一种利用乳酸防治烟草黑胫病的方法

农业,林业,园林,畜牧业,肥料饲料的机械,工具制造及其应用技术1.本发明涉及烟草种植技术领域，特别涉及一种利用乳酸防治烟草黑胫病的方法。背景技术：2.烟草[nicotiana tabacum l.]为茄科烟草属植物，原产于南美洲，中国南北各省区广为栽培；是一种重要的经济作物。烟草产业在地方和国家财政收入中占有重要的地位。但在烟草生产过程中，其产量和品质常受到多种病虫害影响。其中以发病高、危害大、难以控制的烟草黑胫病最为普遍和严重。[0003]烟草黑胫病是一种烟草土传真菌病害，又名“黑秆疯、乌头病、黑根”，其病原菌为烟草疫霉。该种病害近年来在云南烟区常有发生，平均发病率为5.0％～12％，严重时发病率高达75％，给烟草生产造成了巨大的经济损失。在高温高湿的条件下，病害可迅速蔓延，造成严重的产量损失。传统的防治策略，包括轮作、施用杀菌剂和使用抗病品种，都不能较好地控制这种土传病害。杀菌剂虽然在当今大多数情况下使用，但由于长期重复使用，产生了耐药病原体菌株，同时导致农药残留和环境污染等一系列问题出现，制约着烤烟产业的发展，因此越来越不受欢迎。因此，探索更有效、可持续的土传病害防治方法迫在眉睫。[0004]在自然环境下，植物经常面临着多种生物胁迫和非生物胁迫，为了适应这种不利环境，植物在与生物和非生物因素的斗争中，进化出了复杂的抗病调控途径。当病原菌侵染时，植株本身会通过多种机制产生一系列的免疫反应来抵抑病原菌的侵害，我们称之为植物免疫系统或先天免疫。利用植物固有的先天防御机制，对植物进行外界因素(生物因子、物理因子、化学因子)刺激后产生的对病原体进行自行攻击的自然抗性反应，称为诱导抗病性。植物诱导抗病的发现从根本上改变了传统的对付植物病害的方法，实现了由治病到防病的技术转型。传统的对付植物病害的方法是发现植物得病后，用农药杀死病原菌。这些农药在杀死病原菌的同时，在植物上也有大量的残留，长期的使用对环境已造成了巨大的危害。而通过植物免疫诱导技术来诱导植物自身产生抗性则不然，因为大部分植物免疫诱导技术所用物质是无毒、无残留的物质且用量又极低，通过这类物质来对付植物病害，几乎不会对环境产生不良影响。植物免疫诱导技术可称得上是植物的“疫苗”，在植物发病前施用，以防为主，使植物更加健康的生长，从而杜绝或减少化学农药的使用。因此，对其研究、开发应用具有重大意义。技术实现要素：[0005]本发明的目的是提供一种利用乳酸防治烟草黑胫病的方法，该方法简单、易操作，能有效预防烟草黑胫病，可对烟草黑胫病进行定向防治。[0006]本发明的上述技术目的是通过以下技术方案得以实现的：[0007]一种利用乳酸防治烟草黑胫病的方法，烟草幼苗移栽后用乳酸溶液均匀喷洒在其叶面上。[0008]进一步优选的：所述乳酸溶液的浓度为2～7mm/l。[0009]进一步优选的：所述乳酸溶液的浓度为7mm/l。[0010]进一步优选的：每株烟草幼苗喷洒乳酸溶液45～55ml，以叶片均布药液且不流淌为宜。[0011]进一步优选的：烟草幼苗移栽两周后生长至五叶一心时开始喷洒所述乳酸溶液。[0012]进一步优选的：使土壤水分保持在75％～85％。[0013]进一步优选的：控制氮肥增施钾肥,保证氮、磷、钾比例达到1:(1.5-2.0):(3-3.5)。[0014]与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：[0015]本发明首先找到可能防治烟草黑胫病的乳酸，通过综合考量乳酸对黑胫病病原菌的抑菌能力和对烟草植株的毒害作用，筛选出抑菌效果良好、可定向应用于烟草黑胫病防治的7mm/l乳酸，通过喷施乳酸以防治烟草黑胫病，该防治方法操作简单，防治效果较好，天然无污染。附图说明[0016]图1是本发明设置实验的流程图；[0017]图2是本发明乳酸对烟草疫霉菌丝抑制结果图；[0018]图3是乳酸对烟草疫霉菌丝的抑制效果图；[0019]图4是乳酸对烟草疫霉孢子囊的抑制效果图；[0020]图5是各处理烟草形态图；[0021]图6是蒸馏水与乳酸防治烟草黑胫病的对比效果图。具体实施方式[0022]以下结合附图对本发明作进一步详细说明。[0023]实施例1，一种利用乳酸防治烟草黑胫病的方法，烟草幼苗移栽两周后生长至五叶一心时，用乳酸浓度为0mm/l的溶液均匀喷洒在其叶面上，每株烟草幼苗喷洒乳酸溶液50ml左右，以叶片均布药液且不流淌为宜。这一时期使土壤水分保持在80％左右，控制氮肥增施钾肥,保证氮、磷、钾比例达到1:1.8:3.2，增强烟株抗病性。[0024]实施例2，一种利用乳酸防治烟草黑胫病的方法，实施例2与实施例1相同的技术方案不再赘述，其不同的技术方案在于：乳酸的浓度为1mm/l。[0025]实施例3，一种利用乳酸防治烟草黑胫病的方法，实施例3与实施例1相同的技术方案不再赘述，其不同的技术方案在于：乳酸的浓度为2mm/l。[0026]实施例4，一种利用乳酸防治烟草黑胫病的方法，实施例4与实施例1相同的技术方案不再赘述，其不同的技术方案在于：乳酸的浓度为5mm/l。[0027]实施例5，一种利用乳酸防治烟草黑胫病的方法，实施例5与实施例1相同的技术方案不再赘述，其不同的技术方案在于：乳酸的浓度为7mm/l。[0028]实施例6，一种利用乳酸防治烟草黑胫病的方法，实施例6与实施例1相同的技术方案不再赘述，其不同的技术方案在于：乳酸的浓度为10mm/l。[0029]实施例7，一种利用乳酸防治烟草黑胫病的方法，实施例7与实施例1相同的技术方案不再赘述，其不同的技术方案在于：乳酸的浓度为15mm/l。[0030]设置实验[0031]步骤1，培养烟草疫霉菌株；[0032]从黑胫病烟草病株茎秆中分离出烟草疫霉菌株。并在马铃薯葡萄糖琼脂(pda:200克、马铃薯、20克葡萄糖和15克琼脂在1000毫升水中的提取物)上进行常规培养备用。[0033]步骤2，检测不同浓度的乳酸溶液对黑胫病病原菌的抑制效果[0034]步骤21，制备乳酸原液[0035]用无菌蒸馏水制备乳酸原液，溶液通过微滤膜(0.2μm)过滤除菌；[0036]步骤22，制备带药平板[0037]pda培养基进行高温灭菌45min，待pda冷却至40-50℃，将乳酸原液加入pda培养基中，获得6组含乳酸的pda培养基，使得每组培养基中乳酸的浓度为1mm、2mm、5mm、7mm、10mm和15mm，其中不加乳酸的pda培养基为ck，倒出带有不同浓度乳酸的培养基即为带药平板；[0038]步骤23，接种烟草疫霉菌株[0039]将烟草疫霉菌株分别接种于含不同浓度乳酸的带药平板和ck组的带药平板上，待ck组菌落面积生长至2/3时，采用十字交叉法测量菌落直径；[0040]步骤24，统计数据[0041]抑制率＝(ck组的菌落直径-处理组的菌落直径)/ck组的菌落直径，重复三次，获得烟草疫霉在不同乳酸浓度中的生长情况，进而判断乳酸对烟草疫霉的抑制效果，评估结果如图2、图3所示。[0042]由图2、图3可知，烟草疫霉的菌丝生长受到乳酸的抑制，且呈剂量依赖性。从1mm/l开始对菌丝生长有抑制作用，在7mm/l的乳酸作用下达到40％的抑制作用。[0043]步骤3，检测不同浓度的乳酸溶液对黑胫病病原菌孢子囊的抑制效果：配制含不同浓度的乳酸(0、1、2、5、7、10、15mm)诱导液，打取7mm烟草疫霉菌饼转移至培养皿中，并向皿中加入含各浓度乳酸诱导液10ml，之后将培养皿密封好放入恒温培养箱26℃，光照培养48h。在无菌操作环境下，平行削去菌饼下部培养基，使其厚度在1mm左右，置于载破片上在10x20配光学显微镜下观察孢子囊的个数，进行拍照记录。[0044]由图4可知，不同浓度的乳酸对烟草黑胫病病原菌孢子囊均有较好的抑制作用，其中在7mm/l的乳酸作用下达到80％的抑制作用。[0045]步骤4，筛选出适合的乳酸浓度[0046]步骤41，配制含不同浓度的乳酸(0、1、2、5、7、10、15mm)诱导液；[0047]步骤42，烟草育苗与移栽[0048]烟草(红花大金元)种子采用漂浮育苗后移栽到花盆中(直径＝20cm)，每盆保留一个幼苗，并在温室中培育(25±3℃)；[0049]步骤43，乳酸预处理[0050]在烟草长至5-6叶时，分为7组进行处理，每组包含10个植株，7个分组分别用(0、1、2、5、7、10、15mm)的乳酸进行一次叶面喷雾、茎基部喷淋，间隔两天喷一次，共喷三次。[0051]步骤44，烟草植株生长状况统计[0052]分别统计7组中株高、茎围、最大叶长及最大叶宽的平均值，参照表1。[0053]表1不同浓度乳酸对烟草生长的影响[0054][0055]综合考虑乳酸对烟草疫霉菌丝生长抑制、对孢子囊的抑制效果以及对烟草形态指标的影响，筛选出7mm的乳酸对黑胫病病原菌抑制效果较好、且不影响烟草生长。[0056]步骤5，验证乳酸对烟草黑胫病的防治效果[0057]步骤51，烟草育苗与移栽[0058]烟草(红花大金元)种子采用漂浮育苗后移栽到花盆中(直径＝20cm)，每盆保留一个幼苗，并在温室中培育(25±3℃)；[0059]步骤52，乳酸预处理[0060]在烟草长至5-6叶时，用7mm/l的乳酸进行一次叶面喷雾、茎基部喷淋，间隔两天喷一次，共喷三次，以喷洒蒸馏水作为对照。之后,各处理幼苗分别覆盖着塑料袋保持高湿度。每个处理进行三次重复，每个重复包含10个植株。[0061]步骤53，接种病原菌[0062]采用菌丝块基部创伤接种法进行烟草疫霉的接种(用手术刀划伤烟苗茎基部2mm伤口，再将烟草疫霉菌琼脂菌饼置于伤口表面，然后用无菌棉保湿)。以接种无菌pda培养基为空白对照,创伤模拟接种。接种过的幼苗生长在温室中。实验设计和接种:(a)对照:蒸馏水/模拟接种(dw+mock)；(b)蒸馏水/烟草疫霉接种(dw+p.nic)；(c)乳酸/模拟接种(la+mock)；(d)乳酸/烟草疫霉接种(la+p.nic)。每个处理六株植物。试验重复三次。[0063]步骤54，植株病害观察[0064]植株于25℃下光暗交替培养15d统计发病情况。病情指数＝∑(各级病株数x相应级数)/调查总株数x最高级别值x100％，防治效果(％)＝(对照病情指数-处理病情指数)/对照病情指数x100％。统计结果如图5、图6所示，(dw+p.nic)组与(la+p.nic)组处理对烟草黑胫病的防治效果如表2所示；[0065]表2(dw+p.nic)组与(la+p.nic)组处理对烟草黑胫病的防治效果[0066][0067]由图5及表1可知，7mm的乳酸没有对烟草生长造成负面影响。[0068]由图6及表2可知，7mm的乳酸有保护烟草植株的效果，在接种烟草疫霉前预先用乳酸处理烟草，植株发病病斑面积较小。并且病情严重程度显著降低11％，防控效果达16.04％。[0069]本具体实施例仅仅是对本发明的解释，其并不是对本发明的限制，本领域技术人员在阅读完本说明书后可以根据需要对本实施例做出没有创造性贡献的修改，但只要在本发明的权利要求范围内都受到专利法的保护。









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