抗原性多聚呼吸道合胞病毒多肽的制作方法

有机化合物处理,合成应用技术抗原性多聚呼吸道合胞病毒多肽本技术是申请号为202080039105.1的中国专利申请(申请日：2020年4月1日，发明名称：抗原性多聚呼吸道合胞病毒多肽)的分案申请。1.本技术要求在2019年4月2日提交的美国临时申请号62/828,302的优先权权益，并且将其通过引用以其整体并入。2.本技术含有已经以ascii格式电子提交并且通过引用以其整体特此并入的序列表。在2020年3月30日创建的所述ascii副本被命名为2020-04-01_01121-0042-00pct_st25.txt并且大小为55.9kb。3.即使在疫苗学领域取得了许多成功，仍需要新的突破来保护人类免受许多威胁生命的感染性疾病的影响。当前许多已获许可的疫苗都依赖十年前的技术来产生活的减毒病原体或灭活的杀死病原体，所述病原体具有固有的安全性问题，并且在许多情况下，仅刺激短暂的弱免疫应答，从而需要施用多个剂量。虽然遗传学和生物化学工程的进步已经使得开发针对具有挑战性的疾病靶标的治疗剂成为可能，但在疫苗学领域的这些应用尚未完全实现。重组多肽技术现在允许设计最佳抗原。另外，纳米颗粒已经越来越多地展示出用于最佳抗原呈递和靶向药物递送的潜力。已经显示，具有多个附接抗原的纳米颗粒具有由其分子货物的多价展示提供的增加的结合亲合力和由于其纳米尺寸更有效地跨过生物屏障的能力。与流感病毒血凝素(ha)多肽融合的幽门螺杆菌(helicobacter pylori/h.pylori)铁蛋白纳米颗粒已经在小鼠流感模型中允许改善的抗原稳定性和增加的免疫原性(参见kanekiyo等人,nature 499:102-106(2013))。此融合多肽自组装成八面体对称性纳米颗粒并且呈递8个三聚ha刺突，从而在与佐剂一起使用时在各种临床前模型中产生稳健的免疫应答。4.呼吸道合胞病毒(rsv)是婴儿的严重呼吸系统疾病的主要原因，并且是老年人的呼吸系统疾病的主要原因。尽管进行了数十年的研究，但仍未满足疫苗需求。虽然对疫苗的需求是明确的，但在20世纪60年代，当时使用福尔马林灭活的rsv病毒进行的临床试验在婴儿中在rsv感染后使疾病更加严重，使rsv疫苗的开发受到阻碍。参见，hurwitz(2011)expert rev vaccines 10(10):1415-1433。最近，使用处于其融合后构象的rsv f抗原进行的临床项目未能在成人中引发足够的功效。参见，faloon等人(2017)jid 216:1362-1370。5.rsv g是在很大程度上非结构化的多肽，其中所述分子的前三分之一和后三分之一包含几个o-糖基化位点。当在哺乳动物细胞中表达时，rsv g的胞外域是以质量计比氨基酸更多的聚糖。此外，这些侧翼区保守性差，从而给出g高变区的名称。相反，g的中央区在rsv的两种主要株系a与b株系之间相当保守。因此，此结构域被称为rsv g中央保守区(gcc)。6.gcc区被进一步细分为近端区和远端区，所述近端区是由疏水且富含脯氨酸的序列稳定的结构化环，所述远端区由通过两个二硫键保持在一起形成所谓的“胱氨酸套索”的两个螺旋组成。远端半胱氨酸套索含有cx3c基序，所述基序被证明是病毒针对hae细胞上的cx3c受体的结合基序。近端区具有rsv g的唯一良好表征的中和表位131-2g表位。虽然不存在完整rsv gcc的结构，但数据表明，这两个结构化区域形成更高级的三级结构，所述三级结构将近端区放置地非常接近于远端区，因此解释了nab 131-2g为什么可以在空间上阻断cx3c位点从而抑制病毒与cx3cr受体的结合。7.鉴于大约30个氨基酸的结构域的小尺寸，单独的gcc是差的免疫原。我们先前证明可以将此结构域合成为肽并且与铁蛋白纳米颗粒化学缀合，从而形成生物缀合物gcc-np。这种先导抗原引发有效的中和应答，如在hae中和测定中观察到的。此外，所述抗原缺乏可能使免疫分散的高变区，这将使g胞外域成为差的疫苗候选物。8.在此，提出了一组涉及rsv g多肽的新多肽、纳米颗粒、组合物、方法和用途。产生了新颖的rsv g多肽，包括gcc肽作为多聚抗原呈递的多肽。来自rsv a株系(实验室a2株系)和rsv b株系(实验室b1株系)二者的gcc多肽被用于提供更广泛的保护范围。技术实现要素：9.本公开文本的目的是提供可以提供以上讨论的一个或多个优点或者至少为公众提供有用选择的组合物、试剂盒、方法和用途。10.在一些实施方案中，提供了一种包含多于两个rsv gcc单体的抗原性rsv g多肽，其中所述多肽不包含铁蛋白。在一些实施方案中，所述抗原性rsv g多肽是单链。11.在一些实施方案中，提供了抗原性rsv g多肽，其中所述g多肽是展示为颗粒(例如，多聚体)的gcc多肽。在一些实施方案中，包含一个gcc a株系和一个gcc b株系的二聚体与n末端或c末端折叠子标签基因地融合在一起。在从表达它的细胞(例如，大肠杆菌(e.coli))重新折叠后，所述折叠子标签三聚化，并且所得的颗粒呈现gcc多肽的六个拷贝(a株系的3个和b株系的3个)，这在本文中有时被称为“gcc b1-a2-折叠子”或“gcc六聚体”。在一些实施方案中，四个gcc肽(以任何顺序，从n末端到c末端包括b1、a2、b1和a2)通过富含谷氨酸的接头基因地融合在一起以产生gcc肽的可溶性四聚体(在本文中有时称为“gcc四聚体”)。所述gcc四聚体缺乏多聚化结构域，并且因此不形成颗粒。12.进一步的实施方案在本文中公开如下：实施方案01.一种包含多于两个rsv gcc单体的抗原性rsv g多肽，其中所述多肽不包含铁蛋白。实施方案02.根据实施方案1所述的抗原性rsv g多肽，其中所述多肽是单链。实施方案03.一种抗原性rsv g单链多肽，所述多肽包含多于两个rsv gcc单体。实施方案04.根据前述实施方案中任一项所述的抗原性rsv g多肽，所述多肽包含3、4、5、6、7、8、9或10个gcc单体。实施方案05.根据前述实施方案中任一项所述的抗原性rsv g多肽，所述多肽包含a)仅株系a的gcc单体；b)仅株系b的gcc单体；或c)株系a和株系b的gcc单体。实施方案06.根据前述实施方案中任一项所述的抗原性rsv g多肽，所述多肽包含株系a的多于两个gcc单体。实施方案07.根据前述实施方案中任一项所述的抗原性rsv g多肽，所述多肽包含株系b的多于两个gcc单体。实施方案08.根据前述实施方案中任一项所述的抗原性rsv g多肽，所述多肽包含株系a的至少一个gcc单体和株系b的至少一个gcc单体。实施方案09.根据前述实施方案中任一项所述的抗原性rsv g多肽，其中所述多肽是三聚体、四聚体或六聚体。实施方案10.根据前述实施方案中任一项所述的抗原性rsv g多肽，所述多肽包含株系a的三个gcc单体。实施方案11.根据前述实施方案中任一项所述的抗原性rsv g多肽，所述多肽包含株系b的三个gcc单体。实施方案12.根据前述实施方案中任一项所述的抗原性rsv g多肽，所述多肽包含株系a的三个gcc单体和株系b的三个gcc单体。实施方案13.根据前述实施方案中任一项所述的抗原性rsv g多肽，所述多肽包含多聚化结构域。实施方案14.根据前述实施方案中任一项所述的抗原性rsv g多肽，所述多肽包含1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个多聚化结构域。实施方案15.根据实施方案13或14所述的抗原性rsv g多肽，其中所述多聚化结构域是折叠子。实施方案16.根据实施方案13或14所述的抗原性rsv g多肽，其中所述多聚化结构域包含seq id no:9。实施方案16.1.根据实施方案13或14所述的抗原性rsv g多肽，其中所述多聚化结构域包含seq id no:13。实施方案17.根据前述实施方案中任一项所述的抗原性rsv g多肽，所述多肽包含株系a的两个gcc单体和株系b的两个gcc单体。实施方案18.根据实施方案17所述的抗原性rsv g多肽，其中株系a和b的所述单体在单链中按顺序交替。实施方案19.根据前述实施方案中任一项所述的抗原性rsv g多肽，所述多肽包含与seq id no:4-8中的任一个具有80％、85％、90％、95％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。实施方案20.根据前述实施方案中任一项所述的抗原性rsv g多肽，其中所述抗原性rsv g多肽由多核苷酸编码，所述多核苷酸编码至少两个rsv gcc单体和至少一个多聚化结构域；或至少三个rsv gcc单体。实施方案21.根据实施方案20所述的抗原性rsv g多肽，其中所述抗原性rsv g多肽由多核苷酸编码，所述多核苷酸编码至少两个rsv gcc单体和至少一个多聚化结构域。实施方案22.根据实施方案21所述的抗原性rsv g多肽，其中至少一个gcc单体来自株系a，并且至少一个gcc单体来自株系b。实施方案23.根据实施方案20-22中任一项所述的抗原性rsv g多肽，其中编码来自株系a的rsv gcc的所述多核苷酸编码：a.与seq id no:3相同的氨基酸序列；或b.与seq id no:3相同但没有c末端k的氨基酸序列；或c.与seq id no:4的氨基酸2-42相同的氨基酸序列。实施方案24.根据实施方案20-22中任一项所述的抗原性rsv g多肽，其中编码来自株系b的rsv gcc的所述多核苷酸编码：a.与seq id no:10相同的氨基酸序列；或b.与seq id no:8的氨基酸10-51相同的氨基酸序列。实施方案25.根据实施方案20-24中任一项所述的抗原性rsv g多肽，其中编码所述多聚化结构域的多核苷酸编码与以下相同的氨基酸序列：a.seq id no:11；或b.seq id no:7的氨基酸132-175。实施方案25.1.根据实施方案13、15、16.1、19或22中任一项所述的抗原性rsv g多肽，所述多肽包含与seq id no:14具有80％、85％、90％、95％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。实施方案26.根据实施方案20-25.1中任一项所述的抗原性rsv g多肽，所述多肽能够在所述多核苷酸在宿主细胞中表达后形成gcc颗粒。实施方案27.根据实施方案26所述的抗原性rsv g多肽，其中所述多肽是颗粒，并且所述颗粒是六聚体。实施方案28.根据实施方案26所述的抗原性rsv g多肽，其中所述六聚体包含三个rsv gcc株系a单体和三个rsv gcc株系b单体。实施方案29.根据实施方案20所述的抗原性rsv g多肽，其中所述抗原性rsv g多肽由多核苷酸编码，所述多核苷酸编码至少三个rsv gcc单体。实施方案30.根据实施方案29所述的抗原性rsv g多肽，其中所述多核苷酸编码四个rsv gcc单体。实施方案31.根据实施方案30所述的抗原性rsv g多肽，其中所述多核苷酸编码两个属于株系a的gcc单体和两个属于株系b的gcc单体。实施方案32.根据实施方案31所述的抗原性rsv g多肽，其中所述多核苷酸以交替顺序编码株系a的所述两个gcc单体和株系b的所述两个gcc单体。实施方案33.根据前述实施方案中任一项所述的抗原性rsv g多肽，其中所述抗原性rsv g多肽能够引发对rsv的免疫应答和/或保护受试者免受rsv感染。实施方案34.一种包含根据实施方案1-33中任一项所述的抗原性rsv g多肽的组合物，所述组合物进一步包含药学上可接受的载体。实施方案35.根据实施方案1-34中任一项所述的抗原性rsv g多肽或组合物，用于在引发对rsv的免疫应答的方法或保护受试者免受rsv感染中使用。实施方案36.一种引发对rsv的免疫应答或保护受试者免受rsv感染的方法，所述方法包括向受试者施用根据实施方案1-34中任一项所述的抗原性rsv g多肽或组合物。实施方案37.根据实施方案34所述的抗原性rsv g多肽或组合物或者根据实施方案36所述的方法，其中所述受试者是人。实施方案38.一种编码根据实施方案1-33中任一项所述的抗原性rsv多肽的核酸，任选地其中所述核酸是mrna。13.另外的目的和优点将部分阐述于随后的描述中，并且部分将从所述描述中明显看出，或者可以通过实践获知。所述目的和优点将借助所附权利要求中特别指出的要素和组合来实现和获得。14.应理解，上文的发明内容与下文的具体实施方式二者均仅是示例性和解释性的，并且对权利要求无限制性。15.并入本说明书并且构成本说明书的一部分的附图说明了几个实施方案，并且连同所述描述一起用于解释本文所述的原理。附图说明16.图1a-图1b.与铁蛋白纳米颗粒缀合的rsv g中央结构域肽(gcc)的表征。(图1a)考马斯染色的sds-page凝胶，其显示出rsv g中央结构域(seq id no.12)与铁蛋白纳米颗粒的点击缀合，从而形成gcc-np抗原。(图1b)gcc-np的结构模型。17.图2a-图2c.示例性rsv嵌合抗原。(图2a)使一个b1株系gcc肽序列与a2株系gcc肽序列融合，然后与折叠子三聚化标签融合。展示了假设的经折叠的构建体的模型化结构，其中串联gcc肽凭借折叠子标签三聚化，并且因此展示出gcc肽的6个拷贝。有时被称为“b1-a2-折叠子”。(图2b)使来自a和b株系的gcc肽序列中的每一个的两个拷贝以(任选地以a2-b1-a2-b1的顺序)融合，从而形成四聚体嵌合体多肽。不像b1-a2-折叠子，此构建体不需要折叠成更高级的三级结构。(图2c)使a2株系gcc肽的一个拷贝与α颗粒原聚体在其n末端融合，同时使b1株系gcc肽的一个拷贝与c末端融合。显示了假设的经折叠的构建体的模型化结构，其中α原聚体形成了在表面上展示了gcc肽的许多拷贝的颗粒核心。18.图3a-图3c.由低剂量(0.5μg)的rsv g抗原引发的中和抗体效价。(图3a)通过用来自第二次免疫后两周(2wp2)取的血清的与af03一起配制的g抗原免疫引发的rsv a株系hae中和效价。来自未经处理血清和超免疫血清的中和应答分别显示为阴性对照和阳性对照。在每个图中，在免疫中使用的免疫原指示在x轴下方。(图3b)通过用来自第三次免疫后两周取的血清的与af03一起配制的g抗原免疫引发的rsv a株系hae中和效价。标记了对照血清和免疫原。(图3c)通过用来自第三次免疫后两周取的血清的与af03一起配制的g抗原免疫引发的rsv b株系hae中和效价。标记了对照血清和免疫原。19.图4a-图4b.由rsv g抗原引发的rsv a2株系抗原结合抗体应答。(图4a)由高剂量(5μg)的rsv g嵌合抗原引发的在第二次注射后两周(浅灰色框)和第三次注射后两周(深灰色框)测量的针对gcc a2株系引发的gcc结合抗体应答。未经处理小鼠血清应答显示为阴性对照。免疫原标记在x轴下方。(图4b)由低剂量(0.5μg)的rsv g嵌合抗原引发的在第二次注射后两周(浅灰色框)和第三次注射后两周(深灰色框)测量的针对gcc a2株系引发的gcc结合抗体应答。如上标记未经处理小鼠血清和免疫原。20.图5a-图5b.由rsv g抗原引发的rsv b1株系抗原结合抗体应答。(图5a)由高剂量(5μg)的rsv g嵌合抗原引发的在第二次注射后两周(浅灰色框)和第三次注射后两周(深灰色框)测量的针对gcc b1株系引发的gcc结合抗体应答。未经处理小鼠血清应答显示为阴性对照。免疫原标记在x轴下方。(图5b)由低剂量(0.5μg)的rsv g嵌合抗原引发的在第二次注射后两周(浅灰色框)和第三次注射后两周(深灰色框)测量的针对gcc b1株系引发的gcc结合抗体应答。如上标记未经处理小鼠血清和免疫原。21.图6a是实施例5中描述的抗体结合实验的示意图。22.图6b显示了来自参考抗原(圆形)和seq id no:14的构建体(方形)的实施例5中描述的抗体结合实验的结果。虚线指示来自空白孔的基线信号。纵轴和横轴的单位分别是log od单位(udo)和log au/ml(au：任意单位)。具体实施方式23.提供了抗原性rsv g多肽，所述多肽在单独施用或与作为单独的分子的佐剂一起施用时具有抗原性。在一些实施方案中，所述抗原性rsv g多肽包含多于两个rsv gcc单体。在一些实施方案中，所述rsv g多肽不包含铁蛋白。在一些实施方案中，所述rsv g多肽是单链。在一些实施方案中，所述rsv g多肽包含多聚化结构域。在一些实施方案中，所述rsv g多肽是颗粒/多聚体，例如，三聚体、四聚体或六聚体。a.定义[0024]“f多肽”或“rsv f多肽”是指在病毒进入期间负责驱动病毒包膜与宿主细胞膜融合的rsv多肽。[0025]如本文所用，“g多肽”或“rsv g多肽”是指负责使rsv与人气道上皮细胞缔合的附着多肽。示例性的野生型rsv g氨基酸序列提供为seq id no:1。rsv g多肽包含位于细胞外的胞外域(大致为rsv g(seq id no:2)的氨基酸66-297)。在rsv g的胞外域内是中央保守区(gcc或ccr，大致为seq id no:1的氨基酸151-193)。rsv g的ccr包含cx3c基序。cx3c基序介导g多肽与cx3cr1受体的结合。[0026]如本文所用，“原聚体”是指寡聚多肽的结构单元。[0027]如本文所用，“铁蛋白”或“铁蛋白多肽”是指与幽门螺杆菌铁蛋白(seq id no:208或209)或另一种铁蛋白(诸如激烈火球菌(p.furiosus)铁蛋白、粉纹夜蛾(trichoplusia ni)铁蛋白或人铁蛋白)具有可检测的序列同一性的多肽，其用于例如在细胞内或组织中存储铁或在血流中携带铁。此类示例性铁蛋白包括作为两条多肽链(称为重链和轻链)出现的那些(例如，粉纹夜蛾和人铁蛋白)。铁蛋白可以是全长天然存在的序列的片段。[0028]如本文所用，“单体”是指尚未与其他分子一起组装的单个分子。[0029]如本文所用，“颗粒”或“多聚体”是指自组装的球状形式。示例性“颗粒”包括包含多聚化结构域(例如，折叠子)的构建体。多聚化结构域可以起到将分子的多个拷贝聚集在一起的作用。除了在有区别的情况下，“颗粒”和“多聚体”在本文中可互换使用。示例性颗粒是“gcc b1-a2-折叠子”，它形成六聚体(gcc b1的三个拷贝和gcc a2的三个拷贝)。本文所述的“gcc四聚体”不是“颗粒/多聚体”，因为它不是自组装的球状形式。[0030]“rsv gcc多肽”包括rsv gcc的单体形式和颗粒/多聚体形式。[0031]如本文所用，“免疫应答”是指免疫系统的细胞(诸如b细胞、t细胞、树突细胞、巨噬细胞或多形核细胞)对刺激物(诸如抗原或疫苗)的应答。免疫应答可以包括身体的参与宿主防御应答的任何细胞，包括例如分泌干扰素或细胞因子的上皮细胞。免疫应答包括但不限于先天性和/或适应性免疫应答。如本文所用，“保护性免疫应答”是指保护受试者免受感染(例如，预防感染或预防与感染相关的疾病的发生)的免疫应答。测量免疫应答的方法是本领域熟知的，并且包括例如通过测量淋巴细胞(诸如b或t细胞)的增殖和/或活性、细胞因子或趋化因子的分泌、炎症、抗体产生等。“抗体应答”是产生抗体的免疫应答。[0032]如本文所用，“抗原”是指引发免疫应答的因子；和/或当暴露或施用于生物体时由t细胞受体结合的因子(例如，当由mhc分子呈递时)或与抗体(例如，由b细胞产生)结合的因子。在一些实施方案中，抗原在生物体中引发体液应答(例如，包括抗原特异性抗体的产生)。可替代地或另外，在一些实施方案中，抗原在生物体中引发细胞应答(例如，涉及其受体与抗原特异性相互作用的t细胞)。特定抗原可以在靶标生物体(例如，小鼠、兔、灵长类动物、人)的一个或几个成员中引发免疫应答，但是不能在靶标生物体物种的所有成员中引发免疫应答。在一些实施方案中，抗原在靶标生物体物种的至少约25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％的成员中引发免疫应答。在一些实施方案中，抗原与抗体和/或t细胞受体结合，并且在生物体中可能诱导或可能不诱导特定生理应答。在一些实施方案中，例如，抗原可以在体外与抗体和/或t细胞受体结合，无论在体内是否发生这种相互作用。在一些实施方案中，抗原与特定体液或细胞免疫的产物(包括由异源免疫原诱导的那些)反应。[0033]如本文所用，“佐剂”是指非特异性增强对抗原的免疫应答的物质或媒介物。佐剂可以包括但不限于其上吸附有抗原的矿物质(例如，明矾、氢氧化铝或磷酸盐)的悬浮液；抗原溶液乳化在矿物油中或水中的油包水或水包油乳剂(例如，弗氏不完全佐剂)。有时包括杀死的分枝杆菌(例如，弗氏完全佐剂)以进一步增强抗原性。免疫刺激寡核苷酸(例如，cpg基序)也可以用作佐剂(例如，参见美国专利号6,194,388；6,207,646；6,214,806；6,218,371；6,239,116；6,339,068；6,406,705；和6,429,199)。佐剂还可以包括生物分子，诸如toll样受体(tlr)激动剂和共刺激分子。佐剂可以作为单独的分子在组合物中施用或与颗粒共价结合(缀合)。[0034]“抗原性rsv g多肽”在本文中用于指代包含全部或部分rsv g氨基酸序列的多肽，所述氨基酸序列的长度足以使所述分子具有关于rsv的抗原性。抗原性可以是作为进一步包含异源序列(诸如α序列)的构建体的一部分的rsv序列的特征。也就是说，如果rsv序列是进一步包含异源序列的构建体的一部分，则所述构建体可以充当产生抗rsv抗体的抗原就足够了，而不管没有所述异源序列的rsv序列是否可以如此。[0035]“α序列”是seq id no:9的序列。[0036]在一些实施方案中，“抗原性rsv gα多肽”包含与seq id no:6具有至少80％、85％、90％、95％、99％或100％同一性的多肽。在一些实施方案中，所述抗原性rsv gα多肽包含含有rsv gcc和能够使rsv gcc多聚化的seq id no:9或seq id no:9的片段的单链多肽。所述抗原性rsv gα多肽可以进一步包含免疫刺激部分。抗原性可以是作为较大构建体的一部分的rsv g序列的特征。也就是说，所述构建体可以充当针对rsv g多肽的抗原就足够了，而不管没有α(和免疫刺激部分，如果适用的话)的rsv g多肽是否可以如此。然而，要清楚的是，抗原性rsv g多肽不需要包含α序列。“抗原性rsv g多肽”在本文中用于指代可以是抗原性rsv gα多肽或不包含α序列的抗原性rsv g多肽的多肽。[0037]如本文所用，“受试者”是指动物界的任何成员。在一些实施方案中，“受试者”是指人。在一些实施方案中，“受试者”是指非人动物。在一些实施方案中，受试者包括但不限于哺乳动物、鸟、爬行动物、两栖动物、鱼、昆虫和/或蠕虫。在某些实施方案中，所述非人受试者是哺乳动物(例如，啮齿动物、小鼠、大鼠、兔、猴、狗、猫、绵羊、牛、灵长类动物和/猪)。在一些实施方案中，受试者可以是转基因动物、基因工程化动物和/或克隆。在本发明的某些实施方案中，所述受试者是成人、青少年或婴儿。在一些实施方案中，术语“个体”或“患者”被使用并且旨在与“受试者”可互换。[0038]如本文所用，术语“疫苗接种(vaccination)”或“疫苗接种(vaccinate)”是指施用旨在例如对致病因子产生免疫应答的组合物。疫苗接种可以在暴露于致病因子和/或发生一种或多种症状之前、期间和/或之后施用，并且在一些实施方案中，在暴露于所述因子之前、期间和/或之后不久施用。在一些实施方案中，疫苗接种包括间隔适当时间多次施用疫苗接种组合物。[0039]本公开文本描述了分别与给定核酸序列或氨基酸序列(参考序列)具有一定同一性程度的序列。[0040]两个核酸序列之间的“序列同一性”指示序列之间相同的核苷酸的百分比。两个氨基酸序列之间的“序列同一性”指示序列之间相同的氨基酸的百分比。[0041]术语“相同％”、“同一性％”或类似术语旨在具体是指在待比较的序列之间的最佳比对中相同的核苷酸或氨基酸的百分比。所述百分比是纯粹统计学的，并且两个序列之间的差异可以但不一定随机分布在待比较的序列的整个长度上。两个序列的比较通常通过以下方式进行：在最佳比对之后，关于区段或“比较窗口”比较所述序列，以鉴定相应序列的局部区域。用于比较的最佳比对可以手动进行，或者借助smith和waterman,1981,ads app.math.2,482的局部同源性算法进行、借助needleman和wunsch,1970,j.mol.biol.48,443的局部同源性算法进行、借助pearson和lipman,1988,proc.natl acad.sci.usa 88,2444的相似性搜索算法进行、或借助使用所述算法的计算机程序(威斯康星遗传学软件包(wisconsin genetics software package)中的gap、bestfit、fasta、blast p、blast n和tfasta，遗传计算机组(genetics computer group)，威斯康星州麦迪逊科学大道(science drive)575号)进行。[0042]通过以下方式获得同一性百分比：确定待比较的序列对应的相同位置的数目，用此数目除以比较的位置的数目(例如，参考序列中的位置的数目)，并且将此结果乘以100。[0043]在一些实施方案中，同一性程度是针对区域给出的，所述区域是参考序列的整个长度的至少约50％、至少约60％、至少约70％、至少约80％、至少约90％或约100％。例如，如果参考核酸序列由200个核苷酸组成，则针对至少约100、至少约120、至少约140、至少约160、至少约180或约200个核苷酸(在一些实施方案中为连续核苷酸)给出同一性程度。在一些实施方案中，针对参考序列的整个长度给出同一性程度。[0044]分别与给定核酸序列或氨基酸序列具有特定同一性程度的核酸序列或氨基酸序列可以具有所述给定序列的至少一种功能特性，例如并且在一些情况下，在功能上等同于所述给定序列。一种重要的特性包括充当细胞因子的能力，特别是当施用于受试者时。在一些实施方案中，与给定核酸序列或氨基酸序列具有特定同一性程度的核酸序列或氨基酸序列在功能上等同于所述给定序列。[0045]如本文所用，术语“试剂盒”是指一组经包装的相关组分，诸如一种或多种化合物或组合物和一种或多种相关材料，诸如溶剂、溶液、缓冲液、说明书或干燥剂。b.抗原性rsv g多肽[0046]本文提供了抗原性rsv g多肽，所述多肽包含多于两个rsv gcc多肽。在一些实施方案中，所述gcc多肽是gcc单体。在一些实施方案中，提供了包含多于两个rsv gcc单体的抗原性rsv g多肽，其中所述多肽不包含铁蛋白。在一些实施方案中，抗原性rsv g多肽提供为单链，其中所述单链包含多于两个rsv gcc单体。所述rsv gcc多肽/单体可以包含rsv gcc的整个序列或rsv gcc的一部分。在一些实施方案中，所述rsv gcc缺乏最后一个、两个或三个氨基酸。在一些实施方案中，所述rsv gcc缺乏最后一个氨基酸(例如，在seq id no:3的n末端处的k)。与野生型序列(seq id no:3)相比，所述rsv gcc多肽可以包含修饰，例如像在seq id no:3的氨基酸编号7处的n→s取代。[0047]在一些实施方案中，所述rsv gcc多肽来自rsv a株系(uniprotkb/swiss-prot：p27022.1；seq id no:1)。在一些实施方案中，所述rsv gcc多肽来自rsv b株系(uniprotkb/swiss-prot：o36633.1；seq id no:226)。在一些实施方案中，来自株系a的所述rsv gcc多肽包含seq id no:3的氨基酸。在一些实施方案中，来自株系a的所述rsv gcc多肽包含seq id no:3的氨基酸，其中seq id no:3的末端k不存在。在一些实施方案中，来自株系a的所述rsv gcc多肽包含seq id no:4的氨基酸2-42。在一些实施方案中，来自株系b的所述rsv gcc多肽包含seq id no:10的氨基酸。在一些实施方案中，来自株系b的所述rsv gcc多肽包含seq id no:8的氨基酸10-51。[0048]在一些实施方案中，所述rsv gcc多肽包含全部或部分gcc区(rsv g(seq id no:1)的氨基酸151-193)。在一些实施方案中，所述rsv g多肽包含cx3c基序。在一些实施方案中，所述rsv g多肽与cx3cr1受体结合。[0049]在一些实施方案中，所述rsv g多肽未被糖基化。例如，rsv g多肽可以由于n或s/t残基的截短或突变(例如，分别突变为q或a)或其组合而缺乏nxs/tx糖基化位点。[0050]在一些实施方案中，rsv g多肽包含3、4、5、6、7、8、9或10个gcc单体。在一些实施方案中，rsv g多肽包含1-2、1-5、1-10、1-20、1-25、1-30、1-40、1-50、1-60、1-70、1-80、1-90、1-100或1-120个gcc单体。在一些实施方案中，rsv g多肽包含3个gcc单体。在一些实施方案中，rsv g多肽包含6个gcc单体。在一些实施方案中，rsv g多肽包含120个gcc单体。在一些实施方案中，所述抗原性rsv g多肽仅包含株系a的gcc单体。在一些实施方案中，所述抗原性rsv g多肽仅包含株系b的gcc单体。在一些实施方案中，所述抗原性rsv g多肽包含株系a和株系b的gcc单体。[0051]在一些实施方案中，所述抗原性rsv g多肽包含株系a的多于两个gcc单体。在一些实施方案中，所述抗原性rsv g多肽包含株系b的多于两个gcc单体。在一些实施方案中，所述抗原性rsv g多肽包含株系a的至少一个gcc单体和株系b的至少一个gcc单体。在一些实施方案中，所述抗原性rsv g多肽包含株系a的一个gcc单体和株系b的一个gcc单体。在一些实施方案中，所述抗原性rsv g多肽包含两个gcc单体，均来自株系a。在一些实施方案中，所述抗原性rsv g多肽包含两个gcc单体，均来自株系b。在一些实施方案中，所述抗原性rsv g多肽是单链。[0052]在一些实施方案中，所述抗原性rsv g多肽包含株系a的三个gcc单体。在一些实施方案中，所述抗原性rsv g多肽包含株系b的三个gcc单体。在一些实施方案中，所述抗原性rsv g多肽包含株系a的三个gcc单体和株系b的三个gcc单体。[0053]在一些实施方案中，所述抗原性rsv g多肽是三聚体、四聚体或六聚体。在一些实施方案中，所述抗原性rsv g多肽是四聚体。在一些实施方案中，所述三聚体、四聚体或六聚体是单链多肽。在一些实施方案中，所述三聚体、四聚体或六聚体是不形成颗粒的单链多肽。在一些实施方案中，所述抗原性rsv g多肽是包含四个gcc单体的四聚体。在一些实施方案中，所述抗原性rsv g多肽是包含四个gcc单体的四聚体，其中两个单体属于株系a，并且两个单体属于株系b。在一些实施方案中，所述抗原性rsv g多肽是包含四个gcc单体的四聚体，其中两个单体属于株系a并且两个单体属于株系b，其中所述多肽是单链并且不形成颗粒。在一些实施方案中，所述抗原性rsv g多肽是包含seq id no:5的氨基酸的四聚体。在一些实施方案中，所述抗原性rsv g多肽是包含与seq id no:5的氨基酸序列85％、90％、95％或99％相同的氨基酸序列的四聚体。1.rsv g颗粒[0054]在一些实施方案中，提供了rsv g多肽颗粒或多聚体。在一些实施方案中，提供了rsv g多肽颗粒或多聚体，其中所述颗粒不包含铁蛋白。在一些实施方案中，提供了rsv g多肽单链颗粒或多聚体。在一些实施方案中，提供了rsv g多肽颗粒或多聚体，所述多肽颗粒或多聚体包含本文所述的任何rsv g多肽和多聚化结构域。在一些实施方案中，所述rsv g颗粒包含1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个多聚化结构域。在一些实施方案中，rsv g多肽包含1-2、1-5、1-10、1-20、1-25、1-30、1-40、1-50、1-60、1-70、1-80、1-90、1-100或1-120个多聚化结构域。在一些实施方案中，rsv g多肽包含3个gcc多聚化结构域。在一些实施方案中，rsv g多肽包含6个gcc多聚化结构域。在一些实施方案中，rsv g多肽包含120个gcc多聚化结构域。[0055]在一些实施方案中，所述rsv g颗粒包含1个多聚化结构域。在一些实施方案中，所述多聚化结构域是本领域已知的自组装的任何结构域。在一些实施方案中，所述多聚化结构域是折叠子结构域。在一些实施方案中，所述折叠子结构域包含能够自组装的seq id no:11或seq id no:11的一部分。在一些实施方案中，所述折叠子结构域包含与seq id no:1180％、90％、95％或99％相同的序列，其中所述折叠子能够自组装。seq id no:11的示例性部分提供为seq id no:13。在一些实施方案中，所述折叠子结构域包含与seq id no:13 80％、90％、95％或99％相同的序列，其中所述折叠子能够自组装。在一些实施方案中，所述折叠子结构域包含seq id no:13的序列或由其组成。[0056]在一些实施方案中，所述抗原性rsv g多肽包含与氨基酸seq id no:4(b1-a2折叠子，其中折叠子为seq id no:11)具有至少85％、90％、95％、97％、98％、99％或99.5％同一性的序列。在一些实施方案中，所述rsv g多肽包含seq id no:4的序列。在一些实施方案中，所述抗原性rsv g多肽包含与氨基酸seq id no:14(b1-a2折叠子，其中折叠子为seq id no:13)具有至少85％、90％、95％、97％、98％、99％或99.5％同一性的序列。在一些实施方案中，所述rsv g多肽包含seq id no:14的序列。[0057]在一些实施方案中，所述抗原性rsv g多肽包含与氨基酸seq id no:7(a2-a2折叠子)具有至少85％、90％、95％、97％、98％、99％或99.5％同一性的序列。在一些实施方案中，所述rsv g多肽包含seq id no:7的序列。[0058]在一些实施方案中，所述抗原性rsv g多肽包含与氨基酸seq id no:8(b1-b1折叠子)具有至少85％、90％、95％、97％、98％、99％或99.5％同一性的序列。在一些实施方案中，所述rsv g多肽包含seq id no:8的序列。[0059]在一些实施方案中，所述rsv g颗粒是抗原性rsv gα颗粒。例如，所述rsv g多肽可以包含单链多肽，所述单链多肽包含如本文所述的来自株系a、b或a和b二者的rsv gcc；以及完整或部分α序列。在一些实施方案中，所述抗原性rsv g多肽包含与seq id no:6(α颗粒)具有至少85％、90％、95％、97％、98％、99％或99.5％同一性的序列。在一些实施方案中，所述rsv g多肽包含seq id no:6的序列。在一些实施方案中，所述抗原性α颗粒能够自组装。在一些实施方案中，所述抗原性α颗粒包含rsv gcc和与seq id no:9 80％、90％、95％或99％相同的序列，其中所述颗粒能够自组装。在一些实施方案中，所述抗原性α颗粒展示出每个颗粒60个拷贝的颗粒原聚体，其中使2个gcc(任选地，一个株系a和一个株系b)多聚化，使得大约120个gcc得到展示并且可用于免疫识别。[0060]在一些实施方案中，所述rsv多肽是单链构建体，例如表达为单一多肽。[0061]在一些实施方案中，rsv gcc包含相对于野生型序列的单一氨基酸取代。在一些实施方案中，rsv gcc包含相对于野生型序列的多于一个的单一氨基酸取代，例如2、3、4、5或6个取代。示例性的野生型序列是seq id no:3。c.接头[0062]在一些实施方案中，如果存在，接头将rsv单体和/或多聚化结构域的氨基酸序列分开。可以使用任何接头。在一些实施方案中，所述接头是肽接头，其可以有利于所述抗原性rsv g多肽作为融合多肽的表达(例如，从单一开放阅读框)。在一些实施方案中，所述接头是甘氨酸-丝氨酸接头。在一些实施方案中，所述甘氨酸-丝氨酸接头是gs、gggs(seq id no:15)、2xgggs(即，gggsgggs)(seq id no:16)或5xgggs(seq id no:17)。[0063]在一些实施方案中，所述接头的长度是2、3、4、5、6、7、8、9或10个氨基酸。在一些实施方案中，所述接头的长度是约2-4、2-6、2-8、2-10、2-12或2-14个氨基酸。在一些实施方案中，所述接头的长度是至少15个氨基酸。在一些实施方案中，所述接头的长度是至少25个氨基酸。在一些实施方案中，所述接头的长度是至少30个氨基酸。在一些实施方案中，所述接头的长度是至少35个氨基酸。在一些实施方案中，所述接头的长度是至少40个氨基酸。在一些实施方案中，所述接头的长度小于或等于60个氨基酸。在一些实施方案中，所述接头的长度小于或等于50个氨基酸。在一些实施方案中，所述接头的长度是约16、28、40、46或47个氨基酸。在一些实施方案中，所述接头是柔性的。[0064]在一些实施方案中，所述接头包含甘氨酸(g)和/或丝氨酸(s)氨基酸。在一些实施方案中，所述接头包含甘氨酸(g)、丝氨酸(s)、天冬酰胺(n)和/或丙氨酸(a)氨基酸和任选地如以上讨论的半胱氨酸，或由其组成。在一些实施方案中，所述接头包含与seq id no:222具有至少80％、85％、90％、95％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述接头包含ggggsggggsggggsg(seq id no:220)、ggsgsgsnssassgassggasggsggsg(seq id no:221)、ggs gsassgasasgssngsgsgsgsnssassgassggasggsggsg(seq id no:222)或gs。在一些实施方案中，所述接头包含fr1(seq id no:223)或fr2(seq id no:224)。[0065]在一些实施方案中，构建体不包含接头。在一些实施方案中，构建体包含一个接头。在一些实施方案中，构建体包含两个或多于两个接头。在一些实施方案中，所述构建体在每个单体之间以及在单体与多聚化结构域(如果存在)之间包含接头。d.用于疫苗接种的组合物；用途和方法[0066]在一些实施方案中，本发明提供了针对rsv感染对受试者进行免疫的方法。本发明进一步提供了在受试者中引发针对rsv的免疫应答的方法。在一些实施方案中，所述方法包括向所述受试者施用有效量的本文所述的药物组合物。在一些实施方案中，所述方法包括向所述受试者施用有效量的本文所述的抗原性rsv多肽、抗原性rsv g颗粒或抗原性rsvα颗粒。[0067]在一些实施方案中，提供了组合物，所述组合物包含本文所述的多肽或颗粒中的任何一种或多种和药学上可接受的媒介物、佐剂或赋形剂。[0068]在一些实施方案中，向受试者(诸如人)施用本文所述的多肽、颗粒或组合物，以针对由rsv引起的感染进行免疫。在一些实施方案中，向受试者(诸如人)施用本文所述的多肽、纳米颗粒或组合物，以产生针对将来的rsv感染的保护性免疫应答。在一些实施方案中，提供了本文所述的多肽、纳米颗粒或组合物中的任何一种或多种，用于在针对由rsv引起的感染进行免疫中使用。在一些实施方案中，提供了本文所述的多肽、纳米颗粒或组合物中的任何一种或多种，用于在产生针对将来的rsv感染的保护性免疫应答中使用。在一些实施方案中，所述保护性免疫应答降低rsv感染、肺炎、细支气管炎或哮喘的发生率。[0069]在一些实施方案中，组合物包含本文所述的rsv g多肽。在一些实施方案中，组合物包含本文所述的rsv g颗粒。[0070]在一些实施方案中，与用融合后rsv f多肽或gcc-np免疫相比，包含本文所述的rsv g多肽的组合物引发对rsv的优越的中和应答。在一些实施方案中，与用gcc-np免疫相比，用本文所述的rsv g多肽(例如，包含本文所述的rsv g多肽的多肽或颗粒)免疫引发更高效价的针对rsv g的抗体。在一些实施方案中，与用gcc或gcc-np的一个或两个单体免疫相比，用本文所述的rsv g多肽免疫引发更高比率的针对rsv g的总抗体。与用融合后rsv f免疫相比，用本文所述的rsv抗原免疫可以提供更好的针对rsv的保护。[0071]在一些实施方案中，包含含有多于两个gcc单体的rsv g多肽和本文所述的gcc颗粒的组合物引发对rsv的中和应答。[0072]在一些实施方案中，包含含有多于两个gcc单体的rsv g多肽和本文所述的gcc颗粒的组合物提供改善的针对rsv的保护，例如与不包含多于两个gcc单体的组合物相比更高的中和效价。1.受试者[0073]在一些实施方案中，所述受试者是哺乳动物。在一些实施方案中，所述受试者是人。[0074]在一些实施方案中，所述受试者是成人(大于或等于18岁)。在一些实施方案中，所述受试者是儿童或青少年(小于18岁)。在一些实施方案中，所述受试者是老年人(大于60岁)。在一些实施方案中，所述受试者是非老年人(大于或等于18岁且小于或等于60岁)。[0075]在一些实施方案中，向所述受试者施用多于一次的组合物施用。在一些实施方案中，加强免疫施用改善免疫应答。[0076]在一些实施方案中，本文所述的抗原性多肽或组合物中的任何一种或多种用于在哺乳动物中使用，所述哺乳动物诸如灵长类动物(例如，非人灵长类动物，诸如猴(例如，猕猴，诸如恒河猴或食蟹猴)或猿)、啮齿动物(例如，小鼠或大鼠)或驯养的哺乳动物(例如，狗、兔、猫、马、绵羊、牛、山羊、骆驼或驴)。在一些实施方案中，本文所述的抗原性多肽或组合物中的任何一种或多种用于在鸟中使用，所述鸟诸如禽(例如，鸡、火鸡、鸭、鹅、珠鸡(guineafowl)或天鹅)。2.佐剂[0077]如本文所述，佐剂还可以与本文所述的抗原性rsv g多肽和颗粒一起施用于受试者。在一些实施方案中，与在不伴有佐剂的情况下施用单独的多肽或颗粒相比，与所述多肽和颗粒一起施用所述佐剂在所述受试者中产生更高效价的针对rsv多肽的抗体。佐剂可以促进对抗原性多肽的更早、更有效或更持久的免疫应答。[0078]在一些实施方案中，组合物包含一种佐剂。在一些实施方案中，组合物包含多于一种佐剂。在一些实施方案中，组合物不包含佐剂。[0079]在一些实施方案中，佐剂包含铝。在一些实施方案中，佐剂是磷酸铝。在一些实施方案中，佐剂是明矾(alyhydrogel’85 2％；brenntag-目录号21645-51-2)。[0080]在一些实施方案中，佐剂是有机佐剂。在一些实施方案中，佐剂是油基佐剂。在一些实施方案中，佐剂包含水包油纳米乳剂。[0081]在一些实施方案中，佐剂包含角鲨烯。在一些实施方案中，包含角鲨烯的所述佐剂是ribi(sigma adjuvant system，目录号s6322-1vl)、addavaxtm mf59、as03或af03(参见us9703095)。在一些实施方案中，包含角鲨烯的所述佐剂是纳米乳剂。[0082]在一些实施方案中，佐剂包含聚丙烯酸聚合物(paa)。在一些实施方案中，包含paa的所述佐剂是spa09(参见wo 2017218819)。[0083]在一些实施方案中，佐剂包含不可代谢油。在一些实施方案中，所述佐剂是不完全弗氏佐剂(ifa)。[0084]在一些实施方案中，佐剂包含不可代谢油和杀死的结核分枝杆菌(mycobacterium tuberculosis)。在一些实施方案中，所述佐剂是完全弗氏佐剂(cfa)。[0085]在一些实施方案中，佐剂是脂多糖。在一些实施方案中，佐剂是单磷酰a(mpl或mpla)。3.药物组合物[0086]在各种实施方案中，提供了包含本文所述的抗原性rsv g多肽的药物组合物。在一些实施方案中，所述药物组合物是能够引发免疫应答(诸如针对病原体的保护性免疫应答)的免疫原性组合物(例如，疫苗)。[0087]例如，在一些实施方案中，所述药物组合物可以包含以下中的一种或多种：(1)含有多于两个rsv gcc单体的抗原性rsv g多肽；(2)抗原性α多肽；(3)抗原性rsv g颗粒；或(4)抗原性rsv颗粒或非颗粒三聚体、四聚体或六聚体。在一些实施方案中，所述药物组合物包含含有多于两个rsv gcc单体的抗原性rsv g多肽。[0088]在一些实施方案中，本发明提供了包含与本文所述的抗原性多肽相关的抗体或其他药剂的药物组合物。在一个实施方案中，所述药物组合物包含与本文所述的抗原性多肽结合和/或竞争的抗体。可替代地，所述抗体可以识别包含本文所述的抗原性多肽的rsv多肽组分的病毒颗粒。[0089]在一些实施方案中，将如本文所述的药物组合物单独施用或与一种或多种增强免疫应答的药剂(例如，以上所述的佐剂)组合施用。在一些实施方案中，药物组合物进一步包含如上所述的佐剂。[0090]在一些实施方案中，所述药物组合物进一步包含药学上可接受的载体或赋形剂。如本文所用，术语“载体”是指与药物组合物一起施用的稀释剂、佐剂、赋形剂或媒介物。在示例性实施方案中，载体可以包括无菌液体，例如像水和油，包括石油、动物、植物或合成起源的油，例如像花生油、大豆油、矿物油、芝麻油等。在一些实施方案中，载体是或包括一种或多种固体组分。药学上可接受的载体还可以包括但不限于盐水、缓冲盐水、右旋糖、甘油、乙醇及其组合。如本文所用，赋形剂是可以包括在药物组合物中例如以提供或有助于所需的稠度或稳定作用的任何非治疗剂。合适的药物赋形剂包括但不限于淀粉、葡萄糖、乳糖、蔗糖、明胶、麦芽、稻、面粉、白垩、硅胶、硬脂酸钠、单硬脂酸甘油酯、滑石、氯化钠、脱脂乳粉、甘油、丙烯、二醇、水、乙醇等。在各种实施方案中，所述药物组合物是无菌的。[0091]在一些实施方案中，所述药物组合物含有少量的润湿剂或乳化剂或ph缓冲剂。在一些实施方案中，所述药物组合物可以包括多种添加剂(诸如稳定剂、缓冲剂或防腐剂)中的任何一种。另外，可以包括辅助剂、稳定剂、增稠剂、润滑剂和着色剂。[0092]在各种实施方案中，可以将所述药物组合物配制成适合任何所需的施用方式。例如，所述药物组合物可以采取以下形式：溶液、悬浮液、乳剂、滴剂、片剂、丸剂、球剂(pellet)、胶囊、含有液体的胶囊、明胶胶囊、粉末、缓释配制品、栓剂、乳剂、气雾剂、喷雾剂、悬浮液、冻干粉、冷冻悬浮液、干燥粉或任何其他适合使用的形式。在药剂的配制和生产中的一般考虑可以见于例如remington’s pharmaceutical sciences,第19版,mack publishing co.,宾夕法尼亚州伊斯顿,1995(通过引用并入本文)中。[0093]可以经由任何施用途径来施用所述药物组合物。施用途径包括例如口服、皮内、肌内、腹膜内、静脉内、皮下、鼻内、粘膜、硬膜外、舌下、鼻内、脑内、阴道内、透皮、经直肠、通过气管内滴注、支气管滴注、吸入或外用。施用可以为局部的或全身的。在一些实施方案中，施用是口服进行的。在另一个实施方案中，所述施用是通过肠胃外注射。施用方式可以由从业者决定。[0094]在一些实施方案中，所述药物组合物适合于肠胃外施用(例如，静脉内、肌内、腹膜内和皮下)。可以将此类组合物配制为例如溶液、悬浮液、分散体、乳剂等。它们也可以以无菌固体组合物(例如，冻干组合物)的形式生产，所述无菌固体组合物可以在临使用前溶解或悬浮于无菌可注射介质中。例如，肠胃外施用可以通过注射来实现。在此类实施方案中，注射剂以常规形式制备，即作为液体溶液或悬浮液、适合于在注射前溶解或悬浮于液体中的固体形式，或作为乳剂。在一些实施方案中，注射溶液和悬浮液由无菌粉末、冻干粉或颗粒制备而来。[0095]在一个进一步的实施方案中，将所述药物组合物配制用于通过吸入递送(例如，用于直接递送至肺和呼吸系统)。例如，所述组合物可以采取鼻喷雾剂或任何其他已知的气雾剂配制品的形式。在一些实施方案中，用于吸入或气雾剂递送的制剂包含多个颗粒。在一些实施方案中，此类制剂可以具有约1、约2、约3、约4、约5、约6、约7、约8、约9、约10、约11、约12或约13微米的平均粒度。在一些实施方案中，将用于吸入或气雾剂递送的制剂配制为干粉。在一些实施方案中，将用于吸入或气雾剂递送的制剂例如通过包含润湿剂而配制为湿粉。在一些实施方案中，所述润湿剂选自水、盐水或其他处于生理ph的液体。[0096]在一些实施方案中，将根据本发明的药物组合物作为滴剂施用至鼻腔或颊腔。在一些实施方案中，剂量可以包含多滴(例如，1-100、1-50、1-20、1-10、1-5滴等)。[0097]可以将本发明的药物组合物以适合于实现所需结果的任何剂量施用。在一些实施方案中，所需结果是针对在存在于所述组合物中的抗原性颗粒中存在的rsv多肽的来源诱导持久的适应性免疫应答。在一些实施方案中，所需结果是降低一种或多种感染症状的强度、严重程度、频率和/或延迟一种或多种感染症状的发作。在一些实施方案中，所需结果是抑制或预防感染。所需的剂量将根据以下而在受试者之间有所不同：受试者的物种、年龄、体重和一般状况，被预防或治疗的感染的严重程度，所使用的特定组合物及其施用方式。[0098]在一些实施方案中，将根据本发明的药物组合物以单个剂量或多个剂量施用。在一些实施方案中，将所述药物组合物在不同日期以多个剂量施用(例如，初免-加强免疫疫苗接种策略)。在一些实施方案中，将所述药物组合物作为加强免疫方案的一部分施用。[0099]在各种实施方案中，将所述药物组合物与一种或多种另外的治疗剂共同施用。如果所述治疗剂的施用的时间安排使得所述另外的治疗剂和所述药物组合物中的一种或多种活性成分的药理活性在时间上重叠，从而发挥组合的治疗作用，则共同施用不需要同时施用所述治疗剂。通常，每种药剂将以针对该药剂确定的剂量和时间表来施用。4.核酸/mrna[0100]还提供了核酸，所述核酸编码本文所述的抗原性多肽或颗粒。在一些实施方案中，所述核酸是mrna。出于本公开文本的目的，任何能够经历翻译而产生多肽的核酸均被认为是mrna。5.试剂盒[0101]本文还提供了试剂盒，所述试剂盒包含本文所述的一种或多种抗原性多肽、核酸、抗原性颗粒、组合物或药物组合物。在一些实施方案中，试剂盒进一步包含溶剂、溶液、缓冲液、说明书或干燥剂中的一种或多种。[0102]本说明书和示例性实施方案不应当被视为是限制性的。出于本说明书和所附权利要求的目的，除非另有指示，否则在说明书和权利要求书中使用的所有表达数量、百分比或比例的数字和其他数值均应被理解为在所有情况下被术语“约”修饰至已无法将其如此修饰的程度。“约”指示实质上不影响所述主题的特性的变化程度，例如在10％、5％、2％或1％之内。因此，除非有相反的指示，否则以下说明书和所附权利要求中阐述的数值参数是近似值，所述近似值可以根据试图获得的所需特性而变化。最起码并且不试图限制对权利要求范围的等价范围的原则的应用，每个数值参数均应当至少根据所报吿的有效数字的数目和通过应用普通四舍五入技术来解读。[0103]应注意，如本说明书和所附权利要求书所用，单数形式“一个/一种(a)”、“一个/一种(an)”和“所述(the)”以及任何词语的任何单数使用包括复数指示物，除非明确地并且毫不含糊地限于一个/一种指示物。如本文所用，术语“包括”及其语法变体旨在是非限制性的，使得列表中项目的详述不排除可以取代或添加至所列项目的其他类似项目。实施例[0104]提供以下实施例以说明某些公开的实施方案，并且不应被解释为以任何方式限制本公开文本的范围。1.嵌合体rsv g抗原的制备[0105]编码rsv g嵌合体多肽(即，b1-a2-折叠子(seq id no:4)，gcc四聚体a2-b1-a2-b1(seq id no:5)和a2-α-b1颗粒(seq id no:6))的载体是由genscript使用pet28大肠杆菌表达载体合成的，所述表达载体具有iptg诱导型表达启动子。图2a-图2c中显示了抗原的模型化结构。对于约120个展示的gcc表位的实例，预期a2-α-b1颗粒包含60个原聚体(每个包含a2 gcc和b1 gcc)。使用本领域的标准方法在大肠杆菌中表达嵌合多肽。简而言之，将bl21 de3大肠杆菌细胞用相关载体转化，在37℃下在具有0.1％卡那霉素的lb肉汤(典型地为1升表达体积)中生长，并且当细胞密度约为0.5-0.8吸光度单位(uv 600)时用0.1％iptg诱导。将培养物在18℃下放置过夜(大约16小时)用于多肽表达。通过离心收获细胞，并且将细胞沉淀重新悬浮在30ml pbs中并且超声。将样品在4,000rpm下离心30min，弃去上清液，并且将包涵体保留并且重新悬浮在30ml的4m尿素中，然后超声。将样品再次离心，并且将含有rsv g构建体的上清液用4升的pbs透析过夜。然后将可溶性样品使用0.22μm millex-gp过滤器过滤以获得透明上清液用于多肽纯化。[0106]将带有his标签的构建体(即，b1-a2-折叠子(seq id no:4))最初使用ge healthcare histrap柱(用咪唑梯度洗脱)使用ni螯合纯化。将不带his标签的构建体(即，gcc四聚体a2-b1-a2-b1(seq id no:5)和a2-α-b1颗粒(seq id no:6))最初使用离子交换ge healthcare hitrap q柱(用nacl洗脱)纯化。将含有rsv g构建体的级分使用kinetex 5u c18 100a柱利用反相hplc进一步纯化，以进一步纯化构建体并且减少内毒素。最后，使用采用tris缓冲盐水流动相的ge healthcare superdex p200柱通过尺寸排阻纯化来纯化rsv g构建体。纯度是通过sds-page凝胶判断的，并且浓度是通过uv280吸收判断的，这在本领域中是典型的。[0107]为了证明铁蛋白纳米颗粒可以用于改善rsv g中央结构域抗原的免疫原性，我们开发了一种将gcc肽(seq id no:12)化学缀合至铁蛋白纳米颗粒的方法。可以将本文所述的具有s111c突变的铁蛋白(seq id no:206)与gcc肽(seq id no:12)缀合，所述gcc肽被合成为在peg4接头上具有经由nhs基团附接至n末端的马来酰亚胺基团。合成了具有n末端马来酰亚胺的gcc肽，并且通过peptides international(美国肯塔基州路易斯维尔)进行hplc纯化。当将马来酰亚胺-gcc抗原添加至铁蛋白s111c颗粒中时，马来酰亚胺缀合至游离半胱氨酸并形成gcc-np，其可以通过考马斯染色的sds-page凝胶观察到。虽然缀合典型地是50％至90％有效的(参见图1a)，但在图1b中显示了gcc肽铁蛋白纳米颗粒(100％缀合)的模型。2.对rsv g抗原的中和抗体应答的体内表征[0108]为了在小鼠中评估对rsv g抗原的体内应答，在第0周、第3周和第6周用指定剂量的rsv抗原以高剂量(5μg)或低剂量(0.5μg)的抗原肌内免疫雌性balbc小鼠。除非另有说明，否则用床边混合策略为rsv抗原加入af03佐剂。也就是说，在临将50μl注射至每条后肢中之前，将50μl的相关多肽溶液与50μl的sanofi佐剂af03(基于角鲨烯的乳剂；参见klucker等人,j pharm sci.2012年12月；101(12):4490-500)混合。未观察到来自免疫的不利影响。在首次免疫前1天和在每次注射后至少2周(即第2周、第5周和第8周)采集血液。除非另有说明，否则所示出的数据是关于第三次注射后2周(第8周，也表示为2wp3)的。典型地，对来自免疫前动物(表示为未经处理)、第二次注射后两周(第2次后或2wp2)或第三次注射后两周(第3次后或2wp3)的血清进行分析。[0109]对于hae中和测定，将血清在56℃下热灭活30分钟。在补充有pneumaculttm-ali 10x补充剂(stem cell technologies；05003)和1％抗生素/抗真菌剂的pneumaculttm-ali基础培养基(stem cell technologies；05002)(从此称为培养基)中制备灭活血清的四倍系列稀释系列。将rsv病毒原液与血清稀释液1:1合并，并且在37℃下孵育1.5小时。然后将病毒-血清混合物以50μl/孔添加至含有完全分化的hae细胞的24孔板中，并且在37℃、5％co2下孵育1小时。在孵育后，去除接种物，将孔用培养基洗涤两次以去除未结合的病毒，并且在37℃、5％co2下再孵育20小时。在荧光显微镜上对用表达mkate(tagfp635)报告物的rsv感染的培养物中的感染事件计数。[0110]为了检测用不表达mkate报告物的rsv进行的感染(rsv b株系中和)，将假复层上皮用培养基充分洗涤以去除粘液，然后在室温下用4％多聚甲醛固定30分钟，用0.25％triton x-100透化30分钟，并且用补充有2％fbs的dmem在37℃下封闭1小时。将封闭溶液用在补充有2％fbs的dmem中1:200稀释的100μl/孔的小鼠抗rsv单克隆ab混合物(millipore；mab 858-4)置换，并且将板在37℃下孵育2小时。然后将板用补充有0.05％tween 20的pbs洗涤3次。每孔添加100μl的在补充有2％fbs的dmem中1:200稀释的山羊抗小鼠igg(h+l)(invitrogen；a11001)，并且将板在4℃下孵育过夜。第二天早晨，将板用补充有0.05％tween 20的pbs洗涤3次，用具有dapi的prolong gold antifade(thermo fisher scientific；p36935)稳定荧光信号，并且在荧光显微镜上进行计数。在60％减少终点处确定中和抗体效价。3.对rsv g抗原的结合抗体应答的体内表征[0111]对于抗gcc结合，类似于上述在octet尖端上使用具有c末端his标签的gcc肽的三聚化二聚体。将带有his6标签的gcc(a2株系)六聚体(seq id no:7)或带有his6标签的gcc(b1株系)六聚体(seq id no:8)预加载至抗penta-his(his1k)传感器尖端(fortébio#18-5122)上持续400秒以允许捕获达到接近饱和。然后将生物传感器尖端在octet洗涤缓冲液中平衡90秒，然后使经稀释的血清缔合300秒。使用octet数据分析ht10.0软件测量缔合曲线最终响应，并且将所述响应乘以稀释因子(100或300)以获得最终所报告的响应。[0112]为了确定rsv g抗原是否引发gcc结合免疫应答，测试了来自上文的免疫的血清结合gcc a2六聚体(seq id no:7)或gcc b1六聚体(seq id no:8)的能力。在第二次免疫后2周和第三次免疫后2周测试了高剂量(图4a和图5a)和低剂量(图4b和图5b)下的gcc结合应答。对于a2株系(图4a-图4b)和b1株系(图5a-图5b)二者，相对于未经处理小鼠血清而言所有抗原均引发了结合应答。在所有时间点和剂量下，相对于gcc四聚体或gcc-np，b1-a2-折叠子均引发了对gcc a株系的优越的结合应答。在每个时间点，高剂量a2-α-b1引发的结合应答与高剂量b1-a2-折叠子类似，但是相对于低剂量b1-a2-折叠子，低剂量a2-α-b1引发的gcc a株系结合应答降低(图4a-图4b)。[0113]在所有时间点的高剂量下，相对于高剂量gcc-np，b1-a2-折叠子、a1b2a1b2四聚体和a2-α-b1均引发了对gcc b株系的优越的结合应答(图5a)。在每个时间点，低剂量a2-α-b1和b1-a2-折叠子引发的gcc b1结合优于低剂量gcc-np和a1b2a1b2四聚体(图5b)。4.人细胞中的应答[0114]为了证明pre-f-np抗原和gcc-np抗原在人细胞中引发应答的能力，用mimic平台进行了实验。mimic平台仅由自体人免疫细胞构成，所述自体人免疫细胞能够在激发时快速且可再现地产生抗原特异性先天性应答和适应性应答。先前的工作已经证明了mimic系统重现针对诸如hbv、破伤风类毒素、单克隆抗体、yf-vax和流感b细胞应答的不同靶标的体内免疫概况的能力。为了证明gcc-np与单独的gcc肽相比引发优越的g抗体应答，在人b细胞中用单独的gcc肽或与纳米颗粒缀合的gcc肽(gcc-np)处理人b细胞。gcc-np引发了优越的g结合抗体应答。因此，预期包含gcc表位的颗粒将在人免疫中引发免疫应答。5.抗体与gcc抗原的结合的表征[0115]使用双夹心elisa(酶联免疫吸附测定)评价了抗体与具有seq id no:14的序列的嵌合gcc-折叠子多肽的结合。[0116]在所述测定中，rsv g糖蛋白被捕获在捕获抗体与检测抗体之间。在此elisa中，用生物素标记检测抗体，并且使用酶联链霉亲和素检测夹心体(图6a)。[0117]为了研究gcc多肽是否具有正确的构象，使用了识别gcc构象表位的021-2g mab抗体(经纯化的人源化抗蛋白g单克隆抗体，克隆[021-2g]，供应商rd biotech)。因此，021-2g mab结合指示gcc多肽没有错误折叠或降解。检测抗体是经纯化的抗蛋白g单克隆抗体(小鼠igg1，κ)(克隆[131-2g]，供应商：sigma，参考号：mab 858-2-5)，使用诸如lynx rapid plus生物素(1型)抗体缀合试剂盒生物素(1型)(biorad参考号lnk263b、lnk262b或lnk261b)或生物素ez link磺基nhs-lc-生物素(thermo scientific，参考号21327)的生物素化试剂盒进行生物素化。[0118]图6b中显示了结果，表明具有seq id no:14的序列的嵌合gcc-折叠子多肽被所使用的两种抗蛋白g抗体识别，包括识别gcc的构象表位的克隆[021-2g]。此证据与嵌合gcc-折叠子多肽具有引发将识别天然rsv的抗体的正确构象的结论一致。[0119]方法[0120]为了进行所述测定，进行了以下步骤：[0121]在pbs 1x中以1μg/ml制备021-2g包被抗体溶液。在96孔板中每孔分配100μl。盖上板贴。[0122]在+5℃±3℃下将密封板孵育16h至20h。可以在≤-70℃下储存长达3个月。当将板解冻时：排水，然后直接进行饱和。[0123]将板解冻并且排空。在板中分配200μl/孔的饱和缓冲液(具有0.05％聚山梨醇酯20和1％乳的1x pbs)。盖上板贴。将板放置在平板培养箱中。在大约+37℃下孵育至少1小时。[0124]在洗涤缓冲液(具有0.05％聚山梨醇酯20(sigma p1379)的1x pbs)中将板洗涤3次。[0125]所有稀释均采用稀释缓冲液(具有0.05％聚山梨醇酯20和0.1％乳的1x pbs)实现。[0126]将折叠子gcc-his标签(非可溶性部分)(供应商：btl)用作参考抗原和内部对照。参考抗原和内部对照的稀释是在来自相同等分试样的独立重复中进行的。为参考抗原和内部对照准备的稀释是在玻璃“溶血(hemolysis)”型试管或在4.5ml塑料nunc冷冻管中进行的。[0127]在96孔板中制备参考、内部对照和样品的2倍稀释系列，每个稀释系列的体积为100μl。还准备了两个仅含有稀释缓冲液的空白孔。将板用板贴密封。将板放置在平板培养箱中。在大约+37℃下孵育大约1小时。在洗涤缓冲液中进行3次洗涤。[0128]在稀释缓冲液中以适当的浓度制备检测抗体溶液。在板中分配100μl/孔的检测抗体溶液。将板用板贴密封。将板放置在平板培养箱中。在大约+37℃下孵育大约1小时。在洗涤缓冲液中进行3次洗涤。[0129]以适当的稀释缓冲液浓度制备与过氧化物酶偶联的兔多克隆抗人igg抗体溶液。在板中分配100μl/孔的缀合物溶液。将板用板贴密封。将板放置在平板培养箱中。在大约+37℃下孵育大约1小时。在洗涤缓冲液中进行3次洗涤。[0130]在板中分配100μl/孔的tmb(即用型3,3',5,5'-四甲基联苯胺过氧化物酶底物溶液)。在室温下和黑暗中(例如，在箔纸中包裹)孵育大约10min。通过添加100μl/孔的1n hcl溶液来停止反应。在450和620nm下用板读取器读取板。测量光密度(od)，表示为2个读数之间的差异，以考虑96孔板塑料的吸收。[0131]相对活性的计算是在符合欧洲药典公式(第5.3.3段：平行线测定)的应用中通过平行线方法进行的，并且通过ard eu：pla 2.0(平行线测定)或由stegmann公司分配的等效方法进行限定。根据剂量应答定律建模将log/log模型用于计算相对活性。综上所述，本技术包括但不限于以下各项：1.一种包含多于两个rsv gcc单体的抗原性rsv g多肽，其中所述多肽不包含铁蛋白。2.根据项1所述的抗原性rsv g多肽，其中所述多肽是单链。3.一种抗原性rsv g单链多肽，所述多肽包含多于两个rsv gcc单体。4.根据前述项中任一项所述的抗原性rsv g多肽，所述多肽包含3、4、5、6、7、8、9或10个gcc单体。5.根据前述项中任一项所述的抗原性rsv g多肽，所述多肽包含a)仅株系a的gcc单体；b)仅株系b的gcc单体；或c)株系a和株系b的gcc单体。6.根据前述项中任一项所述的抗原性rsv g多肽，所述多肽包含株系a的多于两个gcc单体。7.根据前述项中任一项所述的抗原性rsv g多肽，所述多肽包含株系b的多于两个gcc单体。8.根据前述项中任一项所述的抗原性rsv g多肽，所述多肽包含株系a的至少一个gcc单体和株系b的至少一个gcc单体。9.根据前述项中任一项所述的抗原性rsv g多肽，其中所述多肽是三聚体、四聚体或六聚体。10.根据前述项中任一项所述的抗原性rsv g多肽，所述多肽包含株系a的三个gcc单体。11.根据前述项中任一项所述的抗原性rsv g多肽，所述多肽包含株系b的三个gcc单体。12.根据前述项中任一项所述的抗原性rsv g多肽，所述多肽包含株系a的三个gcc单体和株系b的三个gcc单体。13.根据前述项中任一项所述的抗原性rsv g多肽，所述多肽包含多聚化结构域。14.根据前述项中任一项所述的抗原性rsv g多肽，所述多肽包含1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个多聚化结构域。15.根据项13或14所述的抗原性rsv g多肽，其中所述多聚化结构域是折叠子。16.根据项13或14所述的抗原性rsv g多肽，其中所述多聚化结构域包含seq id no:9。17.根据项13或14所述的抗原性rsv g多肽，其中所述多聚化结构域包含seq id no:13。18.根据前述项中任一项所述的抗原性rsv g多肽，所述多肽包含株系a的两个gcc单体和株系b的两个gcc单体。19.根据项18所述的抗原性rsv g多肽，其中株系a和b的所述单体在单链中按顺序交替。20.根据前述项中任一项所述的抗原性rsv g多肽，所述多肽包含与seq id no:4-8中的任一个具有80％、85％、90％、95％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。21.根据前述项中任一项所述的抗原性rsv g多肽，其中所述抗原性rsv g多肽由多核苷酸编码，所述多核苷酸编码a.至少两个rsv gcc单体和至少一个多聚化结构域；或b.至少三个rsv gcc单体。22.根据项21所述的抗原性rsv g多肽，其中所述抗原性rsv g多肽由多核苷酸编码，所述多核苷酸编码至少两个rsv gcc单体和至少一个多聚化结构域。23.根据项22所述的抗原性rsv g多肽，其中至少一个gcc单体来自株系a，并且至少一个gcc单体来自株系b。24.根据项21-23中任一项所述的抗原性rsv g多肽，其中编码来自株系a的rsv gcc的所述多核苷酸编码：a.与seq id no:3相同的氨基酸序列；或b.与seq id no:3相同但没有c末端k的氨基酸序列；或c.与seq id no:4的氨基酸2-42相同的氨基酸序列。25.根据项21-23中任一项所述的抗原性rsv g多肽，其中编码来自株系b的rsv gcc的所述多核苷酸编码：a.与seq id no:10相同的氨基酸序列；或b.与seq id no:8的氨基酸10-51相同的氨基酸序列。26.根据项21-25中任一项所述的抗原性rsv g多肽，其中编码所述多聚化结构域的多核苷酸编码与以下相同的氨基酸序列：a.seq id no:11；或b.seq id no:7的氨基酸132-175。27.根据项13、15、17、20或23中任一项所述的抗原性rsv g多肽，所述多肽包含与seq id no:14具有80％、85％、90％、95％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。28.根据项21-27中任一项所述的抗原性rsv g多肽，所述多肽能够在所述多核苷酸在宿主细胞中表达后形成gcc颗粒。29.根据项28所述的抗原性rsv g多肽，其中所述多肽是颗粒，并且所述颗粒是六聚体。30.根据项28所述的抗原性rsv g多肽，其中所述六聚体包含三个rsv gcc株系a单体和三个rsv gcc株系b单体。31.根据项21所述的抗原性rsv g多肽，其中所述抗原性rsv g多肽由多核苷酸编码，所述多核苷酸编码至少三个rsv gcc单体。32.根据项31所述的抗原性rsv g多肽，其中所述多核苷酸编码四个rsv gcc单体。33.根据项33所述的抗原性rsv g多肽，其中所述多核苷酸编码两个属于株系a的gcc单体和两个属于株系b的gcc单体。34.根据项33所述的抗原性rsv g多肽，其中所述多核苷酸以交替顺序编码株系a的所述两个gcc单体和株系b的所述两个gcc单体。35.根据前述项中任一项所述的抗原性rsv g多肽，其中所述抗原性rsv g多肽能够引发对rsv的免疫应答和/或保护受试者免受rsv感染。36.一种包含根据项1-35中任一项所述的抗原性rsv g多肽的组合物，所述组合物进一步包含药学上可接受的载体。37.根据项1-36中任一项所述的抗原性rsv g多肽或组合物，用于在引发对rsv的免疫应答的方法或保护受试者免受rsv感染中使用。38.一种引发对rsv的免疫应答或保护受试者免受rsv感染的方法，所述方法包括向受试者施用根据项1-36中任一项所述的抗原性rsv g多肽或组合物。39.根据项36所述的抗原性rsv g多肽或组合物或者根据项38所述的方法，其中所述受试者是人。40.一种编码根据项1-35中任一项所述的抗原性rsv多肽的核酸，任选地其中所述核酸是mrna。









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