小鼠主动脉弓移植方法和暴露并游离腹主动脉的方法

医药医疗技术的改进;医疗器械制造及应用技术1.本发明属于医学动物模型技术领域，具体涉及小鼠主动脉弓移植方法和暴露并游离腹主动脉的方法。背景技术：2.小鼠是公认的理想的实验模式动物，因为它们具有多种遗传背景品系及基因敲除资源，且小鼠繁殖周期短，饲养和相关试剂费用较廉价。3.建立一个操作简便、成功率高的主动脉移植模型对于动脉移植病变、动脉粥样硬化的研究具有重要的意义，其中主动脉弓腹腔移植模型是研究动脉粥样斑块消退的一个很重要的工具。在主动脉弓腹腔移植模型中，供体血管为小鼠的主动脉弓，受体血管为小鼠的腹主动脉。然而，由于小鼠的血管较细且主动脉弓直径是腹主动脉的2-3倍，供受体血管断端管径相差较大，吻合难度高，对显微外科技术有较高要求，是关键技术难点。4.对管径不同的小血管进行吻合一直是比较困难的问题，因此有很多学者在探索相应的解决方法。5.如果管径差距不太大,可以将较细的血管的断端剪成斜面来增加它的周径。但对于血管外径明显不同时该方法也不适用了。有学者提出的鱼嘴切开扩张法吻合法，需在较小血管的断端相隔180度选两个合适的点,用显微剪纵向切开管壁，再修整所形成四边形血管瓣的四个角，其中涉及的操作更精细、困难。此外，缝合血管时需提前修剪血管外膜和吻合口两端、缝合时边距和针距的控制、血管内膜需对合外翻等，这些都增加了血管缝合的难度和风险，如吻合口的漏血、狭窄及血栓形成等。如果供体血管为动脉粥样硬化的主动脉，由于其管壁有粥样斑块附着，管壁增厚、弹性变差，血管缝合的难度和术后吻合口漏血的风险均显著增加。此外，不稳定的斑块可能会在缝合过程中脱落，从而影响结果评估甚至导致受体死亡。总之，一个理想的动物模型应当尽量避免复杂困难的手术操作，尤其是对于那些并不从事显微外科的研究人员来说更是如此。6.目前已经建立了多种小鼠的动脉移植模型。小鼠异位主动脉移植的缝合技术最早由koulack等人在1995年描述。在该模型中，用一段供体胸主动脉代替一段腹主动脉。然而，15％-20％的移植主动脉形成血栓，考虑可能是胸腹主动脉的直径差异导致。尽管手术技术不断改进，但由于小血管缝合相关的技术问题，这种异位模型的广泛应用仍受到了限制。有学者开发了颈部动脉移植模型用来研究同种异体移植血管病变，包括颈动脉-颈动脉移植(端侧连续缝合)，胸主动脉-颈动脉移植(端侧连续缝合)，在没有端到端吻合的情况下，颈动脉处的供体动脉袢形成了一个剪切力变化的分流器，可能会影响新生内膜形成的因素，如血小板沉积、炎症细胞黏附和内皮细胞功能障碍。主动脉弓-腹主动脉移植已被证明是比较理想的动脉粥样斑块消退移植模型，因为主动脉弓内的粥样硬化斑块较其它动脉段发展最迅速和旺盛，有利于斑块消退的判断，但由于供受体血管直径和血管壁厚度的差异，缝合技术难度高仍无法普及。7.此外，腹主动脉部位深不利于操作，且腹主动脉和下腔静脉附着紧密，分离困难、易造成出血，是手术关键步骤也是限速步骤之一。目前已报道的动脉腹腔移植研究均采用腹部纵切口，虽然纵切口不会切断腹肌，出血少，但仍具有以下缺点：1.切口较大(剑突至耻骨联合)；2.纵切口需使用腹部撑开器或拉钩来扩大手术视野，这些辅助工具可能会对显微镊的深部操作造成阻挡，长时间牵拉可能对局部组织造成压迫缺血；3.充分暴露手术视野时需将肠管和盆腔脏器(膀胱及生殖器管)拨出腹腔或盆腔，由于腹部撑开器或拉钩会造成皮肤切缘张力大，尤其是纵切口下端会形成的v字形缘，可能出现肠管或生殖器官悬吊及脏器被皮肤切缘压迫导致瘀血的风险。8.总之，传统的动脉腹腔移植模型因为血管吻合和游离腹主动脉的难度较大对研究人员的显微手术操作技术要求较高，因此模型的建立是相关研究的一个很大的壁垒。技术实现要素：9.本发明为解决上述技术问题，提出一种操作难度低，简单有效的小鼠主动脉弓移植方法和暴露并游离腹主动脉的方法。10.第一方面，提出一种简便的小鼠主动脉弓与腹主动脉吻合方法，利用袖套血管吻合技术，包括：11.主动脉弓的准备：获取供体小鼠的主动脉弓，为移植进行准备。12.腹主动脉准备：采取腹部横切口和无菌无纺布条进行充分暴露受体腹主动脉，利用形成组织间隙水肿来扩大动静脉分界线，利用线结抬高血管辅助游离受体腹主动脉，剪断受体腹主动脉，在受体腹主动脉的两个断开口的周部分别套上套管，并将断开口外翻包覆套管并固形成袖套。13.移植吻合：将准备好的供体主动脉弓放置于受体的腹腔中，采用袖套法血管吻合技术将供体动脉弓根部段动脉壁套于受体腹主动脉近心端的袖套外，并固定结扎；冲洗生理盐水排出供体动脉和受体袖套中的空气，将供体动脉弓的另一端套于受体腹主动脉远心端的袖套外，并固定结扎。14.本发明提供的小鼠主动脉弓和腹主动脉吻合方法操作简单、吻合牢固、可拆除进行多次吻合、重复性好，吻合成功率高。15.优选的，主动脉弓准备时，提前对供体小鼠进行全身肝素化，并用4℃生理盐水对主动脉弓进行灌洗，避免主动脉弓内壁附着血凝块。16.优选的，获取供体小鼠的主动脉弓时，去除主动脉弓周围大部分脂肪组织，注意不能损伤主动脉弓外壁，并采用丝线将主动脉弓上方的三条分支结扎并剪断，靠近主动脉根部剪断主动脉弓，在胸主动脉发出第一条分支处水平剪断，将切取出的主动脉弓保存于4℃生理盐水中。17.优选的，所述腹主动脉袖套制备时，麻醉受体小鼠后充分暴露手术区域，做腹壁中部横切口1.5-2cm；使用湿的无菌无纺布条对肠管、盆腔脏器以及腹主动脉旁组织(如生殖动脉)进行覆盖保护及牵拉，且术中不定时滴加生理盐水保持湿润。18.优选的，剪断受体腹主动脉前，轻柔且快速游离设定长度的腹主动脉，游离腹主动脉上至左髂腰动脉水平下至髂总动脉以上，长约4.5-7mm；在下腔静脉右侧，远离腹主动脉处分离出右髂腰动脉并进行缝扎。19.优选的，剪断受体腹主动脉前，在下腔静脉的右侧远离主干血管的位置找到右髂腰动脉进行缝扎；剪断受体腹主动脉时，在右髂腰动脉支起始处剪断腹主动脉，然后贴紧腹主动脉壁剪断髂腰动脉，获取较大的动脉断口，有利于后期翻折血管壁于袖套上。再使用肝素钠盐水冲洗腹主动脉内残留的血液后，选择两个尺寸合适的套管，使用显微直镊将血管从套管中间穿出并翻折腹主动脉壁于套管外，并使用丝线结扎固定。若结扎线位置靠管口，使用一把直镊轻轻夹持线圈(镊尖与线圈平行)，另一手用镊子抵住袖套根部边沿，双手力量相对，使线结的位置朝袖套根部方向(靠近血管夹方向)移动，最大化可套合段的袖套长度。20.优选的，所述腹主动脉准备时，需制作套管；所述套管套管长0.8mm-1.3mm，外径0.6mm-0.7mm，内径为0.55mm-0.65m，壁厚为0.05mm-0.08mm。其具体尺寸根据血管的实际粗细和长度选择。21.优选的，所述动脉吻合时，将供体主动脉弓放置于受体的腹腔中，使供体主动脉根部靠近受体腹主动脉的近心端，使用袖套法血管吻合技术将供体动脉弓根部段动脉壁套于受体腹主动脉近心端的袖套外，此时应注意避免袖套扭转，再采用丝线固定结扎，再冲洗生理盐水以排出供体动脉弓和受体腹主动脉袖套中的空气；采用同样的方法将供体动脉弓另一端套于受体腹主动脉远心端的袖套外，采用丝线固定结扎；先分别松开受体腹主动脉远心端的阻断线结和血管夹，观察移植后的供体动脉弓内逐渐有血液流入，检查两端吻合端均无漏血后再分别松开受体腹主动脉近心端的阻断线结和血管夹；观察两端吻合端四周无漏血、血管无扭转以及动脉充盈搏动有力；回纳肠管，分两层关腹；消毒皮肤切口，将小鼠置于提前预热的笼子里等待复苏。22.第二方面，开发了暴露并游离腹主动脉的方法，采取腹部横切口和无菌无纺布条进行充分暴露受体腹主动脉，利用动静脉组织间隙水肿并配合线结提拉快速游离腹主动脉。23.本发明采取腹部小横切口和无菌无纺布条牵拉组织的方法暴露腹主动脉方便且充分，通过对动静脉中间冲注生理盐水形成组织间隙水肿并配合线结抬高动脉来辅助分离动静脉，游离动脉速度快且不易损伤血管。24.优选的，该方法具体包括：25.暴露腹主动脉：麻醉受体小鼠后备皮并消毒腹部皮肤，作腹壁小横切口，长约1.5-2cm；棉签将肠管和盆腔脏器(膀胱和生殖器官)拨出腹腔或盆腔，使用湿的无菌无纺布条包裹肠管或覆盖盆腔脏器以及腹主动脉旁组织(如生殖动脉)并轻轻牵拉以充分暴露腹主动脉。26.游离腹主动脉：利用在动静脉间冲注生理盐水形成组织间隙水肿来扩大动静脉分界线，同时利用线结抬高动脉辅助游离。27.其中，28.所述利用在动静脉间冲注生理盐水形成组织间隙水肿来扩大动静脉分界线为：采用直镊提起腹主动脉外膜，使用注射器在下腔静脉和腹主动脉间隙冲注生理盐水形成组织间隙水肿，使用显微直镊在间隙最宽处首先进行分离；29.所述利用线结抬高动脉为：分离出一小段腹主动脉后，从腹主动脉下方穿过1根丝线，打一个松结，通过提起线结抬高动脉，同时用直镊逐步向上或向下分离血管间隙的组织；在右髂腰动脉支的另一侧的腹主动脉下方再穿一根丝线，同上方法分离血管间隙的组织；游离长度4.5-7.0mm即可，范围上至左髂腰动脉，下至髂总动脉分支以上；最后，分别将两个松结拉至到游离好的腹主动脉上下两端打结阻断血流，先打头侧的结，在观察到腹主动脉不再充盈，再打结尾侧的结，然后提起线尾使用显微血管夹夹住线结的上方(头侧)或下方(尾侧)，游离腹主动脉结束。30.优选的，所述作腹壁小横切口为：麻醉受体小鼠后备皮并消毒腹部皮肤，使用眼科剪作腹中部皮肤横切口长约1.5-2cm，随后用眼科镊提高腹肌，电凝器横切腹肌暴露腹腔，避免烧灼到肠壁，及时对腹肌断面的出血点电凝止血，减少失血；31.优选的，使用无菌无纺布条覆盖及牵拉组织暴露腹主动脉时：用棉签将肠管平移至小鼠身体左侧并使用湿的无菌无纺布条包裹肠管；用棉签将盆腔脏器(膀胱和生殖器官)拨出盆腔，覆盖湿的无菌无纺布条并轻轻向下牵拉(若膀胱空虚可使用无纺布条将膀胱和生殖器官下推无需拨出盆腔)；使用无菌无纺布条覆盖保护两侧生殖动脉并向两侧牵拉以充分暴露腹主动脉。32.由上述对本发明的描述可知，本发明具有以下有益效果：33.1、提供一种操作简便、可重复性好、成功率高、易掌握和普及的小鼠主动脉弓腹腔异位移植模型，可用于动脉移植病变、动脉粥样硬化等疾病的发病和逆转机制研究以及相关药物的开发和评估等；34.2、无需对供体血管周围脂肪进行完全剥离，避免了剥除过程对动脉壁的损伤风险；35.3、采用了腹壁小横切口，无需腹部撑开器或拉钩即可充分暴露腹主动脉，皮肤切缘无张力，拨出肠管和盆腔脏器方便也不会造成压迫，使用该横切口术后小鼠均切口愈合良好。同时，本发明使用无菌无纺布条对肠管、盆腔脏器以及两侧生殖动脉进行覆盖及牵拉，不仅可以充分暴露腹主动脉，还可以保护组织避免操作中器械的直接损伤；36.4、首次提出通过在动静脉中间冲注生理盐水形成组织间隙水肿并配合线结抬高血管来辅助游离腹主动脉，速度快且不易损伤血管。37.5、袖套血管吻合技术避免了血管缝合需反复夹持血管壁和多次进出针带来的血管壁撕裂的风险，尤其适用于弹性较差的病变血管壁，如动脉粥样硬化等特殊供体血管壁若被反复夹持缝合不仅容易撕裂还可能造成斑块脱落等情况；38.6、袖套血管吻合速度快，术中夹闭腹主动脉的时间短，减少了受体下半身的缺血时间，对受体的损伤减小，提高了受体的存活率；39.7、吻合口几乎无漏血风险；40.8、袖套血管吻合后方便拆除和多次套合；41.9、提出同时使用结扎和血管夹进行血流阻断，避免传统的单线结结扎，若仅使用线结结扎，太紧会造成血管损伤，太松会出现漏血的问题，若仅使用血管夹可能导致血管残段回缩变短或漏血的问题，所以提出的线结加血管夹双重阻断的方式不仅阻断血流效果好，并且可以多次调整线结或血管夹位置而不易出血，操作的活动度更大；42.10、采用无带柄的套管，不占用血管壁的长度，可最大化利用血管游离段的长度，因此游离的腹主动脉范围在4.5-7mm即可(上至左髂腰动脉水平下至髂总动脉以上)，避免了过度游离腹主动脉，减少了手术时间和离断较多动脉分支的风险。附图说明43.此处所说明的附图用来提供对本发明的进一步理解，构成本发明的一部分，本发明的示意性实施例及其说明用于解释本发明，并不构成对本发明的不当限定。44.其中：45.图1是受体小鼠腹主动脉暴露方法的示意图；46.图2是受体小鼠腹主动脉充分暴露及游离范围的示意图；(游离范围为两虚线之间)47.图3是利用形成动静脉间隙水肿和线结对腹主动脉的辅助游离的示意图；48.图4是腹主动脉袖套制备的示意图；(向套管根部移动线圈最大化可套合的袖套长度)49.图5是采用袖套吻合技术对供体主动脉弓和受体腹主动脉的吻合过程示意图；50.图6是远心端和近心端先后恢复灌注及吻合口检查的示意图；51.图7是关腹示意图；(分两层关腹，先对合腹白线再进行连续缝合)52.图8是主动脉弓游离范围及供受体动脉吻合后示意图；(具有动脉粥样硬化病变的主动脉弓移植到野生型受体小鼠的腹部，血管内白色部分为粥样斑块)53.图9是术后30天宏观检查示意图；(移植血管通畅，斑块面积略有消退)54.图10是术后30天病理检查示意图；(wt移植给wt后血管壁结构无异常)55.图11斑块消退组在术后90天的病理检查示意图；(左图为移植前，右图为术后90天)56.图12是主动脉弓和腹主动脉直径对比的示意图。具体实施方式57.为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。58.在本发明实施例中使用的术语是仅仅出于描述特定实施例的目的，而非旨在限制本发明。在本发明实施例和所附权利要求书中所使用的单数形式的“一种”、“所述”和“该”也旨在包括多数形式，除非上下文清楚地表示其他含义，“多种”一般包含至少两种。59.取决于语境，如在此所使用的词语“如果”、“若”可以被解释成为“在……时”或“当……时”或“响应于确定”或“响应于检测”。类似地，取决于语境，短语“如果确定”或“如果检测(陈述的条件或事件)”可以被解释成为“当确定时”或“响应于确定”或“当检测(陈述的条件或事件)时”或“响应于检测(陈述的条件或事件)”。60.由于传统的主动脉弓腹腔移植技术难度大，移植模型成功率不高，普及率也较低。主要原因是成年雄性小鼠(22-30g)的主动脉弓的直径》1.5mm，腹主动脉直径0.5-0.7mm，血管直径差异很大(见图12)，使用传统显微外科血管端端缝合技术可行度很低。本研究采用了“袖套法血管吻合技术”进行主动脉弓和腹主动脉的端端吻合(图4，图5)，解决了上述主动脉弓移植困难的问题，同时缩短了手术时间并提高了手术成功率。61.实施例一：62.一种小鼠主动脉弓腹腔移植方法，利用袖套血管吻合技术，包括：63.s10、腹主动脉的暴露：麻醉受体小鼠后备皮并消毒腹部皮肤，作腹壁小横切口，长约1.5-2cm；棉签将肠管和盆腔脏器(膀胱和生殖器官)拨出腹腔或盆腔，使用湿的无菌无纺布条包裹肠管或覆盖盆腔脏器并轻轻牵拉以充分暴露腹主动脉。64.具体的：腹腔注射麻醉或气体麻醉受体小鼠；腹部备皮后使用75％的酒精消毒；提起腹部的皮肤，用眼科剪作皮肤横切口，长1.6cm，提起腹肌使用电凝器进行腹肌切割，对出血点及时止血；使用无菌的湿无纺布纱布条(长70mm，宽25mm)包裹肠管并移到小鼠身体左侧、无纺布纱布条(长50mm，宽20mm)覆盖盆腔脏器并向尾侧牵拉，充分暴露腹主动脉(见图1)。65.腹主动脉的游离：利用在动静脉间冲注生理盐水形成组织间隙水肿来扩大动静脉分界线，同时利用线结抬高动脉辅助游离，游离范围为4.5-7mm(上至左髂腰动脉水平，下至髂总动脉分叉以上)(见图2)。66.具体的：游离腹主动脉时，使用注射器在下腔静脉和腹主动脉间隙冲注生理盐水形成组织间隙水肿，使用显微直镊在间隙最宽处首先进行分离。分离出一小段腹主动脉后，从腹主动脉下方穿过1根6-0的丝线，打一个松结，一手用镊子提起线结抬高动脉，另一手同时用直镊逐步向上或向下分离血管间隙的组织。当游离至右髂腰动脉支时，在分支另一侧再穿一根6-0的丝线，同上方法分离血管间隙的组织(见图3)。然后分别将两个松结拉至到游离的腹主动脉上下两端，先打结头侧的线，观察到腹主动脉不再充盈，再打结尾侧的线，然后提起线尾使用显微血管夹夹住线结上方或下方，即获取游离腹主动脉。67.腹主动脉袖套的制备：缝扎右髂腰动脉支，在该分支发出位置剪断受体腹主动脉，在受体腹主动脉的两个断开口的周部分别套上袖套，并分别将断开口外翻包覆套管并用线圈固定为袖套。68.具体的：在下腔静脉的右侧远离主干血管的位置找到右髂腰动脉进行缝扎；在右髂腰动脉支起始处剪断腹主动脉，然后贴紧腹主动脉壁剪断髂腰动脉。使用肝素钠盐水冲洗腹主动脉内残留的血液后，选择2个套管长分别为1.08mm，1.05mm，外径均为0.7mm，内径均为0.65m，壁厚均为0.05mm。使用显微直镊将血管从套管中间穿出并翻折腹主动脉壁于套管外，并使用9-0的丝线结扎固定(见图4)。所示若结扎线位置靠管口，使用一把直镊轻轻夹持线圈(镊尖与线圈平行)，另一手用镊子抵住袖套根部边沿，双手力量相对，使线结的位置朝袖套根部方向(靠近血管夹方向)移动，最大化可套合段的袖套长度(见图4)。69.移植吻合：将准备好的供体主动脉弓放置于受体的腹腔中，采用袖套法血管吻合技术将供体动脉弓根部段动脉壁套于受体腹主动脉近心端的袖套外，并使用7-0丝线固定结扎(见图5)；冲洗生理盐水排出供体动脉和受体袖套中的空气，将供体动脉弓的另一端套于受体腹主动脉远心端的袖套外，并固定结扎(见图5)。70.恢复血液灌注并关腹：先分别松开腹主动脉远心端的线结和血管夹，观察移植后的供体动脉弓内逐渐有血液流入，检查吻合口四周无漏血等异常，再分别松开受体腹主动脉近心端的线结和血管夹；观察两端吻合端均无漏血、血管无扭转以及动脉充盈搏动有力(见图6)；生理盐水冲洗腹腔后回纳肠管，分两层关腹，先对合腹白线后再进行连续缝合切口(7-0尼龙线)(见图7)；消毒皮肤切口，将小鼠置于提前预热的笼子里等待复苏。71.在其它实施例中，也可以将作为供体动脉的主动脉弓替换成胸主动脉和腹主动脉，其对应的移植吻合步骤一致，上述对供体动脉的替换，也属于本技术的保护范围内。72.实施例二：73.材料准备：74.1.设备仪器：手术显微镜(1台，放大倍数8-40倍)，小动物麻醉机(rwd)；75.2.手术器械:眼科镊及眼科剪各1把，显微剪1把，显微弯镊2把(尖头直径0.3mm)，显微直镊2把(尖头直径0.15mm)，显微持针器1把，显微血管夹2个；76.3.试剂耗材:碘伏，肝素钠盐水，4℃生理盐水，无菌无纺布，无菌棉签，9-0丝线，6-0丝线，7-0丝线，7-0尼龙线，2ml注射器，5ml注射器，培养皿，冰袋，医用胶带，动脉套管2个(26g静脉留置针针头制备)：长1.0mm和0.85mm，外径0.6mm，内径为0.55m，壁厚为0.05mm，)。77.实验动物及分组：78.1、动物：选择spf级别野生型(wt)雄性c57bl/6 12只，12-24周龄，体重25-30g；动脉粥样硬化小鼠6只：c57bl/6背景的雄性ldlr缺陷型(ldlr-/-)小鼠给予高脂饲料(60％脂肪，1.5％胆固醇，hfd)喂养20周，体重28-35g。均购自厦门大学实验动物中心。79.2、分组：实验分为2组，对照组为wt c57bl/6移植给wt c57bl/6(n＝6),动脉粥样斑块消退组为hfd-ldlr-/-移植给wt c57bl/6(n＝6)。80.操作过程：81.1、供受体麻醉及保定：82.供受体均使用4-5％异氟烷诱导麻醉，1-2％异氟烷维持麻醉。腹部剃毛后，使用医用胶带固定目标鼠的四肢在手术板上，使其呈仰卧位。使用碘伏消毒并擦除残余毛发。83.2、获取供体主动脉84.进入腹腔后，从下腔静脉注射肝素钠盐水300ul进行全身肝素化后，剪开下腔静脉引流血液；打开胸腔用4℃生理盐水灌洗主动脉；移除胸腺，暴露主动脉弓，分离主动脉弓周围脂肪，游离主动脉弓；使用9-0(丝线)结扎主动脉弓上方的3条分支；在主动脉弓的根部和胸主动脉发出第一条分支水平剪断(见图8)；保存于4℃生理盐水中。85.3、受体手术准备及制备腹主动脉袖套86.受体小鼠麻醉满意后，腹部朝上固定四肢，腹部备皮并使用75％酒精消毒；作腹壁横切口约1.7cm，电凝器切开腹肌，用棉签分别将肠管和盆腔脏器拨向身体左侧和尾侧，使用无菌的无纺布纱布块包裹肠管或覆盖盆腔脏器，滴加生理盐水湿润纱布；充分暴露受体腹主动脉后，用2个尖头棉签擦除腹主动脉表面脂肪的同时松解动静脉粘连；使用装有生理盐水的5ml注射器在动静脉间隙冲注形成组织水肿；使用直镊在间隙最宽处分离出一小段动脉后，穿过6-0丝线，并打一个松结；一把镊子提起线结，另一把镊子小心分离间隙，并配合冲注生理盐水扩大间隙辅助分离；在在下腔静脉右侧找到右髂腰动脉，电凝闭合；小心游离腹主动脉长度约7mm；用线结和显微血管夹分别夹闭游离好的腹主动脉近心端和远心端，然后靠近腹主动脉处剪断右髂腰动脉并水平剪断腹主动脉；使用肝素钠盐水冲洗动脉内残留的血液后，选择一个尺寸合适的袖套，使用显微直镊将血管从袖套中间穿出并翻折动脉壁于袖套外，使用9-0的丝线结扎固定；使用相同方法将另一动脉游离段也翻折于袖套上，结扎固定并剪线。87.4、供受体血管袖套法血管吻合技术端端吻合88.将供体主动脉弓放置于受体的腹腔中，使供体主动脉根部靠近受体腹主动脉的近心端；使用袖套法血管吻合技术将供体动脉弓根部段动脉壁套于受体近心端的袖套外，7-0的丝线固定结扎；冲洗生理盐水排出供体动脉和受体袖套中的空气，使用同样的方法将供体动脉另一端套于受体远心端的袖套外，7-0的丝线固定结扎；先松开远心端的血管夹，可看到移植动脉内逐渐有血液流入，检查上下吻合端均无漏血后松开近心端的血管夹；观察吻合口无漏血、血管无扭转以及动脉充盈搏动有力(见图6)，回纳肠管，分两层关腹；消毒皮肤切口，将小鼠置于提前预热的笼子里等待复苏。89.术后评估90.1、手术时间及成功率统计91.总手术时间为30-40分钟，供体动脉获取需要5-6分钟；受体动脉袖套制备需要5-8分钟；供受体动脉套合需要4-6分钟；受体术中腹主动脉夹闭时间《15分钟。手术当天移植成功率为100％。92.2、移植术后血管的宏观和病理检查93.术后30天对照组和粥样硬化病变的动脉移植组小鼠存活率均为100％。术后30天移植动脉血流通畅且斑块面积缩小(见图9)。术后30天病理检查结果发现wt移植给wt组动脉壁组织结构无异常(见图10)。术后90天病理结果发现斑块消退组的动脉内斑块面积明显少于移植前(见图11)。94.实施例三：95.开发开发了暴露并游离腹主动脉的方法，采取长约1.5-2cm腹部横切口和无菌无纺布条进行充分暴露受体腹主动脉，利用动静脉组织间隙水肿并配合线结提拉快速游离腹主动脉，应用于实施例一和实施例二。96.本实施例中，该方法具体包括步骤：97.暴露腹主动脉：麻醉受体小鼠后备皮并消毒腹部皮肤，作腹壁小横切口，长约1.5-2cm；棉签将肠管和盆腔脏器(膀胱和生殖器官)拨出腹腔或盆腔，使用湿的无菌无纺布条包裹肠管或覆盖盆腔脏器以及腹主动脉旁组织(如生殖动脉)并轻轻牵拉以充分暴露腹主动脉。98.游离腹主动脉：利用在动静脉间冲注生理盐水形成组织间隙水肿来扩大动静脉分界线，同时利用线结抬高动脉辅助游离。99.其中，100.所述利用在动静脉间冲注生理盐水形成组织间隙水肿来扩大动静脉分界线为：采用直镊提起腹主动脉外膜，使用注射器在下腔静脉和腹主动脉间隙冲注生理盐水形成组织间隙水肿，使用显微直镊在间隙最宽处首先进行分离；101.所述利用线结抬高动脉为：分离出一小段腹主动脉后，从腹主动脉下方穿过1根丝线，打一个松结，通过提起线结抬高动脉，同时用直镊逐步向上或向下分离血管间隙的组织；在右髂腰动脉支的另一侧的腹主动脉下方再穿一根丝线，同上方法分离血管间隙的组织；游离长度4.5-7.0mm即可，范围上至左髂腰动脉，下至髂总动脉分支以上；最后，分别将两个松结拉至到游离好的腹主动脉上下两端打结阻断血流，先打头侧的结，在观察到腹主动脉不再充盈，再打结尾侧的结，然后提起线尾使用显微血管夹夹住线结的上方(头侧)或下方(尾侧)，游离腹主动脉结束。102.上面结合附图对本发明进行了示例性描述，显然本发明具体实现并不受上述方式的限制，只要采用了本发明的方法构思和技术方案进行的各种非实质性的改进，或未经改进将本发明的构思和技术方案直接应用于其它场合的，均在本发明的保护范围之内。









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