一种阿伐那非磷酸酯类化合物及其制备方法和应用与流程

有机化合物处理,合成应用技术1.本发明药物化合物技术领域，尤其涉及一种阿伐那非磷酸酯类化合物及其制备方法和应用。背景技术：2.磷酸二酯酶5(pde5)属超家族酶，能够催化第二信使cgmp转化为gmp。pde5抑制剂被推荐作为治疗勃起功能障碍(ed)的一线药物，此外，pde5抑制剂也可用于治疗高血压、冠心病和前列腺增生等疾病[中国药物化学杂志.2017.27.400-07]。据调查统计，40岁至59岁的男性中约有15％的人有ed，60多岁和70岁以上的男性中70％的人有ed，与许多其他慢性疾病一样，ed的发病率也随着年龄的增长而增加[am j med.2021.134.310-16]。[0003]阿伐那非是一种于2012年4月被美国fda批准用于治疗ed的选择性pde5抑制剂。目前，已上市的pde5抑制剂还有西地那非、伐地那非、他地那非、乌地那非和米罗那非。临床研究数据表明，许多ed患者在使用阿伐那非30min内即能成功进行性生活，西地那非、伐地那非、服用后的起效时间约为90min，他达拉非为2h[药学进展.2012.36.135-36]。因此，阿伐那非的速效优势会更得到ed患者的青睐，它与市场上其它的pde5抑制剂有相同的作用机制，但其具有独特的药动学与药效学特性，口服吸收更快，选择性更高，副作用更少，在长期临床试验中本品受试者因不良反应而退出的比例也较低[the annals of pharmacotherapy.2013.47.1312-20]。累积的数据表明，阿伐那非对ed有更优的药理作用，市场反应良好。[0004]然而，阿伐那非存在水溶性差，作用时间短的缺点。因此，开发水溶性阿伐那非以及阿伐那非前药延长药物的作用时间具有重要的价值。技术实现要素：[0005]有鉴于此，本发明提供了一种阿伐那非磷酸酯类化合物及其制备方法和应用。本发明提供的阿伐那非磷酸酯类化合物水溶性好，作用时间长。[0006]为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：[0007]一种阿伐那非磷酸酯类化合物或其药学上可接受的盐，所述阿伐那非磷酸酯类化合物的结构式如式i所示：[0008][0009]式i中：r为氢、苯基、取代苯基、烷基或取代烷基；[0010]所述取代苯基为邻、间、对位上单取代或多取代的苯基；[0011]所述取代苯基上的取代基为卤素、硝基或烷基；[0012]所述取代烷基上的取代基为卤素或氰基。[0013]优选的，所述式i中的r为以下基团中的任意一种：[0014]h、h、[0015]优选的，所述阿伐那非磷酸酯类化合物为式ii～式iv中的任意一种：[0016][0017]本发明还提供了上述方案所述阿伐那非磷酸酯类化合物的制备方法，包括方法一、方法二、方法三或方法四；[0018]所述方法一包括以下步骤：[0019]将阿伐那非、碱、溶剂和具有式a所示结构的化合物混合进行缩合反应，得到具有式i所示结构的阿伐那非磷酸酯类化合物；[0020][0021]式a中r为苯基、取代苯基、烷基或取代烷基；[0022]所述方法二包括以下步骤：[0023]将阿伐那非、碱、溶剂和具有式b所示结构的化合物混合进行缩合反应，得到中间反应液；所述中间反应液中的中间产物具有式c所示结构；[0024]将所述中间反应液和m-cpba溶液混合进行氧化反应，得到具有式i所示结构的阿伐那非磷酸酯类化合物；[0025][0026]式b和式c中：r为苄基、苯基、烷基或取代烷基。[0027]所述方法三包括以下步骤：[0028]将(ch3o)3po、pocl3与阿伐那非混合进行酯化反应，得到具有式iv所示结构的阿伐那非磷酸酯类化合物；[0029]所述方法四包括以下步骤：[0030]将具有式iii所示结构的化合物、bcl3和溶剂混合进行脱苄基反应，得到具有式iv所示结构的阿伐那非磷酸酯类化合物。[0031]优选的，所述方法一和方法二中的溶剂独立地为非极性溶剂或极性非质子溶剂；所述方法一和方法二中的碱独立地为有机碱或无机碱。[0032]优选的，所述方法一中缩合反应的温度为室温，反应时间为12～24h；所述方法二中缩合反应的温度为室温，反应时间为12～24h；所述方法二中氧化反应的温度为室温，时间为4～12h。[0033]优选的，所述方法三中酯化反应的温度为0℃～25℃，反应时间为1h～8h；所述方法四中脱苄基反应的温度为室温，反应时间为12～48h。[0034]本发明还提供了上述方案所述的阿伐那非磷酸酯类化合物或其药学上可接受的盐在制备治疗磷酸二酯酶5相关疾病的药物中的应用。[0035]优选的，所述磷酸二酯酶5相关疾病包括勃起功能障碍相关疾病、高血压、冠心病或前列腺增生。[0036]优选的，所述应用时，阿伐那非磷酸酯类化合物或其药学上可接受的盐单独使用或者与可药用的辅料混合使用。[0037]本发明提供了一种阿伐那非磷酸酯类化合物，结构式如式i所示。本发明提供的阿伐那非磷酸酯类化合物由于其磷酸酯的结构，极性增大而导致水溶性好，通过磷酸酯缓释作用使得药物作用时间长，在治疗磷酸二酯酶5相关疾病的药物中具有广阔的应用前景。[0038]本发明还提供了上述方案所述阿伐那非磷酸酯类化合物的制备方法，本发明提供的制备方法步骤简单，容易操作，适宜进行大规模生产。附图说明[0039]图1为阿伐那非与式ii、式iii所示结构的化合物的灌胃药物释放效果比较；[0040]图2为阿伐那非与式iv所示结构的化合物的灌胃药物释放效果比较。具体实施方式[0041]本发明提供了一种阿伐那非磷酸酯类化合物或其药学上可接受的盐，所述阿伐那非磷酸酯类化合物的结构式如式i所示：[0042][0043]式i中：r为氢、苯基、取代苯基、烷基或取代烷基；[0044]所述取代苯基为邻、间、对位上单取代或多取代的苯基；[0045]所述取代苯基上的取代基为卤素、硝基或烷基；[0046]所述取代烷基上的取代基为卤素或氰基。[0047]在本发明中，所述取代苯基具体优选为单取代苯基、二取代苯基或三取代苯基，当所述取代苯基上的取代基为卤素时，所述卤素优选为氟、氯或溴，当所述取代苯基上的取代基为烷基时，所述烷基的碳原子数优选为1～18，更优选为1～5，具体的，所述烷基优选为甲基或异丁基。[0048]在本发明中，当所述r为烷基或取代烷基时，所述烷基或取代烷基的碳原子数优选为1～18，更优选为1～10；所述取代烷基上的取代基优选为卤素或氰基，所述卤素优选为氟、氯或溴。[0049]在本发明中，所述式i中的r优选为以下基团中的任意一种：[0050]h、h、[0051]在本发明中，所述阿伐那非磷酸酯类化合物优选为式ii～式iv中的任意一种：[0052][0053]在本发明中，所述式ii所示结构饿的化合物的化学名称为：(s)-(1-(4-((3-氯-4-甲氧苄基)氨基)5-((嘧啶-2-亚甲基)氨基甲酰)-2-嘧啶基)-2-吡咯烷基)甲基磷酸二甲酯；所述式iii所示结构饿的化合物的化学名称为：(s)-(1-(4-((3-氯-4-甲氧苄基)氨基)5-((嘧啶-2-亚甲基)氨基甲酰)-2-嘧啶基)-2-吡咯烷基)甲基磷酸二苄酯；所述式iv所示结构饿的化合物的化学名称为：(s)-(1-(4-((3-氯-4-甲氧苄基)氨基)5-((嘧啶-2-亚甲基)氨基甲酰)-2-嘧啶基)-2-吡咯烷基)甲基磷酸。在本发明的具体实施例中，所述阿伐那非磷酸酯类化合物最优选为具有式iv所示结构的化合物。[0054]本发明还提供了上述方案所述阿伐那非磷酸酯类化合物的制备方法，包括方法一、方法二、方法三和方法四，其中方法一用于制备r为苯基、取代苯基、烷基或取代烷基时的阿伐那非磷酸酯类化合物，方法二用于制备r为苄基、苯基、烷基或取代烷基时的阿伐那非磷酸酯类化合物，方法三和方法四用于制备r为氢时的阿伐那非磷酸酯类化合物(即式iv所示的阿伐那非磷酸酯类化合物)。下面分别进行详细说明：[0055]在本发明中，所述方法一包括以下步骤：[0056]将阿伐那非、碱、溶剂和具有式a所示结构的化合物混合进行缩合反应，得到具有式i所示结构的阿伐那非磷酸酯类化合物；[0057][0058]式a中，r为苯基、取代苯基、烷基或取代烷基，所述取代苯基和取代烷基的种类和上述方案一致，在此不再赘述。[0059]在本发明中，所述方法一的合成路线如下式所示：[0060][0061]在本发明中，所述方法一中使用的溶剂优选为非极性溶剂或极性非质子溶剂，更优选包括二氯甲烷、1,2-二氯乙烷、二氧六环、四氢呋喃、n,n-二甲基乙酰胺和二甲基亚砜中的一种或几种；所述碱优选为无机碱或有机碱，所述无机碱优选包括碱金属碳酸盐或碱金属磷酸盐，所述碱建树碳酸盐优选包括碳酸钾、碳酸铯和碳酸钠中的一种或几种，所述碱金属磷酸盐优选包括磷酸钾和磷酸钠中的一种或两种；所述有机碱优选包括吡啶、4-二甲氨基吡啶、三乙胺、三甲胺和四氮唑中的一种或几种。[0062]在本发明中，所述方法一中，阿伐那非和碱的摩尔比优选为1:(1.1～1.3)，更优选为1:1.2；所述阿伐那非和具有式a所示结构的化合物的摩尔比优选为1:(1.1～1.3)，更优选为1:1.2；本发明对所述具有式a所示结构的化合物的来源没有特殊要求，采用市售的上述化合物或者采用本领域技术人员熟知的方法合成均可。本发明对所述溶剂的用量没有特殊要求，能够保证反应顺利进行即可。[0063]在本发明中，所述方法一中缩合反应的温度优选为室温，反应时间优选为12～24h；所述缩合反应优选在氮气保护条件下进行；在本发明的具体实施例中，优选先将阿伐那非溶解于溶剂中，然后加入碱，之后在氮气保护条件下冰水浴冷却15min，采用注射器向反应液中加入具有式a所示结构的化合物，之后自然升温至室温进行反应。本发明优选采用tlc监测反应，待原料反应完全后停止反应；所述tlc监测采用的试剂为甲醇和二氯甲烷的混合溶剂，所述混合溶剂中甲醇的体积分数优选为5％，记为5％meoh/dcm。[0064]反应完成后，本发明优选将所得反应料液中的溶剂蒸干，得到粗产物，然后将所述粗产物进行硅胶柱层析纯化，得到具有式i所示结构的阿伐那非磷酸酯类化合物；在本发明中，所述硅胶柱层析纯化采用的洗脱试剂为甲醇和二氯甲烷的混合溶剂，所述混合溶剂中甲醇和二氯甲烷的体积比优选为1:(20～30)。[0065]在本发明中，所述方法二包括以下步骤：[0066]将阿伐那非、碱、溶剂和具有式b所示结构的化合物混合进行缩合反应，得到中间反应液；所述中间反应液中的中间产物具有式c所示结构；[0067]将所述中间反应液和m-cpba溶液混合进行氧化反应，得到具有式i所示结构的阿伐那非磷酸酯类化合物；[0068][0069]式b和式c中：r为苄基、苯基、烷基或取代烷基。[0070]在本发明中，所述方法二的合成路线如下式所示：[0071][0072]本发明先将阿伐那非、碱、溶剂和具有式b所示结构的化合物混合进行缩合反应，得到中间反应液。在本发明中，所述方法二中使用的溶剂优选为非极性溶剂或极性非质子溶剂，更优选包括二氯甲烷、1,2-二氯乙烷、二氧六环、四氢呋喃、n,n-二甲基乙酰胺和二甲基亚砜中的一种或几种；所述碱优选为无机碱或有机碱，所述无机碱优选包括碱金属碳酸盐或碱金属磷酸盐，所述碱金属碳酸盐优选包括碳酸钾、碳酸铯和碳酸钠中的一种或几种，所述碱金属磷酸盐优选包括磷酸钾和磷酸钠中的一种或两种；所述有机碱优选包括吡啶、4-二甲氨基吡啶、三乙胺、三甲胺和四氮唑中的一种或几种。[0073]在本发明中，所述方法二中，阿伐那非和碱的摩尔比优选为1:(1.1～1.3)，更优选为1:1.2；所述阿伐那非和具有式b所示结构的化合物的摩尔比优选为1:(1.1～1.3)，更优选为1:1.2；本发明对所述具有式b所示结构的化合物的来源没有特殊要求，采用市售的上述化合物或者采用本领域技术人员熟知的方法合成均可。本发明对所述溶剂的用量没有特殊要求，能够保证反应顺利进行即可。[0074]在本发明中，所述方法二中缩合反应的温度优选为室温，反应时间优选为12～24h，所述缩合反应优选在氮气保护条件下进行。在本发明的具体实施例中，优选先将阿伐那非溶解于溶剂中，然后加入碱，之后在氮气保护条件下搅拌5min，采用注射器向反应液中加入具有式b所示结构的化合物并在搅拌条件下进行反应。反应完毕后，无需进行任何处理，直接进行下一步骤的反应即可。[0075]得到中间反应液后，本发明将中间反应液和m-cpba(间氯过氧苯甲酸)溶液混合进行氧化反应，得到具有式i所示结构的阿伐那非磷酸酯类化合物。在本发明中，所述m-cpba溶液采用的溶剂优选和缩合反应步骤中采用的溶剂一致，在此不再赘述；所述m-cpba溶液的浓度优选为0.143g/ml；所述m-cpba和阿伐那非的质量比优选为(0.7～0.8):1，更优选为0.715:1。[0076]在本发明中，所述氧化反应的温度优选为室温，反应时间优选为4～12h；在本发明的具体实施例中，优选先将中间反应液转移至-78℃冷阱中冷却搅拌15min，然后采用恒压滴液漏斗加入m-cpba溶液，滴加完成后自然升温至室温进行氧化反应；本发明优选采用tlc监测反应，待原料反应完全后停止反应；所述tlc监测采用的试剂为甲醇和二氯甲烷的混合溶剂，所述混合溶剂中甲醇的体积分数优选为5％，记为5％meoh/dcm。[0077]氧化反应完成后，本发明优选将所得产物料液和水混合后分层，水层采用有机溶剂萃取，将所得有机层依次进行饱和氯化钠洗涤、无水硫酸钠干燥和蒸干，得到粗产物，将所得粗产物进行硅胶柱层析纯化，得到具有式i所示结构的阿伐那非磷酸酯类化合物。在本发明中，所述萃取用有机溶剂优选为二氯甲烷，所述萃取的次数优选为2次；所述硅胶柱层析纯化采用的洗脱试剂为甲醇和二氯甲烷的混合溶剂，所述混合溶剂中甲醇和二氯甲烷的体积比优选为1:(20～30)。[0078]在本发明中，所述方法三包括以下步骤：[0079]将(ch3o)3po、pocl3与阿伐那非混合进行酯化反应，得到具有式iv所示结构的阿伐那非磷酸酯类化合物。[0080]在本发明中，所述方法三的合成路线如下式所示：[0081][0082]在本发明中，所述(ch3o)3po、pocl3和阿伐那非的用量比优选为6ml:6ml:1mol；所述酯化反应的温度优选为0～25℃，反应时间优选为1～8h；在本发明的具体实施例中，优选在5℃条件下，将阿伐那非加入(ch3o)3po和pocl3的混合液中，然后快速搅拌至反应完全。反应完成后，本发明优选将用冰水淬灭反应，将所得水溶液的ph值用naoh调节至4～6，然后使用c18柱纯化得到阿伐那非磷酸酯类化合物；所述c18柱纯化采用的洗脱剂优选为甲醇和水的混合溶剂，所述混合溶剂中甲醇和水的体积比优选为1:(1～10)，在本发明的具体实施例中，所述c18柱纯化采用的洗脱方式优选为梯度洗脱，优选按照甲醇和水的体积比为1:10、2:8：3:7、4:6：5:5、6:4的比例进行梯度洗脱，收集体积比为6:4时洗脱下来的组分。[0083]在本发明中，所述方法四包括以下步骤：[0084]将具有式iii所示结构的化合物、bcl3和溶剂混合进行脱苄基反应，得到具有式iv所示结构的阿伐那非磷酸酯类化合物。[0085]在本发明中，所述方法四的合成路线如下：[0086][0087]在本发明中，所述方法四采用的溶剂优选为非极性溶剂或极性非质子溶剂，更优选包括二氯甲烷、1,2-二氯乙烷、二氧六环、四氢呋喃、n,n-二甲基乙酰胺和二甲基亚砜中的一种或几种；所述具有式ii所示结构的化合物和bcl3的摩尔比优选为1:12.5；所述脱苄基反应的温度优选为室温，反应时间优选为12～48h。在本发明的具体实施例中，优选先将具有式ii所示结构的化合物溶解于溶剂中，然后在0℃条件下加入bcl3溶液，之后升温至室温进行反应，lc-ms监测至反应结束；所述bcl3溶液的浓度优选为1mol/l，所述bcl3溶液采用的溶剂优选和脱苄基反应采用的溶剂一致，在此不再赘述。[0088]脱苄基反应完成后，本发明优选向所得产物料液中加入饱和碳酸氢钠溶液中和，然后将所得中和液冷冻干燥，得到粗产物，将所述粗产物使用c18柱纯化，得到阿伐那非磷酸类化合物；所述c18柱纯化采用的洗脱剂优选为甲醇和水的混合溶剂，所述混合溶剂中甲醇和水的体积比优选为1:(1～10)。[0089]本发明还提供了上述方案所述的阿伐那非磷酸酯类化合物或其药学上可接受的盐在制备治疗磷酸二酯酶5相关疾病的药物中的应用；在本发明中，所述磷酸二酯酶5相关疾病优选包括勃起功能障碍相关疾病、高血压、冠心病或前列腺增生；所述应用时，阿伐那非磷酸酯类化合物或其药学上可接受的盐优选单独使用或者与可药用的辅料混合使用；本发明对所述辅料的具体种类没有特殊要求，采用本领域技术人员熟知的辅料即可，具体如赋形剂、稀释剂等，在本发明的具体实施例中，优选采用辅料，将上述阿伐那非磷酸酯类化合物或其药学上可接受的盐制备成口服给药的片剂、胶囊剂、颗粒剂或糖浆剂。[0090]下面将结合本发明中的实施例，对本发明中的技术方案进行清楚、完整地描述，但不能将它们理解为对本发明保护范围的限定。[0091]下列实施例中，1h-nmr用jeol jnm-eczs 400核磁共振仪记录，化学位移以δ(ppm)表示；分离纯化用硅胶，未说明均为200-300目，洗脱液的配比均为体积比，使用到的试剂如未特别说明，均为市售分析纯。[0092]实施例1[0093](s)-(1-(4-((3-氯-4-甲氧苄基)氨基)5-((嘧啶-2-亚甲基)氨基甲酰)-2-嘧啶基)-2-吡咯烷基)甲基磷酸二甲酯(式ii)的制备，反应式如下[0094][0095]阿伐那非(2.0g,4.13mmol)溶解于dcm(50ml)中，加入py(400mg,4.96mmol)，氮气保护，冰水浴冷却15min，用注射器加入o,o-二甲基磷酰氯(720mg,4.96mmol)，自然升温至室温，搅拌过夜。tlc(5％meoh/dcm)监测反应，待原料反应完全后停止反应，直接蒸干溶剂，柱层析4-5％meoh/dcm洗脱，得黄色油状物1.64g，收率67.2％。[0096]1h nmr(400mhz,chloroform-d)δ9.02(t,j＝5.9hz,1h),8.69(d,j＝4.9hz,2h),8.39(d,j＝11.5hz,1h),7.44–7.28(m,2h),7.23–7.12(m,2h),6.83(d,j＝7.8hz,1h),4.75(d,j＝4.5hz,2h),4.66–4.45(m,2h),4.38–4.22(m,2h),3.83(s,3h),3.76–3.44(m,9h),2.16–1.87(m,4h).hplc-ms(esi+):[m+h]+:593.0[0097]实施例2[0098](s)-(1-(4-((3-氯-4-甲氧苄基)氨基)5-((嘧啶-2-亚甲基)氨基甲酰)-2-嘧啶基)-2-吡咯烷基)甲基磷酸二苄酯(式iii)的制备，反应式如下：[0099][0100]阿伐那非(2.0g,4.13mmol)溶解于dcm(50ml)中，加入四氮唑(350mg,4.96mmol)，氮气保护，常温搅拌5min,用注射器加入二苯基n,n'-二异丙基亚磷酰胺(1.72g,4.96mmol)，搅拌过夜。反应液转移至-78℃冷阱冷却搅拌15min，恒压滴液漏斗加入m-cpba的二氯甲烷溶液(1.43g,10ml dcm)，滴加m-cpba至反应液中，滴加完成后自然升温至室温。tlc(5％meoh/dcm)监测反应，室温6h反应完全后停止反应。加水100ml，分液，水层dcm 50ml×2萃取，合并二氯甲烷层，饱和氯化钠50ml×1洗，无水硫酸钠干燥，蒸干，3％meoh/dcm柱层析纯化得黄色油状产物1.7g，收率55.4％。[0101]1h nmr(400mhz,chloroform-d)δ9.28–9.11(m,1h),8.69(d,j＝5.0hz,2h),8.59(s,1h),7.95(t,j＝1.9hz,1h),7.87(dd,j＝7.7,1.5hz,1h),7.84–7.74(m,1h),7.45–7.39(m,1h),7.31(d,j＝11.4hz,2h),7.25(d,j＝7.7hz,3h),7.19(t,j＝5.0hz,2h),7.07(td,j＝9.1,3.5hz,1h),6.76(d,j＝8.8hz,1h),5.25(s,1h),4.98(td,j＝9.0,3.2hz,4h),4.79(d,j＝4.9hz,2h),4.52(p,j＝7.4,6.6hz,1h),4.32–4.18(m,2h),4.07–3.89(m,1h),3.79(d,j＝13.2hz,3h),3.72–3.41(m,2h),2.03–1.82(m,4h).hplc-ms(esi+):[m+h]+:745.1[0102]实施例3[0103](s)-(1-(4-((3-氯-4-甲氧苄基)氨基)5-((嘧啶-2-亚甲基)氨基甲酰)-2-嘧啶基)-2-吡咯烷基)甲基磷酸(化合物iii)的制备。分别采用路线1和路线2进行制备，路线1的反应式如下：[0104][0105]在5℃的(ch3o)3po(6ml)和pocl3(6ml，40mmol)的溶液中，加入阿伐那非(1.0g，2.0mmol)，快速搅拌。反应完全后，用冰水淬灭反应，得到的水溶液用naoh调ph至4-6(ph试纸黄色)，直接上样c18柱，水400ml洗脱，甲醇200ml洗脱得产物，甲醇旋蒸至50ml，静置结晶得产物1.4g，收率62％。[0106]路线2的反应式如下：[0107][0108]将化合物ii(1.0g，1.3mmol)溶解于dcm(20ml)中，0℃下加入1mol/l的bcl3溶液(16.25ml)，室温搅拌2天。lc-ms监测反应，反应完全后加入饱和碳酸氢钠调ph＝7，反应液冷冻干燥，使用c18柱meoh：h2o＝1:10～3:2梯度洗脱纯化，得到白色固体产物300mg，收率40.8％。[0109]1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ9.14(dt,j＝11.6,6.0hz,1h),8.82(dt,j＝11.8,5.8hz,1h),8.75(d,j＝4.9hz,2h),8.54(d,j＝4.2hz,1h),7.37(dd,j＝8.6,3.7hz,2h),7.34–7.23(m,1h),7.07(t,j＝7.5hz,1h),4.57(d,j＝5.9hz,3h),4.29–3.89(m,5h),3.80(s,3h),3.65–3.37(m,3h),2.11–1.71(m,4h).hplc-ms(esi+):[m+h]+:564.1.[0110]测试例1水溶性测试[0111]1、标准曲线的配备[0112]称取样品500mg于研钵中研磨5min，称取24.57mg于50ml容量瓶中，甲醇稀释至刻度，超声5min溶解。得到的母液溶度为0.4914mg/ml，按照表1中的比例对母液进行稀释，得到线性溶液。[0113]表1母液稀释比例[0114][0115]2、标准曲线采用uv仪器测定[0116]uv型号：shimadzu uv-2550uv-visible spectrophotometer[0117]检测波长：260nm[0118]测试所得标准曲线为：y＝0.0248x+0.0185，r2＝0.9984，r＝0.9992，其中y为溶解度，x为吸光度；[0119]3、待测样品精密称重(20mg左右)，加纯水定容至2ml，旋涡助溶20秒，样品采用0.22μm过滤膜过滤后，滤液用水稀释100倍待测试(移液管移液100μl至10ml容量瓶，定容)，在260nm波长下测试吸光度，测试结果代入标准曲线，计算溶解度。[0120]测试结果如下：[0121]式ii化合物：吸光度:0.476，溶解度：18.44μg/ml，乘以稀释倍数100，溶解度:1.872mg/ml。式iii化合物：吸光度:0.481，溶解度：18.65μg/ml，乘以稀释倍数100，溶解度:1.840mg/ml。式iv化合物：吸光度:0.869，溶解度：34.29μg/ml，乘以稀释倍数100，溶解度:3.392mg/ml。[0122]测试例2生物活性测试[0123]通过测试在大鼠体内释放阿伐那非的速度来评估本发明化合物的活性。[0124]实验原理与方法：基于超高效液相-质谱-质谱联用(lc-ms-ms)比较阿伐那非与阿伐那非磷酸酯衍生化合物腹腔给药后大鼠的血药浓度。[0125]实验方法：[0126](1)液质样品制备：经过查阅阿伐那非药动学文献，6h以后很难检测到阿伐那非原型药物，因此本实验选择检测腹腔给药1h内的血液样品。采用液液萃取法，取300μl的血清和300μl乙酸乙酯置于干净ep管中，涡旋混合后，吸取上清，重复三次，合并上清。上清真空干燥后，残渣加入200μl的75％乙腈复溶，低温高速离心(18000g，4摄氏度)20min，吸取150μl，置于进样瓶待分析。[0127](2)液相分析条件：[0128]色谱条件：色谱柱为agilentzorbax eclipse plus c18柱(2.1×100mm,1.8μm)，流动相a为0.1％甲酸水溶液，流动相b为乙腈，按下表1的规定进行梯度洗脱，流速为0.4ml/min，柱温为25℃，进样体积：2μl。[0129]表1梯度洗脱程序(体积分数)[0130][0131](3)质谱条件：应用esi+正模式进行检测，气体温度(gas temp.)为325℃，干燥气体(drying gas)为8l/min，喷雾器(nebulizer)为35psi，鞘气温度(sheath gas temp.)为350℃，鞘气流速(aux gas flow)为11l/min，毛细管电压(vcap)为4000v，碎裂电压(fragment)为150v，分离器(skimmer)为65v，oct 1rf vpp为750v。使用esi-l low concentration tuning mix(g1969-8500)对准确质量数进行矫正。一级质谱扫描范围：m/z 50～1100；二级质谱在一级扫描基础上选择前3强进行诱导碰撞解离(cid)获得二级质谱数据。[0132]实验结果：[0133]色谱质谱优化：阿伐那非属于含氮杂原子的杂环化合物(结构式如式v所示)，其分子式为c23h27cln7o3，准确分子量483.1858da，在esi+状态下色谱峰响应优于esi-状态下色谱峰。因此选择监测阿伐那非的[m+h]+＝484.1858的色谱峰，在色谱中7.88min出峰，在此保留时间附近无其他杂z9hi干扰，表明色谱特异性好。[0134][0135]阿伐那非磷酸酯类化合物和阿伐那非灌胃药物释放效果比较结果如图1～图2所示，图1为阿伐那非与式ii、式iii所示结构的化合物的灌胃药物释放效果比较，图2为阿伐那非与式iv所示结构的化合物的灌胃药物释放效果比较；图1～图2中，av代表阿伐那非原药，ii、iii、iv代表式ii、iii、iv所示结构的化合物，后续表示为化合物(ii)、化合物(iii)和化合物(iv)。[0136]根据图1可以看出，阿伐那非1h相比阿伐那非0.5h，阿伐那非血液浓度开始下降，表明阿伐那非进入排泄相。化合物(ii)1h相比化合物(ii)0.5h，阿伐那非血液浓度开始上升，表明阿伐那非处于吸收相。因此说明化合物(ii)可能具有一定缓释作用；化合物(iii)1h相比化合物(iii)0.5h，阿伐那非血液浓度开始下降，表明化合物(iii)进入排泄相，没有缓释作用。化合物(iv)1h相比化合物(iv)0.5h，阿伐那非血液浓度开始上升，表明阿伐那非处于吸收相，且1h的血药浓度达到阿伐那非的80％，因此说明衍生化化合物(iv)具有很好的缓释作用。[0137]以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。









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