N-取代-4-[3-(喹啉-6-基)脲基]苯甲酰肼衍生物及其制备方法和用途

有机化合物处理,合成应用技术n-取代-4-[3-(喹啉-6-基)脲基]苯甲酰肼衍生物及其制备方法和用途技术领域[0001]本发明属于医药技术领域，具体涉及一种n-取代-4-[3-(喹啉-6-基)脲基]苯甲酰肼衍生物及其制备方法和用途。背景技术：[0002]胃癌(gastric cancer)是最常见的恶性消化道肿瘤，尤其高发于欧美发达国家，致死率极高。近年来，我国胃癌癌发病人数呈一定上升趋势，是第五大常见癌症和第三大常见癌症死亡原因。与其他肿瘤相比，胃癌具有隐匿性强，中老年人尤其易感等显著性发病特征。临床上，胃癌的治疗方法以手术为主，药物治疗为辅。但是，只有少数患者适合接受手术治疗，且手术的预后效果也不尽如人意。并且传统的化疗药物存在特异性差，毒副作用大，易导致耐药等问题，从而使胃癌化疗的应用也受到了极大的限制。因此，迫切需要开发一些新型的胃癌治疗策略及靶向性药物。[0003]nur77属于类固醇/甲状腺激素受体超家族的成员，其内源性配体至今尚未被发现，因此被称为孤儿核受体。作为立早基因的产物，nur77能够以细胞特异的方式被各种刺激如血清、生长因子、放疗、化疗或促凋亡药物等诱导，从而调控细胞生存、自噬和死亡。研究表明，nur77在正常组织表达较低，但在许多肿瘤中却高表达，尤其是在胃癌中。nur77的表达水平与胃癌的发生发展存在密切的联系。有趣的是，临床上的统计资料表明，nur77表达与胃癌良好预后却有密切关系，原因可能是某些治疗很可能通过nur77靶点的介导起作用。研究表明在nur77在胃癌细胞生长、凋亡等多种生理活动中起着重要调控作用，是潜在的抗胃癌治疗靶标。由于nur77的内源性配体尚未被发现，设计合成小分子调控nur77的表达及功能成为抗胃癌研究的热点。技术实现要素：[0004]鉴于以上技术问题，本发明提供以下技术方案：[0005]本发明的第一目的在于提供一种n-取代-4-[3-(喹啉-6-基)脲基]苯甲酰肼衍生物，其具有如通式ⅰ所示的结构：[0006][0007]其中r选自h、卤素原子、ch3或och3。[0008]本发明第二个目的是提供一种n-取代-4-[3-(喹啉-6-基)脲基]苯甲酰肼衍生物的制备方法，包括以下步骤：[0009]s1、以喹啉-6-胺与4-异氰酸苯甲酸乙酯为原料，进行亲核加成反应，得到中间体1；[0010]s2、以所述中间体1与水合肼为原料，进行肼解反应，得到中间体2；[0011]s3、以所述中间体2与取代苯甲醛为原料，进行加成缩合反应，即得所述n-取代-4-[3-(喹啉-6-基)脲基]苯甲酰肼衍生物。[0012]优选地，所述喹啉-6-胺与4-异氰酸苯甲酸乙酯的摩尔比为0.8～1.2∶1；[0013]所述中间体1与水合肼的摩尔比为1∶20～30；[0014]所述中间体2与取代苯甲醛的摩尔比为0.8～1.2∶1。[0015]优选地，s1中，所述亲核加成反应是在70-80℃下反应反应1.5～2.5h；[0016]s2中，所述肼解反应是在70-80℃反应6～12h；[0017]s3中，所述加成缩合反应是在70-78℃下回流反应6～8h。[0018]本发明第三个目的是提供所述n-取代-4-[3-(喹啉-6-基)脲基]苯甲酰肼衍生物在制备nur77表达抑制剂中的用途。[0019]本发明第四个目的在于提供了所述n-取代-4-[3-(喹啉-6-基)脲基]苯甲酰肼衍生物在制备治疗肿瘤的药物中的用途。[0020]优选地，所述n-取代-4-[3-(喹啉-6-基)脲基]苯甲酰肼衍生物在制备抑制胃癌细胞生长的药物中的用途。[0021]优选地，所述n-取代-4-[3-(喹啉-6-基)脲基]苯甲酰肼衍生物在制备抑制胃癌细胞凋亡的药物中的用途。[0022]本发明第五个目的在于提供一种用于治疗肿瘤的药物，其包括所述n-取代-4-[3-(喹啉-6-基)脲基]苯甲酰肼衍生物，以及药学上可接受的辅料或载体。[0023]对比现有技术，本发明的有益效果为：[0024]1、喹啉类化合物是一类具有广泛生理活性的含氮杂环化合物，广泛应用在医药领域，具有包括杀菌、抗肿瘤、抗病毒、消炎及增强机体免疫等多种作用。酰肼类化合物具有如抗病毒、抗肿瘤、抗炎等广泛的生物活性。本发明利用分子杂合方法和生物电子等排体设计思路，最后设计合成了一类具有新结构的n-取代-4-[3-(喹啉-6-基)脲基]苯甲酰肼衍生物，该衍生物以通式中母核结构作为活性基团，r取代基可进一步增强母核结构的活性；同时该衍生物反应成本低，产率高，反应过程简单易控制，适用于工业化生产，且该类衍生物具有一定的抗胃癌活性，可用于制备抗胃癌药物和研究该类化合物的构效关系。[0025]2、通过western blot实验检测n-取代-4-[3-(喹啉-6-基)脲基]苯甲酰肼衍生物对nur77的调控作用，结果表明，本发明提供的衍生物能够以浓度依赖的方式抑制nur77的表达。附图说明[0026]图1是实施例2提供的化合物处理ags细胞后对细胞凋亡的影响；[0027]图2是实施例2提供的化合物处理ags细胞后nur77蛋白表达的western blotting检测结果。具体实施方式[0028]为了便于理解本发明，现结合具体实施方式对本发明作进一步说明，以进一步诠释本发明，但不构成对本发明的任何方式的限制。[0029]本发明提供一种n-取代-4-[3-(喹啉-6-基)脲基]苯甲酰肼衍生物，其具有如通式ⅰ所示的结构：[0030][0031]其中r选自h、卤素原子、ch3或och3。[0032]下述实验方法和检测方法，如没有特殊说明，均为常规方法；下述试剂和原料，如没有特殊说明，均为市售。[0033]下面结合具体实施例对本发明进行说明。[0034]实施例1[0035]一种n'-(4-甲氧基亚苄基)-4-[3-(喹啉-6-基)脲基]苯甲酰肼，是按照以下步骤制备得到：[0036]1、中间体4-[3-(喹啉-6-基)脲基]苯甲酸乙酯合成[0037]在25ml干燥单口瓶中加入喹啉-6-胺(1.44g，0.01mol)，15ml乙醇，4-异氰酸苯甲酸乙酯(1.91g,0.01mol)，在搅拌状态下升温至70℃，反应2小时，tlc检测反应已结束，停止反应。反应液冷却至室温，抽滤，乙醇洗滤饼，烘干得白色固体产物4-[3-(喹啉-6-基)脲基]苯甲酸乙酯3.0g，收率89.5％。m.p.180.1～180.4℃；[0038]波谱数据：1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ:9.25(s,1h),9.18(s,1h),8.76(d,j＝4.0hz,1h),8.28(d,j＝8.1hz,1h),8.21(d,j＝1.6hz,1h),7.97(d,j＝9.0hz,1h),7.92(d,j＝8.5hz,2h),7.72(dd,j＝1.8,9.0hz,1h),7.64(d,j＝8.5hz,2h),7.48(dd,j＝4.1,8.2hz,1h),4.29(q,j＝6.9hz,2h),1.32(t,j＝7.0hz,3h)；13c nmr(150mhz,dmso-d6)δ:168.7,152.7,144.6,137.8,135.7,130.9,130.1,129.0,123.5,123.4,122.8,122.3,118.9,117.9,113.9,60.8,14.7；esi-hrms(+):m/z calcd for c19h18n3o3+[m+h]+336.1343,found 336.1338.[0039]2、中间体4-[3-(喹啉-6-基)脲基]苯甲酰肼的合成[0040]在50ml干燥单口瓶中加入4-[3-(喹啉-6-基)脲基]苯甲酸乙酯(3.35g，0.01mol)，30ml乙醇，水合肼85％(10g,0.20mol)，在搅拌状态下升温至70℃，反应6小时，tlc检测反应已结束，停止反应。反应液冷却至室温，抽滤，乙醇洗滤饼，烘干得白色固体产物4-[3-(喹啉-6-基)脲基]苯甲酰肼2.60g，收率80.7％。m.p.201.1～202.4℃；[0041]波谱数据：1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ:9.65(brs,1h),9.15(s,1h),9.07(s,1h),8.76(d,j＝2.8hz,1h),8.27(d,j＝8.1hz,1h),8.20(d,j＝2.00hz,1h),7.96(d,j＝9.0hz,1h),7.80(d,j＝8.5hz,2h),7.71(dd,j＝2.0,9.07hz,1h),7.56(d,j＝8.5hz,2h),7.48(dd,j＝4.1,8.2hz,1h),4.44(brs,2h)；13c nmr(150mhz,dmso-d6)δ:166.1,152.8,149.0,144.7,142.6,137.9,135.6,130.0,129.0,128.4,127.0,123.5,122.2,117.8,113.7；esi-hrms(+):m/z calcd for c17h16n5o2+[m+h]+322.1299,found 322.1289；[0042]3、产物n'-(4-甲氧基亚苄基)-4-[3-(喹啉-6-基)脲基]苯甲酰肼的制备(q2)[0043]在干燥的反应瓶中，先依次加入4-甲氧基苯甲醛(0.136g,0.001mol)、4-(3-(喹啉-6-基)脲基)苯甲酰肼(0.322g,0.001mol)、乙醇乙醇(10ml)，再在搅拌状态升温至回流78℃回流反应8h。tlc检测反应已完全，停止反应。过滤，乙醇洗涤滤饼，烘干得n'-(3-甲氧基亚苄基)-4-[3-(喹啉-6-基)脲基]苯甲酰肼0.41g，收率87.2％。[0044]波谱数据：1h nmr(600mhz,dmso-d6)δ:11.66(s,1h),9.61(s,1h),9.59(brs,1h),8.76(d,j＝2.9hz,1h),8.41(s,1h),8.30(d,j＝8.0hz,1h),8.26(d,j＝1.8hz,1h),7.98(d,j＝8.8hz,1h),7.91(d,j＝8.4hz,2h),7.76(dd,j＝2.0,9.0hz,1h),7.71-7.64(m,3h),7.49(dd,j＝4.0,8.0hz,1h),7.03(d,j＝8.4hz,2h),3.81(s,3h)；13c nmr(150mhz,dmso-d6)δ:162.9,161.2,152.9,148.8,147.6,144.4,143.5,138.2,135.9,129.8,129.1,129.1,127.5,126.9,123.6,122.2,118.5,117.8,114.8,113.7,55.8；esi-hrms(+):m/z calcd for c25h22n5o3+[m+h]+440.1717,found 440.1700.[0045]实施例2[0046]一种n'-(4-甲氧基亚苄基)-4-[3-(喹啉-6-基)脲基]苯甲酰肼，与实施例1的不同在于喹啉-6-胺与4-异氰酸苯甲酸乙酯的摩尔比0.8∶1。[0047]实施例3[0048]一种n'-(4-甲氧基亚苄基)-4-[3-(喹啉-6-基)脲基]苯甲酰肼，与实施例1的不同在于喹啉-6-胺与4-异氰酸苯甲酸乙酯的摩尔比1.2∶1。[0049]实施例4[0050]一种n'-(4-甲氧基亚苄基)-4-[3-(喹啉-6-基)脲基]苯甲酰肼，与实施例1的不同在于4-[3-(喹啉-6-基)脲基]苯甲酸乙酯与水合肼的摩尔比1∶30。[0051]实施例5[0052]一种n'-(4-甲氧基亚苄基)-4-[3-(喹啉-6-基)脲基]苯甲酰肼，与实施例1的不同在于4-(3-(喹啉-6-基)脲基)苯甲酰肼与4-甲氧基苯甲醛的摩尔比0.8∶1。[0053]实施例6[0054]一种n'-(4-甲氧基亚苄基)-4-[3-(喹啉-6-基)脲基]苯甲酰肼，与实施例1的不同在于4-(3-(喹啉-6-基)脲基)苯甲酰肼与4-甲氧基苯甲醛的摩尔比1.2∶1。[0055]实施例7[0056]一种n'-(4-甲氧基亚苄基)-4-[3-(喹啉-6-基)脲基]苯甲酰肼，与实施例1的不同在于中间体1——4-[3-(喹啉-6-基)脲基]苯甲酸乙酯合成时是在80℃下反应1.5h。[0057]实施例8[0058]一种n'-(4-甲氧基亚苄基)-4-[3-(喹啉-6-基)脲基]苯甲酰肼，与实施例1的不同在于中间体2——4-[3-(喹啉-6-基)脲基]苯甲酰肼合成时是在80℃反应12h。[0059]实施例9[0060]一种n'-(4-甲氧基亚苄基)-4-[3-(喹啉-6-基)脲基]苯甲酰肼，与实施例1的不同在于产物——n'-(4-甲氧基亚苄基)-4-[3-(喹啉-6-基)脲基]苯甲酰肼合成时是在70℃下回流反应6h。[0061]实施例10[0062]一种n'-(3-甲氧基亚苄基)-4-[3-(喹啉-6-基)脲基]苯甲酰肼，其制备过程与实施例1的不同在于步骤3中将4-甲氧基苯甲醛替换成3-甲氧基苯甲醛，具体为：[0063]在干燥的反应瓶中，先依次加入3-甲氧基苯甲醛(0.136g,0.001mol)、4-(3-(喹啉-6-基)脲基)苯甲酰肼(0.322g,0.001mol)、乙醇(10ml)，再在搅拌状态升温至回流反应。tlc检测反应已完全，停止反应。过滤，乙醇洗涤滤饼，烘干得n'-(3-甲氧基亚苄基)-4-[3-(喹啉-6-基)脲基]苯甲酰肼(记为q5)0.38g，收率86.5％。[0064]波谱数据：1h nmr(600mhz,dmso-d6):11.83(brs,1h),9.82(d,j＝4.4hz,2h),8.77(d,j＝2.9hz,1h),8.46(brs,1h),8.34-8.24(m,2h),7.98(d,j＝9.1hz,1h),7.93(d,j＝8.0hz,2h),7.78(dd,j＝1.2,8.9hz,1h),7.70(d,j＝8.4hz,2h),7.48(dd,j＝4.2,8.2hz,1h),7.38(t,j＝7.7hz,1h),7.33-7.25(m,2h),7.01(d,j＝7.3hz,1h),3.81(s,3h)；13c nmr(150mhz,dmso-d6):163.2,160.0,153.0,148.7,147.6,144.3,143.7,138.3,136.4,136.0,130.4,129.7,129.2,129.1,126.7,123.7,122.2,120.5,117.8,116.6,113.7,111.6,55.6；esi-hrms(+):m/z calcd for c25h22n5o3+[m+h]+440.1717,found 440.1710.[0065]实施例11[0066]一种n'-(3-氯亚苄基)-4-[3-(喹啉-6-基)脲基]苯甲酰肼，其制备过程与实施例1的不同在于步骤3中将4-甲氧基苯甲醛替换成3-氯苯甲醛，具体为：[0067]在干燥的反应瓶中，先依次加入3-氯苯甲醛(0.140g,0.001mol)、4-(3-(喹啉-6-基)脲基)苯甲酰肼(0.322g,0.001mol)、乙醇(10ml)，再在搅拌状态升温至回流反应。tlc检测反应已完全，停止反应。过滤，乙醇洗涤滤饼，烘干得n'-(3-氯亚苄基)-4-[3-(喹啉-6-基)脲基]苯甲酰肼(记为q7)0.40g，收率86.5％。[0068]波谱数据：1h nmr(600mhz,dmso-d6):12.17(brs,1h),9.40(brs,1h),9.39(s,1h),9.12(brs,1h),9.00(d,j＝4.2hz,1h),8.78(d,j＝2.4hz,2h),8.32(d,j＝7.9hz,1h),8.25(d,j＝2.2hz,1h),8.12(d,j＝8.4hz,1h),7.99(d,j＝8.8hz,3h),7.88-7.82(m,2h),7.77(dd,j＝2.4,9.1hz,2h),7.71(d,j＝8.6hz,2h),7.50(dd,j＝4.1,8.1hz,1h)；13c nmr(150mhz,dmso-d6):163.2,152.9,150.8,148.7,148.7,144.7,144.1,143.8,138.1,136.2,135.7,130.2,130.1,129.6,129.4,129.1,128.1,126.3,125.2,124.8,123.8,122.3,120.3,117.9,113.8；esi-hrms(+):m/z calcd for c24h19cln5o3+[m+h]+444.1222,found 444.1224.[0069]实验例1[0070]体外毒性测试[0071]由于实施例1～9制备得到的n'-(4-甲氧基亚苄基)-4-[3-(喹啉-6-基)脲基]苯甲酰肼的性质基本相同，故仅以实施例1、实施例10及实施例11制备得到的产物为例进行说明。[0072]利用mtt法对化合物进行体外毒性测试。在本实验中，该类化合物设置0.78125μm、1.5625μm、3.125μm、6.25μm、12.5μm、25.0μm和50μm共7个浓度，加药时间为48小时，测定其od值，并计算ic50值。结果如表1所示。[0073]表1化合物对细胞毒性筛选(μm)[0074]化合物编号ges-1snu-1agsq224.568.4564.448q5＞506.2561.467q720.3418.43610.345[0075]结果显示，化合物n'-(4-甲氧基亚苄基)-4-[3-(喹啉-6-基)脲基]苯甲酰肼(q2)、n'-(3-甲氧基亚苄基)-4-[3-(喹啉-6-基)脲基]苯甲酰肼(q5)和n'-(3-氯亚苄基)-4-[3-(喹啉-6-基)脲基]苯甲酰肼(q7)对胃癌细胞snu-1和ags都有很好的抑制作用。特别是n'-(3-甲氧基亚苄基)-4-[3-(喹啉-6-基)脲基]苯甲酰肼(q5)在正常胃上皮细胞中毒性较小，并且显著的抑制snu-1和ags胃癌细胞生长。[0076]实验例2[0077]采用流式细胞术对细胞毒性较小且能够抑制胃癌细胞生长的化合物q5(由于实施例1～11制备得到的产物的性质基本相同，故在此仅以实施例10制备得到的产物为例进行说明)进行细胞凋亡检测。ags细胞加入1μm、2μm浓度的药物处理24h后，通过流式细胞术检测，结果表明化合物q5能显著诱导胃癌细胞凋亡，如图1所示。[0078]研究表明，nur77在胃癌细胞生长、凋亡等多种生理活动中起着重要调控作用，是潜在的抗胃癌治疗靶标。由于nur77的内源性配体尚未被发现，设计合成小分子调控nur77的表达及功能成为抗胃癌研究的热点。接下来我们通过western blot实验检测化合物q5对nur77的调控作用，用不同浓度的q5处理ags细胞，药物浓度分别是0.25μm、0.5μm、1μm和2μm，4小时后收样并用western blotting检测nur77蛋白表达，gapdh为内参。结果表明，与对照相比，化合物q5能够以浓度依赖的方式抑制nur77的表达，如图2所示。[0079]显然，本领域的技术人员可以对本发明进行各种改动和变型而不脱离本发明的精神和范围。这样，倘若本发明的这些修改和变型属于本发明权利要求及其等同技术的范围之内也意图包含这些改动和变型在内。









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