而言，cd56的表达与nk细胞相关。除了作为神经谱系定向的标志物外，在造血系统中也发现cd56表达。cd56在包括gamma delta(γδ)τ细胞和激活的cd8+t细胞在内的其他淋巴样细胞上以及在树突状细胞上已被检测到。ncam被认为在细胞-细胞粘附、神经突增生、突触可塑性以及学习和记忆方面具有作用。51.cd3epsilon(cd3ε)是形成t细胞受体(tcr)-cd3复合物的一部分的多肽。cd3ε链连同cd3δ、cd3γ和cd3ζ链一起负责跨细胞膜传输tcr介导的信号，以激活对适应性免疫反应很重要的下游信号传导途径。cd3ε除了在t细胞激活期间在信号转导中起作用外，还在正确的t细胞发育中起作用。cd3ε通过形成两种异二聚体cd3δ/cd3ε和cd3γ/cd3ε来启动tcr-cd3复合物组装。cd3ε还经由cd3ε胞质区中存在的内吞作用序列在tcr-cd3复合物的内化和细胞表面下调中起作用。52.cd3delta(cd3δ)是形成t细胞受体(tcr)-cd3复合物的一部分的多肽。cd3δ链连同cd3ε、cd3γ和cd3ζ链一起负责跨细胞膜传输tcr介导的信号，以激活对适应性免疫反应很重要的下游信号传导途径。cd3δ除了在t细胞激活期间在信号转导中起作用外，还在正确的细胞内tcr-cd3复合物组装和表面表达中起作用。cd3δ在胸腺细胞(胸腺内的淋巴细胞)分化中起重要作用。在不存在功能性tcr-cd3复合物的情况下，胸腺细胞无法正确分化。cd3δ通过与cd4和cd8相互作用来在tcr与共受体cd4和cd8之间建立功能联系，这种相互作用是允许cd4或cd8 t细胞的激活和正向选择的相互作用。53.如果稳健的筛查方法可以在新生儿期从干血斑(dbs)中鉴定出患者，则x-cgd、xlp1、fhl2、at、cvid、scid、ada缺乏症和dock8缺乏症将是新生儿筛查(nbs)的有力候选者。例如，由于大多数先天性pidd引起特定蛋白质的减少或不存在，这些目标蛋白质的直接定量代表了一种有吸引力的潜在筛查工具。54.为了进行nbs评估，从dbs取出干血冲孔，并且执行实验室测试以检测血液中是否存在特定物质(称为标志物或生物标志物)，所述物质指示出生时不明显但在以后的生活中导致严重健康问题的病症。尽管所筛查的病症因国家而异，但大多数国家筛查苯丙酮尿症、原发性先天性甲状腺功能减退症、囊性纤维化和镰状细胞病。nbs已被证明在改善患者结果和避免受影响个体的长期残疾方面非常有效，同时降低医疗费用。不幸的是，检测经常受限于血细胞中极低的蛋白质浓度和dbs中存在的有限血量。55.串联质谱(ms/ms)于二十世纪九十年代首次应用于nbs，从而为快速筛查多种代谢物以及由此从出生时收集的dbs样本中筛查多种疾病铺平道路(chace j mass spectrom.wiley-blackwell；2009；44:163–170；millington等人，j.inherit.metab.dis.1990；13:321–324；sweetman等人，pediatrics.2006；117:s308–s314；almannai等人，curr.opin.pediatr.2016；28:694–699；watson等人，genet.med.nature publishing group；2006.第1s–252s页；chace等人，clin.chem.1993；39:66–71)。在三重四极质谱仪上执行的选择性反应监测质谱(srm-ms)进一步实现了对特定生物标志物的精确、高通量和分析上稳健的定量；因此，它现在已成为全球临床nbs实验室的护理标准(chace dh j mass spectrom.wiley-blackwell；2009；44:163–170；chace和kalas.clinical biochemistry.2005；38:296–309。dott等人，american journal of medical genetics part a.wiley subscription services,inc.,a wiley company；2006；140:837–842)。56.ms/ms依赖于上游浓缩代谢物的测量，以检测具有特定酶缺陷的各种先天性代谢错误。这排除将其应用于疾病，诸如pidd，其中不存在或当前未验证累积的代谢物。为此，基于蛋白质的测定(诸如流式细胞术或蛋白质印迹)已被用作针对其中大多数突变导致蛋白质产物不存在或减少的疾病(诸如维斯科特-奥尔德里奇综合征(wiskott-aldrich syndrome,was)及其较轻度表型，x连锁血小板减少症(xlt))的一线研究方法(qasim等人br.j.haematol.2001；113:861–865；jin等人，blood.american society of hematology；2004；104:4010–4019)。这些方法要求可获得来自患者的完整血液样本或细胞，从而不可能对来自资源贫乏地区的患者进行基于群体的筛查或测试。57.先前已证实，用于定量来自pbmc的胰蛋白酶消化物的btk、wasp和t细胞标志物cd3ε的特征肽的基于ms的方法可用于分别筛查x连锁无丙种球蛋白血症(xla)、was和scid(kerfoot等人，proteomics clin appl,2012.6(7-8):第394-402页)。cd3ε被选择作为t细胞数量的一般表示，因为尽管存在遗传异质性，但所有scid患者都共有t细胞淋巴细胞减少症。盲法研究中的每位患者都缺乏对他们各自疾病有特异性的特征肽(即，xla患者缺乏布鲁顿酪氨酸激酶(btk)且was患者缺失was蛋白(wasp)，等等)。58.srm-ms利用蛋白水解生成的特征肽作为目标蛋白的化学计量替代物。反过来，这可用于估计样本中表达该蛋白质的特定细胞类型的数量(即对cd3ε进行定量以指示血液中cd3+t细胞的数量)。ms对每种特征肽的高特异性由三种物理化学性质赋予-它的质量、在高效液相色谱(hplc)分离时的保留时间以及所得的靶标特异性片段化模式(kennedy等人nat.methods.2014；11:149–155)。尽管取得了这些进展，但典型的定量极限范围是100至1000ng蛋白质/ml，使用复杂的基质(诸如血液或血浆)通常排除通过基于srm-ms的测定对低丰度靶标的精确定量。这限制对导致仅在细胞内表达的靶蛋白水平不存在或降低的许多pidd的适用性(de saint basile等人j.clin.invest.american society for clinical investigation；2004；114:1512–1517)。59.与srm联合的肽免疫亲和富集(免疫-srm)(也称为稳定同位素标准物和被抗肽抗体捕获(siscapa))通过在srm-ms分析之前利用抗肽抗体纯化和富集来自复杂生物样本的目标肽来提高srm-ms测定的灵敏度(zhao等人，j vis exp.2011；53:2812；whiteaker等人，mol.cell proteomics.american society for biochemistry and molecular biology；2010；9:184–196；whiteaker等人mol.cell proteomics.american society for biochemistry and molecular biology；2012；11:m111.015347；kuhn等人，clin.chem.2009；55:1108–1117；anderson等人，j proteome res.2004；3(2):235-244；collins等人，frontiers in immunology,2018.9(2756)；collins等人frontiers in immunology,2020.11；jung等人，j proteome res,2017.16(2):第862-871页)。代表性的免疫-srm过程在图2中例示出。60.使用抗肽抗体对特征肽生物标志物进行免疫亲和富集可从复杂的生物基质中分离出目标肽。这简化了样本基质、降低了背景并浓缩了分析物从而增强液相色谱-串联质谱(lc-ms/ms)测定的灵敏度(anderson等人，j proteome res,2004.3(2):第235-44页；anderson和hunter,mol cell proteomics,2006.5(4):第573-88页)。免疫-srm允许以高重现性对血液中以低皮摩尔浓度存在的蛋白质进行定量(whiteaker等人，mol cell proteomics,2010.9(1):第184-96页；whiteaker等人，j proteome res,2014.13(4):第2187-96页；hoofnagle等人，clin chem,2008.54(11):第1796-804页；hoofnagle等人，clin chem,2016.62(1):第48-69页；kuhn等人，mol cell proteomics,2012.11(6):第m111.013854页)。使用这种方法，在40个患者样本的盲法筛查中，所有样本各自的肽均显著减少并且诊断截断值允许对每个经分子确认的xla病例(n＝26)、was病例(n＝11)及3例scid中的2例进行阳性鉴定(collins等人，frontiers in immunology,2018.9(2756))。61.免疫-srm测定的许多方面取决于正在诊断的病症、每种病症可用的生物标志物、开发可富集目标肽的分子实体的能力，以及每种目标肽在质谱仪中的行为。所有这些方面以及更多方面都需要仔细考虑和实验，以实现能够可靠地检测病症的可靠测定。在特定实施方案中，在临床症状出现之前使用dbs用nbs组进行病症的诊断。62.本公开提供了一种用于可靠地诊断x-cgd、xlp1、fhl2、at、cvid、scid、ada缺乏症和dock8缺乏症的多重免疫-srm方法。另外，细胞特异性标志物cd42、cd56、cd3ε和cd3δ可以被用作次要标志物以通过定量血小板(cd42)、自然杀伤(nk)细胞(cd56)和t细胞(cd3ε和cd3δ)为诊断提供支持信息。在特定实施方案中，cd3ε和cd3δ可以用作诊断scid的主要标志物。本文公开的多重免疫-srm测定可以利用针对在x-cgd、xlp1、fhl2、at、cvid、scid、ada缺乏症和dock8缺乏症中减少或不存在的蛋白质肽生成的抗肽抗体。63.现在更详细地描述本公开的以下方面：(i)生物样本的收集和加工；(ii)x-cgd、xlp1、fhl2、at、cvid、scid、ada缺乏症和dock8缺乏症的肽标志物，以及次要肽标志物cd42、cd56、cd3ε和cd3δ；(iii)生物样本中蛋白质的酶消化；(iv)用于富集肽标志物的抗体；(v)变体；(vi)肽的富集策略；(vii)液相色谱(lc)；(viii)质谱(ms)；(ix)使用方法；(x)试剂盒；(xi)示例性实施方案；(xii)实验性实施例；和(xiii)结尾段落。这些标题仅为了组织目的而提供，并不限制本公开的范围或解释。64.(i)生物样本的收集和加工。在特定实施方案中，在本公开的方法中可以使用的生物样本包括源自血液或细胞的样本。在特定实施方案中，本公开的方法中使用的样本是dbs。在特定实施方案中，可通过将血液置于滤纸卡上并使血液干燥来制备来自受试者的全血。65.在特定实施方案中，可以将来自受试者的全血收集在任何抗凝剂中。在特定实施方案中，可以将来自受试者的全血收集在肝素中。可通过将50-100μl(例如，70μl)血液/斑用移液管吸移到滤纸卡(例如，protein savertm卡，whatman inc,piscataway,nj)上来制备dbs且让其在室温下干燥。在特定实施方案中，让血液在滤纸卡上干燥过夜。可将dbs例如在-80℃下储存在密封塑料袋中直到使用。在特定实施方案中，整个dbs可用于本公开的免疫-srm测定中。在特定实施方案中，来自dbs的一个或多个3mm冲孔可用于本公开的免疫-srm测定中。在特定实施方案中，可以将dbs用0.1％triton x-100溶解在50mm碳酸氢铵中。66.在特定实施方案中，在本公开的方法中使用的样本包括从颊拭子或粘膜样本获得的细胞。在特定实施方案中，粘膜样本包括口、鼻、生殖器和直肠样本(espinosa-de aquino等人(2017)methods in ecolo gy and evolution 8:370-378)。在特定实施方案中，颊拭子样本包括来自脸颊或嘴巴的细胞。在特定实施方案中，颊拭子样本可以按照以下描述的方案从受试者获得：chla.(2016年4月4日)。颊拭子采集程序。chla-clinical pathology；(2016年7月27日)。颊dna采集说明。pathway genomics；(2017年12月14日)。颊拭子样本采集说明。otogenetics；pdxl pdxl.(2017年11月28日)。颊拭子采集程序-personalizeddx labs[video].youtube.见万维网上的youtu.be/3ftvhkfm71o？t＝146；和疾病控制和预防中心(cdc).(2020年7月8日)。收集、操纵和测试covid-19临床标本的临时指南。见万维网上的cdc.gov/coronavirus/2019-ncov/lab/guidelines-clinical-specimens.html。[0067]在特定实施方案中，颊拭子样本可以通过以下方案从受试者获得。在样本采集之前，患者至少30分钟不吸烟、不吃、不喝、不嚼口香糖或刷牙。小心地从包装中取出拭子，确保尖端不触及任何物体或表面。将拭子插入位于嘴的一侧在脸颊、牙齿和上牙龈之间的颊腔中。将拭子的尖端压在一侧脸颊内侧，并以作圆周运动的方式来回、上下摩擦。在摩擦期间旋转手柄，以使来自脸颊的细胞覆盖整个尖端。在采集过程中，不允许尖端触及牙齿、牙龈和嘴唇。不允许拭子被唾液过度饱和。采集后，在不接触牙齿、牙龈或嘴唇的情况下将拭子从嘴中取出。让拭子在室温下风干至少30分钟。去除手柄的拭子可储存在低温小瓶中。可以用第二根拭子在对侧脸颊上重复这些步骤。颊拭子样本采集后可在2-8℃下储存长达72小时，如果超过72小时，则可在-80℃或更低的冰箱中储存。在特定实施方案中，用颊拭子采集细胞可以持续至少30秒。在特定实施方案中，用颊拭子采集细胞可以从最大粘膜表面采集。在特定实施方案中，可以为每个受试者采集一到五个颊拭子样本。在特定实施方案中，颊拭子样本可以在无菌表面上风干至少五分钟、至少10分钟、至少15分钟、至少20分钟、至少25分钟、至少30分钟或更长时间。在特定实施方案中，受试者可以在样本采集之前用清水冲洗他们的嘴巴。在特定实施方案中，样本采集区域可以使用单独的拭子用盐水润湿。在特定实施方案中，颊拭子样本可储存在25℃、20℃、15℃、10℃、5℃、0℃、-5℃、-10℃、-15℃、-20℃或更低温度下。在特定实施方案中，颊拭子样本可以在-20℃下储存一至两周。在特定实施方案中，可以从水和/或漱口水冲洗液而不是拭子采集颊样本(michalczyk等人(2004)biotechniques37(2):262-269)。[0068]在特定实施方案中，来自颊拭子样本的细胞可以用0.1％triton x-100溶解在50mm碳酸氢铵中。在特定实施方案中，可以按照espinosa-de aquino等人(2017)描述的方案从颊拭子样本中分离出蛋白质。在特定实施方案中，来自颊拭子样本的细胞可以用适当的缓冲液诸如trizol(thermo fisher scientific,waltham,ma)提取，并且核酸沉淀后的上清液可以被用于蛋白质提取。在特定的实施方案中，可以用丙酮沉淀蛋白质，可以将蛋白质沉淀重悬于合适的缓冲液(例如，盐酸胍在95％的补加有2.5％甘油的乙醇中的溶液)中，可以通过超声分散沉淀，可以将沉淀离心并且洗涤，可以干燥沉淀，并且可以将沉淀溶解在合适的缓冲液(例如，pbs和十二烷基硫酸钠)中。在特定实施方案中，可将经溶解的团沉淀在100℃下加热，然后离心以获得上清液以供使用。[0069]在特定实施方案中，本公开的方法中使用的样本包括外周血单个核细胞(pbmc)。pbmc来自外周血并且来源于驻存在骨髓中的造血干细胞(hsc)。pbmc是具有圆形细胞核的血细胞并且可以包括许多类型的细胞，包括单核细胞、淋巴细胞(包括t细胞、b细胞和nk细胞)、树突状细胞和干细胞。pbmc可以通过密度梯度离心(例如，ficoll-paque)和/或通过白细胞去除术(kerfoot等人，proteomics clin appl,2012.6(7-8):394-402；grievink等人(2016)biopreserv biobank14(5):410-415；corkum等人，(2015)bmc immunol.16:48；jia等人，(2018)biopreserv biobank 16(2):82-91)分离。密度梯度离心按细胞密度分离细胞。在特定实施方案中，全血或血沉棕黄层可在密度介质上方或下方分层，而不将两层混合，接着进行离心。在特定实施方案中，pbmc在血浆与密度梯度介质之间的界面处作为白色薄层出现。在特定实施方案中，可以使用含有ficoll-hypaque和将ficoll溶液与待抽取的血液分开的凝胶塞的抽血管(细胞制备管(cpttm,bd biosciences,san jose,ca)；puleo等人(2017)bio-protocol 7(2):e2103)。在特定实施方案中，可以使用被设计成具有用于防止密度梯度介质和样本在离心之前混合的插入件的sepmatetm管(stemcelltmtechnologies,vancouver,ca)。白细胞去除机是一种自动化装置，从供体取得全血并使用高速离心分离出目标pbmc级分，同时将剩余部分血液(包括血浆、红细胞和粒细胞)返回供体。在特定实施方案中，分离的pbmc可以用0.1％triton x-100溶解在50mm碳酸氢铵中。[0070]在特定实施方案中，本公开的方法中使用的样本包括白血细胞(wbc)。wbc，也称为白细胞，是免疫系统的一部分并且保护身体免受感染和外来侵入物的侵害。在特定实施方案中，wbc包括粒细胞(多形核细胞)、淋巴细胞(单个核细胞)和单核细胞(单个核细胞)。在特定实施方案中，单个核细胞或多形核细胞的富集可以使用用抗体缀合磁珠进行的特定细胞类型的正向选择或负向选择(zhou等人(2012)clinical and vaccine immunology 19(7):1065-1074)。在特定实施方案中，wbc包括淋巴细胞和单核细胞，但不包括粒细胞。在特定实施方案中，wbc可以通过使用裂解试剂诸如氯化铵来裂解红细胞的过程来分离。在特定实施方案中，单个核wbc可以通过如上所述的密度梯度离心来分离。在特定实施方案中，分离的wbc可以用0.1％triton x-100溶解在50mm碳酸氢铵中。[0071](ii)x-cgd、xlp1、fhl2、at、cvid、scid、ada缺乏症和dock8缺乏症的肽标志物，以及次要肽标志物cd42、cd56、cd3ε和cd3δ。存在许多来自靶蛋白的理论蛋白水解肽。这些可能是单克隆抗体产生的潜在候选者。尽管如此，在通过ms/ms筛查了它们的特征之后，选择了最佳的潜在候选肽。选择具有最高灵敏度和特异性的那些特征肽以开发相应的单克隆抗体，并使用临床样本进行验证。在特定实施方案中，多种肽和抗体可以包括在多重分析中以增加免疫-srm测定的通量并降低该测定所需的成本和时间。[0072]通常，选择一种或两种特征蛋白水解肽以化学计量地表示目标蛋白质，所述特征蛋白水解肽是目标蛋白质所特有的并且在ms实验中始终观察到(mallick等人nat biotechnol 2007；25:125-131)。可以通过先前ms实验中的检测、使用计算工具预测通过ms最有可能观察到的肽或两者的组合来选择特征肽。在特定实施方案中，可选择长度为5-22个氨基酸且具有中等疏水性的胰蛋白酶肽。由于在hplc中的保留时间变化和表面损失，极具亲水性和极具疏水性的肽可能不太稳定。在特定实施方案中，甲硫氨酸残基(氧化)、n端谷氨酰胺(环化)、天冬酰胺随后是甘氨酸或脯氨酸(易于脱酰胺)和二碱基末端(例如相邻的赖氨酸或精氨酸残基诸如kk、kr、rr、rk具有可变消化效率的潜力)可能是不希望的(whiteaker和paulovich clin lab med.2011；31(3):385-396)。较短的肽和含有脯氨酸残基的那些肽可能是srm的更佳靶标(lange等人molecular systems biology 2008；4:222)。[0073]在特定实施方案中，所述肽包括cybb、sh2d1a(sap)、prf-1、atm、cd19、il2rg、ada、dock8、cd42、cd56、cd3ε、cd3δ或它们的组合的部分。在特定实施方案中，所述肽包括图1所示的seq id no:1-15和210-217。[0074]在特定实施方案中，本公开的抗体的示例性cdr序列示于表1a中。在特定实施方案中，本公开的抗体的示例性可变重(vh)和可变轻(vl)结构域序列示于表1b中。在特定实施方案中，本公开的示例性肽和抗体的seq id no示于表1c中。[0075]表1a.本公开的抗体的示例性cdr序列[0076][0077][0078][0079]表1b.本公开的抗体的示例性可变重(vh)和可变轻(vl)结构域序列[0080][0081][0082][0083]表1c.本公开的示例性肽和抗体的seq id no[0084][0085][0086][0087]*加下划线的seq id no表示核苷酸序列。未加下划线的seq id no表示氨基酸序列。[0088](iii)生物样本中蛋白质的酶消化。可对dbs中、来自颊拭子样本的细胞中、pbmc中或wbc中的蛋白质进行蛋白水解以产生肽，可在通过lc-srm-ms分析之前通过免疫亲和纯化进一步选择该肽。蛋白水解可以使用位点特异性内切蛋白酶来完成，诸如胃蛋白酶、arg-c蛋白酶、asp-n肽链内切酶、bnps-粪臭素、半胱天冬酶1、半胱天冬酶2、半胱天冬酶3、半胱天冬酶4、半胱天冬酶5、半胱天冬酶6、半胱天冬酶7、半胱天冬酶8、半胱天冬酶9、半胱天冬酶10、糜蛋白酶、梭菌蛋白酶(梭菌肽酶b)、肠激酶、xa因子、谷氨酰肽链内切酶、颗粒酶b、lysc、脯氨酸-肽链内切酶、蛋白酶k、葡萄球菌肽酶i、嗜热菌蛋白酶、凝血酶和胰蛋白酶。也可以使用特异性切割位点的化学品。酶和/或化学品的组合可用于获得期望的分析物。[0089]在特定实施方案中，可以用胰蛋白酶将dbs中、来自颊拭子样本的细胞中、pbmc中或wbc中的蛋白质消化成肽。胰蛋白酶专门切割精氨酸和赖氨酸残基的c端，并且可以作为生成肽的优先选择，因为生成的肽的质量与大多数质谱仪的检测能力(高达2000m/z)相容并且因为存在有效的算法可用于生成理论上胰蛋白酶生成的肽的数据库。高切割特异性、可用性和低成本是胰蛋白酶的其他优点。通过用胰蛋白酶处理蛋白质形成的肽称为胰蛋白酶肽。[0090](iv)用于富集肽标志物的抗体。抗体包括基本上由一个或多个免疫球蛋白基因或其片段编码的多肽配体，无论是天然的还是部分或全部合成产生的。抗体特异性地(或选择性地)结合并识别表位(例如，抗原)。抗体可以包括具有与免疫球蛋白结合结构域同源或很大程度上同源的结合结构域的任何蛋白质。抗体可以是单克隆的或多克隆的。抗体可以是任何免疫球蛋白类别的成员，包括任何人类别：igg、igm、iga、igd和ige等。公认的免疫球蛋白基因包括κ和λ轻链恒定区基因，α、γ、δ、ε和μ重链恒定区基因，以及无数免疫球蛋白可变区基因。抗体的“fc”部分是指免疫球蛋白重链的包括一个或多个重链恒定区结构域ch1、ch2和ch3但不包括重链可变区的部分。[0091]完整抗体可包括通过二硫键相互连接的至少两条重链(h)和两条轻链(l)。每条重链由重链可变区(本文中缩写为vh或vh)和重链恒定区组成。重链恒定区包括三个结构域ch1、ch2和ch3。每条轻链由轻链可变区(在本文中缩写为vl或vl)和轻链恒定区组成。轻链恒定区包括一个结构域cl。vh区和vl区可进一步细分为高变区，称为互补决定区(cdr)，其间散布着较保守的区域，称为框架区(fr)。每个vh和vl由从氨基端到羧基端按以下顺序排列的三个cdr和四个fr组成：fr1、cdr1、fr2、cdr2、fr3、cdr3、fr4。重链和轻链的可变区含有与抗原相互作用的结合结构域。抗体的恒定区可介导免疫球蛋白与宿主组织或因子(包括免疫系统的各种细胞(例如，效应细胞)以及经典补体系统的第一组分(clq))的结合。[0092]给定cdr或fr的精确氨基酸序列边界可以使用许多众所周知的方案中的任一种容易地确定，包括以下描述的那些方案：kabat等人(1991)"sequences of proteins of immunological interest,"第5版public health service,national institutes of health,bethesda,md.(kabat编号方案)；al-lazikani等人(1997)j mol biol 273:927-948(chothia编号方案)；maccallum等人(1996)j mol biol 262:732-745(contact编号方案)；martin等人(1989)proc.natl.acad.sci.,86:9268-9272(abm编号方案)；lefranc m p等人(2003)dev comp immunol 27(1):55-77(imgt编号方案)；及honegger和pluckthun(2001)j mol biol 309(3):657-670("aho"编号方案)。给定cdr或fr的边界可根据用于鉴定的方案而变化。例如，kabat方案是基于结构比对，而chothia方案是基于结构信息。kabat和chothia方案两者的编号均是基于最常见的抗体区域序列长度，并通过插入字母(例如“30a”)调节插入，并且一些抗体中出现缺失。这两种方案将某些插入和缺失(“插入缺失(indel)”)放置在不同的位置，从而产生不同的编号。contact方案是基于复杂晶体结构的分析，并且在许多方面与chothia编号方案相似。在特定实施方案中，本文公开的抗体cdr序列是根据kabat编号。[0093]抗体片段包括抗体的小于全长的任何衍生物或部分。在特定实施方案中，抗体片段保留全长抗体作为结合配偶体的特异性结合能力的至少大部分。抗体片段的实例包括fab、fab′、fab'-sh、f(ab′)2、单链可变片段(scfv)、fv、dsfv双抗体和fd片段和/或免疫球蛋白的与本文所述的表位特异性地结合的任何生物学有效片段。抗体或抗体片段包括多克隆抗体、单克隆抗体、人抗体、人源化抗体、合成抗体、嵌合抗体、双特异性抗体、微型抗体和线性抗体的全部或一部分。[0094]单链可变片段(scfv)是用短接头肽连接的免疫球蛋白重链和轻链的可变区的融合蛋白。fv片段包括抗体的单臂的vl和vh结构域。虽然fv片段的两个结构域vl和vh由单独基因编码，但该vl和vh可使用例如重组方法通过合成接头来接合，该合成接头使该vl和vh能够以其中vl区和vh区配对从而形成单价分子(单链fv(scfv))的单一蛋白链形式制得。有关fv和scfv的另外信息，参见例如，bird等人，science 242(1988)423-426；huston等人，proc.natl.acad.sci.usa 85(1988)5879-5883；plueckthun,the pharmacology of monoclonal antibodies,第113卷,rosenburg和moore(编),springer-verlag,new york),(1994)269-315；wo1993/16185；美国专利号5,571,894；以及美国专利号5,587,458。[0095]fab片段是包含vl、vh、cl和ch1结构域的单价抗体片段。f(ab')2片段是包含在铰链区处通过二硫桥键连接的两个fab片段的二价片段。对于具有增加的体内半衰期的fab和f(ab')2片段的讨论，参见美国专利5,869,046。双抗体包含两个可以是二价的表位结合位点。参见例如，ep 0404097；wo1993/01161；以及holliger等人，proc.natl.acad.sci.usa 90(1993)6444-6448。也可使用双重亲和力重靶向抗体(darttm；基于双抗体型式，但以用于获得额外的稳定性的c端二硫桥键为特征(moore等人，blood 117,4542-51(2011))。抗体片段也可包括分离的cdr。对于抗体片段的综述，参见hudson等人，nat.med.9(2003)129-134。[0096]可通过任何方式产生抗体片段。例如，抗体片段可通过完整抗体的片段化酶促或化学产生，或者它可从编码部分抗体序列的基因重组产生。可替代地，抗体片段可全部或部分合成产生。抗体片段可包括单链抗体片段。在另一个实施方案中，片段可包含例如通过二硫连键联接在一起的多个链。片段还可包含多分子复合物。功能性抗体片段通常可包含至少50个氨基酸，并且更通常将包含至少200个氨基酸。[0097]在特定实施方案中，可产生重组免疫球蛋白。参见，cabilly,us4,816,567和queen等人，proc natl acad sci usa,86:10029-10033(1989)。[0098]如所指出的，在特定实施方案中，工程化的抗体或抗原结合片段的结合结构域可通过接头接合。接头是这样的氨基酸序列，该氨基酸序列可为工程化的抗体或抗原结合片段的结合结构域之间的构象运动提供柔性和空间。可使用任何适当的接头。接头的实例可在chen等人，adv drug deliv rev.2013年10月15日；65(10):1357-1369中找到。该接头可以是柔性的、刚性的或半刚性的，这取决于所需功能结构域向靶标的呈递。常用的柔性接头包括gly-ser接头，诸如ggsgggsggsg(seq id no:154)、ggsgggsgsg(seq id no:155)和ggsgggsg(seq id no:156)。另外的实例包括：ggggsggggs(seq id no:157)；gggsgggs(seq id no:158)；和ggsggs(seq id no:159)。也可使用包含一个或多个抗体铰链区和/或免疫球蛋白重链恒定区，诸如单独的ch3或ch2ch3序列的接头。[0099]在一些情况下，柔性接头可能不能维持特定用途所需的结合结构域的距离或定位。在这些情况下，刚性或半刚性接头可能是有用的。刚性或半刚性接头的实例包括富含脯氨酸的接头。在特定实施方案中，富含脯氨酸的接头是比仅基于偶然性所预期的具有更多脯氨酸残基的肽序列。在特定实施方案中，富含脯氨酸的接头是具有至少30％、至少35％、至少36％、至少39％、至少40％、至少48％、至少50％或至少51％脯氨酸残基的接头。富含脯氨酸的接头的具体实例包括富含脯氨酸的唾液蛋白(prp)的片段。[0100]本领域普通技术人员还将理解，抗体可经历多种翻译后修饰。这些修饰的类型和程度通常取决于用于表达抗体的宿主细胞系以及培养条件。此类修饰可包括糖基化、甲硫氨酸氧化、二酮哌嗪形成、天冬氨酸异构化和天冬酰胺脱酰胺的变化。[0101]单克隆抗体包括从大致上均质的抗体群体获得的抗体，即除在产生单克隆抗体期间可出现的可能变体(此类变体通常以少量存在)之外，构成所述群体的各个抗体是同一的并且/或者结合相同表位。与通常包括针对不同决定簇(表位)的不同抗体的多克隆抗体制品不同，每种单克隆抗体均针对抗原上的单一决定簇。这种类型的抗体是由单个产生抗体的杂交瘤的子细胞产生的。单克隆抗体通常对与其结合的任何表位展现单一结合亲和力。[0102]修饰语“单克隆”指示从均质抗体群体获得的抗体的特性并且不应解释为需要通过任何特定方法产生抗体。单克隆抗体仅识别一种类型的抗原。本文的单克隆抗体包括“嵌合”抗体(免疫球蛋白)，其中重链和/或轻链的一部分与源自特定物种或属于特定抗体类别或亚类的抗体中的对应序列是同一或同源的，而所述一条或多条链的剩余部分与源自另一物种或属于另一抗体类别或亚类的抗体以及此类抗体的片段中的对应序列是同一或同源的。用于产生抗体的技术在本领域中是众所周知的，并且描述于例如harlow和lane“antibodies,a laboratory manual”,cold spring harbor laboratory press,1988；harlow和lane“using antibodies:a laboratory manual”cold spring harbor laboratory press,1999；tickle等人，jala:journal of the association for laboratory automation.2009；14(5):303-307；babcook等人，proc.natl.acad.sci.u.s.a.1996；93:7843-7848；以及us5,627,052中。[0103]在特定实施方案中，“亲和力”是指分子(例如，抗体)的单一结合位点与其结合配偶体(例如，抗原)之间全部非共价相互作用总和的强度。除非另有说明，否则如本文中所用，“结合亲和力”是指内在结合亲和力，其反映结合对的成员(例如，抗体与肽)之间的1:1相互作用。分子x对其配偶体y的亲和力通常可由解离常数(kd)或缔合常数(ka)表示。亲和力可通过本领域中已知的常用方法来测量。[0104]在特定实施方案中，“结合”意指抗体的结合结构域与其靶肽以10-8m或更低、在特定实施方案中为10-5m至10-13m、在特定实施方案中为10-5m至10-10m、在特定实施方案中为10-5m至10-7m、在特定实施方案中为10-8m至10-13m或在特定实施方案中为10-9m至10-13m的解离常数(kd)缔合。所述术语可进一步用于指示结合结构域不与存在的其他生物分子结合(例如，它以10-4m或更高、在特定实施方案中10-4m至1m的解离常数(kd)与其他生物分子结合)。[0105]在特定实施方案中，“结合”意指抗体的结合结构域与其靶肽以107m-1或更高、在特定实施方案中为105m-1至1013m-1、在特定实施方案中为105m-1至1010m-1、在特定实施方案中为105m-1至108m-1、在特定实施方案中为107m-1至1013m-1或在特定实施方案中为107m-1至108m-1的亲和常数(即，缔合常数，ka)缔合。所述术语可进一步用于指示结合结构域不与存在的其他生物分子结合(例如，它以104m-1或更低、在特定实施方案中104m-1至1m-1的缔合常数(ka)与其他生物分子结合)。[0106]本公开的抗体可用于在srm测定中检测的本文所述的肽的免疫亲和富集，以用于诊断x-cgd、xlp1、fhl2、共济失调毛细血管扩张症、cvid、scid、ada缺乏症和dock8缺乏症，以及评估次要肽标志物cd42、cd56、cd3ε和cd3δ。在特定实施方案中，cd3ε和cd3δ可以用作诊断scid的主要标志物。高亲和力抗体的特定实施方案包括抗cybb 131、抗cybb 509、抗sh2d1a 19、抗sh2d1a110、抗prf 215、抗prf 441、抗atm 798、抗atm 1544、抗atm1561、抗cd19 41、抗cd19 55、抗cd19 210、抗cd19 505、抗il2rg295、抗il2rg 316、抗ada 93、抗dock8 1272、抗cd42 128、抗cd42 154、抗cd56 122、抗cd3ε74、抗cd3δ24和抗cd3δ133。[0107]在特定实施方案中，示例性抗体包括表1a-1c和图11中给出的vh cdr、重链、vh结构域、lh cdr、轻链和vl结构域的seq id no。[0108]在特定实施方案中，示例性抗体包括含有前导序列的重链或轻链编码序列。在特定实施方案中，示例性抗体包括含有前导序列的可变重结构域或可变轻结构域编码序列。在特定实施方案中，示例性抗体包括含有前导肽的重链或轻链氨基酸序列。在特定实施方案中，示例性抗体包括不含前导肽的重链或轻链氨基酸序列。在特定实施方案中，示例性抗体包括含有前导肽的可变重结构域或可变轻结构域氨基酸序列。在特定实施方案中，示例性抗体包括不含前导肽的可变重结构域或可变轻结构域氨基酸序列。[0109](v)变体。还包括本文公开和引用的序列的变体。功能变体包括不实质性影响蛋白质的生理效应的一个或多个残基添加或取代。功能片段包括不实质性影响蛋白质的生理效应的一个或多个缺失或截断。可以通过在结合研究中观察到实验上相当的结果来确认没有实质性影响。结合结构域的功能变体和功能片段以与野生型参考相当的水平结合它们的同源抗原或配体。[0110]可以使用本领域众所周知的计算机程序，诸如dnastartm(madison,wisconsin)软件来找到确定哪些氨基酸残基可以取代、插入或缺失而不消除生物活性的指导。优选地，本文公开的蛋白质变体中的氨基酸变化是保守性氨基酸变化，即类似带电荷或不带电荷的氨基酸的取代。保守性氨基酸变化涉及在侧链上相关的氨基酸家族中的一个氨基酸的取代。[0111]在肽或蛋白质中，合适的氨基酸保守取代是本领域技术人员已知的，并且通常可以在不改变所得分子的生物活性的情况下制作。本领域技术人员认识到，一般而言，多肽的非必需区域中的单个氨基酸取代不会实质性改变生物活性(参见，例如，watson等人molecular biology of the gene,第4版,1987,the benjamin/cummings pub.co.,p.224)。天然存在的氨基酸通常分为如下保守取代家族：第1组：丙氨酸(ala)、甘氨酸(gly)、丝氨酸(ser)和苏氨酸(thr)；第2组：(酸性)：天冬氨酸(asp)和谷氨酸(glu)；第3组：(酸性；也归类为极性、带负电荷的残基及其酰胺)：天冬酰胺(asn)、谷氨酰胺(gln)、asp和glu；第4组：gln和asn；第5组：(碱性；也归类为极性、带正电荷的残基)：精氨酸(arg)、赖氨酸(lys)和组氨酸(his)；第6组(大的脂肪族、非极性残基)：异亮氨酸(ile)、亮氨酸(leu)、甲硫氨酸(met)、缬氨酸(val)和半胱氨酸(cys)；第7组(不带电荷、极性)：酪氨酸(tyr)、gly、asn、gln、cys、ser和thr；第8组(大的芳香族残基)：苯丙氨酸(phe)、色氨酸(trp)和tyr；第9组(非极性)：脯氨酸(pro)、ala、val、leu、ile、phe、met和trp；第11组(脂肪族)：gly、ala、val、leu和ile；第10组(小的脂肪族、非极性或微极性残基)：ala、ser、thr、pro和gly；第12组(含硫)：met和cys。另外的信息可见于creighton(1984)proteins,w.h.freeman and company。[0112]在制作此类变化时，可考虑氨基酸的亲水性指数。亲水性氨基酸指数在赋予蛋白相互作用生物功能中的重要性在本领域中已得到一致认同(kyte和doolittle,1982,j.mol.biol.157(1),105-32)。每种氨基酸都已基于其疏水性和电荷特征被分配了亲水指数(kyte和doolittle,1982)。这些值是：ile(+4.5)；val(+4.2)；leu(+3.8)；phe(+2.8)；cys(+2.5)；met(+1.9)；ala(+1.8)；gly(-0.4)；thr(-0.7)；ser(-0.8)；trp(-0.9)；tyr(-1.3)；pro(-1.6)；his(-3.2)；谷氨酸(-3.5)；gln(-3.5)；天冬氨酸(-3.5)；asn(-3.5)；lys(-3.9)；和arg(-4.5)。[0113]在本领域中已知某些氨基酸可被具有类似亲水指数或评分的其他氨基酸取代并且仍产生具有类似生物学活性的蛋白，即仍然获得生物功能等效的蛋白。在制作此类变化时，优选亲水指数在±2以内的氨基酸，特别优选亲水指数在±1以内的氨基酸，并且甚至更特别取代亲水指数在±0.5以内的氨基酸的取代。在本领域中还应理解类似氨基酸的取代可根据亲水性而有效地制作。[0114]如美国专利号4,554,101中所详述，已将以下亲水性值分配给氨基酸残基：arg(+3.0)；lys(+3.0)；天冬氨酸(+3.0±1)；谷氨酸(+3.0±1)；ser(+0.3)；asn(+0.2)；gln(+0.2)；gly(0)；thr(-0.4)；pro(-0.5±1)；ala(-0.5)；his(-0.5)；cys(-1.0)；met(-1.3)；val(-1.5)；leu(-1.8)；ile(-1.8)；tyr(-2.3)；phe(-2.5)；trp(-3.4)。应理解氨基酸可由具有类似亲水性值的另一氨基酸取代并且仍然获得生物学上等效的并且尤其是免疫学上等效的蛋白。在此类变化中，优选亲水指数在±2以内的氨基酸，特别优选亲水指数在±1以内的氨基酸，并且甚至更特别取代亲水指数在±0.5以内的氨基酸的取代。[0115]如上面所总结的，氨基酸取代可基于氨基酸侧链取代基的相对相似性，例如其疏水性、亲水性、电荷、大小等。[0116]在特定实施方案中，结合结构域vh区可以源自或基于已知抗体或本文公开的抗体的vh，并且当与已知抗体或本文公开的抗体的vh相比时，可以任选地含有一个或多个(例如，2、3、4、5、6、7、8、9、10个)插入、一个或多个(例如，2、3、4、5、6、7、8、9、10个)缺失、一个或多个(例如，2、3、4、5、6、7、8、9、10)个氨基酸取代(例如，保守氨基酸取代或非保守氨基酸取代)或上述变化的组合。插入、缺失或取代可以在vh区的任何位置，包括在该区域的氨基端或羧基端或这两端，条件是每个cdr包括零个变化或最多一个、两个或三个变化并且条件是含有经修饰的vh区的结合结构域仍然可以以类似于野生型结合结构域的亲和力特异性地结合其靶标。[0117]在特定实施方案中，结合结构域中的vl区源自或基于已知抗体或本文公开的抗体的vl，并且当与已知抗体或本文公开的抗体的vl相比时，任选地含有一个或多个(例如，2、3、4、5、6、7、8、9、10个)插入、一个或多个(例如，2、3、4、5、6、7、8、9、10个)缺失、一个或多个(例如，2、3、4、5、6、7、8、9、10个)氨基酸取代(例如，保守氨基酸取代)或上述变化的组合。插入、缺失或取代可以在vl区的任何位置，包括在该区域的氨基端或羧基端或两端，条件是每个cdr包括零个变化或最多一个、两个或三个变化并且条件是含有经修饰的vl区的结合结构域仍然可以以类似于野生型结合结构域的亲和力特异性结合其靶标。[0118]如别处所示，基因序列的变体可以包括密码子优化变体、序列多态性、剪接变体以及/或者不在统计学上显著的程度上影响编码的产物功能的突变。[0119]蛋白质、核酸和基因序列的变体还包括与本文公开的蛋白质、核酸或基因序列具有至少70％序列同一性、80％序列同一性、85％序列同一性、90％序列同一性、95％序列同一性、96％序列同一性、97％序列同一性、98％序列同一性或99％序列同一性的序列。[0120]“序列同一性％”是指如通过比较序列所确定的两个或更多个序列之间的关系。在本领域中，“同一性”还意指如通过此类序列串之间的匹配所确定的蛋白质、核酸或基因序列之间的序列相关性程度。“同一性”(经常称为“相似性”)可通过已知方法来容易地计算，所述方法包括(但不限于)在以下中描述的那些：computational molecular biology(lesk,a.m.编辑)oxford university press,ny(1988)；biocomputing:informatics and genome projects(smith,d.w.编辑)academic press,ny(1994)；computer analysis of sequence data,part i(griffin,a.m.,and griffin,h.g.编辑)humana press,nj(1994)；sequence analysis in molecular biology(von heijne,g.编辑)academic press(1987)；以及sequence analysis primer(gribskov,m.and devereux,j.编辑)oxford university press,ny(1992)。确定同一性的优选方法被设计为给出在所测试序列之间的最佳匹配。确定序列同一性的方法编写于可公开获得的计算机程序中。序列比对和百分比序列同一性计算可使用lasergene生物信息学计算套件(dnastar,inc.,madison,wisconsin)的megalign程序来执行。序列的多重比对还可使用clustal比对方法(higgins和sharp cabios,5,151-153(1989)，以默认参数(空位罚分＝10，空位长度罚分＝10)来执行。相关程序还包括gcg程序套件(wisconsin package 9.0版,genetics computer group(gcg),madison,wisconsin)；blastp、blastn、blastx(altschul等人,j.mol.biol.215:403-410(1990)；dnastar(dnastar,inc.,madison,wisconsin)；以及并入smith-waterman算法的fasta程序(pearson,comput.methods genome res.,[proc.int.symp.](1994),meeting date1992,111-20.编辑：suhai,sandor.publisher:plenum,new york,n.y.。在本公开的上下文内，将了解在将序列分析软件用于分析的情况下，分析的结果是基于所引用的程序的“默认值”。如本文所用，“默认值”将意指在首次初始化时用软件最初加载的值或参数的任何集合。[0121](vi)肽的富集策略。srm之前所需肽靶标的富集可通过本领域已知的任何方法来完成。可使用许多富集程序，包括来自样本的丰富蛋白质种类的基于免疫吸附的耗减、沉淀、色谱、电泳、溶剂分配、免疫沉淀、免疫电泳和免疫色谱。在特定实施方案中，可使用用于从样本的消化物中特异性地基于抗体捕获单独胰蛋白酶肽的siscapa方法(anderson等人，j.proteome research 2004；3:235-244；us7,632,686)。[0122]在特定实施方案中，结合肽标志物的抗体(诸如本文公开的抗体)可附着于固体载体。特定实施方案使用亲和柱，其中抗体与色谱介质共价偶联。在特定实施方案中，poros(applied biosystems,foster city,ca)纳米柱可用于siscapa富集中，并且特征是高结合能力、允许快速富集靶肽的相对较高的抗体浓度以及制备具有多种官能化基团的色谱柱的能力。可替代地，抗体可附着于珠粒、磁珠或其他固体颗粒上。一种附着方式是抗体与包被在珠粒上的蛋白质的缀合。例如，蛋白g包被的颗粒以优选的取向提供抗体的结合。可使用其他附着方式，如用抗体直接包被珠粒。磁性颗粒具有广泛的化学性质，从而允许与抗体偶联。用附着在颗粒上的抗体进行富集可以允许样本的并行加工。磁性颗粒加工已在用于siscapa富集步骤的96孔板中自动化，在所述板中进行洗脱以通过质谱进行分析。其他特定实施方案使用新颖的珠粒捕集装置，所述装置被开发来执行与纳流色谱系统一致的珠粒处理步骤(anderson等人，mol cell proteomics 2009；8(5):995-1005)。这样可使洗脱与分析步骤之间肽在容器中的损失最小化。也可通过将抗肽抗体固定在移液管尖端中来实现肽富集(nelson等人，anal chem.1995；67(7):1153-1158)。在将抗体结合的肽与游离肽分离后，可洗脱结合的肽。可使用任何洗脱方式。已发现有效的一种洗脱方式是5％乙酸/3％乙腈。对于特定的肽有效的是，可使用其他洗脱方式，包括其他酸和其他浓度的乙酸。[0123](vii)液相色谱(lc)。在特定实施方案中，在srm-ms之前执行一个或多个lc纯化步骤。可使富集肽的混合物(流动相)通过填充有材料(固定相)的色谱柱，以基于肽的重量和对柱的流动相和固定相的亲和力来分离出该肽。传统的lc分析依赖于样本组分与柱填充材料之间的化学相互作用，其中样本通过柱的层流是从测试样本中分离出目标分析物的基础。熟练技术人员将理解，在这种柱中的分离是扩散过程。多种柱填充材料可用于样本的色谱分离，并且适当分离方案的选择是取决于样本特征、目标分析物、存在的干扰物质及其特征等的经验过程。可根据需要(例如，所纯化的化合物的结构、极性和溶解性)使用各种填充化学物质。在特定实施方案中，所述柱是极性柱、离子交换柱(阳离子和阴离子两者)、疏水相互作用柱、苯基柱、c-2柱、c-8柱、c-18柱、多孔聚合物上的极性涂层或可商购的其他柱。在色谱过程中，材料的分离受变量如洗脱剂(也称为“流动相”)的选择、梯度洗脱的选择以及梯度条件、温度等的影响。在特定实施方案中，分析物可通过在柱填充材料可逆地保留目标分析物而不保留一种或多种其他材料的条件下，将样本施加到柱上来进行纯化。在这些实施方案中，可采用第一流动相条件，在所述第一流动相条件下目标分析物被柱保留，并且一旦将未保留的材料洗涤通过，就可随后采用第二流动相条件从柱中去除所保留的材料。可替代地，可通过在流动相条件下将样本施加到柱上来纯化分析物，在所述流动相条件下，与一种或多种其他材料相比，目标分析物以不同的速率被洗脱。如上所述，相对于样本的一种或多种其他组分，此类程序可富集一种或多种目标分析物的量。在特定实施方案中，lc是微流lc(微lc)。在微流lc中，色谱分离是使用每分钟低微升范围内的流速执行的。在特定实施方案中，lc是纳流lc(纳lc)。在纳流lc(纳lc)中，色谱分离是使用300纳升/分钟的流速执行的。减缓的流速导致由于这种类型的色谱提供的高浓缩效率所致的高分析灵敏度(cutillas,current nanoscience,2005；1:65-71)。[0124](viii)质谱(ms)。质谱仪包括测量可转换为气相离子的质荷(m/z)比的参数的气相离子谱仪。质谱法是指使用质谱仪检测气相离子。质谱仪通常包括离子源和质量分析仪。质谱仪的实例是飞行时间(tof)、磁性扇区、四极过滤器、离子阱、离子回旋共振、静电扇区分析仪以及这些的杂合体。激光解吸质谱仪包括使用激光能量作为解吸、挥发和电离分析物的手段的质谱仪。串联质谱仪包括能够执行两个连续阶段的基于m/z的离子(包括离子混合物中的离子)辨别或测量的任何质谱仪。所述短语包括具有两个质量分析仪的质谱仪，所述质量分析仪能够执行两个连续阶段的基于m/z的空间串联离子辨别或测量。所述短语进一步包括具有单个质量分析仪的质谱仪，所述质量分析仪能够执行两个连续阶段的基于m/z的时间串联离子辨别或测量。因此，所述短语明确地包括qq-tof质谱仪、离子阱质谱仪、离子阱-tof质谱仪、tof-tof质谱仪、傅立叶变换离子回旋共振质谱仪、静电扇区-磁性扇区质谱仪、三重四极质谱仪以及它们的组合。[0125]质谱中的电离包括将样本中的分析物电离的过程。此类分析物可能变成用于进一步分析的带电分子。例如，样本电离可通过电喷射电离(esi)、激光喷射电离(lsi)、大气压化学电离(apci)、光致电离、电子电离、快速原子轰击(fab)/液相次级电离(lsims)、基质辅助激光解吸电离(maldi)、场致电离、场解吸、热喷射/等离子体喷射电离以及粒子束电离来执行。熟练技术人员将理解可基于待测量的分析物、样本类型、检测器类型、正负模式的选择等确定电离方法的选择。[0126]质量分析仪包括质谱仪的部件，所述部件吸收离子化的质量，并根据m/z比将它们分离，并且将它们输出至检测器，在检测器中对它们进行检测，然后转换为数字输出。用于确定m/z比的合适质量分析仪包括四极质量分析仪、飞行时间(tof)质量分析仪、磁性或静电扇区质量分析仪和离子阱(例如离子回旋共振)质量分析仪。[0127]选择性反应监测(srm)-ms测定靶向针对给定的目标蛋白质靶向一组预定肽。srm是串联质谱模式，其中在串联质谱的第一阶段中选择特定质量的离子(母离子或前体离子)，然后在第二质谱检测阶段中选择前体离子的片段化反应的离子产物。与选定的前体离子和碎片离子相关的特定对的m/z值称为跃迁。对于每种特征肽，鉴定提供最佳信号强度并将靶向肽与样本中存在的其他种类区分开的那些碎片离子。优化的跃迁有助于有效的srm测定。随时间推移监测几个这样的跃迁(前体/碎片离子对)，从而生成一组色谱迹线，其中特定跃迁的保留时间和信号强度作为坐标。特征肽的srm-ms分析通常在三重四极质谱仪(qqq-ms)上执行，所述质谱仪是能够选择性地分离对应于特征肽的m/z的前体离子并选择性地监测肽特异性碎片离子的仪器。在srm分析中，特异性取决于多个质量分析仪(质量过滤器)。第一个四极用于选择所需的母离子或前体离子。第三个四极用于监测(一种或多种)碎片离子。碎片离子是通过第二个四极中的碰撞诱导解离生成的。两个级别的质量选择允许高选择性，因为共洗脱背景离子非常有效地被滤出。与调查样本中的所有分析物的常规串联质谱(ms/ms)实验不同，srm分析选择性地靶向(过滤)特定分析物，这意味着与常规的“全扫描”技术相比，灵敏度提高一个或两个数量级。此外，srm在高达五个数量级的宽动态范围内提供线性响应。这样使得能够检测高度复杂混合物中的低丰度蛋白质。因此，srm是具有低背景干扰的高度特异性检测/监测方法。当在单次ms运行中监测多种母离子时，这种类型的分析被称为多反应监测(mrm)。使用mrm分析，可在单次质谱运行中监测多种蛋白质和蛋白质的多个区域(特征肽)。选择性反应监测/多反应监测质谱(srm/mrm-ms)描述于例如us 8,383,417、wo 2013/106603和us 2013/105684中。[0128]在特定实施方案中，以下参数可用于指定在特定lc-srm-ms系统下蛋白质的lc-srm-ms测定：(1)给定蛋白质的富集的胰蛋白酶肽；(2)肽在lc柱上的保留时间(rt)；(3)肽前体离子的m/z值；(4)用于使前体离子电离的去簇电位；(5)由肽前体离子生成的碎片离子的m/z值；以及(6)用于使针对特定肽而优化的肽前体离子碎裂的碰撞能量(ce)。rt包括分析物的注入与洗脱之间经过的时间。去簇电位(dp)包括溶解和解离离子簇的电压电位。它也被称为“碎裂电压”或“离子转移毛细管偏移电压”，这取决于制造商。碰撞能量(ce)包括前体离子在它们加速进入碰撞池时所接收的能量的量。[0129]为了通过本文公开的方法促进肽的准确定量，可将已知量的一组目标同位素标记的合成型式的肽添加到样本中，以用作内部标准物。由于同位素标记的肽具有与相应的替代肽同一的物理和化学性质，因此它们从色谱柱共洗脱，并容易在所得质谱图中鉴定(gerber等人，proc.natl.asso.sci.2003；100:6940-6945；kirkpatrick等人，methods2005；35:265-273)。可用来标记给定肽中的氨基酸的同位素包括13c、2h、15n、17o、18o和34s。在特定实施方案中，用13c和/或15n重同位素标记肽。标记的标准物的添加可在蛋白水解消化之前或之后进行。在特定实施方案中，在蛋白水解消化之后添加标记的内部标准物肽。合成同位素标记的肽的方法将是本领域技术人员已知的。因此，在特定实施方案中，实验样本含有内部标准物肽。在特定实施方案中，内部标准物肽包括参考特征肽。在特定实施方案中，可通过组合以下来确定特征肽浓度：(i)通过比较特征肽的峰面积与从lc-mrm-ms测定获得的其相应的参考特征肽的峰面积而计算的比率，和(ii)参考特征肽的已知浓度。被选择作为参考标准并适合定量的肽有时被称为quantotypic肽(q-肽)。q-肽不仅具有蛋白水解肽的所有特征，而且对可构成参考肽的残基施加了限制以消除人工修饰和/或不完全切割(holman等人，bioanalysis 2012；4(14):1763-1786)。[0130]一种或多种给定蛋白质的绝对定量水平可通过srm/mrm方法确定，其中将一种生物样本中来自给定蛋白质的单个肽的srm/mrm特征峰面积与已知量的“加标”内部标准物的srm/mrm特征峰面积进行比较。在特定实施方案中，所述内部标准物是合成型式的相同的精确肽，其含有用一种或多种重同位素标记的一个或多个氨基酸残基。合成此类同位素标记的内部标准物，由此质谱分析生成与天然肽特征峰不同且截然不同并且可用作比较峰的可预测且一致的srm/mrm特征峰。因此，当将内部标准物以已知量加标到来自生物样本的蛋白质制剂中并通过质谱分析时，将天然肽的特征峰面积与内部标准物肽的特征峰面积进行比较，并且这种数值比较指示存在于来自生物样本的原始蛋白质制剂中的天然肽的绝对摩尔浓度和/或绝对重量。片段肽的绝对定量数据根据每种样本中所分析的蛋白质的量来显示。绝对定量可跨单一样本中的许多肽以及因此蛋白质同时执行；以及/或者跨许多样本执行，以获得对于在单个生物样本中和/或在整个单个样本队列中的绝对蛋白质量的了解。[0131]肽绝对定量的另一种策略是通过均衡肽的等摩尔性。这种方法包括化学合成呈二肽形式的目标同位素标记的q-肽。常见的氨基酸序列位于q-肽的n端，并且被称为均衡肽。在溶解和蛋白水解消化后，可通过参考单个光标记的肽来准确地确定q-肽的量。然后可将适当量的每种标准物肽添加到目标样本中(预先消化或在蛋白水解之前)，以促进绝对定量(holzmann等人，anal.chem.2009；81:10254-10261)。绝对定量也可使用定量串联体(qconcat)蛋白质(beynon等人，nat.methods 2005；2:587-589；johnson等人，j.am.soc.mass spectrom.2009；20:2211-2220；ding等人，j.proteome res.2011；10:3652-3659；carroll等人，molecular&cellular proteomics 2011；9月19日:mcp-m111)。在这种策略中，在稳定的同位素富集培养基中生长的大肠杆菌(escherichia coli)中异源产生了重组人工蛋白质，所述蛋白质是来自几种目标蛋白质的标准物肽的亲和标记的级联体(concatenation)。然后将qconcat蛋白亲和纯化并与样本共消化，从而生成组成其的所有“重”q-肽的化学计量混合物，并且随后分析来自天然蛋白和内部标准物的蛋白水解肽。qconcat方法的一种变型，称为肽级联标准物(pcs)，在人工蛋白质序列中的q肽之间使用反映它们的内源环境的侧翼区(kito等人，j.proteome res.2007；6:792-800)。其他特定实施方案使用用于绝对定量的蛋白质标准物(psaq)(brun等人，mol.cell.proteomics 2007；6:2139-2149)。psaq使用重组蛋白，而不是来自几种蛋白质的肽的级联，待定量的整个蛋白质以稳定的同位素标记形式表达。然后可将一种或几种psaq添加到样本的预消化物中以有助于定量。[0132]特定实施方案使用无标记的策略进行蛋白质定量，诸如基于强度的测量(america和cordewener,proteomics 2008；8:731-749)或光谱计数(lundgren等人，expert rev.proteomics 2010；7:39-53)。[0133]为了获得给定肽的相对定量水平，可将一种生物样本中来自给定蛋白质的单个肽或多个肽的质谱分析得出的特征峰面积(或峰高，如果峰被充分解析)与使用相同srm/mrm方法针对一种或多种另外且不同的生物样本中来自相同蛋白质的相同的一种或多种肽确定的特征峰面积进行比较。以此方式，在相同的实验条件下，相对于两种或更多种生物样本中来自相同蛋白质的相同的一种或多种肽，确定了来自给定蛋白质的特定的一种或多种肽的量。另外，相对定量可通过比较通过srm/mrm方法得到的给定蛋白质的一种或多种给定肽的特征峰面积与来自在来自生物样本的相同蛋白质制剂内的不同蛋白质的一种或多种另外不同的肽的特征峰面积而对于来自在单一样本内的单一蛋白质的所述一种或多种给定肽来确定。以这种方式，相对于同一样本中的另一种蛋白质，确定了来自给定蛋白质的特定肽的量，并且因此确定了给定蛋白质的量。这些方法生成来自给定蛋白质的单个肽或多个肽的定量，以及样本之间和样本内来自相同蛋白质或来自不同蛋白质的另一种或多种肽的量，其中如由特征峰面积确定的量是相对于彼此而言，无论来自生物样本的蛋白质制剂中肽的绝对重量/体积或重量/重量的量如何。有关不同样本之间各个特征峰面积的相对定量数据可标准化为每种样本所分析的蛋白质的量。可在单个样本中同时跨多个肽和/或跨多个样本执行相对定量，以了解相对蛋白质的量。[0134]特征肽水平可以浓度单位(例如，pmol/l)表示。在特定实施方案中，可将源自接受x-cgd、xlp1、fhl2、at、cvid、scid、ada缺乏症、dock8缺乏症筛查的受试者的测试样本中的特征肽，次要肽标志物cd42、次要肽标志物cd56、次要肽标志物cd3ε、次要肽标志物cd3δ或它们的组合的平均浓度与正常对照样本中的相应肽的平均浓度进行比较。在特定实施方案中，正常对照样本可源自一个或多个正常对照受试者或源自正常对照受试者群体。在特定实施方案中，正常对照受试者包括未患有或未知患有x-cgd、xlp1、fhl2、at、cvid、scid、ada缺乏症、dock8缺乏症、血小板缺乏症、nk细胞缺乏症和/或t细胞缺乏症的受试者。[0135]在特定实施方案中，正常对照受试者包括不具有与x-cgd、xlp1、fhl2、at、cvid、scid、ada缺乏症、dock8缺乏症、cd42缺乏症、cd56缺乏症、cd3ε缺乏症、cd3δ缺乏症或它们的组合相关的基因突变的受试者。[0136]在特定实施方案中，来自正常对照受试者群体的dbs中cybb509特征肽的平均浓度包括在300pmol/l至3000pmol/l的范围内、在500pmol/l至2900pmol/l的范围内和在700pmol/l至2800pmol/l的范围内的浓度。在特定实施方案中，来自正常对照受试者群体的dbs中cybb 509特征肽的平均浓度包括300pmol/l、400pmol/l、500pmol/l、600pmol/l、700pmol/l、800pmol/l、900pmol/l、1000pmol/l、1100pmol/l、1200pmol/l、1300pmol/l、1400pmol/l、1500pmol/l、1600pmol/l、1700pmol/l、1800pmol/l、1900pmol/l、2000pmol/l、2100pmol/l、2200pmol/l、2300pmol/l、2400pmol/l、2500pmol/l、2600pmol/l、2700pmol/l、2800pmol/l、2900pmol/l、3000pmol/l或更高的浓度。[0137]在特定实施方案中，来自正常对照受试者群体的dbs中ada 93特征肽的平均浓度包括在900pmol/l至5000pmol/l的范围内、在1000pmol/l至4900pmol/l的范围内和在1100pmol/l至4800pmol/l的范围内的浓度。在特定实施方案中，来自正常对照受试者群体的dbs中ada 93特征肽的平均浓度包括900pmol/l、1000pmol/l、1100pmol/l、1200pmol/l、1300pmol/l、1400pmol/l、1500pmol/l、1600pmol/l、1700pmol/l、1800pmol/l、1900pmol/l、2000pmol/l、2100pmol/l、2200pmol/l、2300pmol/l、2400pmol/l、2500pmol/l、2600pmol/l、2700pmol/l、2800pmol/l、2900pmol/l、3000pmol/l、3100pmol/l、3200pmol/l、3300pmol/l、3400pmol/l、3500pmol/l、3600pmol/l、3700pmol/l、3800pmol/l、3900pmol/l、4000pmol/l、4100pmol/l、4200pmol/l、4300pmol/l、4400pmol/l、4500pmol/l或更高的浓度。[0138]在特定实施方案中，来自正常对照受试者群体的dbs中dock81272特征肽的平均浓度包括在70pmol/l至550pmol/l的范围内、在80pmol/l至530pmol/l的范围内和在90pmol/l至500pmol/l的范围内的浓度。在特定实施方案中，来自正常对照受试者群体的dbs中dock8 1272特征肽的平均浓度包括70pmol/l、75pmol/l、80pmol/l、85pmol/l、90pmol/l、95pmol/l、100pmol/l、125pmol/l、150pmol/l、175pmol/l、200pmol/l、225pmol/l、250pmol/l、275pmol/l、300pmol/l、325pmol/l、350pmol/l、375pmol/l、400pmol/l、425pmol/l、450pmol/l、475pmol/l、500pmol/l、525pmol/l、550pmol/l或更高的浓度。[0139]在特定实施方案中，来自正常对照受试者群体的dbs中cd42128特征肽的平均浓度包括在4000pmol/l至20000pmol/l的范围内、在5000pmol/l至18000pmol/l的范围内和在6000pmol/l至17500pmol/l的范围内的浓度。在特定实施方案中，来自正常对照受试者群体的dbs中cd42 128特征肽的平均浓度包括4000pmol/l、4500pmol/l、5000pmol/l、5500pmol/l、6000pmol/l、6500pmol/l、7000pmol/l、7500pmol/l、8000pmol/l、8500pmol/l、9000pmol/l、9500pmol/l、10000pmol/l、10500pmol/l、11000pmol/l、11500pmol/l、120000pmol/l、12500pmol/l、13000pmol/l、13500pmol/l、14000pmol/l、14500pmol/l、15000pmol/l、15500pmol/l、16000pmol/l、16500pmol/l、17000pmol/l、17500pmol/l、18000pmol/l、18500pmol/l、19000pmol/l、19500pmol/l、20000pmol/l或更高的浓度。[0140]在特定实施方案中，来自正常对照受试者群体的dbs中cd42154特征肽的平均浓度包括在8000pmol/l至30000pmol/l的范围内、在9000pmol/l至29000pmol/l的范围内和在10000pmol/l至28000pmol/l的范围内的浓度。在特定实施方案中，来自正常对照受试者群体的dbs中cd42 154特征肽的平均浓度包括8000pmol/l、9000pmol/l、10000pmol/l、11000pmol/l、12000pmol/l、13000pmol/l、14000pmol/l、15000pmol/l、16000pmol/l、17000pmol/l、18000pmol/l、19000pmol/l、20000pmol/l、21000pmol/l、22000pmol/l、23000pmol/l、24000pmol/l、25000pmol/l、26000pmol/l、27000pmol/l、28000pmol/l、29000pmol/l、30000pmol/l或更高的浓度。[0141]在特定实施方案中，来自正常对照受试者群体的dbs中cd56122特征肽的平均浓度包括在600pmol/l至5000pmol/l的范围内、在700pmol/l至4500pmol/l的范围内和在800pmol/l至4000pmol/l的范围内的浓度。在特定实施方案中，来自正常对照受试者群体的dbs中cd56 122特征肽的平均浓度包括600pmol/l、700pmol/l、800pmol/l、900pmol/l、1000pmol/l、1100pmol/l、1200pmol/l、1300pmol/l、1400pmol/l、1500pmol/l、1600pmol/l、1700pmol/l、1800pmol/l、1900pmol/l、2000pmol/l、2100pmol/l、2200pmol/l、2300pmol/l、2400pmol/l、2500pmol/l、2600pmol/l、2700pmol/l、2800pmol/l、2900pmol/l、3000pmol/l、3100pmol/l、3200pmol/l、3300pmol/l、3400pmol/l、3500pmol/l、3600pmol/l、3700pmol/l、3800pmol/l、3900pmol/l、4000pmol/l、4100pmol/l、4200pmol/l、4300pmol/l、4400pmol/l、4500pmol/l、4600pmol/l、4700pmol/l、4800pmol/l、4900pmol/l、5000pmol/l或更高的浓度。[0142]在特定实施方案中，来自正常对照受试者群体的dbs中atm1561特征肽的平均浓度包括在20pmol/l至100pmol/l的范围内、在25pmol/l至90pmol/l的范围内和在30pmol/l至80pmol/l的范围内的浓度。在特定实施方案中，来自正常对照受试者群体的dbs中atm 1561特征肽的平均浓度包括20pmol/l、25pmol/l、30pmol/l、35pmol/l、40pmol/l、45pmol/l、50pmol/l、55pmol/l、60pmol/l、65pmol/l、70pmol/l、75pmol/l、80pmol/l、85pmol/l、90pmol/l、95pmol/l、100pmol/l或更高的浓度。[0143]在特定实施方案中，来自正常对照受试者群体的dbs中prf 215特征肽的平均浓度包括在10pmol/l至200pmol/l的范围内、在11pmol/l至100pmol/l的范围内和在12pmol/l至80pmol/l的范围内的浓度。在特定实施方案中，来自正常对照受试者群体的dbs中prf215特征肽的平均浓度包括10pmol/l、15pmol/l、20pmol/l、25pmol/l、30pmol/l、35pmol/l、40pmol/l、45pmol/l、50pmol/l、55pmol/l、60pmol/l、65pmol/l、70pmol/l、75pmol/l、80pmol/l、85pmol/l、90pmol/l、95pmol/l、100pmol/l、110pmol/l、115pmol/l、120pmol/l、125pmol/l、130pmol/l、135pmol/l、140pmol/l、145pmol/l、150pmol/l、155pmol/l、160pmol/l、165pmol/l、170pmol/l、175pmol/l、180pmol/l、185pmol/l、190pmol/l、195pmol/l、200pmol/l或更高的浓度。[0144]可通过相关领域中已知的任何方法来合成一种或多种标准肽。此类合成肽还可包含具有一种或多种天然修饰的氨基酸。此类天然修饰可包括谷氨酰胺和天冬酰胺的脱氨基、胺化、氧化和羟基化。[0145](ix)使用方法。本公开的方法包括鉴定患有x-cgd、xlp1、fhl2、at、cvid、scid、ada缺乏症和dock8缺乏症中的一种或多种的个体。在特定实施方案中，所述方法包括鉴定患有x连锁或il2rg缺陷型scid的个体。在特定实施方案中，诊断患有x-cgd、xlp1、fhl2、at、cvid、scid、ada缺乏症和/或dock8缺乏症的个体是在早期，例如作为nbs的一部分，或在个体的病症症状明显之前执行。在特定实施方案中，鉴定或诊断包括使用次要肽标志物cd42、cd56、cd3ε、cd3δ或它们的组合。在特定实施方案中，次要标志物cd42可以提供关于血小板水平的信息。在特定实施方案中，次要标志物cd56可以提供关于nk细胞水平的信息。在特定实施方案中，cd3ε用作次要标志物以提供关于t细胞水平的信息。在特定实施方案中，cd3δ用作次要标志物以提供关于t细胞水平的信息。在特定实施方案中，cd3ε用作主要标志物以诊断患有scid的个体。在特定实施方案中，cd3δ用作主要标志物以诊断患有scid的个体。[0146]本公开的方法包括获得dbs、颊拭子、pbmc或wbc样本。在特定实施方案中，根据本文所述的方法获得dbs、颊拭子、pbmc或wbc样本。在特定实施方案中，从储存dbs、颊拭子、pbmc或wbc样本以供将来测试的dbs、颊拭子、pbmc或wbc储库或实验室获得dbs、颊拭子、pbmc或wbc样本。[0147]本公开的方法包括用消化酶消化dbs、来自颊拭子的细胞、pbmc或wbc中的蛋白质。在特定实施方案中，可在适当的缓冲液中溶解dbs的一个或多个冲孔、整个dbs、来自颊拭子的细胞、pbmc或wbc，并且可添加上述适当的消化酶以将存在于dbs、来自颊拭子的细胞、pbmc或wbc中的蛋白质消化成肽片段。在特定实施方案中，可以将dbs、来自颊拭子的细胞、pbmc或wbc用0.1％triton x-100溶解在50mm碳酸氢铵中并用胰蛋白酶消化。[0148]本公开的方法包括富集用于筛查x-cgd、xlp1、fhl2、at、cvid、ada缺乏症和/或dock8缺乏症的特征肽。特征肽包括：用于x-cgd的cybb 131；用于x-cgd的cybb 509；用于xlp1的sh2d1a 19；用于xlp1的sh2d1a 110；用于fhl2的prf 215；用于fhl2的prf 441；用于at的atm 798；用于at的atm 1544；用于at的atm 1561；用于cvid的cd19 41；用于cvid的cd1955；用于cvid的cd19 210；用于cvid的cd19 505；用于scid的il2rg 295；用于scid的il2rg 316；用于scid的cd3ε74；用于scid的cd3δ24；用于scid的cd3δ133；用于ada缺乏症的ada 93；用于dock8缺乏症的dock8 1272；用于血小板水平的cd42 128；用于血小板水平的cd42 154；用于nk细胞水平的cd56122；用于t细胞水平的cd3ε74；用于t细胞水平的cd3δ24；及用于t细胞水平的cd3δ133。在特定实施方案中，富集特征肽包括使来自消化的生物样本的肽片段的混合物与识别所述特征肽的一种或多种结合实体接触。在特定实施方案中，所述结合实体是抗体或其抗原结合片段。在特定实施方案中，所述抗体包括表1a-1c和图11中公开的那些。在特定实施方案中，本公开的抗体的氨基酸序列包括seq id no:23、24、26、27、29、30、32、33、41、42、44、45、47、48、50、51、59、60、62、63、65、66、68、69、77、78、80、81、89、90、92、93、95、96、98、99、107、108、110、111、119、120、122、123、131、132、134、135、143、144、146、147、149、150、152、153、168、169、172、173、176、177、180和181。在特定实施方案中，本公开的抗体的编码序列包括seq id no:22、25、28、31、40、43、46、49、58、61、64、67、76、79、88、91、94、97、106、109、118、121、130、133、142、145、148、151、166、167、170、171、174、175、178、179和182-209。在特定实施方案中，所述抗体包括结合cybb 131、cybb 509、sh2d1a 19、sh2d1a110、prf 215、prf 441、atm 798、atm 1544、atm 1561、cd1941、cd19 55、cd19 210、cd19 505、il2rg 295、il2rg 316、ada93、dock8 1272、cd42 128、cd42 154、cd56 122、cd3ε74、cd3δ24和cd3δ133的抗体。[0149]在特定实施方案中，抗体被用于富集包含seq id no:1的cybb肽。在特定实施方案中，包含seq id no:16-21、23、24、26、27、29、30、32和33的抗体被用于富集包含seq id no:2的cybb肽。[0150]在特定实施方案中，包含seq id no:160-165、168、169、172、173、176、177、180和181的抗体被用于富集包含seq id no:3的sh2d1a肽。在特定实施方案中，抗体被用于富集包含seq id no:4的sh2d1a肽。[0151]在特定实施方案中，包含seq id no:34-39、41、42、44、45、47、48、50和51的抗体被用于富集包含seq id no:5的prf-1肽。在特定实施方案中，抗体被用于富集包含seq id no:6的prf-1肽。[0152]在特定实施方案中，包含seq id no:52-57、59、60、62、63、65、66、68和69的抗体被用于富集包含seq id no:7的atm肽。在特定实施方案中，抗体被用于富集包含seq id no:210的atm肽。在特定实施方案中，抗体被用于富集包含seq id no:211的atm肽。[0153]在特定实施方案中，包含seq id no:70-75、77、78、80和81的抗体被用于富集包含seq id no:8的cd19肽。在特定实施方案中，抗体被用于富集包含seq id no:9的cd19肽。在特定实施方案中，抗体被用于富集包含seq id no:10的cd19肽。在特定实施方案中，抗体被用于富集包含seq id no:212的cd19肽。[0154]在特定实施方案中，抗体被用于富集包含seq id no:213的il2rg肽。在特定实施方案中，抗体被用于富集包含seq id no:214的il2rg肽。[0155]在特定实施方案中，包含seq id no:82-87、89、90、92、93、95、96、98和99的抗体被用于富集包含seq id no:11的ada肽。[0156]在特定实施方案中，包含seq id no:100-105、107、108、110和111的抗体被用于富集包含seq id no:12的dock8肽。[0157]在特定实施方案中，包含seq id no:112-117、119、120、122和123的抗体被用于富集包含seq id no:13的cd42肽。在特定实施方案中，包含seq id no:124-129、131、132、134和135的抗体被用于富集包含seq id no:14的cd42肽。[0158]在特定实施方案中，包含seq id no:136-141、143、144、146、147、149、150、152和153的抗体被用于富集包含seq id no:15的cd56肽。[0159]在特定实施方案中，抗体被用于富集seq id no:215的cd3ε肽。[0160]在特定实施方案中，抗体被用于富集包含seq id no:216的cd3δ肽。在特定实施方案中，抗体被用于富集包含seq id no:217的cd3δ肽。[0161]在特定实施方案中，表1a-1c和图11中公开的可以结合其同源特征肽的一种或多种抗体的任何组合可用于筛查x-cgd、xlp1、fhl2、at、cvid、scid、ada缺乏症和/或dock8缺乏症。在特定实施方案中，表1a-1c和图11中公开的可以结合其同源特征肽的一种或多种抗体的任何组合可用于筛查群体的x-cgd、xlp1、fhl2、at、cvid、scid、ada缺乏症和/或dock8缺乏症。在特定实施方案中，所述方法包括鉴定患有x连锁或il2rg缺陷型scid的个体。[0162]本公开的方法包括在ms分析之前任选地对免疫亲和富集的肽执行液相色谱以分离出该肽。液相色谱可基于肽的重量和对柱的流动相和固定相的亲和力来分离出该肽。[0163]本公开的方法包括对免疫亲和富集的肽执行srm-ms或mrm-ms以定量给定特征肽的量。在特定实施方案中，如上所述的那样进行srm-ms或mrm-ms。在特定实施方案中，特征肽的定量包括使用以已知量引入到测定中的参考肽。在特定实施方案中，参考肽在各个方面可与特征肽都是同一的，不同之处在于所述参考肽已经例如用一种或多种重同位素进行了差异标记，以将参考肽与特征肽区分开。[0164]在特定实施方案中，srm-ms或mrm-ms检测cybb肽的减少或不存在。在特定实施方案中，cybb肽包含seq id no:1。在特定实施方案中，cybb肽包含seq id no:2。[0165]在特定实施方案中，srm-ms或mrm-ms检测sh2d1a肽的减少或不存在。在特定实施方案中，sh2d1a肽包含seq id no:3。在特定实施方案中，sh2d1a肽包含seq id no:4。[0166]在特定实施方案中，srm-ms或mrm-ms检测prf-1肽的减少或不存在。在特定实施方案中，prf-1肽包含seq id no:5。在特定实施方案中，prf-1肽包含seq id no:6。[0167]在特定实施方案中，srm-ms或mrm-ms检测atm肽的减少或不存在。在特定实施方案中，atm肽包含seq id no:7。在特定实施方案中，atm肽包含seq id no:210。在特定实施方案中，atm肽包含seq id no:211。[0168]在特定实施方案中，srm-ms或mrm-ms检测cd19肽的减少或不存在。在特定实施方案中，cd19肽包含seq id no:8。在特定实施方案中，cd19肽包含seq id no:9。在特定实施方案中，cd19肽包含seq id no:10。在特定实施方案中，cd19肽包含seq id no:212。[0169]在特定实施方案中，srm-ms或mrm-ms检测il2rg肽的减少或不存在。在特定实施方案中，il2rg肽包含seq id no:213。在特定实施方案中，il2rg肽包含seq id no:214。[0170]在特定实施方案中，srm-ms或mrm-ms检测ada肽的减少或不存在。在特定实施方案中，ada肽包含seq id no:11。[0171]在特定实施方案中，srm-ms或mrm-ms检测dock8肽的减少或不存在。在特定实施方案中，dock8肽包含seq id no:12。[0172]在特定实施方案中，srm-ms或mrm-ms检测cd42肽的减少或不存在。在特定实施方案中，cd42肽包含seq id no:13。在特定实施方案中，cd42肽包含seq id no:14。[0173]在特定实施方案中，srm-ms或mrm-ms检测cd56肽的减少或不存在。在特定实施方案中，cd56肽包含seq id no:15。[0174]在特定实施方案中，srm-ms或mrm-ms检测cd3ε肽的减少或不存在。在特定实施方案中，cd3ε肽包含seq id no:215。[0175]在特定实施方案中，srm-ms或mrm-ms检测cd3δ肽的减少或不存在。在特定实施方案中，cd3δ肽包含seq id no:216。在特定实施方案中，cd3δ肽包含seq id no:217。[0176]特定实施方案包括使用如本文所述的免疫-srm在一段时间内监测受试者的特征肽水平。在特定实施方案中，选择受试者以根据本文公开的系统和方法进行监测，因为他们表现出如本文所述的x-cgd、xlp1、fhl2、at、cvid、scid、ada缺乏症和/或dock8缺乏症的体征或症状，或正在接受对x-cgd、xlp1、fhl2、at、cvid、scid、ada缺乏症和/或dock8缺乏症的治疗。[0177]本文公开的特定实施方案包括确定在正在接受x-cgd、xlp1、fhl2、at、cvid、scid、ada缺乏症和/或dock8缺乏症的治疗的受试者中治疗的功效，包括在一种或多种治疗之前以及在一种或多种治疗期间和/或之后获得源自受试者的生物样本；使用本文所述的免疫-srm检测治疗之前所述受试者中的特征肽水平；使用本文所述的免疫-srm检测所述一种或多种治疗期间或之后所述受试者中的特征肽水平；以及如果治疗期间或之后的特征肽水平高于治疗之前的特征肽水平，则确定治疗有效，或者如果治疗期间或之后的特征肽水平等于或低于治疗之前的特征肽水平，则确定治疗无效。在特定实施方案中，所述生物样本包括dbs、来自颊拭子的细胞、pbmc或wbc。在特定实施方案中，所述受试者正在接受x连锁或il2rg缺陷型scid的治疗。[0178]在特定实施方案中，确定在正在接受x-cgd、xlp1、fhl2、at、cvid、scid、ada缺乏症和/或dock8缺乏症的治疗的受试者中的治疗功效可以指导所述一种或多种治疗是应该继续还是停止，或者是否应该实施新的治疗。在特定实施方案中，如果在一种或多种治疗期间或之后受试者中的特征肽水平高于所述一种或多种治疗之前所述受试者中的特征肽水平，则可以继续所述一种或多种治疗。在特定实施方案中，如果在所述受试者中在所述一种或多种治疗期间或之后的特征肽水平比在正常对照受试者中或未受x-cgd、xlp1、fhl2、at、cvid、scid、ada缺乏症和/或dock8缺乏症影响的对照受试者中测得的特征肽水平高1％、高5％、高10％、高15％、高20％、高25％、高30％、高35％、高40％、高45％、高50％、高55％、高60％、高65％、高70％、高75％、高80％、高85％、高90％、高95％、高100％或更多，则停止所述一种或多种治疗。在特定实施方案中，如果在治疗期间或之后所述受试者中的特征肽水平等于或低于治疗之前所述受试者中的特征肽水平或者如果所述特征肽不存在，则可以实施新的治疗。[0179]本文公开的特定实施方案包括测量施用给正在接受x-cgd、xlp1、fhl2、at、cvid、scid、ada缺乏症和/或dock8缺乏症的治疗的受试者的蛋白质治疗剂的药代动力学特征，包括在施用一种或多种蛋白质治疗剂之前以及在施用一种或多种蛋白质治疗剂期间和/或之后获得源自受试者的生物样本；使用本文所述的免疫-srm检测施用一种或多种蛋白质治疗剂之前受试者中的特征肽水平；使用本文所述的免疫-srm检测施用一种或多种蛋白质治疗剂期间或之后受试者中的特征肽水平，从而测量施用的蛋白质治疗剂的药代动力学特征。在特定实施方案中，所述生物样本包括dbs、来自颊拭子的细胞、pbmc或wbc。在特定实施方案中，所述受试者正在接受x连锁或il2rg缺陷型scid的治疗。[0180]在特定实施方案中，特征肽水平的“稳定”测量值是相对于同一受试者中的先前比较进行评价的测量值并且表示自上一次测量以来尚未显著变化(如通过本领域已知的统计量度，如t检验或p值，例如p值》0.05确定的)的特征肽水平。在特定实施方案中，“稳定”测量值是相对于同一患者中的先前比较进行评价的测量值并且表示自一组集合或平均的先前测量(例如，前3、4、或5次测量)以来尚未显著变化(如通过本领域已知的统计量度，如t检验或p值，例如p值》0.05确定的)的特征肽水平。[0181]特征肽水平的“无变化的”测量值是相对于同一患者中的先前比较进行评价的测量值并且表示未能在特定受试者中实现接近或远离参考特征肽水平的得分的统计学显著变化。在特定实施方案中，“无变化的”测量值是相对于同一患者中的先前比较或自一组集合或平均的先前测量(例如，前3、4、或5次测量)以来进行评价的测量值。[0182]在特定实施方案中，本公开的抗体也可用于补充临床测试中，以诊断生化结果不明确的那些患者以及携带来自遗传测试的意义未知的变体(vus)的患者的x-cgd、xlp1、fhl2、at、cvid、scid、ada缺乏症和dock8缺乏症。在特定实施方案中，在编码本文公开的x-cgd的cybb、xlp1的sh2d1a、fhl2的prf-1、at的atm、cvid的cd19、scid的il2rg、ada缺乏症的ada和/或dock8缺乏症的dock8的基因中具有vus的受试者可以用本公开的免疫-srm测定进行测试，以确定vus是否影响这些受试者中的相应特征肽水平。[0183]在特定实施方案中，预定的截断值用作给定特征肽的阈值。给定特征肽的浓度高于阈值表明所测定的生物样本(例如，dbs、来自颊拭子的细胞、pbmc或wbc)来自未罹患x-cgd、xlp1、fhl2、at、cvid、scid、ada缺乏症和/或dock8缺乏症的个体。给定特征肽的浓度低于阈值或不存在表明所测定的dbs来自罹患x-cgd、xlp1、fhl2、at、cvid、scid、ada缺乏症和/或dock8缺乏症的个体。在特定实施方案中，可通过分析正常对照群体和计算此群体中给定特征肽的浓度的标准偏差(sd)来确定阈值。可根据给定特征肽的平均浓度将阈值设置为某个sd。在特定实施方案中，阈值是来自给定特征肽的平均浓度的-1sd、-1.1sd、-1.2sd、-1.3sd、-1.4sd、-1.5sd、-1.6sd、-1.7sd、-1.8sd、-1.9sd、-2.0sd、-2.1sd、-2.2sd、-2.3sd、-2.4sd、-2.5sd、-2.6sd、-2.7sd、-2.8sd、-2.9sd、-3.0sd或更高sd。在特定实施方案中，为了诊断或筛查x-cgd、xlp1、fhl2、at、cvid、scid、ada缺乏症和/或dock8缺乏症，可通过分析正常对照群体并计算此群体中给定特征肽的浓度与内源性atp7b浓度之比的标准偏差(sd)来确定阈值(jung等人，j.proteome res.2017；16:862–871)。可将每种pidd的肽浓度截断值设置为源自每种特征肽的平均浓度或给定特征肽的浓度与内源性atp7b浓度之比的某个sd。[0184]在特定实施方案中，本公开的特征肽的阈值浓度包括来自正常对照群体中相应特征肽的平均浓度的-1.0sd、-1.25sd、-1.3sd、-1.35sd、-1.4sd、-1.45sd、-1.5sd、-1.55sd、-1.6sd、-1.65sd、-1.7sd、-1.75sd、-1.8sd、-1.85sd、-1.9sd、-1.95sd、-2.0sd、-2.25sd、-2.3sd、-2.35sd、-2.4sd、-2.45sd、-2.5sd、-2.55sd、-2.6sd、-2.65sd、-2.7sd、-2.75sd、-2.8sd、-2.85sd、-2.9sd、-2.95sd、-3.0sd或更多。[0185]在特定实施方案中，cybb 509肽的阈值浓度包括250pmol/l或更低、240pmol/l或更低、230pmol/l或更低、220pmol/l或更低、210pmol/l或更低、200pmol/l或更低、190pmol/l或更低、185pmol/l或更低、180pmol/l或更低、175pmol/l或更低、170pmol/l或更低、165pmol/l或更低、160pmol/l或更低、155pmol/l或更低、150pmol/l或更低。在特定实施方案中，cybb 509肽的阈值浓度包括188pmol/l或更低。[0186]在特定实施方案中，ada 93肽的阈值浓度包括500pmol/l或更低、490pmol/l或更低、480pmol/l或更低、470pmol/l或更低、460pmol/l或更低、450pmol/l或更低、440pmol/l或更低、430pmol/l或更低、420pmol/l或更低、410pmol/l或更低、400pmol/l或更低、390pmol/l或更低、380pmol/l或更低、370pmol/l或更低、360pmol/l或更低。在特定实施方案中，ada 93肽的阈值浓度包括470pmol/l或更低。[0187]在特定实施方案中，dock8 1272肽的阈值浓度包括100pmol/l或更低、90pmol/l或更低、80pmol/l或更低、70pmol/l或更低、60pmol/l或更低、50pmol/l或更低、40pmol/l或更低、30pmol/l或更低、20pmol/l或更低、10pmol/l或更低。在特定实施方案中，dock8 1272肽的阈值浓度包括63pmol/l或更低。[0188]在特定实施方案中，cd42 128肽的阈值浓度包括4000pmol/l或更低、3900pmol/l或更低、3800pmol/l或更低、3700pmol/l或更低、3600pmol/l或更低、3500pmol/l或更低、3400pmol/l或更低、3300pmol/l或更低、3200pmol/l或更低、3100pmol/l或更低、3000pmol/l或更低、2900pmol/l或更低、2800pmol/l或更低、2700pmol/l或更低、2600pmol/l或更低。在特定实施方案中，cd42 128肽的阈值浓度包括3435pmol/l或更低。[0189]在特定实施方案中，cd42 154肽的阈值浓度包括8000pmol/l或更低、7900pmol/l或更低、7800pmol/l或更低、7700pmol/l或更低、7600pmol/l或更低、7500pmol/l或更低、7400pmol/l或更低、7300pmol/l或更低、7200pmol/l或更低、7100pmol/l或更低、7000pmol/l或更低、6900pmol/l或更低、6800pmol/l或更低、6700pmol/l或更低、6600pmol/l或更低。在特定实施方案中，cd42 154肽的阈值浓度包括7450pmol/l或更低。[0190]在特定实施方案中，cd56 122肽的阈值浓度包括600pmol/l或更低、590pmol/l或更低、580pmol/l或更低、570pmol/l或更低、560pmol/l或更低、550pmol/l或更低、540pmol/l或更低、530pmol/l或更低、520pmol/l或更低、510pmol/l或更低、500pmol/l或更低、490pmol/l或更低、480pmol/l或更低、470pmol/l或更低、460pmol/l或更低。在特定实施方案中，cd56 122肽的阈值浓度包括482pmol/l或更低。[0191]在特定实施方案中，atm 1561肽的阈值浓度包括18pmol/l或更低、17pmol/l或更低、16pmol/l或更低、15pmol/l或更低、14pmol/l或更低、13pmol/l或更低、12pmol/l或更低、11pmol/l或更低、10pmol/l或更低、9pmol/l或更低、8pmol/l或更低、7pmol/l或更低、6pmol/l或更低、5pmol/l或更低、4pmol/l或更低、3pmol/l或更低、2pmol/l或更低、1pmol/l或更低。在特定实施方案中，atm1561肽的阈值浓度包括15pmol/l或更低。[0192]在特定实施方案中，prf 215肽的阈值浓度包括11pmol/l或更低、10pmol/l或更低、9pmol/l或更低、8pmol/l或更低、7pmol/l或更低、6pmol/l或更低、5pmol/l或更低、4pmol/l或更低、3pmol/l或更低、2pmol/l或更低、1pmol/l或更低、0.9pmol/l或更低、0.8pmol/l或更低、0.7pmol/l或更低、0.6pmol/l或更低、0.5pmol/l或更低、0.4pmol/l或更低、0.3pmol/l或更低、0.2pmol/l或更低、0.1pmol/l或更低。在特定实施方案中，prf 215肽的阈值浓度包括10pmol/l或更低。[0193]在特定实施方案中，特征肽可被认为是用于诊断或筛查给定疾病的主要生物标志物。主要特征肽可包括首先用于诊断或筛查给定疾病的肽。在特定实施方案中，主要生物标志物可用于直接诊断特定疾病。在特定实施方案中，主要生物标志物可从相应蛋白质的消化中可再现地获得，具有用于免疫亲和富集的高亲和力抗体，和/或可在独立的液相色谱柱和/或质谱仪器上再现。在特定实施方案中，cybb肽可用作主要生物标志物以筛查患有x-cgd的受试者。在特定实施方案中，sh2d1a肽可用作主要生物标志物以筛查患有xlp1的受试者。在特定实施方案中，prf-1肽可用作主要生物标志物以筛查患有fhl2的受试者。在特定实施方案中，atm肽可用作主要生物标志物以筛查患有at的受试者。在特定实施方案中，cd19肽可用作主要生物标志物以筛查患有cvid的受试者。在特定实施方案中，il2rg肽可用作主要生物标志物以筛查患有scid的受试者。在特定实施方案中，cd3ε肽可用作主要生物标志物以筛查患有scid的受试者。在特定实施方案中，cd3δ肽可用作主要生物标志物以筛查患有scid的受试者。在特定实施方案中，ada肽可用作主要生物标志物以筛查患有ada缺乏症的受试者。在特定实施方案中，dock8肽可用作主要生物标志物以筛查患有dock8缺乏症的受试者。在特定实施方案中，特征肽可被认为是用于诊断或筛查给定疾病的次要生物标志物。次要特征肽可包括第二被用于确认用主要标志物对给定疾病进行的诊断或筛查的肽。在特定实施方案中，cd42可以是用于评估血小板水平的次要生物标志物。在特定实施方案中，cd56可以是nk细胞水平的次要生物标志物。在特定实施方案中，cd56可以是支持各种免疫缺陷的次要生物标志物。在特定实施方案中，cd3ε可用作用于评估t细胞水平的次要生物标志物。在特定实施方案中，cd3δ可用作用于评估t细胞水平的次要生物标志物。[0194]本文公开的方法包括基于用本文公开的组合物和方法筛查x-cgd、xlp1、fhl2、at、cvid、scid、ada缺乏症和/或dock8缺乏症的结果来治疗受试者(例如人)。治疗受试者包括递送治疗有效量。治疗有效量包括提供有效量、防治性治疗和/或治疗性治疗的那些。[0195]“有效量”是引起受试者的所需生理变化所必需的组合物的量。例如，对于x-cgd、xlp1、fhl2、at、cvid、scid、ada缺乏症和/或dock8缺乏症，有效量可提供症状减轻、症状消除或治愈。通常施用有效量用于研究目的。本文公开的有效量可在动物模型或体外测定中引起与评估疾病的发展、进展和/或消退有关的统计学显著效果。[0196]特定实施方案可包括作为“防治性治疗”施用组合物。防治性治疗包括对没有展现出x-cgd、xlp1、fhl2、at、cvid、scid、ada缺乏症和/或dock8缺乏症的体征或症状或仅展现出x-cgd、xlp1、fhl2、at、cvid、scid、ada缺乏症和/或dock8缺乏症的早期体征或症状的受试者施用的防治性治疗，以使得施用治疗是为了削弱或降低发展所述病症的风险。因此，防治性治疗用作针对x-cgd、xlp1、fhl2、at、cvid、scid、ada缺乏症和/或dock8缺乏症的预防性治疗。[0197]在特定实施方案中，防治性治疗可预防、延迟或减少x-cgd、xlp1、fhl2、at、cvid、scid、ada缺乏症和/或dock8缺乏症的发作。在特定实施方案中，可在其他预防性措施(诸如使用针对pidd的抗生素)之前、同时或之后给予防治性治疗。在特定实施方案中，防治性治疗可预防x-cgd、xlp1、fhl2、at、cvid、scid、ada缺乏症和/或dock8缺乏症，或降低与x-cgd、xlp1、fhl2、at、cvid、scid、ada缺乏症和/或dock8缺乏症相关的症状或并发症的严重程度。[0198]x-cgd的症状和并发症可包括：细菌和真菌感染；肉芽肿；肺、肝、脾、骨或皮肤的脓肿；淋巴结肿；持续性腹泻；和/或长期流涕。xlp1的症状和并发症包括发烧；疲劳、体重减轻；食欲不振；淋巴结肿大；和/或患癌风险增加。fhl2的症状和并发症包括发烧；水肿；肝脾肿大；肝功能障碍；神经损害；癫痫发作；和/或共济失调。at的症状和并发症包括运动协调性下降；智力发育下降；步行迟缓；和/或暴露在阳光下的皮肤区域变色。cvid的症状和并发症包括呼吸问题；长期咳嗽；导致体重减轻的腹泻；耳部感染；鼻窦感染；和/或反复肺部感染。scid的症状和并发症包括呼吸道感染、耳部感染、鹅口疮、其他病原体感染、支气管炎、肺炎、腹泻和发育停滞。ada缺乏症的症状和并发症包括肺炎；慢性腹泻；皮疹；和/或发育迟缓。dock8缺乏症的症状和并发症包括湿疹；呼吸道感染；和/或皮肤葡萄球菌感染。[0199]“治疗性治疗”包括对展现出x-cgd、xlp1、fhl2、at、cvid、scid、ada缺乏症和/或dock8缺乏症的症状或体征的受试者施用的治疗，并且出于削弱或消除x-cgd、xlp1、fhl2、at、cvid、scid、ada缺乏症和/或dock8缺乏症的那些体征或症状的目的而被施用给所述受试者。在特定实施方案中，治疗性治疗可为被诊断患有x-cgd、xlp1、fhl2、at、cvid、scid、ada缺乏症和/或dock8缺乏症的受试者提供免疫功能。在特定实施方案中，治疗性治疗可减轻、控制或消除x-cgd、xlp1、fhl2、at、cvid、scid、ada缺乏症和/或dock8缺乏症的症状和并发症，诸如本文所述的那些。[0200]防治性治疗和治疗性治疗不必相互排斥，并且在特定实施方案中，所施用的剂量可达成多于一种治疗类型。[0201]在特定实施方案中，治疗有效量为被诊断患有x-cgd、xlp1、fhl2、at、cvid、scid、ada缺乏症和/或dock8缺乏症的受试者提供免疫系统功能。因此，在特定实施方案中，本文公开的治疗方法包括用于诸如x-cgd、xlp1、fhl2、at、cvid、scid、ada缺乏症和/或dock8缺乏症的病症的干细胞移植、免疫球蛋白输注、抗生素输注和/或基因疗法。在特定实施方案中，治疗方法包括用于ada缺乏症的酶疗法。提供免疫功能包括：减少细菌、病毒或寄生虫感染的频率或数量，增加预期寿命，和/或增加生长。[0202]在特定实施方案中，治疗性组合物的施用可伴随单独佐剂的施用。示例性佐剂包括明矾、膨润土、胶乳和丙烯酸颗粒；不完全弗氏佐剂(incomplete freund's adjuvant)、完全弗氏佐剂(complete freund'sadjuvant)；基于铝的盐，诸如氢氧化铝；基于钙的盐；二氧化硅或任何tlr生物配体；sigma佐剂系统(sas)；ribi佐剂。[0203]对于施用，可基于体外测定和/或动物模型研究的结果初始估计治疗有效量(本文中也称为剂量)。此类信息可用于更准确地确定目标受试者的可用剂量。施用至特定受试者的实际剂量的量可由医师、兽医或研究人员在考虑诸如包括受试者的目标、体重、疾患的严重程度、先前或同时的治疗干预、特发性疾病在内的身体和生理因素以及施用途径的参数的情况下确定。[0204]细胞的治疗有效量可在104个细胞/千克至109个细胞/千克的范围内。在特定实施方案中，细胞的治疗有效量可包括104个细胞/千克、105个细胞/千克、106个细胞/千克、107个细胞/千克、108个细胞/千克、109个细胞/kg或更高。[0205]有用剂量可在0.1至5μg/kg或0.5至1μg/kg的范围内。在特定实施方案中，剂量可包括1μg/kg、15μg/kg、30μg/kg、50μg/kg、55μg/kg、70μg/kg、90μg/kg、150μg/kg、350μg/kg、500μg/kg、750μg/kg、1000μg/kg、0.1至5mg/kg或0.5至1mg/kg。在特定实施方案中，剂量可包括1mg/kg、10mg/kg、30mg/kg、50mg/kg、70mg/kg、100mg/kg、300mg/kg、500mg/kg、700mg/kg、1000mg/kg或者更高。[0206]治疗有效量可通过在治疗方案的过程期间(例如每天、每隔一天、每3天、每4天、每5天、每6天、每周、每2周、每3周、每月、每2个月、每3个月、每4个月、每5个月、每6个月、每7个月、每8个月、每9个月、每10个月、每11个月或每年)施用单次或多次剂量来实现。[0207](x)试剂盒。还提供了用于测试先天性病症的试剂盒。试剂盒可包括用于取血的刺血针、用于收集血滴的过滤卡、用于采集脸颊细胞的拭子、用于采集血液的管、用于溶解dbs或细胞的溶液以及用于消化dbs或细胞中的标志物蛋白的适当缓冲液和酶。试剂盒可进一步包括一个或多个容器，所述一个或多个容器包括抗肽结合剂(例如，抗体)和/或试剂或用品，以评估cybb、sh2d1a(sap)、prf-1、atm、cd19、il2rg、ada、dock8、cd42、cd56、cd3ε和/或cd3δ的缺乏或减少。在特定实施方案中，试剂盒包括一个或多个容器，所述一个或多个容器包括以下抗肽抗体：抗cybb 131、抗cybb 509、抗sh2d1a 19、抗sh2d1a 110、抗prf 215、抗prf 441、抗atm798、抗atm 1544、抗atm 1561、抗cd19 41、抗cd19 55、抗cd19210、抗cd19 505、抗il2rg 295、抗il2rg 316、抗ada 93、抗dock8 1272、抗cd42 128、抗cd42 154和/或抗cd56 122、抗cd3ε74、抗cd3δ24和/或抗cd3δ133。可将抗体固定在固相载体诸如柱或珠粒上。试剂盒还可包括用于使肽从抗体释放的洗脱缓冲液。在特定实施方案中，试剂盒可包括一种或多种标记的参考肽以对特征肽执行绝对定量。在特定实施方案中，试剂盒还可包括有效使用试剂盒所需的一些或全部必要的实验室和/或医疗用品，诸如纱布、无菌粘合带、手套、管等。可改变本文所述的任何试剂盒的内容物。[0208]可以制备试剂盒的组分以供储存和以后使用。与此类一个或多个容器相伴的可为由管制试剂盒的制造、使用或销售的政府机构开具的呈表格形式的报告书，所述报告书反映由制造、使用或销售的机构核准(在需要时)。[0209]任选地，试剂盒进一步包括在所述方法中使用试剂盒的说明书。在各种实施方案中，说明书可包括适当的说明以解释与使用试剂盒相关的结果；相关废弃物的适当处置；等等。说明书可采用试剂盒内提供的印刷说明书的形式，或者可将说明书印刷在试剂盒本身的一部分上。说明书可呈页、小册子、手册、cd-rom或计算机可读装置的形式，或者可在诸如网站的远程位置提供说明书的指导。[0210]包括以下示例性实施方案和实施例以说明本公开的特定实施方案。鉴于本公开，本领域普通技术人员应认识到，在不脱离本公开的精神和范围的情况下可对本文所公开的特定实施方案作出许多改变并且仍获得相似或类似结果。[0211](xi)示例性实施方案。[0212]1.一种针对受试者的x连锁慢性肉芽肿病(x-cgd)、腺苷脱氨酶(ada)缺乏症和细胞质分裂付出蛋白8(dock8)缺乏症的筛查方法，所述方法包括：[0213]获得源自所述受试者的生物样本；[0214]用酶消化来自所述生物样本的蛋白质以产生一种或多种肽；[0215]执行以下富集：[0216]用抗体或其抗原结合片段富集seq id no:2的x-cgd的cybb特征肽，所述抗体或其抗原结合片段结合所述第二cybb特征肽并且包含：重链可变(vh)结构域，所述重链可变(vh)结构域包含seq id no:16的cdr1、seq id no:17的cdr2和seq id no:18的cdr3；以及轻链可变(vl)结构域，所述轻链可变(vl)结构域包含：seq id no:19的cdr1、seq id no:20的cdr2和seq id no:21的cdr3；[0217]用抗体或其抗原结合片段富集seq id no:11的ada缺乏症的ada特征肽，所述抗体或其抗原结合片段结合所述ada特征肽并且包含：重链可变(vh)结构域，所述重链可变(vh)结构域包含seq id no:82的cdr1、seq id no:83的cdr2和seq id no:84的cdr3；以及轻链可变(vl)结构域，所述轻链可变(vl)结构域包含：seq id no:85的cdr1、seq id no:86的cdr2和seq id no:87的cdr3；以及[0218]用抗体或其抗原结合片段富集seq id no:12的dock8缺乏症的dock8特征肽，所述抗体或其抗原结合片段结合所述dock8特征肽并且包含：重链可变(vh)结构域，所述重链可变(vh)结构域包含seq id no:100的cdr1、seq id no:101的cdr2和seq id no:102的cdr3；以及轻链可变(vl)结构域，所述轻链可变(vl)结构域包含：seq id no:103的cdr1、seq id no:104的cdr2和seq id no:105的cdr3；[0219]对经富集的肽执行液相色谱-多反应监测质谱(lc-mrm-ms)以确定每种特征肽的浓度；以及[0220]如下对受试者进行诊断：[0221]当所述cybb特征肽的浓度低于预定阈值浓度时或当所述cybb特征肽不存在时，诊断所述受试者患有x-cgd；[0222]当所述ada特征肽的浓度低于预定阈值浓度时或当所述ada特征肽不存在时，诊断所述受试者患有ada缺乏症；并且[0223]当所述dock8特征肽的浓度低于预定阈值浓度时或当所述dock8特征肽不存在时，诊断所述受试者患有dock8缺乏症。[0224]2.如实施方案1所述的方法，其中所述方法进一步包括执行以下富集：[0225]用抗体或其抗原结合片段富集seq id no:13的第一cd42特征肽，所述抗体或其抗原结合片段结合所述第一cd42特征肽并且包含：重链可变(vh)结构域，所述重链可变(vh)结构域包含seq id no:112的cdr1、seq id no:113的cdr2和seq id no:114的cdr3；以及轻链可变(vl)结构域，所述轻链可变(vl)结构域包含：seq id no:115的cdr1、seq id no:116的cdr2和seq id no:117的cdr3；[0226]用抗体或其抗原结合片段富集seq id no:14的第二cd42特征肽，所述抗体或其抗原结合片段结合所述第二cd42特征肽并且包含：重链可变(vh)结构域，所述重链可变(vh)结构域包含seq id no:124的cdr1、seq id no:125的cdr2和seq id no:126的cdr3；以及轻链可变(vl)结构域，所述轻链可变(vl)结构域包含：seq id no:127的cdr1、seq id no:128的cdr2和seq id no:129的cdr3以及[0227]用抗体或其抗原结合片段富集seq id no:15的cd56特征肽，所述抗体或其抗原结合片段结合所述cd56特征肽并且包含：重链可变(vh)结构域，所述重链可变(vh)结构域包含seq id no:136的cdr1、seq id no:137的cdr2和seq id no:138的cdr3；以及轻链可变(vl)结构域，所述轻链可变(vl)结构域包含：seq id no:139的cdr1、seq id no:140的cdr2和seq id no:141的cdr3；[0228]对经富集的第一cd42、第二cd42和/或cd56特征肽执行液相色谱-多反应监测质谱(lc-mrm-ms)以确定每种特征肽的浓度；以及[0229]将所述第一cd42、第二cd42和cd56特征肽的浓度与相应的预定阈值浓度进行比较。[0230]3.如实施方案2所述的方法，其中所述方法进一步包括在所述第一和第二cd42特征肽浓度的所述比较之后评估所述受试者的血小板水平。[0231]4.如实施方案2或3所述的方法，其中所述方法进一步包括在所述cd56特征肽浓度的所述比较之后评估所述受试者的自然杀伤细胞水平。[0232]5.如实施方案1-4中任一项所述的方法，其中所述方法作为新生儿筛查(nbs)的一部分执行，所述新生儿筛查另外筛查所述受试者的苯丙酮尿症、原发性先天性甲状腺功能减退症、囊性纤维化和镰状细胞病中的一种或多种。[0233]6.如实施方案1-5中任一项所述的方法，其中所述生物样本是干血斑(dbs)、颊拭子、外周血单个核细胞(pbmc)或白血细胞(wbc)。[0234]7.一种针对受试者的x连锁慢性肉芽肿病(x-cgd)、x连锁淋巴细胞增生综合征1(xlp1)、家族性噬血细胞性淋巴组织细胞增多症2(fhl2)、共济失调毛细血管扩张症(at)、普通变异型免疫缺陷(cvid)、严重联合免疫缺陷(scid)、腺苷脱氨酶(ada)缺乏症和/或细胞质分裂付出蛋白8(dock8)缺乏症的筛查方法，所述方法包括：[0235]获得源自所述受试者的生物样本；[0236]用酶消化来自所述生物样本的蛋白质以产生一种或多种肽；[0237]执行以下富集：[0238]用抗体或其抗原结合片段富集seq id no:1的x-cgd的第一cybb特征肽，所述抗体或其抗原结合片段结合所述第一cybb特征肽；[0239]用抗体或其抗原结合片段富集seq id no:2的x-cgd的第二cybb特征肽，所述抗体或其抗原结合片段结合所述第二cybb特征肽并且包含：重链可变(vh)结构域，所述重链可变(vh)结构域包含seq id no:16的cdr1、seq id no:17的cdr2和seq id no:18的cdr3；以及轻链可变(vl)结构域，所述轻链可变(vl)结构域包含：seq id no:19的cdr1、seq id no:20的cdr2和seq id no:21的cdr3；[0240]用抗体或其抗原结合片段富集seq id no:3的xlp1的第一sh2d1a特征肽，所述抗体或其抗原结合片段结合所述第一sh2d1a特征肽并且包含：重链可变(vh)结构域，所述重链可变(vh)结构域包含seq id no:160的cdr1、seq id no:161的cdr2和seq id no:162的cdr3；以及轻链可变(vl)结构域，所述轻链可变(vl)结构域包含：seq id no:163的cdr1、seq id no:164的cdr2和seq id no:165的cdr3；[0241]用抗体或其抗原结合片段富集seq id no:4的xlp1的第二sh2d1a特征肽，所述抗体或其抗原结合片段结合所述第二sh2d1a特征肽；[0242]用抗体或其抗原结合片段富集seq id no:5的fhl2的第一prf-1特征肽，所述抗体或其抗原结合片段结合所述第一prf-1特征肽并且包含：重链可变(vh)结构域，所述重链可变(vh)结构域包含seq id no:34的cdr1、seq id no:35的cdr2和seq id no:36的cdr3；以及轻链可变(vl)结构域，所述轻链可变(vl)结构域包含：seq id no:37的cdr1、seq id no:38的cdr2和seq id no:39的cdr3；[0243]用抗体或其抗原结合片段富集seq id no:6的fhl2的第二prf-1特征肽，所述抗体或其抗原结合片段结合所述第二prf-1特征肽；[0244]用抗体或其抗原结合片段富集seq id no:210的共济失调毛细血管扩张症的第一atm特征肽，所述抗体或其抗原结合片段结合所述第一atm特征肽；[0245]用抗体或其抗原结合片段富集seq id no:211的共济失调毛细血管扩张症的第二atm特征肽，所述抗体或其抗原结合片段结合所述第二atm特征肽；[0246]用抗体或其抗原结合片段富集seq id no:7的共济失调毛细血管扩张症的第三atm特征肽，所述抗体或其抗原结合片段结合所述第三atm特征肽并且包含：重链可变(vh)结构域，所述重链可变(vh)结构域包含seq id no:52的cdr1、seq id no:53的cdr2和seq id no:54的cdr3；以及轻链可变(vl)结构域，所述轻链可变(vl)结构域包含：seq id no:55的cdr1、seq id no:56的cdr2和seq id no:57的cdr3；[0247]用抗体或其抗原结合片段富集seq id no:8的cvid的第一cd19特征肽，所述抗体或其抗原结合片段结合所述第一cd19特征肽并且包含：重链可变(vh)结构域，所述重链可变(vh)结构域包含seq id no:70的cdr1、seq id no:71的cdr2和seq id no:72的cdr3；以及轻链可变(vl)结构域，所述轻链可变(vl)结构域包含：seq id no:73的cdr1、seq id no:74的cdr2和seq id no:75的cdr3；[0248]用抗体或其抗原结合片段富集seq id no:9的cvid的第二cd19特征肽，所述抗体或其抗原结合片段结合所述第二cd19特征肽；[0249]用抗体或其抗原结合片段富集seq id no:10的cvid的第三cd19特征肽，所述抗体或其抗原结合片段结合所述第三cd19特征肽；[0250]用抗体或其抗原结合片段富集seq id no:212的cvid的第四cd19特征肽，所述抗体或其抗原结合片段结合所述第四cd19特征肽；[0251]用抗体或其抗原结合片段富集seq id no:213的scid的第一il2rg特征肽，所述抗体或其抗原结合片段结合所述第一il2rg特征肽；[0252]用抗体或其抗原结合片段富集seq id no:214的scid的第二il2rg特征肽，所述抗体或其抗原结合片段结合所述第二il2rg特征肽；[0253]用抗体或其抗原结合片段富集seq id no:215的scid的cd3ε特征肽，所述抗体或其抗原结合片段结合所述cd3ε特征肽；[0254]用抗体或其抗原结合片段富集seq id no:216的scid的第一cd3dδ特征肽，所述抗体或其抗原结合片段结合所述第一cd3dδ特征肽；[0255]用抗体或其抗原结合片段富集seq id no:217的scid的第二cd3dδ特征肽，所述抗体或其抗原结合片段结合所述第二cd3dδ特征肽；[0256]用抗体或其抗原结合片段富集seq id no:11的ada缺乏症的ada特征肽，所述抗体或其抗原结合片段结合所述ada特征肽并且包含：重链可变(vh)结构域，所述重链可变(vh)结构域包含seq id no:82的cdr1、seq id no:83的cdr2和seq id no:84的cdr3；以及轻链可变(vl)结构域，所述轻链可变(vl)结构域包含：seq id no:85的cdr1、seq id no:86的cdr2和seq id no:87的cdr3；和/或[0257]用抗体或其抗原结合片段富集seq id no:12的dock8缺乏症的dock8特征肽，所述抗体或其抗原结合片段结合所述dock8特征肽并且包含：重链可变(vh)结构域，所述重链可变(vh)结构域包含seq id no:100的cdr1、seq id no:101的cdr2和seq id no:102的cdr3；以及轻链可变(vl)结构域，所述轻链可变(vl)结构域包含：seq id no:103的cdr1、seq id no:104的cdr2和seq id no:105的cdr3；[0258]对经富集的肽执行液相色谱-多反应监测质谱(lc-mrm-ms)以确定每种特征肽的浓度；以及[0259]如下对受试者进行诊断：[0260]当所述第一和/或第二cybb特征肽的浓度低于相应的预定阈值浓度时或当所述第一和/或第二cybb特征肽不存在时，诊断所述受试者患有x-cgd；[0261]当所述第一和/或第二sh2d1a特征肽的浓度低于相应的预定阈值浓度时或当所述第一和/或第二sh2d1a特征肽不存在时，诊断所述受试者患有xlp1；[0262]当所述第一和/或第二prf-1特征肽的浓度低于相应的预定阈值浓度时或当所述第一和/或第二prf-1特征肽不存在时，诊断所述受试者患有fhl2；[0263]当所述第一、第二和/或第三atm特征肽的浓度低于相应的预定阈值浓度时或当所述第一、第二和/或第三atm特征肽不存在时，诊断所述受试者患有at；[0264]所述第一、第二、第三和/或第四cd19特征肽的浓度低于相应的预定阈值浓度时或当所述第一、第二、第三和/或第四cd19特征肽不存在时，诊断所述受试者患有cvid；[0265]当所述第一il2rg、所述第二il2rg、所述cd3ε、所述第一cd3δ和/或所述第二cd3δ特征肽的浓度低于相应的预定阈值浓度时或当所述第一il2rg、所述第二il2rg、所述cd3ε、所述第一cd3δ和/或所述第二cd3δ特征肽不存在时，诊断所述受试者患有scid；[0266]当所述ada特征肽的浓度低于预定阈值浓度时或当所述ada特征肽不存在时，诊断所述受试者患有ada缺乏症；和/或[0267]当所述dock8特征肽的浓度低于预定阈值浓度时或当所述dock8特征肽不存在时，诊断所述受试者患有dock8缺乏症。[0268]8.如实施方案7所述的方法，其中所述方法进一步包括在将所述cd3ε、所述第一cd3δ和/或所述第二cd3δ特征肽与相应的预定阈值浓度比较之后评估所述受试者的t细胞水平。[0269]9.如实施方案7或8所述的方法，其中所述方法i那一步包括执行以下富集：[0270]用抗体或其抗原结合片段富集seq id no:13的第一cd42特征肽，所述抗体或其抗原结合片段结合所述第一cd42特征肽并且包含：重链可变(vh)结构域，所述重链可变(vh)结构域包含seq id no:112的cdr1、seq id no:113的cdr2和seq id no:114的cdr3；以及轻链可变(vl)结构域，所述轻链可变(vl)结构域包含：seq id no:115的cdr1、seq id no:116的cdr2和seq id no:117的cdr3；[0271]用抗体或其抗原结合片段富集seq id no:14的第二cd42特征肽，所述抗体或其抗原结合片段结合所述第二cd42特征肽并且包含：重链可变(vh)结构域，所述重链可变(vh)结构域包含seq id no:124的cdr1、seq id no:125的cdr2和seq id no:126的cdr3；以及轻链可变(vl)结构域，所述轻链可变(vl)结构域包含：seq id no:127的cdr1、seq id no:128的cdr2和seq id no:129的cdr3；和/或[0272]用抗体或其抗原结合片段富集seq id no:15的cd56特征肽，所述抗体或其抗原结合片段结合所述cd56特征肽并且包含：重链可变(vh)结构域，所述重链可变(vh)结构域包含seq id no:136的cdr1、seq id no:137的cdr2和seq id no:138的cdr3；以及轻链可变(vl)结构域，所述轻链可变(vl)结构域包含：seq id no:139的cdr1、seq id no:140的cdr2和seq id no:141的cdr3；[0273]对经富集的第一cd42、第二cd42和/或cd56特征肽执行液相色谱-多反应监测质谱(lc-mrm-ms)以确定每种特征肽的浓度；以及[0274]将所述第一cd42、第二cd42和/或cd56特征肽的浓度与相应的预定阈值浓度进行比较。[0275]10.如实施方案9所述的方法，其中所述方法进一步包括在所述第一和/或第二cd42特征肽浓度的所述比较之后评估所述受试者的血小板水平。[0276]11.如实施方案9或10所述的方法，其中所述方法进一步包括在所述cd56特征肽浓度的所述比较之后评估所述受试者的自然杀伤细胞水平。[0277]12.如实施方案7-11中任一项所述的方法，其中所述方法作为新生儿筛查(nbs)的一部分执行，所述新生儿筛查另外筛查所述受试者的苯丙酮尿症、原发性先天性甲状腺功能减退症、囊性纤维化和镰状细胞病中的一种或多种。[0278]13.如实施方案7-12中任一项所述的方法，其中所述方法在所述受试者中不存在x-cgd、xlp1、fhl2、共济失调毛细血管扩张症、cvid、scid、ada缺乏症和/或dock8缺乏症的临床症状的情况下执行。[0279]14.如实施方案7-13中任一项所述的方法，其中所述生物样本是干血斑(dbs)、颊拭子、外周血单个核细胞(pbmc)或白血细胞(wbc)。[0280]15.如实施方案7-14中任一项所述的方法，其中所述酶是胰蛋白酶。[0281]16.如实施方案7-15中任一项所述的方法，其中从来自正常对照受试者群体的相应生物样本中的每种特征肽的平均浓度的标准偏差(sd)来计算每种特征肽的所述相应的预定阈值浓度。[0282]17.如实施方案16所述的方法，其中所述来自正常对照受试者群体的相应生物样本中seq id no:2的x-cgd的所述第二cybb特征肽的所述平均浓度包括在300pmol/l至3000pmol/l范围内的浓度。[0283]18.如实施方案16或17所述的方法，其中所述相应的预定阈值浓度包括所述来自正常对照受试者群体的相应生物样本中seq id no:2的x-cgd的所述第二cybb特征肽的平均浓度的-2.5sd至-2sd。[0284]19.如实施方案16-18中任一项所述的方法，其中所述来自正常对照受试者群体的相应生物样本中seq id no:5的fhl2的所述第一prf-1特征肽的所述平均浓度包括在10pmol/l至200pmol/l范围内的浓度。[0285]20.如实施方案16-19中任一项所述的方法，其中所述相应的预定阈值浓度包括所述来自正常对照受试者群体的相应生物样本中seq id no:5的fhl2的所述第一prf-1特征肽的平均浓度的-1.5sd至-1sd。[0286]21.如实施方案16-20中任一项所述的方法，其中所述来自正常对照受试者群体的相应生物样本中seq id no:7的共济失调毛细血管扩张症的所述第三atm特征肽的所述平均浓度包括在20pmol/l至100pmol/l范围内的浓度。[0287]22.如实施方案16-21中任一项所述的方法，其中所述相应的预定阈值浓度包括所述来自正常对照受试者群体的相应生物样本中seq id no:7的共济失调毛细血管扩张症的所述第三atm特征肽的平均浓度的-2.25sd至-1.75sd。[0288]23.如实施方案16-22中任一项所述的方法，其中所述来自正常对照受试者群体的相应生物样本中seq id no:11的ada缺乏症的所述ada特征肽的所述平均浓度包括在900pmol/l至5000pmol/l范围内的浓度。[0289]24.如实施方案16-23中任一项所述的方法，其中所述相应的预定阈值浓度包括所述来自正常对照受试者群体的相应生物样本中seq id no:11的ada缺乏症的所述ada特征肽的平均浓度的-2.1[0290]sd至-1.6sd。[0291]25.如实施方案16-24中任一项所述的方法，其中所述来自正常对照受试者群体的相应生物样本中seq id no:12的dock8缺乏症的所述dock8特征肽的所述平均浓度包括在70pmol/l至550pmol/l范围内的浓度。[0292]26.如实施方案16-25中任一项所述的方法，其中所述相应的预定阈值浓度包括所述来自正常对照受试者群体的相应生物样本中seq id no:12的dock8缺乏症的所述dock8特征肽的平均浓度的-2.5sd至-2sd。[0293]27.如实施方案16-26中任一项所述的方法，其中所述来自正常对照受试者群体的相应生物样本中seq id no:13的所述第一cd42特征肽的所述平均浓度包括在4000pmol/l至20000pmol/l范围内的浓度。[0294]28.如实施方案16-27中任一项所述的方法，其中所述相应的预定阈值浓度包括所述来自正常对照受试者群体的相应生物样本中seq id no:13的所述第一cd42特征肽的平均浓度的-2.25sd至-1.75sd。[0295]29.如实施方案16-28中任一项所述的方法，其中所述来自正常对照受试者群体的相应生物样本中seq id no:14的所述第二cd42特征肽的所述平均浓度包括在8000pmol/l至30000pmol/l范围内的浓度。[0296]30.如实施方案16-29中任一项所述的方法，其中所述相应的预定阈值浓度包括所述来自正常对照受试者群体的相应生物样本中seq id no:14的所述第二cd42特征肽的平均浓度的-1.75sd至-1.25sd。[0297]31.如实施方案16-30中任一项所述的方法，其中所述来自正常对照受试者群体的相应生物样本中seq id no:15的所述cd56特征肽的所述平均浓度包括在600pmol/l至5000pmol/l范围内的浓度。[0298]32.如实施方案16-31中任一项所述的方法，其中所述相应的预定阈值浓度包括所述来自正常对照受试者群体的相应生物样本中seq id no:15的所述cd56特征肽的平均浓度的-2.75sd至-2.25[0299]sd。[0300]33.如实施方案7-32中任一项所述的方法，其中用于富集seq id no:2的x-cgd的所述第二cybb特征肽的所述抗体或其抗原结合片段包含以下的一者或多者：seq id no:27的vh结构域；seq id no:33的vl结构域；seq id no:24的重链；或seq id no:30的轻链。[0301]34.如实施方案7-33中任一项所述的方法，其中用于富集seq id no:3的xlp1的所述第一sh2d1a特征肽的所述抗体或其抗原结合片段包含以下的一者或多者：seq id no:173的vh结构域；seq id no:181的vl结构域；seq id no:169的重链；或seq id no:177的轻链。[0302]35.如实施方案7-34中任一项所述的方法，其中用于富集seq id no:5的fhl2的所述第一prf-1特征肽的所述抗体或其抗原结合片段包含以下的一者或多者：seq id no:45的vh结构域；seq id no:51的vl结构域；seq id no:42的重链；或seq id no:48的轻链。[0303]36.如实施方案7-35中任一项所述的方法，其中用于富集seq id no:7的共济失调毛细血管扩张症的所述第三atm特征肽的所述抗体或其抗原结合片段包含以下的一者或多者：seq id no:63的vh结构域；seq id no:69的vl结构域；seq id no:60的重链；或seq id no:66的轻链。[0304]37.如实施方案7-36中任一项所述的方法，其中用于富集seq id no:8的cvid的所述第一cd19特征肽的所述抗体或其抗原结合片段包含以下的一者或多者：seq id no:78的vh结构域；或seq id no:81的vl结构域。[0305]38.如实施方案7-37中任一项所述的方法，其中用于富集seq id no:11的ada缺乏症的所述ada特征肽的所述抗体或其抗原结合片段包含以下的一者或多者：seq id no:93的vh结构域；seq id no:99的vl结构域；seq id no:90的重链；或seq id no:96的轻链。[0306]39.如实施方案7-38中任一项所述的方法，其中用于富集seq id no:12的dock8缺乏症的所述dock8特征肽的所述抗体或其抗原结合片段包含seq id no:108的vh结构域和/或seq id no:111的vl结构域。[0307]40.如实施方案7-39中任一项所述的方法，其中用于富集seq id no:13的所述第一cd42特征肽的所述抗体或其抗原结合片段包含seq id no:120的vh结构域和/或seq id no:123的vl结构域。[0308]41.如实施方案7-40中任一项所述的方法，其中用于富集seq id no:14的所述第二cd42特征肽的所述抗体或其抗原结合片段包含seq id no:132的vh结构域和/或seq id no:135的vl结构域。[0309]42.如实施方案7-41中任一项所述的方法，其中用于富集seq id no:15的所述cd56特征肽的所述抗体或其抗原结合片段包含以下的一者或多者：seq id no:147的vh结构域；seq id no:153的vl结构域；seq id no:144的重链；或seq id no:150的轻链。[0310]43.一种检测一种或多种生物样本中x连锁慢性肉芽肿病(x-cgd)、x连锁淋巴细胞增生综合征1(xlp1)、家族性噬血细胞性淋巴组织细胞增多症2(fhl2)、共济失调毛细血管扩张症(at)、普通变异型免疫缺陷(cvid)、严重联合免疫缺陷(scid)、腺苷脱氨酶(ada)缺乏症和/或细胞质分裂付出蛋白8(dock8)缺乏症的一种或多种特征肽的方法，所述方法包括：[0311]获得所述一种或多种生物样本；[0312]用酶消化来自每种生物样本的血液的蛋白质以产生一种或多种肽；[0313]执行以下富集：[0314]用抗体或其抗原结合片段富集seq id no:1的x-cgd的第一cybb特征肽，所述抗体或其抗原结合片段结合所述第一cybb特征肽；[0315]用抗体或其抗原结合片段富集seq id no:2的x-cgd的第二cybb特征肽，所述抗体或其抗原结合片段结合所述第二cybb特征肽并且包含：重链可变(vh)结构域，所述重链可变(vh)结构域包含seq id no:16的cdr1、seq id no:17的cdr2和seq id no:18的cdr3；以及轻链可变(vl)结构域，所述轻链可变(vl)结构域包含：seq id no:19的cdr1、seq id no:20的cdr2和seq id no:21的cdr3；[0316]用抗体或其抗原结合片段富集seq id no:3的xlp1的第一sh2d1a特征肽，所述抗体或其抗原结合片段结合所述第一sh2d1a特征肽并且包含：重链可变(vh)结构域，所述重链可变(vh)结构域包含seq id no:160的cdr1、seq id no:161的cdr2和seq id no:162的cdr3；以及轻链可变(vl)结构域，所述轻链可变(vl)结构域包含：seq id no:163的cdr1、seq id no:164的cdr2和seq id no:165的cdr3；[0317]用抗体或其抗原结合片段富集seq id no:4的xlp1的第二sh2d1a特征肽，所述抗体或其抗原结合片段结合所述第二sh2d1a特征肽；[0318]用抗体或其抗原结合片段富集seq id no:5的fhl2的第一prf-1特征肽，所述抗体或其抗原结合片段结合所述第一prf-1特征肽并且包含：重链可变(vh)结构域，所述重链可变(vh)结构域包含seq id no:34的cdr1、seq id no:35的cdr2和seq id no:36的cdr3；以及轻链可变(vl)结构域，所述轻链可变(vl)结构域包含：seq id no:37的cdr1、seq id no:38的cdr2和seq id no:39的cdr3；[0319]用抗体或其抗原结合片段富集seq id no:6的fhl2的第二prf-1特征肽，所述抗体或其抗原结合片段结合所述第二prf-1特征肽；[0320]用抗体或其抗原结合片段富集seq id no:210的共济失调毛细血管扩张症的第一atm特征肽，所述抗体或其抗原结合片段结合所述第一atm特征肽；[0321]用抗体或其抗原结合片段富集seq id no:211的共济失调毛细血管扩张症的第二atm特征肽，所述抗体或其抗原结合片段结合所述第二atm特征肽；[0322]用抗体或其抗原结合片段富集seq id no:7的共济失调毛细血管扩张症的第三atm特征肽，所述抗体或其抗原结合片段结合所述第三atm特征肽并且包含：重链可变(vh)结构域，所述重链可变(vh)结构域包含seq id no:52的cdr1、seq id no:53的cdr2和seq id no:54的cdr3；以及轻链可变(vl)结构域，所述轻链可变(vl)结构域包含：seq id no:55的cdr1、seq id no:56的cdr2和seq id no:57的cdr3；[0323]用抗体或其抗原结合片段富集seq id no:8的cvid的第一cd19特征肽，所述抗体或其抗原结合片段结合所述第一cd19特征肽并且包含：重链可变(vh)结构域，所述重链可变(vh)结构域包含seq id no:70的cdr1、seq id no:71的cdr2和seq id no:72的cdr3；以及轻链可变(vl)结构域，所述轻链可变(vl)结构域包含：seq id no:73的cdr1、seq id no:74的cdr2和seq id no:75的cdr3；[0324]用抗体或其抗原结合片段富集seq id no:9的cvid的第二cd19特征肽，所述抗体或其抗原结合片段结合所述第二cd19特征肽；[0325]用抗体或其抗原结合片段富集seq id no:10的cvid的第三cd19特征肽，所述抗体或其抗原结合片段结合所述第三cd19特征肽；[0326]用抗体或其抗原结合片段富集seq id no:212的cvid的第四cd19特征肽，所述抗体或其抗原结合片段结合所述第四cd19特征肽；[0327]用抗体或其抗原结合片段富集seq id no:213的scid的第一il2rg特征肽，所述抗体或其抗原结合片段结合所述第一il2rg特征肽；[0328]用抗体或其抗原结合片段富集seq id no:214的scid的第二il2rg特征肽，所述抗体或其抗原结合片段结合所述第二il2rg特征肽；[0329]用抗体或其抗原结合片段富集seq id no:215的scid的cd3ε特征肽，所述抗体或其抗原结合片段结合所述cd3ε特征肽；[0330]用抗体或其抗原结合片段富集seq id no:216的scid的第一cd3dδ特征肽，所述抗体或其抗原结合片段结合所述第一cd3dδ特征肽；[0331]用抗体或其抗原结合片段富集seq id no:217的scid的第二cd3dδ特征肽，所述抗体或其抗原结合片段结合所述第二cd3dδ特征肽；[0332]用抗体或其抗原结合片段富集seq id no:11的ada缺乏症的ada特征肽，所述抗体或其抗原结合片段结合所述ada特征肽并且包含：重链可变(vh)结构域，所述重链可变(vh)结构域包含seq id no:82的cdr1、seq id no:83的cdr2和seq id no:84的cdr3；以及轻链可变(vl)结构域，所述轻链可变(vl)结构域包含：seq id no:85的cdr1、seq id no:86的cdr2和seq id no:87的cdr3；和/或[0333]用抗体或其抗原结合片段富集seq id no:12的dock8缺乏症的dock8特征肽，所述抗体或其抗原结合片段结合所述dock8特征肽并且包含：重链可变(vh)结构域，所述重链可变(vh)结构域包含seq id no:100的cdr1、seq id no:101的cdr2和seq id no:102的cdr3；以及轻链可变(vl)结构域，所述轻链可变(vl)结构域包含：seq id no:103的cdr1、seq id no:104的cdr2和seq id no:105的cdr3；[0334]以及[0335]对经富集的肽执行液相色谱-多反应监测质谱(lc-mrm-ms)以确定每种特征肽的浓度，从而检测所述一种或多种生物样本中x-cgd、xlp1、fhl2、at、cvid、scid、ada缺乏症和/或dock8缺乏症的一种或多种特征肽。[0336]44.如实施方案43所述的方法，其中所述方法进一步包括通过如下方式来检测血小板和/或自然杀伤(nk)细胞的一种或多种特征肽：执行以下富集：[0337]用抗体或其抗原结合片段富集seq id no:13的第一cd42特征肽，所述抗体或其抗原结合片段结合所述第一cd42特征肽并且包含：重链可变(vh)结构域，所述重链可变(vh)结构域包含seq id no:112的cdr1、seq id no:113的cdr2和seq id no:114的cdr3；以及轻链可变(vl)结构域，所述轻链可变(vl)结构域包含：seq id no:115的cdr1、seq id no:116的cdr2和seq id no:117的cdr3；[0338]用抗体或其抗原结合片段富集seq id no:14的第二cd42特征肽，所述抗体或其抗原结合片段结合所述第二cd42特征肽并且包含：重链可变(vh)结构域，所述重链可变(vh)结构域包含seq id no:124的cdr1、seq id no:125的cdr2和seq id no:126的cdr3；以及轻链可变(vl)结构域，所述轻链可变(vl)结构域包含：seq id no:127的cdr1、seq id no:128的cdr2和seq id no:129的cdr3；和/或[0339]用抗体或其抗原结合片段富集seq id no:15的cd56特征肽，所述抗体或其抗原结合片段结合所述cd56特征肽并且包含：重链可变(vh)结构域，所述重链可变(vh)结构域包含seq id no:136的cdr1、seq id no:137的cdr2和seq id no:138的cdr3；以及轻链可变(vl)结构域，所述轻链可变(vl)结构域包含：seq id no:139的cdr1、seq id no:140的cdr2和seq id no:141的cdr3；[0340]以及[0341]对经富集的第一cd42、第二cd42和/或cd56特征肽执行液相色谱-多反应监测质谱(lc-mrm-ms)以确定每种特征肽的浓度，从而检测血小板和/或自然杀伤(nk)细胞的一种或多种特征肽。[0342]45.如实施方案43或44所述的方法，其中所述一种或多种生物样本是干血斑(dbs)、颊拭子、外周血单个核细胞(pbmc)或白血细胞(wbc)。[0343]46.如实施方案43-45中任一项所述的方法，其中所述酶是胰蛋白酶。[0344]47.如实施方案43-46中任一项所述的方法，所述方法进一步包括将每种特征肽的浓度与相应的预定阈值浓度进行比较。[0345]48.如实施方案43-47中任一项所述的方法，其中从一种或多种来自正常对照受试者群体的相应生物样本中的每种特征肽的平均浓度的标准偏差(sd)来计算每种特征肽的所述相应的预定阈值浓度。[0346]49.如实施方案48所述的方法，其中所述一种或多种来自正常对照受试者群体的相应生物样本中seq id no:2的x-cgd的所述第二cybb特征肽的所述平均浓度包括在300pmol/l至3000pmol/l范围内的浓度。[0347]50.如实施方案48或49所述的方法，其中所述相应的预定阈值浓度包括所述来自正常对照受试者群体的相应生物样本中seq id no:2的x-cgd的所述第二cybb特征肽的平均浓度的-2.5sd至-2sd。[0348]51.如实施方案48-50中任一项所述的方法，其中所述一种或多种来自正常对照受试者群体的相应生物样本中seq id no:5的fhl2的所述第一prf-1特征肽的所述平均浓度包括在10pmol/l至200pmol/l范围内的浓度。[0349]52.如实施方案48-51中任一项所述的方法，其中所述相应的预定阈值浓度包括所述来自正常对照受试者群体的相应生物样本中seq id no:5的fhl2的所述第一prf-1特征肽的平均浓度的-1.5sd至-1sd。[0350]53.如实施方案48-52中任一项所述的方法，其中所述一种或多种来自正常对照受试者群体的相应生物样本中seq id no:7的共济失调毛细血管扩张症的所述第三atm特征肽的所述平均浓度包括在20pmol/l至100pmol/l范围内的浓度。[0351]54.如实施方案48-53中任一项所述的方法，其中所述相应的预定阈值浓度包括所述来自正常对照受试者群体的相应生物样本中seq id no:7的共济失调毛细血管扩张症的所述第三atm特征肽的平均浓度的-2.25sd至-1.75sd。[0352]55.如实施方案48-54中任一项所述的方法，其中所述一种或多种来自正常对照受试者群体的相应生物样本中seq id no:11的ada缺乏症的所述ada特征肽的所述平均浓度包括在900pmol/l至5000pmol/l范围内的浓度。[0353]56.如实施方案48-55中任一项所述的方法，其中所述相应的预定阈值浓度包括所述来自正常对照受试者群体的相应生物样本中seq id no:11的ada缺乏症的所述ada特征肽的平均浓度的-2.1[0354]sd至-1.6sd。[0355]57.如实施方案48-56中任一项所述的方法，其中所述一种或多种来自正常对照受试者群体的相应生物样本中seq id no:12的dock8缺乏症的所述dock8特征肽的所述平均浓度包括在70pmol/l至550pmol/l范围内的浓度。[0356]58.如实施方案48-57中任一项所述的方法，其中所述相应的预定阈值浓度包括所述来自正常对照受试者群体的相应生物样本中seq id no:12的dock8缺乏症的所述dock8特征肽的平均浓度的-2.5sd至-2sd。[0357]59.如实施方案48-58中任一项所述的方法，其中所述一种或多种来自正常对照受试者群体的相应生物样本中seq id no:13的所述第一cd42特征肽的所述平均浓度包括在4000pmol/l至20000pmol/l范围内的浓度。[0358]60.如实施方案48-59中任一项所述的方法，其中所述相应的预定阈值浓度包括所述来自正常对照受试者群体的相应生物样本中seq id no:13的所述第一cd42特征肽的平均浓度的-2.25sd至-1.75sd。[0359]61.如实施方案48-60中任一项所述的方法，其中所述一种或多种来自正常对照受试者群体的相应生物样本中seq id no:14的所述第二cd42特征肽的所述平均浓度包括在8000pmol/l至30000pmol/l范围内的浓度。[0360]62.如实施方案48-61中任一项所述的方法，其中所述相应的预定阈值浓度包括所述来自正常对照受试者群体的相应生物样本中seq id no:14的所述第二cd42特征肽的平均浓度的-1.75sd至-1.25sd。[0361]63.如实施方案48-62中任一项所述的方法，其中所述一种或多种来自正常对照受试者群体的相应生物样本中seq id no:15的所述cd56特征肽的所述平均浓度包括在600pmol/l至5000pmol/l范围内的浓度。[0362]64.如实施方案48-63中任一项所述的方法，其中所述相应的预定阈值浓度包括所述来自正常对照受试者群体的相应生物样本中seq id no:15的所述cd56特征肽的平均浓度的-2.75sd至-2.25sd。[0363]65.如实施方案43-64中任一项所述的方法，其中用于富集seq id no:2的x-cgd的所述第二cybb特征肽的所述抗体或其抗原结合片段包含以下的一者或多者：seq id no:27的vh结构域；seq id no:33的vl结构域；seq id no:24的重链；或seq id no:30的轻链。[0364]66.如实施方案43-65中任一项所述的方法，其中用于富集seq id no:3的xlp1的所述第一sh2d1a特征肽的所述抗体或其抗原结合片段包含以下的一者或多者：seq id no:173的vh结构域；seq id no:181的vl结构域；seq id no:169的重链；或seq id no:177的轻链。[0365]67.如实施方案43-66中任一项所述的方法，其中用于富集seq id no:5的fhl2的所述第一prf-1特征肽的所述抗体或其抗原结合片段包含以下的一者或多者：seq id no:45的vh结构域；seq id no:51的vl结构域；seq id no:42的重链；或seq id no:48的轻链。[0366]68.如实施方案43-67中任一项所述的方法，其中用于富集seq id no:7的共济失调毛细血管扩张症的所述第三atm特征肽的所述抗体或其抗原结合片段包含以下的一者或多者：seq id no:63的vh结构域；seq id no:69的vl结构域；seq id no:60的重链；或seq id no:66的轻链。[0367]69.如实施方案43-68中任一项所述的方法，其中用于富集seq id no:8的cvid的所述第一cd19特征肽的所述抗体或其抗原结合片段包含以下的一者或多者：seq id no:78的vh结构域；或seq id no:81的vl结构域。[0368]70.如实施方案43-69中任一项所述的方法，其中用于富集seq id no:11的ada缺乏症的所述ada特征肽的所述抗体或其抗原结合片段包含以下的一者或多者：seq id no:93的vh结构域；seq id no:99的vl结构域；seq id no:90的重链；或seq id no:96的轻链。[0369]71.如实施方案43-70中任一项所述的方法，其中用于富集seq id no:12的dock8缺乏症的所述dock8特征肽的所述抗体或其抗原结合片段包含seq id no:108的vh结构域和/或seq id no:111的vl结构域。[0370]72.如实施方案43-71中任一项所述的方法，其中用于富集seq id no:13的所述第一cd42特征肽的所述抗体或其抗原结合片段包含seq id no:120的vh结构域和/或seq id no:123的vl结构域。[0371]73.如实施方案43-72中任一项所述的方法，其中用于富集seq id no:14的所述第二cd42特征肽的所述抗体或其抗原结合片段包含seq id no:132的vh结构域和/或seq id no:135的vl结构域。[0372]74.如实施方案43-73中任一项所述的方法，其中用于富集seq id no:15的所述cd56特征肽的所述抗体或其抗原结合片段包含以下的一者或多者：seq id no:147的vh结构域；seq id no:153的vl结构域；seq id no:144的重链；或seq id no:150的轻链。[0373]75.一种确定在正在治疗x连锁慢性肉芽肿病(x-cgd)、x连锁淋巴细胞增生综合征1(xlp1)、家族性噬血细胞性淋巴组织细胞增多症2(fhl2)、共济失调毛细血管扩张症(at)、普通变异型免疫缺陷(cvid)、严重联合免疫缺陷(scid)、腺苷脱氨酶(ada)缺乏症和/或细胞质分裂付出蛋白8(dock8)缺乏症的受试者中一种或多种治疗的功效的方法，所述方法包括：[0374]在所述一种或多种治疗之前获得源自所述受试者的生物样本；[0375]用酶消化来自所述生物样本的血液的蛋白质以产生一种或多种肽；[0376]执行以下富集：[0377]用抗体或其抗原结合片段富集seq id no:1的x-cgd的第一cybb特征肽，所述抗体或其抗原结合片段结合所述第一cybb特征肽；[0378]用抗体或其抗原结合片段富集seq id no:2的x-cgd的第二cybb特征肽，所述抗体或其抗原结合片段结合所述第二cybb特征肽并且包含：重链可变(vh)结构域，所述重链可变(vh)结构域包含seq id no:16的cdr1、seq id no:17的cdr2和seq id no:18的cdr3；以及轻链可变(vl)结构域，所述轻链可变(vl)结构域包含：seq id no:19的cdr1、seq id no:20的cdr2和seq id no:21的cdr3；[0379]用抗体或其抗原结合片段富集seq id no:3的xlp1的第一sh2d1a特征肽，所述抗体或其抗原结合片段结合所述第一sh2d1a特征肽并且包含：重链可变(vh)结构域，所述重链可变(vh)结构域包含seq id no:160的cdr1、seq id no:161的cdr2和seq id no:162的cdr3；以及轻链可变(vl)结构域，所述轻链可变(vl)结构域包含：seq id no:163的cdr1、seq id no:164的cdr2和seq id no:165的cdr3；[0380]用抗体或其抗原结合片段富集seq id no:4的xlp1的第二sh2d1a特征肽，所述抗体或其抗原结合片段结合所述第二sh2d1a特征肽；[0381]用抗体或其抗原结合片段富集seq id no:5的fhl2的第一prf-1特征肽，所述抗体或其抗原结合片段结合所述第一prf-1特征肽并且包含：重链可变(vh)结构域，所述重链可变(vh)结构域包含seq id no:34的cdr1、seq id no:35的cdr2和seq id no:36的cdr3；以及轻链可变(vl)结构域，所述轻链可变(vl)结构域包含：seq id no:37的cdr1、seq id no:38的cdr2和seq id no:39的cdr3；[0382]用抗体或其抗原结合片段富集seq id no:6的fhl2的第二prf-1特征肽，所述抗体或其抗原结合片段结合所述第二prf-1特征肽；[0383]用抗体或其抗原结合片段富集seq id no:210的共济失调毛细血管扩张症的第一atm特征肽，所述抗体或其抗原结合片段结合所述第一atm特征肽；[0384]用抗体或其抗原结合片段富集seq id no:211的共济失调毛细血管扩张症的第二atm特征肽，所述抗体或其抗原结合片段结合所述第二atm特征肽；[0385]用抗体或其抗原结合片段富集seq id no:7的共济失调毛细血管扩张症的第三atm特征肽，所述抗体或其抗原结合片段结合所述第三atm特征肽并且包含：重链可变(vh)结构域，所述重链可变(vh)结构域包含seq id no:52的cdr1、seq id no:53的cdr2和seq id no:54的cdr3；以及轻链可变(vl)结构域，所述轻链可变(vl)结构域包含：seq id no:55的cdr1、seq id no:56的cdr2和seq id no:57的cdr3；[0386]用抗体或其抗原结合片段富集seq id no:8的cvid的第一cd19特征肽，所述抗体或其抗原结合片段结合所述第一cd19特征肽并且包含：重链可变(vh)结构域，所述重链可变(vh)结构域包含seq id no:70的cdr1、seq id no:71的cdr2和seq id no:72的cdr3；以及轻链可变(vl)结构域，所述轻链可变(vl)结构域包含：seq id no:73的cdr1、seq id no:74的cdr2和seq id no:75的cdr3；[0387]用抗体或其抗原结合片段富集seq id no:9的cvid的第二cd19特征肽，所述抗体或其抗原结合片段结合所述第二cd19特征肽；[0388]用抗体或其抗原结合片段富集seq id no:10的cvid的第三cd19特征肽，所述抗体或其抗原结合片段结合所述第三cd19特征肽；[0389]用抗体或其抗原结合片段富集seq id no:212的cvid的第四cd19特征肽，所述抗体或其抗原结合片段结合所述第四cd19特征肽；[0390]用抗体或其抗原结合片段富集seq id no:213的scid的第一il2rg特征肽，所述抗体或其抗原结合片段结合所述第一il2rg特征肽；[0391]用抗体或其抗原结合片段富集seq id no:214的scid的第二il2rg特征肽，所述抗体或其抗原结合片段结合所述第二il2rg特征肽；[0392]用抗体或其抗原结合片段富集seq id no:215的scid的cd3ε特征肽，所述抗体或其抗原结合片段结合所述cd3ε特征肽；[0393]用抗体或其抗原结合片段富集seq id no:216的scid的第一cd3dδ特征肽，所述抗体或其抗原结合片段结合所述第一cd3dδ特征肽；[0394]用抗体或其抗原结合片段富集seq id no:217的scid的第二cd3dδ特征肽，所述抗体或其抗原结合片段结合所述第二cd3dδ特征肽；[0395]用抗体或其抗原结合片段富集seq id no:11的ada缺乏症的ada特征肽，所述抗体或其抗原结合片段结合所述ada特征肽并且包含：重链可变(vh)结构域，所述重链可变(vh)结构域包含seq id no:82的cdr1、seq id no:83的cdr2和seq id no:84的cdr3；以及轻链可变(vl)结构域，所述轻链可变(vl)结构域包含：seq id no:85的cdr1、seq id no:86的cdr2和seq id no:87的cdr3；和/或[0396]用抗体或其抗原结合片段富集seq id no:12的dock8缺乏症的dock8特征肽，所述抗体或其抗原结合片段结合所述dock8特征肽并且包含：重链可变(vh)结构域，所述重链可变(vh)结构域包含seq id no:100的cdr1、seq id no:101的cdr2和seq id no:102的cdr3；以及轻链可变(vl)结构域，所述轻链可变(vl)结构域包含：seq id no:103的cdr1、seq id no:104的cdr2和seq id no:105的cdr3；[0397]对经富集的肽执行液相色谱-多反应监测质谱(lc-mrm-ms)以确定在所述一种或多种治疗之前所述受试者中每种特征肽的浓度；[0398]在所述一种或多种治疗期间或之后对源自所述受试者的生物样本重复所述获得、消化、富集和执行；[0399]以及[0400]在以下情况确定所述一种或多种治疗对下述疾病有效：[0401]当所述一种或多种治疗期间或之后所述第一和/或第二cybb特征肽的浓度高于所述一种或多种治疗之前所述第一和/或第二cybb特征肽的相应浓度时，确定所述一种或多种治疗对x-cgd有效；[0402]当所述一种或多种治疗期间或之后所述第一和/或第二sh2d1a特征肽的浓度高于所述一种或多种治疗之前所述第一和/或第二sh2d1a特征肽的相应浓度时，确定所述一种或多种治疗对xlp1有效；[0403]当所述一种或多种治疗期间或之后所述第一和/或第二prf-1特征肽的浓度高于所述一种或多种治疗之前所述第一和/或第二prf-1特征肽的相应浓度时，确定所述一种或多种治疗对fhl2有效；[0404]当所述一种或多种治疗期间或之后所述第一、第二和/或第三atm特征肽的浓度高于所述一种或多种治疗之前所述第一、第二和/或第三atm特征肽的浓度时，确定所述一种或多种治疗对at有效；[0405]当所述一种或多种治疗期间或之后所述第一、第二、第三和/或第四cd19特征肽的浓度高于所述一种或多种治疗之前所述第一、第二、第三和/或第四cd19特征肽的相应浓度时，确定所述一种或多种治疗对cvid有效；[0406]当所述一种或多种治疗期间或之后所述第一il2rg、所述第二il2rg、所述cd3ε、所述第一cd3δ和/或所述第二cd3δ特征肽的浓度高于所述一种或多种治疗之前所述第一il2rg、所述第二il2rg、所述cd3ε、所述第一cd3δ和/或所述第二cd3δ特征肽的相应浓度时，确定所述一种或多种治疗对scid有效；[0407]当所述一种或多种治疗期间或之后所述ada特征肽的浓度高于所述一种或多种治疗之前所述ada特征肽的浓度时，确定所述一种或多种治疗对ada缺乏症有效；和/或[0408]当所述一种或多种治疗期间或之后所述dock8特征肽的浓度等于或高于所述一种或多种治疗之前的预定阈值浓度时，确定所述一种或多种治疗对dock8缺乏症有效，[0409]或者[0410]在以下情况确定所述一种或多种治疗对下述疾病无效：[0411]当所述一种或多种治疗期间或之后所述第一和/或第二cybb特征肽的浓度等于或低于所述一种或多种治疗之前所述第一和/或第二cybb特征肽的相应浓度时，或当所述第一和/或第二cybb特征肽不存在时，确定所述一种或多种治疗对x-cgd无效；[0412]当所述一种或多种治疗期间或之后所述第一和/或第二sh2d1a特征肽的浓度等于或低于所述一种或多种治疗之前所述第一和/或第二sh2d1a特征肽的相应浓度时，或当所述第一和/或第二sh2d1a特征肽不存在时，确定所述一种或多种治疗对xlp1无效；[0413]当所述一种或多种治疗期间或之后所述第一和/或第二prf-1特征肽的浓度等于或低于所述一种或多种治疗之前所述第一和/或第二prf-1特征肽的相应浓度时，或当所述第一和/或第二prf-1特征肽不存在时，确定所述一种或多种治疗对fhl2无效；[0414]当所述一种或多种治疗期间或之后所述第一、第二和/或第三atm特征肽的浓度等于或低于所述一种或多种治疗之前所述第一、第二和/或第三atm特征肽的相应浓度时，或当所述第一、第二和/或第三atm特征肽不存在时，确定所述一种或多种治疗对at无效；[0415]当所述一种或多种治疗期间或之后所述第一、第二、第三和/或第四cd19特征肽的浓度等于或低于所述一种或多种治疗之前所述第一、第二、第三和/或第四cd19特征肽的相应浓度时，或当所述第一、第二、第三和/或第四cd19特征肽不存在时，确定所述一种或多种治疗对cvid无效；[0416]当所述一种或多种治疗期间或之后所述第一il2rg、所述第二il2rg、所述cd3ε、所述第一cd3δ和/或所述第二cd3δ特征肽的浓度等于或低于所述一种或多种治疗之前所述第一il2rg、所述第二il2rg、所述cd3ε、所述第一cd3δ和/或所述第二cd3δ特征肽的相应浓度时，或当所述第一il2rg、所述第二il2rg、所述cd3ε、所述第一cd3δ和/或所述第二cd3δ特征肽不存在时，确定所述一种或多种治疗对scid无效；[0417]当所述一种或多种治疗期间或之后所述ada特征肽的浓度等于或低于所述一种或多种治疗之前所述ada特征肽的浓度时，或当所述ada特征肽不存在时，确定所述一种或多种治疗对ada缺乏症无效；和/或[0418]当所述一种或多种治疗期间或之后所述dock8特征肽的浓度等于或低于所述一种或多种治疗之前所述dock8特征肽的浓度时，或当所述dock8特征肽不存在时，确定所述一种或多种治疗对dock8缺乏症无效。[0419]76.如实施方案75所述的方法，其中所述方法进一步包括通过如下方式来确定一种或多种治疗在所述受试者中的功效：执行以下富集：[0420]用抗体或其抗原结合片段富集seq id no:13的第一cd42特征肽，所述抗体或其抗原结合片段结合所述第一cd42特征肽并且包含：重链可变(vh)结构域，所述重链可变(vh)结构域包含seq id no:112的cdr1、seq id no:113的cdr2和seq id no:114的cdr3；以及轻链可变(vl)结构域，所述轻链可变(vl)结构域包含：seq id no:115的cdr1、seq id no:116的cdr2和seq id no:117的cdr3；[0421]用抗体或其抗原结合片段富集seq id no:14的第二cd42特征肽，所述抗体或其抗原结合片段结合所述第二cd42特征肽并且包含：重链可变(vh)结构域，所述重链可变(vh)结构域包含seq id no:124的cdr1、seq id no:125的cdr2和seq id no:126的cdr3；以及轻链可变(vl)结构域，所述轻链可变(vl)结构域包含：seq id no:127的cdr1、seq id no:128的cdr2和seq id no:129的cdr3；和/或[0422]用抗体或其抗原结合片段富集seq id no:15的cd56特征肽，所述抗体或其抗原结合片段结合所述cd56特征肽并且包含：重链可变(vh)结构域，所述重链可变(vh)结构域包含seq id no:136的cdr1、seq id no:137的cdr2和seq id no:138的cdr3；以及轻链可变(vl)结构域，所述轻链可变(vl)结构域包含：seq id no:139的cdr1、seq id no:140的cdr2和seq id no:141的cdr3；[0423]所述富集是在所述一种或多种治疗之前在所述生物样本中进行的；[0424]对经富集的第一cd42、第二cd42和/或cd56特征肽执行液相色谱-多反应监测质谱(lc-mrm-ms)以确定在所述一种或多种治疗之前所述受试者中每种特征肽的浓度；[0425]在所述一种或多种治疗期间或之后对源自所述受试者的生物样本重复所述获得、消化、富集和执行；[0426]以及[0427]在以下情况确定所述一种或多种治疗有效：[0428]当所述一种或多种治疗期间或之后所述第一cd42、第二cd42和/或cd56特征肽的浓度高于所述一种或多种治疗之前所述第一cd42、第二cd42和/或cd56特征肽的相应浓度时；[0429]或者[0430]在以下情况确定所述一种或多种治疗无效：[0431]当所述一种或多种治疗期间或之后所述第一cd42、第二cd42和/或cd56特征肽的浓度等于或低于所述一种或多种治疗之前所述第一cd42、第二cd42和/或cd56特征肽的相应浓度时，或当所述第一cd42、第二cd42和/或cd56特征肽不存在时。[0432]77.如实施方案75或76所述的方法，其中所述生物样本是干血斑(dbs)、颊拭子、外周血单个核细胞(pbmc)或白血细胞(wbc)。[0433]78.如实施方案75-77中任一项所述的方法，其中所述酶是胰蛋白酶。[0434]79.如实施方案75-78中任一项所述的方法，所述方法进一步包括将每种特征肽的浓度与相应的预定阈值浓度进行比较。[0435]80.如实施方案75-79中任一项所述的方法，其中从来自正常对照受试者群体的相应生物样本中的每种特征肽的平均浓度的标准偏差(sd)来计算每种特征肽的所述相应的预定阈值浓度。[0436]81.如实施方案80所述的方法，其中所述来自正常对照受试者群体的相应生物样本中seq id no:2的x-cgd的所述第二cybb特征肽的所述平均浓度包括在300pmol/l至3000pmol/l范围内的浓度。[0437]82.如实施方案80或81所述的方法，其中所述相应的预定阈值浓度包括所述来自正常对照受试者群体的相应生物样本中seq id no:2的x-cgd的所述第二cybb特征肽的平均浓度的-2.5sd至-2sd。[0438]83.如实施方案80-82中任一项所述的方法，其中所述来自正常对照受试者群体的相应生物样本中seq id no:5的fhl2的所述第一prf-1特征肽的所述平均浓度包括在10pmol/l至200pmol/l范围内的浓度。[0439]84.如实施方案80-83中任一项所述的方法，其中所述相应的预定阈值浓度包括所述来自正常对照受试者群体的相应生物样本中seq id no:5的fhl2的所述第一prf-1特征肽的平均浓度的-1.5sd至-1sd。[0440]85.如实施方案80-84中任一项所述的方法，其中所述来自正常对照受试者群体的相应生物样本中seq id no:7的共济失调毛细血管扩张症的所述第三atm特征肽的所述平均浓度包括在20pmol/l至100pmol/l范围内的浓度。[0441]86.如实施方案80-85中任一项所述的方法，其中所述相应的预定阈值浓度包括所述来自正常对照受试者群体的相应生物样本中seq id no:7的共济失调毛细血管扩张症的所述第三atm特征肽的平均浓度的-2.25sd至-1.75sd。[0442]87.如实施方案80-86中任一项所述的方法，其中所述来自正常对照受试者群体的相应生物样本中seq id no:11的ada缺乏症的所述ada特征肽的所述平均浓度包括在900pmol/l至5000pmol/l范围内的浓度。[0443]88.如实施方案80-87中任一项所述的方法，其中所述相应的预定阈值浓度包括所述来自正常对照受试者群体的相应生物样本中seq id no:11的ada缺乏症的所述ada特征肽的平均浓度的-2.1[0444]sd至-1.6sd。[0445]89.如实施方案80-88中任一项所述的方法，其中所述来自正常对照受试者群体的相应生物样本中seq id no:12的dock8缺乏症的所述dock8特征肽的所述平均浓度包括在70pmol/l至550pmol/l范围内的浓度。[0446]90.如实施方案80-89中任一项所述的方法，其中所述相应的预定阈值浓度包括所述来自正常对照受试者群体的相应生物样本中seq id no:12的dock8缺乏症的所述dock8特征肽的平均浓度的-2.5sd至-2sd。[0447]91.如实施方案80-90中任一项所述的方法，其中所述来自正常对照受试者群体的相应生物样本中seq id no:13的所述第一cd42特征肽的所述平均浓度包括在4000pmol/l至20000pmol/l范围内的浓度。[0448]92.如实施方案80-91中任一项所述的方法，其中所述相应的预定阈值浓度包括所述来自正常对照受试者群体的相应生物样本中seq id no:13的所述第一cd42特征肽的平均浓度的-2.25sd至-1.75sd。[0449]93.如实施方案80-92中任一项所述的方法，其中所述来自正常对照受试者群体的相应生物样本中seq id no:14的所述第二cd42特征肽的所述平均浓度包括在8000pmol/l至30000pmol/l范围内的浓度。[0450]94.如实施方案80-93中任一项所述的方法，其中所述相应的预定阈值浓度包括所述来自正常对照受试者群体的相应生物样本中seq id no:14的所述第二cd42特征肽的平均浓度的-1.75sd至-1.25sd。[0451]95.如实施方案80-94中任一项所述的方法，其中所述来自正常对照受试者群体的相应生物样本中seq id no:15的所述cd56特征肽的所述平均浓度包括在600pmol/l至5000pmol/l范围内的浓度。[0452]96.如实施方案80-95中任一项所述的方法，其中所述相应的预定阈值浓度包括所述来自正常对照受试者群体的相应生物样本中seq id no:15的所述cd56特征肽的平均浓度的-2.75sd至-2.25[0453]sd。[0454]97.如实施方案75-96中任一项所述的方法，其中用于富集seq id no:2的x-cgd的所述第二cybb特征肽的所述抗体或其抗原结合片段包含以下的一者或多者：seq id no:27的vh结构域；seq id no:33的vl结构域；seq id no:24的重链；或seq id no:30的轻链。[0455]98.如实施方案75-97中任一项所述的方法，其中用于富集seq id no:3的xlp1的所述第一sh2d1a特征肽的所述抗体或其抗原结合片段包含以下的一者或多者：seq id no:173的vh结构域；seq id no:181的vl结构域；seq id no:169的重链；或seq id no:177的轻链。[0456]99.如实施方案75-98中任一项所述的方法，其中用于富集seq id no:5的fhl2的所述第一prf-1特征肽的所述抗体或其抗原结合片段包含以下的一者或多者：seq id no:45的vh结构域；seq id no:51的vl结构域；seq id no:42的重链；或seq id no:48的轻链。[0457]100.如实施方案75-99中任一项所述的方法，其中用于富集seq id no:7的共济失调毛细血管扩张症的所述第三atm特征肽的所述抗体或其抗原结合片段包含以下的一者或多者：seq id no:63的vh结构域；seq id no:69的vl结构域；seq id no:60的重链；或seq id no:66的轻链。[0458]101.如实施方案75-100中任一项所述的方法，其中用于富集seq id no:8的cvid的所述第一cd19特征肽的所述抗体或其抗原结合片段包含以下的一者或多者：seq id no:78的vh结构域；或seq id no:81的vl结构域。[0459]102.如实施方案75-101中任一项所述的方法，其中用于富集seq id no:11的ada缺乏症的所述ada特征肽的所述抗体或其抗原结合片段包含以下的一者或多者：seq id no:93的vh结构域；seq id no:99的vl结构域；seq id no:90的重链；或seq id no:96的轻链。[0460]103.如实施方案75-102中任一项所述的方法，其中用于富集seq id no:12的dock8缺乏症的所述dock8特征肽的所述抗体或其抗原结合片段包含seq id no:108的vh结构域和/或seq id no:111的vl结构域。[0461]104.如实施方案75-103中任一项所述的方法，其中用于富集seq id no:13的所述第一cd42特征肽的所述抗体或其抗原结合片段包含seq id no:120的vh结构域和/或seq id no:123的vl结构域。[0462]105.如实施方案75-104中任一项所述的方法，其中用于富集seq id no:14的所述第二cd42特征肽的所述抗体或其抗原结合片段包含seq id no:132的vh结构域和/或seq id no:135的vl结构域。[0463]106.如实施方案75-105中任一项所述的方法，其中用于富集seq id no:15的所述cd56特征肽的所述抗体或其抗原结合片段包含以下的一者或多者：seq id no:147的vh结构域；seq id no:153的vl结构域；seq id no:144的重链；或seq id no:150的轻链。[0464]107.一种用于筛查受试者的x连锁慢性肉芽肿病(x-cgd)、x连锁淋巴细胞增生综合征1(xlp1)、家族性噬血细胞性淋巴组织细胞增多症2(fhl2)、共济失调毛细血管扩张症(at)、普通变异型免疫缺陷(cvid)、严重联合免疫缺陷(scid)、腺苷脱氨酶(ada)缺乏症和/或细胞质分裂付出蛋白8(dock8)缺乏症的测定物，所述测定物包含：[0465](i)抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段包含：[0466]重链可变(vh)结构域，所述重链可变(vh)结构域包含seq id no:16的cdr1、seq id no:17的cdr2和seq id no:18的cdr3，以及轻链可变(vl)结构域，所述轻链可变(vl)结构域包含：seq id no:19的cdr1、seq id no:20的cdr2和seq id no:21的cdr3，所述抗体或其抗原结合片段结合至seq id no:2的x-cgd的cybb特征肽；[0467]重链可变(vh)结构域，所述重链可变(vh)结构域包含seq id no:160的cdr1、seq id no:161的cdr2和seq id no:162的cdr3；以及轻链可变(vl)结构域，所述轻链可变(vl)结构域包含：seq id no:163的cdr1、seq id no:164的cdr2和seq id no:165的cdr3，所述抗体或其抗原片段结合至seq id no:3的xlp1的sh2d1a特征肽；[0468]重链可变(vh)结构域，所述重链可变(vh)结构域包含seq id no:34的cdr1、seq id no:35的cdr2和seq id no:36的cdr3；以及轻链可变(vl)结构域，所述轻链可变(vl)结构域包含：seq id no:37的cdr1、seq id no:38的cdr2和seq id no:39的cdr3，所述抗体或其抗原片段结合至seq id no:5的fhl2的prf-1特征肽；[0469]重链可变(vh)结构域，所述重链可变(vh)结构域包含seq id no:52的cdr1、seq id no:53的cdr2和seq id no:54的cdr3；以及轻链可变(vl)结构域，所述轻链可变(vl)结构域包含：seq id no:55的cdr1、seq id no:56的cdr2和seq id no:67的cdr3，所述抗体或其抗原片段结合至seq id no:7的共济失调毛细血管扩张症的atm特征肽；[0470]重链可变(vh)结构域，所述重链可变(vh)结构域包含seq id no:70的cdr1、seq id no:71的cdr2和seq id no:72的cdr3；以及轻链可变(vl)结构域，所述轻链可变(vl)结构域包含：seq id no:73的cdr1、seq id no:74的cdr2和seq id no:75的cdr3，所述抗体或其抗原片段结合至seq id no:8的cvid的cd19特征肽；[0471]重链可变(vh)结构域，所述重链可变(vh)结构域包含seq id no:82的cdr1、seq id no:83的cdr2和seq id no:84的cdr3；以及轻链可变(vl)结构域，所述轻链可变(vl)结构域包含：seq id no:85的cdr1、seq id no:86的cdr2和seq id no:87的cdr3，所述抗体或其抗原片段结合至seq id no:11的ada缺乏症的ada特征肽；和/或[0472]重链可变(vh)结构域，所述重链可变(vh)结构域包含seq id no:100的cdr1、seq id no:101的cdr2和seq id no:102的cdr3；以及轻链可变(vl)结构域，所述轻链可变(vl)结构域包含：seq id no:103的cdr1、seq id no:104的cdr2和seq id no:105的cdr3，所述抗体或其抗原片段结合至seq id no:12的dock8缺乏症的dock8特征肽；[0473]和/或[0474](ii)结合seq id no:1的x-cgd的cybb特征肽的抗体或其抗原结合片段；[0475]结合seq id no:4的xlp1的sh2d1a特征肽的抗体或其抗原结合片段；[0476]结合seq id no:6的fhl2的prf-1特征肽的抗体或其抗原结合片段；[0477]结合seq id no:210的at的atm特征肽的抗体或其抗原结合片段；[0478]结合seq id no:211的at的atm特征肽的抗体或其抗原结合片段；[0479]结合seq id no:9的cvid的cd19特征肽的抗体或其抗原结合片段；[0480]结合seq id no:10的cvid的cd19特征肽的抗体或其抗原结合片段；[0481]结合seq id no:212的cvid的cd19特征肽的抗体或其抗原结合片段；[0482]结合seq id no:213的scid的il2rg特征肽的抗体或其抗原结合片段；[0483]结合seq id no:214的scid的il2rg特征肽的抗体或其抗原结合片段；[0484]结合seq id no:215的scid的cd3ε特征肽的抗体或其抗原结合片段；[0485]结合seq id no:216的scid的cd3δ特征肽的抗体或其抗原结合片段；和/或[0486]结合seq id no:217的scid的cd3δ特征肽的抗体或其抗原结合片段；[0487]和/或[0488](iii)参考特征肽，所述参考特征肽包括：[0489]seq id no:1的x-cgd的cybb特征肽；[0490]seq id no:2的x-cgd的cybb特征肽；[0491]seq id no:3的xlp1的sh2d1a特征肽；[0492]seq id no:4的xlp1的sh2d1a特征肽；[0493]seq id no:5的fhl2的prf-1特征肽；[0494]seq id no:6的fhl2的prf-1特征肽；[0495]seq id no:210的共济失调毛细血管扩张症的atm特征肽；[0496]seq id no:211的共济失调毛细血管扩张症的atm特征肽；[0497]seq id no:7的共济失调毛细血管扩张症的atm特征肽；[0498]seq id no:8的cvid的cd19特征肽；[0499]seq id no:9的cvid的cd19特征肽；[0500]seq id no:10的cvid的cd19特征肽；[0501]seq id no:212的cvid的cd19特征肽；[0502]seq id no:213的scid的il2rg特征肽；[0503]seq id no:214的scid的il2rg特征肽；[0504]seq id no:215的scid的cd3ε特征肽；[0505]seq id no:216的scid的cd3δ特征肽；[0506]seq id no:217的scid的cd3δ特征肽；[0507]seq id no:11的ada缺乏症的ada特征肽；和/或[0508]seq id no:12的dock8缺乏症的dock8特征肽。[0509]108.如实施方案107所述的测定物，所述测定物进一步包含：[0510](iv)抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段包含：[0511]重链可变(vh)结构域，所述重链可变(vh)结构域包含seq id no:112的cdr1、seq id no:113的cdr2和seq id no:114的cdr3；以及轻链可变(vl)结构域，所述轻链可变(vl)结构域包含：seq id no:115的cdr1、seq id no:116的cdr2和seq id no:117的cdr3，所述抗体或其抗原片段结合至seq id no:13的cd42特征肽；[0512]重链可变(vh)结构域，所述重链可变(vh)结构域包含seq id no:124的cdr1、seq id no:125的cdr2和seq id no:126的cdr3；以及轻链可变(vl)结构域，所述轻链可变(vl)结构域包含：seq id no:127的cdr1、seq id no:128的cdr2和seq id no:129的cdr3，所述抗体或其抗原片段结合至seq id no:14的cd42特征肽；和/或[0513]重链可变(vh)结构域，所述重链可变(vh)结构域包含seq id no:136的cdr1、seq id no:137的cdr2和seq id no:138的cdr3；以及轻链可变(vl)结构域，所述轻链可变(vl)结构域包含：seq id no:139的cdr1、seq id no:140的cdr2和seq id no:141的cdr3，所述抗体或其抗原片段结合至seq id no:15的cd56特征肽；[0514]和/或[0515](v)参考特征肽，所述参考特征肽包括：[0516]seq id no:13的cd42特征肽；[0517]seq id no:14的cd42特征肽；和/或[0518]seq id no:15的cd56特征肽。[0519]109.如实施方案107或108所述的测定物，其中所述参考特征肽是经同位素标记的。[0520]110.如实施方案107-109中任一项所述的测定物，其中所述抗体或其抗原结合片段附着于磁珠。[0521]111.一种重组抗体或其抗原结合片段，所述重组抗体或其抗原结合片段包含：重链可变(vh)结构域，所述重链可变(vh)结构域包含seq id no:16的cdr1、seq id no:17的cdr2和seq id no:18的cdr3；以及轻链可变(vl)结构域，所述轻链可变(vl)结构域包含：seq id no:19的cdr1、seq id no:20的cdr2和seq id no:21的cdr3。[0522]112.如实施方案111所述的重组抗体或其抗原结合片段，其中[0523]所述vh结构域如seq id no:27所示并且/或者所述重链如seq id no:24所示；并且[0524]所述vl结构域如seq id no:33所示并且/或者所述轻链如seq id no:30所示。[0525]113.一种重组抗体或其抗原结合片段，所述重组抗体或其抗原结合片段包含：重链可变(vh)结构域，所述重链可变(vh)结构域包含seq id no:160的cdr1、seq id no:161的cdr2和seq id no:162的cdr3；以及轻链可变(vl)结构域，所述轻链可变(vl)结构域包含：seq id no:163的cdr1、seq id no:164的cdr2和seq id no:165的cdr3。[0526]114.如实施方案113所述的重组抗体或其抗原结合片段，其中[0527]所述vh结构域如seq id no:173所示并且/或者所述重链如seq id no:169所示；并且[0528]所述vl结构域如seq id no:181所示并且/或者所述轻链如seq id no:177所示。[0529]115.一种重组抗体或其抗原结合片段，所述重组抗体或其抗原结合片段包含：重链可变(vh)结构域，所述重链可变(vh)结构域包含seq id no:34的cdr1、seq id no:35的cdr2和seq id no:36的cdr3；以及轻链可变(vl)结构域，所述轻链可变(vl)结构域包含：seq id no:37的cdr1、seq id no:38的cdr2和seq id no:39的cdr3。[0530]116.如实施方案115所述的重组抗体或其抗原结合片段，其中[0531]所述vh结构域如seq id no:45所示并且/或者所述重链如seq id no:42所示；并且[0532]所述vl结构域如seq id no:51所示并且/或者所述轻链如seq id no:48所示。[0533]117.一种重组抗体或其抗原结合片段，所述重组抗体或其抗原结合片段包含：重链可变(vh)结构域，所述重链可变(vh)结构域包含seq id no:52的cdr1、seq id no:53的cdr2和seq id no:54的cdr3；以及轻链可变(vl)结构域，所述轻链可变(vl)结构域包含：seq id no:55的cdr1、seq id no:56的cdr2和seq id no:57的cdr3。[0534]118.如实施方案117所述的重组抗体或其抗原结合片段，其中[0535]所述vh结构域如seq id no:63所示并且/或者所述重链如seq id no:60所示；并且[0536]所述vl结构域如seq id no:69所示并且/或者所述轻链如seq id no:66所示。[0537]119.一种重组抗体或其抗原结合片段，所述重组抗体或其抗原结合片段包含：重链可变(vh)结构域，所述重链可变(vh)结构域包含seq id no:70的cdr1、seq id no:71的cdr2和seq id no:72的cdr3；以及轻链可变(vl)结构域，所述轻链可变(vl)结构域包含：seq id no:73的cdr1、seq id no:74的cdr2和seq id no:75的cdr3。[0538]120.如实施方案119所述的重组抗体或其抗原结合片段，其中所述vh结构域如seq id no:78所示并且所述vl结构域如seq id no:81所示。[0539]121.一种重组抗体或其抗原结合片段，所述重组抗体或其抗原结合片段包含：重链可变(vh)结构域，所述重链可变(vh)结构域包含seq id no:82的cdr1、seq id no:83的cdr2和seq id no:84的cdr3；以及轻链可变(vl)结构域，所述轻链可变(vl)结构域包含：seq id no:85的cdr1、seq id no:86的cdr2和seq id no:87的cdr3。[0540]122.如实施方案121所述的重组抗体或其抗原结合片段，其中[0541]所述vh结构域如seq id no:93所示并且/或者所述重链如seq id no:90所示；并且[0542]所述vl结构域如seq id no:99所示并且/或者所述轻链如seq id no:96所示。[0543]123.一种重组抗体或其抗原结合片段，所述重组抗体或其抗原结合片段包含：重链可变(vh)结构域，所述重链可变(vh)结构域包含seq id no:100的cdr1、seq id no:101的cdr2和seq id no:102的cdr3；以及轻链可变(vl)结构域，所述轻链可变(vl)结构域包含：seq id no:103的cdr1、seq id no:104的cdr2和seq id no:105的cdr3。[0544]124.如实施方案123所述的重组抗体或其抗原结合片段，其中所述vh结构域如seq id no:108所示并且所述vl结构域如seq id no:111所示。[0545]125.一种重组抗体或其抗原结合片段，所述重组抗体或其抗原结合片段包含：重链可变(vh)结构域，所述重链可变(vh)结构域包含seq id no:112的cdr1、seq id no:113的cdr2和seq id no:114的cdr3；以及轻链可变(vl)结构域，所述轻链可变(vl)结构域包含：seq id no:115的cdr1、seq id no:116的cdr2和seq id no:117的cdr3。[0546]126.如实施方案125所述的重组抗体或其抗原结合片段，其中所述vh结构域如seq id no:120所示并且所述vl结构域如seq id no:123所示。[0547]127.一种重组抗体或其抗原结合片段，所述重组抗体或其抗原结合片段包含：重链可变(vh)结构域，所述重链可变(vh)结构域包含seq id no:124的cdr1、seq id no:125的cdr2和seq id no:126的cdr3；以及轻链可变(vl)结构域，所述轻链可变(vl)结构域包含：seq id no:127的cdr1、seq id no:128的cdr2和seq id no:129的cdr3。[0548]128.如实施方案127所述的重组抗体或其抗原结合片段，其中所述vh结构域如seq id no:132所示并且所述vl结构域如seq id no:135所示。[0549]129.一种重组抗体或其抗原结合片段，所述重组抗体或其抗原结合片段包含：重链可变(vh)结构域，所述重链可变(vh)结构域包含seq id no:136的cdr1、seq id no:137的cdr2和seq id no:138的cdr3；以及轻链可变(vl)结构域，所述轻链可变(vl)结构域包含：seq id no:139的cdr1、seq id no:140的cdr2和seq id no:141的cdr3。[0550]130.如实施方案129所述的重组抗体或其抗原结合片段，其中[0551]所述vh结构域如seq id no:147所示并且/或者所述重链如seq id no:144所示；并且[0552]所述vl结构域如seq id no:153所示并且/或者所述轻链如seq id no:150所示。[0553]131.一种试剂盒，所述试剂盒包括：[0554](i)抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段包含：[0555]重链可变(vh)结构域，所述重链可变(vh)结构域包含seq id no:16的cdr1、seq id no:17的cdr2和seq id no:18的cdr3，以及轻链可变(vl)结构域，所述轻链可变(vl)结构域包含：seq id no:19的cdr1、seq id no:20的cdr2和seq id no:21的cdr3，所述抗体或其抗原结合片段结合至seq id no:2的x-cgd的cybb特征肽；[0556]重链可变(vh)结构域，所述重链可变(vh)结构域包含seq id no:160的cdr1、seq id no:161的cdr2和seq id no:162的cdr3；以及轻链可变(vl)结构域，所述轻链可变(vl)结构域包含：seq id no:163的cdr1、seq id no:164的cdr2和seq id no:165的cdr3，所述抗体或其抗原片段结合至seq id no:3的xlp1的sh2d1a特征肽；[0557]重链可变(vh)结构域，所述重链可变(vh)结构域包含seq id no:34的cdr1、seq id no:35的cdr2和seq id no:36的cdr3；以及轻链可变(vl)结构域，所述轻链可变(vl)结构域包含：seq id no:37的cdr1、seq id no:38的cdr2和seq id no:39的cdr3，所述抗体或其抗原片段结合至seq id no:5的fhl2的prf-1特征肽；[0558]重链可变(vh)结构域，所述重链可变(vh)结构域包含seq id no:52的cdr1、seq id no:53的cdr2和seq id no:54的cdr3；以及轻链可变(vl)结构域，所述轻链可变(vl)结构域包含：seq id no:55的cdr1、seq id no:56的cdr2和seq id no:67的cdr3，所述抗体或其抗原片段结合至seq id no:7的共济失调毛细血管扩张症的atm特征肽；[0559]重链可变(vh)结构域，所述重链可变(vh)结构域包含seq id no:70的cdr1、seq id no:71的cdr2和seq id no:72的cdr3；以及轻链可变(vl)结构域，所述轻链可变(vl)结构域包含：seq id no:73的cdr1、seq id no:74的cdr2和seq id no:75的cdr3，所述抗体或其抗原片段结合至seq id no:8的cvid的cd19特征肽；[0560]重链可变(vh)结构域，所述重链可变(vh)结构域包含seq id no:82的cdr1、seq id no:83的cdr2和seq id no:84的cdr3；以及轻链可变(vl)结构域，所述轻链可变(vl)结构域包含：seq id no:85的cdr1、seq id no:86的cdr2和seq id no:87的cdr3，所述抗体或其抗原片段结合至seq id no:11的ada缺乏症的ada特征肽；[0561]重链可变(vh)结构域，所述重链可变(vh)结构域包含seq id no:100的cdr1、seq id no:101的cdr2和seq id no:102的cdr3；以及轻链可变(vl)结构域，所述轻链可变(vl)结构域包含：seq id no:103的cdr1、seq id no:104的cdr2和seq id no:105的cdr3，所述抗体或其抗原片段结合至seq id no:12的dock8缺乏症的dock8特征肽；[0562]重链可变(vh)结构域，所述重链可变(vh)结构域包含seq id no:112的cdr1、seq id no:113的cdr2和seq id no:114的cdr3；以及轻链可变(vl)结构域，所述轻链可变(vl)结构域包含：seq id no:115的cdr1、seq id no:116的cdr2和seq id no:117的cdr3，所述抗体或其抗原片段结合至seq id no:13的cd42特征肽；[0563]重链可变(vh)结构域，所述重链可变(vh)结构域包含seq id no:124的cdr1、seq id no:125的cdr2和seq id no:126的cdr3；以及轻链可变(vl)结构域，所述轻链可变(vl)结构域包含：seq id no:127的cdr1、seq id no:128的cdr2和seq id no:129的cdr3，所述抗体或其抗原片段结合至seq id no:14的cd42特征肽；和/或[0564]重链可变(vh)结构域，所述重链可变(vh)结构域包含seq id no:136的cdr1、seq id no:137的cdr2和seq id no:138的cdr3；以及轻链可变(vl)结构域，所述轻链可变(vl)结构域包含：seq id no:139的cdr1、seq id no:140的cdr2和seq id no:141的cdr3，所述抗体或其抗原片段结合至seq id no:15的cd56特征肽；[0565]和/或[0566](ii)结合seq id no:1的x-cgd的cybb特征肽的抗体或其抗原结合片段；[0567]结合seq id no:4的xlp1的sh2d1a特征肽的抗体或其抗原结合片段；[0568]结合seq id no:6的fhl2的prf-1特征肽的抗体或其抗原结合片段；[0569]结合seq id no:210的at的atm特征肽的抗体或其抗原结合片段；[0570]结合seq id no:211的at的atm特征肽的抗体或其抗原结合片段；[0571]结合seq id no:9的cvid的cd19特征肽的抗体或其抗原结合片段；[0572]结合seq id no:10的cvid的cd19特征肽的抗体或其抗原结合片段；[0573]结合seq id no:212的cvid的cd19特征肽的抗体或其抗原结合片段；[0574]结合seq id no:213的scid的il2rg特征肽的抗体或其抗原结合片段；[0575]结合seq id no:214的scid的il2rg特征肽的抗体或其抗原结合片段；[0576]结合seq id no:215的scid的cd3ε特征肽的抗体或其抗原结合片段；[0577]结合seq id no:216的scid的cd3δ特征肽的抗体或其抗原结合片段；和/或[0578]结合seq id no:217的scid的cd3δ特征肽的抗体或其抗原结合片段；[0579]和/或[0580](iii)参考特征肽，所述参考特征肽包括：[0581]seq id no:1的x-cgd的cybb特征肽；[0582]seq id no:2的x-cgd的cybb特征肽；[0583]seq id no:3的xlp1的sh2d1a特征肽；[0584]seq id no:4的xlp1的sh2d1a特征肽；[0585]seq id no:5的fhl2的prf-1特征肽；[0586]seq id no:6的fhl2的prf-1特征肽；[0587]seq id no:210的共济失调毛细血管扩张症的atm特征肽；[0588]seq id no:211的共济失调毛细血管扩张症的atm特征肽；[0589]seq id no:7的共济失调毛细血管扩张症的atm特征肽；[0590]seq id no:8的cvid的cd19特征肽；[0591]seq id no:9的cvid的cd19特征肽；[0592]seq id no:10的cvid的cd19特征肽；[0593]seq id no:212的cvid的cd19特征肽；[0594]seq id no:213的scid的il2rg特征肽；[0595]seq id no:214的scid的il2rg特征肽；[0596]seq id no:215的scid的cd3ε特征肽；[0597]seq id no:216的scid的cd3δ特征肽；[0598]seq id no:217的scid的cd3δ特征肽；[0599]seq id no:11的ada缺乏症的ada特征肽；[0600]seq id no:12的dock8缺乏症的dock8特征肽；[0601]seq id no:13的cd42特征肽；[0602]seq id no:14的cd42特征肽；和/或[0603]seq id no:15的cd56特征肽。[0604]132.如实施方案131所述的试剂盒，所述试剂盒进一步包括滤纸卡、冲孔工具、颊拭子、低温瓶、采血管、消化酶、消化缓冲液、所述抗体或其抗原结合片段的固体载体以及洗脱缓冲液中的一种或多种。[0605]133.如实施方案131或132所述的试剂盒，其中所述参考特征肽是经同位素标记的。[0606]134.如实施方案131-133中任一项所述的试剂盒，其中所述抗体或其抗原结合片段附着于磁珠。[0607](xii)实验性实施例。下面在实验性实施例中描述的数据中的至少一些数据已发表在collins等人，frontiers in immunology,第11卷,article 464(2020年4月)中。[0608]实施例1.概述。生成与选择性反应监测联合的多重肽免疫亲和富集(免疫-srm)组，以用于从干血斑(dbs)中同时筛查代表三种原发性免疫缺陷病症(pidd)特异性蛋白质和三种细胞类型特异性蛋白质的六种特征肽。在来自表现出维斯科特-奥尔德里奇综合征(was)、x连锁无丙种球蛋白血症(xla)、x连锁慢性肉芽肿病(x-cgd)、dock8缺乏症和腺苷脱氨酶(ada)缺乏症的29名pidd患者样本(包括两名xla携带者)的样本中，代表每种疾病的肽相对于正常对照显著减少，并且患者鉴定与临床和分子诊断具有极好的符合性。多重组中还包括血小板(cd42)和自然杀伤(nk)细胞(cd56)的细胞特异性标志物。在was患者中，发现cd42水平显著降低，与特征性血小板减少症一致。骨髓移植前后分析的was患者在治疗后显示出正常化的was蛋白和血小板cd42，这突出了免疫-srm证明和监测pidd治疗效果的能力。高通量免疫-srm方法可在2.5分钟的运行时间内筛查pidd特异性肽，满足高容量新生儿筛查(nbs)工作流程的要求。这种高通量方法返回与标准免疫-srm pidd组同一的结果。免疫-srm肽分析代表了一种用于从易于采集和运输的dbs中鉴定和研究pidd患者的稳健的潜在临床诊断方法，并且支持通过nbs进行早期pidd诊断的重大潜力。[0609]开发了多重蛋白质组学诊断组，以使用六种特征肽生物标志物筛查dbs中的六种从分子上界定的pidd。当前的一组靶向pidd包括ada缺乏症(ada)(whitmore和gaspar,frontiers in immunology,2016.7:第314-314页；flinn和gennery,orphanet journal of rare diseases,2018.13(1):第65页)、细胞质分裂付出蛋白8(dock8)缺乏症(aydin等人，j clin immunol,2015.35(2):第189-98页；engelhardt等人，jallergy clin immunol,2009.124(6):第1289-302页e4)、x连锁慢性肉芽肿病(xl-cgd)、共济失调毛细血管扩张症(at)、x连锁淋巴细胞增生综合征(xlp1；sh2d1a缺乏症)和家族性噬血细胞性淋巴组织细胞增多症2(fhl2)。这些疾患的特征肽充当直接诊断特定pidd的主要标志物。对次要蛋白质标志物如神经细胞粘附分子(cd56)和糖蛋白ib(cd42)的分析通过分别生成关于自然杀伤(nk)细胞和血小板计数的信息而为特异性诊断提供支持。总之，与上述疾患相关的六种肽生物标志物可以同时在多重测定中进行定量。[0610]相对于多克隆抗体(pab)，针对特征肽的抗肽单克隆抗体(mab)的生成具有更高的特异性、可重复性和批次间一致性。已经建立了正常对照范围，并且使用盲法样本集合测试区分患者与对照的能力，而次要标志物提供了关于由此产生的对造血和免疫系统的影响的信息。最后，已开发具有高度可转移性且适于诊断分析和高通量(ht)nbs两者的多重方法。[0611]材料和方法。[0612]干血斑样本。该方案得到了控制机构审查委员会的批准。所有受试者均根据赫尔辛基宣言给予书面知情同意。正常对照血液样本购自bioivt(hicksville,ny)。患者样本由西雅图儿童免疫学诊断实验室(seattle children's immunology diagnostic laboratory)提供，包括源于乌贝兰迪亚联邦大学(乌贝兰迪亚(uberlandia)，巴西)的样本。在获得书面知情同意后，在美国国立卫生研究院(bethesda,md)采集了另外的患者样本。通过手指针刺或将70μl血液(每12mm斑点)用移液管吸移到滤纸卡(protein saver 903,piscayaway,nj)上来制备样本。然后将样本在室温下干燥过夜，运输到sch，并储存在-80℃下直至使用。分析来自175名正常对照的dbs样本。总共分析了来自29名pidd患者的dbs，包括来自8名was患者样本、11名xla患者和2名携带者、1名dock8缺乏症患者、3名xl-cgd患者、1名ar-cgd患者和6名ada缺乏症患者的样本。[0613]免疫-srm试剂。triton x-100(t9284-100ml)、经tpck处理的worthington胰蛋白酶(ls003740)和(3-[3-胆酰胺丙基＝二甲基铵基]-1-丙磺酸盐)(chaps)(编号28300)洗涤剂获自fisher scientific(waltham,ma)。碳酸氢铵(ambic)(a6141-25g)购自sigma aldrich。乙腈(acn)(编号a955，optima lc/ms级)、乙酸(aa)(编号a11350，optima lc/ms)、水(编号w6，optima lc/ms级)、甲酸(fa)(编号a117，optima lc/ms级)、磷酸盐缓冲盐水(1×pbs，编号10010-023)、二硫苏糖醇(dtt)和三(羟甲基)氨基甲烷(tris)缓冲液购自fisher scientific(waltham,ma)。[0614]同位素标记的内部标准物(is)肽购自atlantic peptides(lewisburg,pa)或life technologies corporation(carlsbad,ca)。is肽被纯化至》95％并且被合成为掺入了重的稳定同位素标记的c端赖氨酸或精氨酸。标记(13c或15n)导致+8(赖氨酸)或+10(arg)道尔顿(da)的质量偏移。将等分试样于-80℃储存在5％acn/0.1％fa中直到使用。[0615]pidd内部标准物(is)肽作为500x的在含1×pbs+15％acn+0.1％fa+0.03％chaps的h2o中的混合物储存并且在临使用前稀释。储液混合物和肽捕获实验中的最终肽浓度如表2所示。[0616]表2.每种靶标肽的每个样本的储液和最终内部肽浓度和单克隆抗体珠粒质量。[0617][0618]特征肽的选择和抗体产生。根据已发表的siscapa测定的cptac指南进行候选特征肽选择(hoofnagle等人，clin chem,2016.62(1):第48-69页)。简言之，候选是通过对蛋白质进行电脑模拟(in silico)消化以生成胰蛋白酶肽而生成的。基于长度和疏水性将这些序列分开。排除了具有潜在缺失切割、甲硫氨酸和已知的翻译后修饰的肽。针对在蛋白质组中的独特性使用blast工具筛查最终候选肽。如果存在多个候选肽，则基于ms反应选择最终肽。用于抗体生产的最终肽选择是通过比较等效浓度下的ms反应来进行的。特征肽的片段化模式在图3中呈现。[0619]抗体产生如下那样执行。合成具有n端半胱氨酸的肽序列，并在兔免疫前使该肽序列缀合至佐剂蛋白。从动物分离具有高滴度和活性的外周血单个核细胞(pbmc)，然后培养b细胞。然后使反应的分离的b细胞克隆它们的cdna并且使抗体在哺乳动物表达系统中表达以进行进一步筛查。在b细胞培养和抗体克隆表达后，使用elisa和免疫-srm方法测试抗体以确定用于单克隆开发的适合性。[0620]可替代地，在小鼠免疫之前如上那样进行肽合成和佐剂缀合。分离来自反应的动物的b细胞并产生杂交瘤细胞系。在粗出血的多个阶段以及在杂交瘤发育后使用elisa和免疫-srm方法测试抗体，以确定用于单克隆开发的适合性。[0621]抗体珠粒试剂的产生。通过如下方式来产生单克隆抗体(mab)珠粒：与来自invitrogen(carlsbad,ca)的最初用1×pbs+0.03％chaps洗涤的蛋白g包被的磁珠(dynabeads，编号10004d)一起温育，并进行珠粒的磁性分离(millipore，编号20-4000)(temecula,ca)以去除储存缓冲液。将珠粒通过移液管吹吸混合，随后用磁体分离。该洗涤程序总共重复三次。最后，将适量的mab储液以1:2.5μg mab:μl珠粒的比率添加到分离的珠粒中。然后将抗体和珠粒在4℃下翻滚过夜以进行偶联。最后，将固定的mab联接的珠粒用1×pbs+0.03％chaps洗涤两次并以0.4μg/μl的浓度重悬。[0622]dbs提取、胰蛋白酶消化和免疫亲和富集。蛋白质提取和胰蛋白酶消化是通过针对先前报道的程序(collins等人，frontiers in immunology,2018.9(2756)；collins等人frontiers in immunology,2020.11)加以修改的程序进行的。从dbs卡上取出两个直径为6.35mm的冲孔并且将其放入来自thermo scientific(chicago,il)的96孔板(masterblock,greinier，编号786201)中。将这些冲孔浸入300μl含0.1％triton x-100的50mm碳酸氢铵缓冲液中。然后将二硫苏糖醇(dtt)添加到h2o中至0.2m dtt的浓度。涡旋后，在37℃下在搅动下进行蛋白质提取30分钟。蛋白质提取后，取出300μl提取的上清液并转移到新板中，然后添加60μg胰蛋白酶并在37℃下温育2小时。所得的肽混合物直接用于肽免疫亲和富集。[0623]将15μl的1m tris(ph 8，编号15568-025)和15μl的1x内部标准物混合物直接添加到经过消化的肽混合物中。pidd特征肽内部标准物的最终is浓度示于表2中。接下来，按表2中列出的质量直接添加mab珠粒。将所得溶液在4℃下在搅动下温育过夜，以允许抗肽抗体进行肽捕获。[0624]温育后，使用96孔磁板(alpaqua magnum ex，编号a000380)(beverly,ma)将mab-珠粒拉下并用1×pbs+0.01％chaps洗涤两次以去除脱靶肽。每次洗涤后，用磁体收集mab珠粒，然后用另外的洗涤缓冲液重悬。最终洗涤后，将它们用磁铁收集，然后添加30μl含有5％aa+3％acn的洗脱水溶液。以1000rpm将捕获的肽从珠粒上洗脱5分钟。最后，用磁铁收集珠粒并将洗脱的肽转移到lc/ms小瓶或新的96孔板以进行分析。从4或5x 3.125mm冲孔中分析了可用dbs少于所需dbs的样本。在这些情况下，除抗体输入质量外，所有体积都进行了相应调整。[0625]液相色谱质谱。在具有ionkey源和双m级梯度及上样色谱泵的waters xevo tq-xs(milford,ma)上执行分离的肽混合物的lc-ms/ms。色谱溶剂为a：h2o+0.1％fa和b：acn+0.1％fa。作为初始步骤，用98:2a:b的恒定流以20μl/min将肽上样到m级阱对称c18柱(300μm x 25mm,100a,5um)上保持三分钟。上样后，使该流反向。将肽从捕集柱上洗脱，并使用150μm x 100mm beh c18 ionkey(130a，1.7μm)进行分离。示出了20分钟和2.5分钟梯度的梯度流条件(表3)。在q1和q3四极杆中以单位分辨率获取srm跃迁。停留时间为5毫秒，质量范围之间有3毫秒的暂停且总循环时间为1.5秒。选择每个肽的前体和片段质量以生成最高强度的跃迁。调节前体质量、片段质量和碰撞能量以优化生成的信号。每种肽的内源性srm迹线示于图4中。[0626]梯度设置示于表3中。以单位/单位分辨率获取跃迁，停留时间为10毫秒且在质量范围之间有5毫秒的暂停，从而导致循环时间为0.75秒。[0627]表3.用于标准免疫-srm分析和高通量免疫-srm分析的液相色谱条件。[0628][0629]数据分析。srm数据使用skyline进行分析(maccoss lab，开源软件，seattle,wa，见万维网上的skyline.ms/project/home/begin.view)。通过将内源肽信号与以已知浓度添加到肽提取物中的同位素is的信号进行比较来生成内源特征肽的浓度。使用graphpad prism(san diego,ca)进行统计分析。与每种肽的正常对照相比，使用单因素方差分析(one-way anova)分析肽的减少。[0630]方法性能评估。生成反应曲线以建立测定线性度以及检测和定量极限。对每个样本提取和消化来自正常对照dbs的冲孔(2x 6.35mm冲孔)。消化后，将样本汇集并重新等分以生成一致的内源肽信号。向等分样本中添加八个不同浓度(0×、0.05×、0.1×、0.5×、1×、2×、5×和50×)的is。每个浓度一式三份地添加。is添加后，如所述的那样完成免疫-srm工作流程。肽洗脱后，将样本分成两个小瓶进行lc-ms/ms分析并通过两个单独的梯度(20分钟和2.5分钟)运行以比较各自的分析值。反应曲线样本通过标准和高通量(ht)梯度运行。[0631]通过在不同的五天定量内源肽浓度来确定所述测定的测定内和测定间精度。每天，在整个免疫-srm过程中进行五次重复测定。确定日内样本集合和日间样本集合的变异系数(cv)。cv样本通过标准梯度和ht梯度运行。[0632]为了研究内源蛋白质和肽的稳定性，随着时间推移分析同一张dbs卡。将三张单独的dbs卡储存在室温和37℃下，并与保存在-20℃下的样本进行比较，以确定储存温度的影响。在温育七天后进行肽浓度测量。每个样本一式三份地分析。[0633]患者样本分析。用生成的包含患者和对照的混合样本集合以盲法方式分析患者样本。完整的样本集合通过标准的20分钟梯度运行以初步建立诊断。分析后，通过与揭盲前的诊断截断值进行比较来预测患者状况。使用2.5分钟的ht梯度分析17个样本和20个正常对照的子集合，以检查标准和ht方法的符合性。[0634]结果[0635]肽选择和抗体开发。表4中列出了选择作为代表性生物标志物肽的特征肽序列以及用于定量分析的分子量及母离子和子离子。[0636]已经生成了针对每个序列的单克隆抗体。选择最终抗体是因为它们能够以高亲和力捕获内源性特征肽并且它们没有干扰分析物。[0637]表4.主要和次要标志物的特征肽信息(包括序列、质量及母离子和碎片离子)。完整肽片段信息示于图1中。[0638][0639][0640][0641][0642]主要标志物被用于直接诊断特定的相关pidd。次要标志物提供与造血相关靶标的标志物有关的信息。[0643]方法性能评估。表5中示出了分析数字，包括标准梯度条件的线性度、lod、loq、测定内和测定间cv，以及稳定性。除cd42 128具有17.6fmol的lod和30fmol的loq以外，所有肽都具有小于10fmol的lod和loq值。线性范围图示于图5a、图5b中。所有肽浓度均可重现，cv《20％。通常，这是样本运行之间可接受的变化极限。表6中示出了ht梯度分析的分析数字。在2.5分钟和20分钟运行之间lod值相当，而loq值在每种情况下都增加，除了cd56122、ada 93和cybb 509在转向ht方法时以外。测定内cv在采用更快速的方法时倾向于增加，而除dock8 1272外，所有肽的测定内cv均小于20％。[0644]另外，在除cd42 128以外的所有情况下，在室温或37℃下储存7天时段内，肽浓度相对于储存在-20℃下的样本的变化小于20％。当储存在室温和37℃下时，该血小板标志物分别表现出25.5％和27.9％的增加。[0645]表5.标准pidd梯度的优点的分析数字。[0646][0647]主要标志物被用于直接诊断相关pidd。次要标志物提供与造血相关靶标的标志物有关的信息。[0648]表6.标准20分钟和ht 2.5分钟梯度的llod、lloq和cv的比较。[0649][0650]主要标志物被用于直接诊断相关pidd。次要标志物提供与造血相关靶标的标志物有关的信息。[0651]正常对照范围。对125个正常对照样本执行免疫-srm分析以设定正常范围。这些范围被用于建立可以鉴定患者的诊断截断值。每种情况下每种肽的平均值、标准偏差和诊断截断值示于表7中。[0652]表7.特征肽的平均正常浓度值(n＝125)和当前诊断截断值。[0653][0654][0655]患者样本。特征肽浓度、免疫-srm和临床诊断、遗传信息和治疗示于图6中。[0656]对于cd42 128，七名未治疗的was患者中有六名低于诊断截断值，而研究中的所有其他患者具有正常的cd42 128水平(图7a)。对于cd42 154，所有未治疗的was患者均低于限定的诊断截断值(图7b)。然而，cd42 154有更多的假阳性和未检测到肽的样本。这可能是由于已知的多态性导致质量变化并干扰肽检测。最后，在治愈性bmt之前和之后从同一患者采集样本20-a和20-b。在bmt之后，该患者的cd42 128和cd42 154水平高于每种肽的诊断截断值(图7a、图7b)。最后，患者14的cd42 128水平高于诊断截断值。对于这些患者，所有非靶标肽均在正常范围内，并且没有其他患者的cd42128水平低于诊断截断值。[0657]发现确诊的x-cgd患者的dbs具有低于正常值的cybb浓度。x-cgd患者中的cybb平均浓度为46.9pmol/l(图8a)。常染色体隐性遗传(ar)-cgd患者24的cybb浓度为1,172.6pmol/l，远高于187.4pmol/l cybb 509的诊断截断值。对于这些患者，所有非靶标肽均在正常范围内。[0658]dock8缺乏症患者(dbs 25)(图8b)的dock8 1272肽浓度为18.2pmol/l。这与365.3pmol/l的正常对照平均值(p《0.05)和62.2pmol/l的诊断截断值相比时显著降低。该患者的所有非靶标肽均在正常范围内，并且没有其他患者的dock8 1272水平低于截断值。[0659]来自ada缺乏症患者26-31的dbs具有可变的ada 93值(图8c)。患者28、30和31的ada 93浓度为15.6pmol/l、2.0pmol/l和2.3pmol/l，远低于设为469.1pmol/l的诊断截断值。患者26、27和29的肽浓度高于截断值水平。患者27具有3232.1pmol/l的接近平均的ada 93浓度，而患者26和29的肽浓度升高，分别为6540.7pmol/l和7415.1pmol/l。五名患者正在接受某种形式的治疗。患者28和30目前正在接受peg-ada ert，患者26、27和29已接受常规rbc输注以管理其ada缺乏症。患者31未经治疗且缺乏ada。没有其他pidd患者或正常对照样本的ada 93水平低于截断值浓度。[0660]所有患者样本的nk细胞标志物cd56 122水平都高于由正常对照确定的诊断截断值(图9)。[0661]患者样本的高通量(ht)分析。使用适合于群体筛查的经优化的2.5分钟ht梯度分析17个患者样本的子集合。ht分析未产生另外的假阳性并且诊断与标准lc-ms/ms方法的诊断相匹配(图10a-10c)。高cv是从ht方法分析中排除dock8 1272的原因。[0662]本研究证明，免疫-srm是一种高度灵敏的测定，其通过直接定量dbs中存在的低丰度蛋白质来正确鉴定具有三种从基因上界定的pidd的患者。患有ada缺乏症、dock8缺乏症、x-cgd的患者可被同时筛查。通过分析血小板的次要(即非直接诊断的)蛋白质标志物cd42和nk细胞的次要蛋白质标志物cd56，获得了新的支持性信息。数据还表明，该方法灵敏度高、随时间推移可重现、线性范围宽且易于转移。[0663]所有was患者均为基因和生化确诊病例。次要血小板标志物cd42 128和cd42 154在was患者中减少，这与循环血小板减少一致。发现患者样本14是cd42 128的水平虽然低，但高于诊断截断值的唯一was患者。尚不清楚患者14在分析时是否接受了脾切除术或血小板输注。因此，cd42特征肽代表dbs中的血小板水平。有趣的是，当在治愈性hsct之前(患者20-a)和之后(患者20-b)对同一患者进行分析时，次要血小板标志物cd42 128和cd42 154在hsct后升高到诊断截断值以上。[0664]使用cybb特征肽的免疫-srm分析也容易鉴定x连锁cgd患者(图8a)。患者21-23的cybb 509浓度远低于187.4pmol/l的诊断截断值。该分析将对具有cybb基因突变的x-cgd患者有特异性，但对该疾病的常染色体隐性形式没有特异性，该常染色体隐性形式是由nadph复合物中其他组分的损失引起的。这在对表现出正常cybb 509水平的ar-cgd患者24的分析中很明显(图6)。可以为单个nadph组分添加代表cyba或ncf1-3的其他特征肽，以鉴定cgd的ar形式。因为通过流式细胞术测量nadph氧化酶需要通过静脉穿刺抽取静脉血，并且中性粒细胞的活力有限，所以来自dbs的免疫-srm代表了一种强大的临床筛查替代技术。[0665]对dock8缺乏症的主要标志物的分析显示，免疫-srm可以容易地将患者与对照区分开(图8b)。对于dock8 1272的分析，健康对照表现出365.3±134.7pmol/l的平均肽浓度。诊断截断值被设为62.2pmol/l或低于平均浓度2.25sd。当从dbs测量时，通过这些方法分析的dock8样本具有非常低的dock8 1272浓度。有趣的是，通过流式细胞术发现这里研究的患者具有含有10％dock8阳性pbmc的回复体表型。dock8缺乏症的诊断往往可能很困难，因为回复需要专门的流式细胞术工作流程，因此无论是否回复都能够清楚地区分大多数或所有患者表型的稳健测定将大大简化鉴定(jing等人,the journal of allergy and clinical immunology,2014.133(6):第1667-1675页)。另外，由于一个等位基因中经常存在大量缺失，因此测序可能具有挑战性。免疫-srm诊断可能更能耐受回复，因为该测定是对dbs中存在的所有细胞的全局分析。因此，虽然某些pbmc亚群可表现出dock8的回复体表达，但总体而言，总蛋白浓度显著降低。因为先前的研究已经表明几乎所有dock8患者都具有非常低的dock8蛋白质表达(engelhardt等人,j allergy clin immunol,2009.124(6):第1289-302页e4)，所以预计大多数患者通过免疫-srm将被筛查为阳性。所有其他患者显示出正常的dock8 1272水平，表明该生物标志物是dock8缺乏症的特征。[0666]一名ada患者未经治疗并且具有极度降低的2.3pmol/l的ada93浓度。被筛查的五名ada缺乏症患者正在接受针对他们的病症的某种形式的酶替代治疗(ert)，并且该治疗的形式影响免疫-srm鉴定患者的能力(图8c)。患者28和30使用特征肽ada 93得到正确诊断，尽管他们正在接受聚乙二醇化ada ert(牛培加酶(pegademase bovine)，leadiant biosciences,inc.,gaithersburg,md)。在这些患者中，ada水平极低，为15.6pmol/l和2.0pmol/l(分别对于患者28和30而言)并且远低于469.1pmol/l的截断值。用于治疗的重组ada酶来源于牛并且不会干扰免疫-srm对内源性人ada的定量(booth和gaspar,biologics:targets&therapy,2009.3:第349-358页)。然而，来自巴西的患者26、27和29正在用红细胞输注治疗以提供外源性酶，因为rbc具有显著水平的ada(fargo等人,british journal of haematology,2013.160(4):第547-554页)。半衰期为90天，每周接受rbc输注的ada缺乏症患者的血液中将具有稳定水平的rbc相关人ada，因此这些患者在免疫-srm测定中显示正常。这与分别在患者26、27和29中通过免疫-srm测量的6540.7、3232.1和7415.4pmol/l的ada 93水平一致。事实上，患者26中的蛋白质水平显著高于2914.0pmol/l ada 93的平均正常值，这可能是由于输注后rbc数量增加。这些结果表明，免疫-srm也可以充当用于确定如基因疗法或bmt的治疗的功效或测量外源递送的蛋白质治疗剂的药代动力学特征的工具。[0667]这里ada治疗的额外证据可能以正常nk细胞标志物cd56 122浓度的形式出现(图9)。ada缺乏症是一种tb-nk型scid，其通常会导致患者中nk细胞浓度降低。患者28在样本采集时一直在接受peg-ada治疗，该治疗已经被证实会增加接受治疗的患者中的淋巴细胞浓度(booth和gaspar,biologics:targets&therapy,2009.3:第349-358页)。同样，患者26和27的输注治疗可以增加绝对淋巴细胞数量(schmalstieg等人,pediatric research,1977.11(4):第493-493页)。这些数据共同提供了有关治疗干预的成功以及对造血和免疫系统的潜在后果的信息。[0668]虽然20分钟的运行时间对于要用作临床诊断工具的免疫-srm分析而言将是足够的，但是将需要显著减少该分析时间以便达到nbs所需的样本通量。为了解决这个问题，设计了利用2.5分钟样本运行时间的ht梯度。肽跃迁和保留时间窗口被优化成在较短的分析运行中保持足够的肽信号和分离。总体而言，由于ms扫描速率，有必要减少监测的跃迁的数量，从而减少整体信号。尽管进行了这样的减少，但ht方法的检测极限在所有情况下都相似，除了ada 93、cd42 154和cd56 122以外，在这些情况下它们显著更高(表6)。相比之下，除cybb 509、ada 93和cd56 122以外的所有肽的lloq增加了几倍。这些结果可能是由于ht分析的整体信号减少，因为监测的跃迁减少，每个峰上测量的数据点减少，以及肽共洗脱增加。在大多数情况下，测定内cv增加，但在除dock8以外的所有情况下均保持低于20％的变化。由于肽保留时间的变化和分辨率的损失，在ht分析中dock8 1272浓度分析的重现性差。在当前的梯度条件下，dock81272将是nbs的不良特征肽候选者并且需要在标准条件下进行分析。将研究dock8的其他候选肽进行ht分析。[0669]通过2.5分钟ht梯度法分析来自先前运行的盲法样本集合(图10a-10c)。在该样本集合中分析的患者中，所指示条件与标准梯度相匹配。这些患者和正常对照的结果示于图10a-10c中。对于主要标志物cybb 509和ada 93，ht分析未产生假阳性。这些结果表明，免疫-srm和当前研究的肽生物标志物适于基于群体的nbs研究所需的ht分析。[0670]这些靶标pidd病症被选为代表新生儿筛查的强大潜在候选者。它们是相对频繁的病症，存在针对它们的有效治疗(包括防治性抗生素和iv免疫球蛋白)或治愈选择(包括hsct或基因疗法)。在没有稳健的新生儿筛查方法的情况下，往往需要很长时间才怀疑这些相对罕见的先天性pidd并采取步骤建立正确的诊断并启动有效的治疗或治愈程序。在这段时间期间，患者在出生后的第一年内易于出现危及生命的感染和未经治疗的疾患的其他负面后果。对通过nbs鉴定的家庭进行遗传咨询也具有重要价值。这些事实表明，本研究中包含的pidd是新生儿筛查的优良候选者并将为患者群体和医疗保健系统带来显著益处。免疫-srm是pidd的nbs筛查的一个有吸引力的潜在平台，因为它操作简单、快速、成本低，并且被多重化以在dbs的单次运行中包括每位患者的多种疾患。如果将次要细胞标志物纳入以在转诊时为临床医生提供增多的背景信息，则2.5分钟ht运行相当于每分钟2种疾患或每分钟3.2个生物标志物的运行时间。[0671]免疫-srm可以有效地同时从dbs中鉴定3种先天性pidd，同时提供有关免疫系统的额外背景信息。当怀疑存在免疫缺陷时，对许多相对罕见的免疫病症进行直接测试将产生重要的诊断价值。这种免疫-srm pidd组能够在高度多重化的过夜测定中针对多种疾患产生明确的结果，并且可以进一步扩展到基因产物经常不存在的其他pidd。免疫-srm提取、消化和富集操作简单并且在大多数情况下，适于当前的临床工作流程。从提取自dbs的少量血液执行这种测定的能力很重要且方便，因为dbs卡可以在室温下无创采集并且容易邮寄。提示pidd的免疫-srm结果在确定对于进一步测试和基因测序的需要方面的价值无法衡量。另外，该测定可以提供类似于流式细胞术或淋巴细胞亚群信息的关于免疫系统的背景辅助信息。免疫-srm为常常可能难以诊断或诊断耗时的疾病提供明确的结果，并且是对当前临床工作流程的有力补充。[0672]预示性实施例2。用于诊断共济失调毛细血管扩张症(at)的atm特征肽的免疫-srm测定。将使用特征肽atm 798、atm 1544、atm1561或它们的组合，如实施例1和本文别处所述的那样通过免疫-srm来分析来自at患者或疑似患有at的患者的dbs(如上所述)、颊拭子样本、外周血单个核细胞(pbmc)或白血细胞(wbc)，以及来自正常对照的相应样本。[0673]颊拭子样本。控制机构审查委员会(controlling institutional revie w board)批准颊拭子样本的方案，并且所有受试者都给出书面知情同意。正常对照颊拭子样本获自商业供应商处。所有颊拭子样本均在实验室中储存在-20℃或-80℃下。盲样本用寄件人提供的id标记并且经确认和同意的患者样本在收到后会被给予实验室id。皮袋中的尼龙植绒干拭子copan diagnostics 502cs01将从fisher scientific(伊利诺伊州芝加哥市(chicago，il)；目录号23-600-951)获得。2-ml低温储存内螺纹小瓶将从fisher scientific(伊利诺伊州芝加哥市；目录号12-567-501)获得。颊拭子样本采集可遵循以下方案：chla.(2016年4月4日)。颊拭子采集程序。chla-clinical pathology；(2016年7月27日)。颊dna采集说明。pathway genomics；(2017年12月14日)。颊拭子样本采集说明。otogenetics；pdxl pdxl.(2017年11月28日)。颊拭子采集程序-personalizeddx labs[video].you tube.见万维网上的youtube/3ftvhkfm71o？t＝146；和疾病控制和预防中心(cdc).(2020年7月8日)。收集、操纵和测试covid-19临床标本的临时指南。见万维网上的cdc.gov/coronavirus/2019-ncov/lab/guideli nes-clinical-specimens.html。可以如上文针对dbs所述的那样将含有细胞的颊拭子的尖端夹入管中进行溶解和消化。[0674]外周血单个核细胞(pbmc)和白血细胞(wbc)。pbmc和wbc可以通过本领域已知的方案采集，该方案为诸如以下描述的方案：kerfoot等人，proteomics clin appl,2012.6(7-8):394-402；grievink等人(2016)biopreserv biobank 14(5):410-415；corkum等人(2015)bmc immunol.16:48；和jia等人(2018)biopreserv biobank 16(2):82-91；和zhou等人(2012)clinical and vaccine immunology 19(7):1065-1074。可将分离的pbmc或wbc溶解，并且可以如上文针对dbs所述的那样对来自细胞的蛋白质进行消化。[0675]将会对免疫srm-诊断与临床诊断进行比较。如果可用，则将为每位患者获得atm基因的遗传信息和治疗信息。免疫-srm测定可以与其他特征肽多重化，所述其他特征肽包括用于测试以下的特征肽：x-cgd(cybb 131、cybb 509或它们的组合)；scid(il2rg 295、il2rg 316、cd3ε74、cd3δ24、cd3δ133或它们的组合)；ada缺乏症(ada 93)；dock8缺乏症(dock8 1272)；xlp1(sh2d1a 19、sh2d1a 110或它们的组合)；fhl2(prf 215、prf 441或它们的组合)；cvid(cd19 41、cd19 55、cd19 210、cd19 505或它们的组合)；血小板水平(cd42 128、cd42 154或它们的组合)；nk细胞水平(cd56122)；t细胞水平(cd3ε74、cd3δ24、cd3δ133或它们的组合)；或它们的组合。[0676]预示性实施例3。用于诊断家族性噬血细胞性淋巴组织细胞增多症2(fhl2)的一个或多个prf特征肽的免疫-srm测定。将使用prf215和/或prf 441特征肽如实施例1和本文别处所述的那样通过免疫-srm来分析来自fhl2患者或疑似患有fhl2的患者的dbs、颊拭子样本、pbmc或wbc(如本文所述)以及来自正常对照的相应样本。将会对免疫srm-诊断与临床诊断进行比较。如果可用，则将为每位患者获得prf-1基因的遗传信息和治疗信息。免疫-srm测定可以与其他特征肽多重化，所述其他特征肽包括用于测试以下的特征肽：x-cgd(cybb 131、cybb 509或它们的组合)；scid(il2rg 295、il2rg 316、cd3ε74、cd3δ24、cd3δ133或它们的组合)；ada缺乏症(ada 93)；dock8缺乏症(dock8 1272)；xlp1(sh2d1a 19、sh2d1a 110或它们的组合)；at(atm 798、atm 1544、atm 1561或它们的组合)；cvid(cd19 41、cd19 55、cd19 210、cd19 505或它们的组合)；血小板水平(cd42 128、cd42 154或它们的组合)；nk细胞水平(cd56 122)；t细胞水平(cd3ε74、cd3δ24、cd3δ133或它们的组合)；或它们的组合。[0677]预示性实施例4。用于诊断x连锁淋巴细胞增生综合征1(xlp1)的sh2d1a(sap)特征肽的免疫-srm测定。将使用sh2d1a 19和/或sh2d1a 110特征肽如实施例1和本文别处所述的那样通过免疫-srm来分析来自xlp1患者或疑似患有xlp1的患者的dbs、颊拭子样本、pbmc或wbc(如本文所述)以及来自正常对照的相应样本。将会对免疫srm-诊断与临床诊断进行比较。如果可用，则将为每位患者获得sap基因的遗传信息和治疗信息。免疫-srm测定可以与其他特征肽多重化，所述其他特征肽包括用于测试以下的特征肽：x-cgd(cybb 131、cybb 509或它们的组合)；scid(il2rg 295、il2rg 316、cd3ε74、cd3δ24、cd3δ133或它们的组合)；ada缺乏症(ada 93)；dock8缺乏症(dock8 1272)；fhl2(prf 215、prf 441或它们的组合)；at(atm 798、atm 1544、atm 1561或它们的组合)；cvid(cd19 41、cd19 55、cd19 210、cd19 505或它们的组合)；血小板水平(cd42 128、cd42 154或它们的组合)；nk细胞水平(cd56122)；t细胞水平(cd3ε74、cd3δ24、cd3δ133或它们的组合)；或它们的组合。[0678]预示性实施例5。用于诊断普通变异型免疫缺陷(cvid)的cd19特征肽的免疫-srm测定。将使用cd19 41、cd19 55、cd19 210和/或cd19 505特征肽如本文所述的那样通过免疫-srm来分析来自cvid患者或疑似患有cvid的患者的dbs、颊拭子样本、pbmc或wbc(如本文所述)以及来自正常对照的相应样本。将会对免疫srm-诊断与临床诊断进行比较。如果可用，则将为每位患者获得cd19基因的遗传信息和治疗信息。免疫-srm测定可以与其他特征肽多重化，所述其他特征肽包括用于测试以下的特征肽：x-cgd(cybb 131、cybb 509或它们的组合)；scid(il2rg 295、il2rg 316、cd3ε74、cd3δ24、cd3δ133或它们的组合)；ada缺乏症(ada 93)；dock8缺乏症(dock8 1272)；fhl2(prf 215、prf 441或它们的组合)；at(atm 798、atm 1544、atm 1561或它们的组合)；xlp1(sh2d1a 19、sh2d1a 110或它们的组合)；血小板水平(cd42 128、cd42 154或它们的组合)；nk细胞水平(cd56 122)；t细胞水平(cd3ε74、cd3δ24、cd3δ133或它们的组合)；或它们的组合。[0679]预示性实施例6。用于诊断严重联合免疫缺陷(scid)的il2rg和/或cd3特征肽的免疫-srm测定。将使用il2rg 295、il2rg 316、cd3ε74、cd3δ24和/或cd3δ133特征肽如本文所述的那样通过免疫-srm来分析来自scid患者或疑似患有scid的患者的dbs、颊拭子样本、pbmc或wbc(如本文所述)以及来自正常对照的相应样本。将会对免疫srm-诊断与临床诊断进行比较。如果可用，则将为每位患者获得il2rg、cd3ε、cd3δ和/或在scid中突变的其它基因的遗传信息和治疗信息。免疫-srm测定可以与其他特征肽多重化，所述其他特征肽包括用于测试以下的特征肽：x-cgd(cybb 131、cybb 509或它们的组合)；ada缺乏症(ada 93)；dock8缺乏症(dock8 1272)；fhl2(prf 215、prf 441或它们的组合)；at(atm798、atm 1544、atm 1561或它们的组合)；xlp1(sh2d1a 19、sh2d1a 110或它们的组合)；cvid(cd19 41、cd19 55、cd19 210、cd19 505或它们的组合)；血小板水平(cd42 128、cd42 154或它们的组合)；nk细胞水平(cd56 122)；t细胞水平(cd3ε74、cd3δ24、cd3δ133或它们的组合)；或它们的组合。[0680]预示性实施例7。用于测量t细胞水平的cd3特征肽的免疫-srm测定。将使用cd3ε74、cd3δ24和/或cd3δ133特征肽，通过免疫-srm来分析来自受试者和正常对照的dbs、颊拭子样本、pbmc或wbc(如本文所述)以测量任何受试者中的t细胞水平。在特定实施方案中，免疫-srm测定使用cd3ε74、cd3δ24和/或cd3δ133特征肽作为次要生物标志物来支持scid的诊断。在将cd3ε74、cd3δ24和/或cd3δ133特征肽用作次要生物标志物来支持scid的诊断的情况下，用于诊断scid的主要特征肽可包括：il2rg 295、il2rg 316、cd3ε74、cd3δ24和/或cd3δ133。免疫-srm测定可以与其他特征肽多重化，所述其他特征肽包括用于测试以下的特征肽：x-cgd(cybb 131、cybb 509或它们的组合)；ada缺乏症(ada 93)；dock8缺乏症(dock8 1272)；fhl2(prf 215、prf 441或它们的组合)；at(atm 798、atm 1544、atm 1561或它们的组合)；xlp1(sh2d1a 19、sh2d1a 110或它们的组合)；cvid(cd19 41、cd19 55、cd19 210、cd19 505或它们的组合)；血小板水平(cd42 128、cd42154或它们的组合)；nk细胞水平(cd56 122)；或它们的组合。[0681](xiii)结尾段落。本文所公开的每个实施方案可包含以下、基本上由或由以下组成：所述实施方案特别陈述的要素、步骤、成分或组分。因此，术语“包含/包括(include)”或“包含/包括(including)”应解释为叙述：“包括/包含(comprise)、由……组成或基本上由……组成”。过渡术语“包含/包括(comprise)”或“包含/包括(comprises)”意指具有但不限于，并且允许包括未指定的要素、步骤、成分或组分，即使在较大的量时也是如此。过渡短语“由……组成”排除未指定的任何要素、步骤、成分或组分。过渡短语“基本上由……组成”将实施方案的范围限制为指定的要素、步骤、成分或组分以及并不实质地影响所述实施方案的那些要素、步骤、成分或组分。实质性影响将导致利用从新生儿获得的dbs、本文公开的抗体和免疫-srm来可靠地诊断x-cgd、xlp1、fhl2、at、cvid、ada缺乏症和/或dock8缺乏症的能力的统计学上显著的降低。[0682]除非另外指示，否则说明书和权利要求书中所用的表示成分的量、性质如分子量、反应条件等的所有数字应当理解为在所有情况下都由术语“约”修饰。因此，除非有相反的指示，否则说明书和所附权利要求书中所陈述的数值参数都是近似值，所述值可根据本发明要寻求获得的所需性质而变化。在最低限度，并且不试图将等效物原则的应用限制于权利要求的范围，每个数值参数均应当至少根据报告的有效数字的数值和通过应用普通四舍五入技术来解读。当要求进一步清楚时，术语“约”在与陈述的数值或范围结合使用时具有本领域技术人员合理地归于它的含义，即将稍微大于或稍微小于陈述值或范围表示为在以下范围内：陈述值±20％；陈述值±19％；陈述值±18％；陈述值±17％；陈述值±16％；陈述值±15％；陈述值±14％；陈述值±13％；陈述值±12％；陈述值±11％；陈述值±10％；陈述值±9％；陈述值±8％；陈述值±7％；陈述值±6％；陈述值±5％；陈述值±4％；陈述值±3％；陈述值±2％；或陈述值±1％。[0683]尽管阐述本发明广泛范围的数值范围和参数是近似值，但具体实例中列出的数值是尽可能精确地报告的。然而，任何数值固有地含有由其各自的试验测量中存在的标准偏差所必然引起的某些误差。[0684]除非本文另外指示或者与上下文明显矛盾，否则在描述本发明的上下文中(尤其在所附权利要求书的上下文中)使用的术语“一个/种”、“所述”以及类似的指代语应解读为涵盖单数和复数指代语。本文中列举数值的范围仅意在作为一种单个地提及落在所述范围内的每个单独数值的速记方法。除非本文另外指出，将每个单个值并入说明书，如同其在本文中被单独引用一样。除非本文另有说明或明确与上下文相矛盾，否则本文所述的所有方法均可按任何合适的顺序执行。本文提供的任何和所有实施例或示例性语言(例如，“诸如”)的使用仅意在更好地说明本发明，而不会对原本要求保护的本发明的范围构成限制。说明书中的任何语言都不应解读为指示任何未要求保护的要素是实施本发明所必需的。[0685]本文所公开的本发明的替代要素或实施方案的分组不应解读为是限制性的。每个组的成员可单个地提及和要求保护，或以与所述组的其它成员或本文中出现的其它要素的任何组合形式提及和要求保护。可预见，出于简便和/或可专利性的原因，一个组的一个或多个成员可包括于所述组内，或从所述组中删除。当出现任何这种包括或删除时，本说明书被认为含有所修改的组，因此满足所附权利要求中使用的所有马库什组(markush group)的书面描述。[0686]本文描述了本发明的某些实施方案，包括为本发明人所知用于实施本发明的最佳模式。当然，本领域技术人员在阅读前面的描述后将会明了这些所描述实施方案的变化形式。发明人希望熟练的技术人员在适当情况下使用这样的变更，且发明人意图将本发明用于以本文具体描述以外的方式实践。因此，本发明包括在适用法律允许的所附的权利要求中列举的主题的所有修改形式和等效形式。此外，除非本文另外指示或者与上下文明显矛盾，否则呈所有可能变化形式的上述要素的任何组合都涵盖在本发明内。[0687]此外，在整个说明书中，已经大量参考了专利、印刷的出版物、期刊文章和其他书面文本(本文的参考材料)。每一参考材料关于它们的参考教义单个地以引用的方式整体并入本文。[0688]应当理解，本文所公开的本发明的实施方案是对本发明原理的说明。可采用的其他修改形式也在本发明的范围内。因此，例如但不限于，可根据本文的教义利用本发明的替代性配置。因而，本发明不限于明确示出和描述的实施方案。[0689]本文示出的细节是作为实例并且仅出于说明性讨论本发明的优选实施方案的目的，并且之所以呈现所述细节，是为了提供认为是本发明的各个实施方案的原理和概念方面的最有用和易理解的描述的内容。就此而言，除对于本发明的基本理解所必需的之外，没有企图更详细地示出本发明的结构细节，借助于附图和/或实施例所作的描述使得本领域技术人员明了如何可以在实践中体现本发明的若干形式。[0690]除非在实施例中明确并毫无疑问地修改或是当含义的应用使得任何构建无意义或基本上无意义，否则在本公开中使用的定义和解释意指并且旨在控制任何未来构建。在术语的构建将使它无意义或基本上无意义的情况下，定义应该从韦氏字典(webster's dictionary)第3版或本领域普通技术人员已知的字典诸如生物化学和分子生物学牛津字典(attwood t等人编辑，oxford university press,oxford,2006)中取得。









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