4-胍基苯甲酸芳基酯类化合物及其在抗SARS-CoV-2病毒中的用途

有机化合物处理,合成应用技术4-胍基苯甲酸芳基酯类化合物及其在抗sars-cov-2病毒中的用途技术领域1.本发明属于药物化学领域，具体地，本发明涉及4-胍基苯甲酸芳基酯类化合物及其抗sars-cov-2病毒的用途。背景技术：2.自2019年12月起，全球各国家相继爆发由2型严重急性呼吸综合症冠状病毒(sars-cov-2，简称新冠病毒)感染引起的新型冠状病毒肺炎，世界卫生组织(who)将其命名为covid-19。sars-cov-2病毒具有高度传染性和隐蔽性(nature.2020；584(7821):420-424)。大量感染者无明显症状或症状较轻，典型临床症状表现为发热以及咳嗽、气促等呼吸道症状，严重感染者可致肺炎、肺水肿、呼吸窘迫乃至死亡。除了对肺部的损伤，sars-cov-2还会攻击大脑、心脏、肾脏、肝脏、脾脏、肠胃道等全身多处器官，导致中风、血栓、急性肾损伤、胃肠道感染等并发症(nat med.2020；26(7):1017-1032.)。截至2020年10月31日，sars-cov-2已感染了全球超过4600万人，并造成接近120万患者死亡，而且目前疫情仍在快速蔓延。3.covid-19对人类健康、经济发展、社会活动等所造成的影响难以估计，全球科学家正尝试运用各种手段寻找和开发可以有效对抗sars-cov-2的疫苗和药物。但截至目前，仅有瑞德西韦一个药物在部分国家和地区被批准用于covid-19的治疗，不过由who开展的全球最大规模的新冠疗法临床研究“solidarity trial”却认为瑞德西韦无效(repurposed antiviral drugs for covid-19-interim who solidarity trial results.medrxiv.doi.org/10.1101/2020.10.15.20209817)，可见瑞德西韦的疗效并不十分确切。全球有多款疫苗处于iii期临床试验中，但疫苗的防护效力、持久性和安全性等问题仍有待谨慎验证(nature.2020 585(7823):20-21.)。此外，由于sars-cov-2具有与人类长期共存并发生变异的可能性，因此更加凸显了开发多种不同作用机制的药物来共同对抗sars-cov-2的必要性。4.生物学研究表明，新冠病毒入侵不仅依赖于宿主细胞的膜表面受体血管紧张素转化酶2(ace2)进行结合，还依赖于ii型跨膜丝氨酸蛋白酶(tmprss2)对新冠病毒的刺突蛋白(s蛋白)进行剪切活化(cell.2020；181(2):271-280.e8.)。tmprss2是一个催化中心位于胞外的跨膜蛋白，它对新冠病毒s蛋白的s2亚单元进行裂解，使其暴露出融合肽，促进病毒与宿主细胞的融合和入胞。体外研究显示，使用tmprss2抑制剂卡莫司他(camostat)或萘莫司他(nafamostat)能够有效阻断sars-cov-2病毒对肺细胞的感染(antimicrobagents chemother.2020；64(6):e00754-20)。另一方面，组织病理学研究发现，病毒入侵所依赖的两个关键蛋白ace2和tmprss2共表达的细胞类型主要分布于鼻腔、肺部和肠道(cell.2020；181(5):1016-1035.e19.；nat med.2020；26(5):681-687.)。这即提示，作用于呼吸系统局部、靶向tmprss2的吸入剂类药物或许也能有效地阻断病毒入侵的门户、大大降低人体感染的风险。5.因此，本领域迫切地需要研发一种靶向tmprss2的抑制剂，用于抗sars-cov-2病毒。技术实现要素：6.本发明的主要目的在于提供一种sars-cov-2病毒侵入体细胞的抑制剂，具体地本发明提供了一类4-胍基苯甲酸芳基酯类化合物及其制备方法，以及其在制备sars-cov-2病毒抑制剂，和/或治疗sars-cov-2引起的相关疾病的药物中的用途。7.在本发明的第一方面，提供了一种4-胍基苯甲酸芳基酯类化合物及其药学上可接受的盐，具有式(i)结构，[0008][0009]式中，[0010]a为6-10元芳环或芳杂环，所述芳环、芳杂环可以被1～2个选自烷基、卤原子的取代基所取代；[0011]b为-n(r1)-；[0012]c为单糖基；[0013]x为o或nh；[0014]r1选自h、c1～c3烷基。[0015]在另一优选例中，式(i)中，a选自：苯环、吡啶、萘环、喹啉、苯并呋喃或吲哚。[0016]在另一优选例中，式(i)中，r1为h或甲基。[0017]在另一优选例中，式(i)中，c为己糖基。[0018]在另一优选例中，式(i)中，c为(2s,3r,4r,5r)-2,3,4,5,6-五羟基己基。[0019]在另一优选例中，所述药学上可接受的盐包括但不限于盐酸盐、硫酸盐、氢溴酸盐、甲磺酸盐、硝酸、磷酸盐、乙酸盐、草酸盐、丁二酸盐、酒石酸盐、马来酸盐、精氨酸盐。[0020]在另一优选例中，所述药学上可接受的盐为盐酸盐。[0021]在另一优选例中，所述化合物选自下组：6-(((2s,3r,4r,5r)-2,3,4,5,6-五羟基己基)氨甲酰基)萘-2-基4-胍基苯甲酸酯盐酸盐、6-(甲基((2s,3r,4r,5r)-2,3,4,5,6-五羟基己基)氨甲酰基)萘-2-基4-胍基苯甲酸酯盐酸盐、4-(((2s,3r,4r,5r)-2,3,4,5,6-五羟基己基)氨甲酰基)苯基4-胍基苯甲酸酯盐酸盐、4-(甲基((2s,3r,4r,5r)-2,3,4,5,6-五羟基己基)氨甲酰基)苯基4-胍基苯甲酸酯盐酸盐、6-(n-((2s,3r,4r,5r)-2,3,4,5,6-五羟基己基)甲脒基)萘-2-基4-胍基苯甲酸酯二盐酸盐、5-(((2s,3r,4r,5r)-2,3,4,5,6-五羟基己基)氨甲酰基)萘-1-基4-胍基苯甲酸酯盐酸盐、1-甲基-2-(((2s,3r,4r,5r)-2,3,4,5,6-五羟基己基)氨甲酰基)-1h-吲哚-6-基4-胍基苯甲酸酯盐酸盐、3-(((2s,3r,4r,5r)-2,3,4,5,6-五羟基己基)氨甲酰基)喹啉-7-基4-胍基苯甲酸酯盐酸盐、6-(((2s,3r,4r,5r)-2,3,4,5,6-五羟基己基)氨甲酰基)吡啶-3基4-胍基苯甲酸酯盐酸盐、1-甲基-3-(((2s,3r,4r,5r)-2,3,4,5,6-五羟基己基)氨甲酰基)-1h-吲哚-6-基4-胍基苯甲酸酯盐酸盐、或其组合。[0022]在本发明的第二方面，提供了一种制备第一方面所述的化合物的方法，所述方法选自路线1或2，[0023]其中，路线1包括步骤：[0024](s1)式(ia)所示化合物与hb-c在缩合剂或/和碱的作用下缩合生成式(ib)所示化合物；[0025](s2)s1中制得的式(ib)所示化合物氢化脱除苄基生成式(ic)所示的化合物；[0026](s3)步骤s2中制得的式(ic)所示的化合物与4-胍基苯甲酸在缩合剂或/和碱的作用下缩合生成式(i)化合物；[0027]所述步骤如下式所示：[0028][0029]其中，r2选自h、c1-c3烷基；[0030]其他各取代基定义如前所述；[0031]其中，路线2包括步骤：[0032](t1)式(id)所示化合物与4-胍基苯甲酸在缩合剂或/和碱的作用下缩合生成式(ie)所示化合物；[0033](t2)步骤(t1)中制备所得式(ie)所示化合物，氢化脱除苄基生成式(if)所示化合物；[0034](t3)步骤(t2)中制备所得式(if)所示化合物在缩合剂或/和碱的作用下与hb-c缩合生成式(i)化合物；[0035]所述步骤如下式所示：[0036][0037]其中，各取代基定义如前所述。[0038]在另一优选例中，所述缩合剂选自：二环己基碳二亚胺(dcc)、2-(7-氮杂苯并三氮唑)-n,n,n',n'-四甲基脲六氟磷酸酯(hatu)、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐/1-羟基苯并三唑(ecdi/hobt)、2-(1h-苯并三偶氮l-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲四氟硼酸酯(tbtu)、n,n'-羰基二咪唑(cdi)、1h-苯并三唑-1-基氧三吡咯烷基六氟磷酸盐(pybop)、或其组合。[0039]在另一优选例中，所述缩合剂为dcc或hatu。[0040]在另一优选例中，所述碱为有机碱。[0041]在另一优选例中，所述有机碱包括但不仅限于吡啶(py)、n,n-二异丙基乙胺(dipea)、4-二甲氨基吡啶(dmap)、三乙胺；[0042]在本发明的第三方面，提供了一种活性成分或含所述活性成分的制剂的用途，所述活性成分为第一方面所述的式(i)化合物或其药学上可接受的盐，[0043]其中所述活性成分或制剂用于制备sars-cov-2病毒的抑制剂；和/或sars-cov-2引起的相关疾病的药物。[0044]在另一优选例中，所述疾病选自：covid-19、sars-cov-2感染导致的中风、血栓、肾损伤、胃肠道感染等全身性多器官并发症、或其组合。[0045]在另一优选例中，所述疾病为covid-19。[0046]在另一优选例中，所述活性成分选自：6-(((2s,3r,4r,5r)-2,3,4,5,6-五羟基己基)氨甲酰基)萘-2-基4-胍基苯甲酸酯盐酸盐、6-(甲基((2s,3r,4r,5r)-2,3,4,5,6-五羟基己基)氨甲酰基)萘-2-基4-胍基苯甲酸酯盐酸盐、4-(((2s,3r,4r,5r)-2,3,4,5,6-五羟基己基)氨甲酰基)苯基4-胍基苯甲酸酯盐酸盐、4-(甲基((2s,3r,4r,5r)-2,3,4,5,6-五羟基己基)氨甲酰基)苯基4-胍基苯甲酸酯盐酸盐、6-(n-((2s,3r,4r,5r)-2,3,4,5,6-五羟基己基)甲脒基)萘-2-基4-胍基苯甲酸酯二盐酸盐、5-(((2s,3r,4r,5r)-2,3,4,5,6-五羟基己基)氨甲酰基)萘-1-基4-胍基苯甲酸酯盐酸盐、1-甲基-2-(((2s,3r,4r,5r)-2,3,4,5,6-五羟基己基)氨甲酰基)-1h-吲哚-6-基4-胍基苯甲酸酯盐酸盐、3-(((2s,3r,4r,5r)-2,3,4,5,6-五羟基己基)氨甲酰基)喹啉-7-基4-胍基苯甲酸酯盐酸盐、6-(((2s,3r,4r,5r)-2,3,4,5,6-五羟基己基)氨甲酰基)吡啶-3基4-胍基苯甲酸酯盐酸盐、1-甲基-3-(((2s,3r,4r,5r)-2,3,4,5,6-五羟基己基)氨甲酰基)-1h-吲哚-6-基4-胍基苯甲酸酯盐酸盐、或其组合。[0047]在另一优选例中，所述制剂为口服制剂或非口服制剂。[0048]在另一优选例中，所述口服制剂或非口服制剂包括：粉剂、颗粒剂、胶囊剂、注射剂、吸入剂、酊剂、口服液、片剂、含片、或滴丸。[0049]在另一优选例中，所述非口服制剂为吸入剂。[0050]在本发明的第四方面，提供了一种药物组合物，包含：[0051](a)第一方面所述的4-胍基苯甲酸芳基酯类化合物或其药学上可接受的盐；[0052](b)药学上可接受的载体、赋形剂或辅料；[0053]在另一优选例中，所述药物组合物除了含有第一方面所述的4-胍基苯甲酸芳基酯类化合物或其药学上可接受的盐之外，还可以包括选自下组的其他机制的抗病毒药物：[0054](b1)rna依赖的rna聚合酶抑制剂；[0055](b2)主蛋白酶抑制剂；[0056](b3)木瓜样蛋白酶抑制剂；[0057](b4)解旋酶抑制剂；[0058](b5)弗林蛋白酶抑制剂；[0059](b6)组织蛋白酶l抑制剂。[0060]在另一优选例中，所述rna依赖的rna聚合酶抑制剂为瑞德西韦。(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐/1-羟基苯并三唑(ecdi/hobt)、2-(1h-苯并三偶氮l-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲四氟硼酸酯(tbtu)、n,n'-羰基二咪唑(cdi)、1h-苯并三唑-1-基氧三吡咯烷基六氟磷酸盐(pybop)；优选缩合剂为dcc、hatu；[0075]本发明中，所述“碱”包括有机碱和无机碱；有机碱的例子包括但不仅限于吡啶(py)、n,n-二异丙基乙胺(dipea)、4-二甲氨基吡啶(dmap)、三乙胺、1,8-二氮杂二环十一碳-7-烯(dub)、三羟乙基胺、甲醇钠、乙醇钠、叔丁醇钠；无机碱的例子包括但不仅限于氢氧化钠、氢氧化钾、氢化钠、碳酸钾、碳酸钠、碳酸氢钾、碳酸氢钠、碳酸铯、磷酸钾；化合物制备过程中，本领域熟练技术人员可根据具体反应底物、反应条件的不同进行适当地变化和调整；[0076]本发明的活性成分[0077]本发明提供了一种4-胍基苯甲酸芳基酯类化合物及其药学上可接受的盐，具有式(i)结构，[0078][0079]式中，[0080]a为6-10元芳环或芳杂环，所述芳环、芳杂环可以被1～2个选自烷基、卤原子的取代基所取代；[0081]b为-n(r1)-；[0082]c为单糖基；[0083]x为o或nh；[0084]r1选自h、c1～c3烷基。[0085]在另一优选例中，式(i)中，a选自：苯环、吡啶、萘环、喹啉、苯并呋喃或吲哚。[0086]在另一优选例中，式(i)中，r1为h或甲基。[0087]在另一优选例中，式(i)中，c为己糖基。[0088]在另一优选例中，式(i)中，c为(2s,3r,4r,5r)-2,3,4,5,6-五羟基己基。[0089]在另一优选例中，所述药学上可接受的盐包括但不限于盐酸盐、硫酸盐、氢溴酸盐、甲磺酸盐、硝酸、磷酸盐、乙酸盐、草酸盐、丁二酸盐、酒石酸盐、马来酸盐、精氨酸盐。[0090]在另一优选例中，所述药学上可接受的盐为盐酸盐。[0091]在另一优选例中，所述化合物选自下组：6-(((2s,3r,4r,5r)-2,3,4,5,6-五羟基己基)氨甲酰基)萘-2-基4-胍基苯甲酸酯盐酸盐、6-(甲基((2s,3r,4r,5r)-2,3,4,5,6-五羟基己基)氨甲酰基)萘-2-基4-胍基苯甲酸酯盐酸盐、4-(((2s,3r,4r,5r)-2,3,4,5,6-五羟基己基)氨甲酰基)苯基4-胍基苯甲酸酯盐酸盐、4-(甲基((2s,3r,4r,5r)-2,3,4,5,6-五羟基己基)氨甲酰基)苯基4-胍基苯甲酸酯盐酸盐、6-(n-((2s,3r,4r,5r)-2,3,4,5,6-五羟基己基)甲脒基)萘-2-基4-胍基苯甲酸酯二盐酸盐、5-(((2s,3r,4r,5r)-2,3,4,5,6-五羟基己基)氨甲酰基)萘-1-基4-胍基苯甲酸酯盐酸盐、1-甲基-2-(((2s,3r,4r,5r)-2,3,4,5,6-五羟基己基)氨甲酰基)-1h-吲哚-6-基4-胍基苯甲酸酯盐酸盐、3-(((2s,3r,4r,5r)-2,3,4,5,6-五羟基己基)氨甲酰基)喹啉-7-基4-胍基苯甲酸酯盐酸盐、6-(((2s,3r,4r,5r)-2,3,4,5,6-五羟基己基)氨甲酰基)吡啶-3基4-胍基苯甲酸酯盐酸盐、1-甲基-3-(((2s,3r,4r,5r)-2,3,4,5,6-五羟基己基)氨甲酰基)-1h-吲哚-6-基4-胍基苯甲酸酯盐酸盐、或其组合；[0092]卡莫司他(camostat)或萘莫司他(nafamostat)[0093]卡莫司他(camostat)或萘莫司他(nafamostat)是靶向tmprss2的抑制剂，临床上用于缓解胰腺炎症状和抗凝血，其结构式如下所示：[0094][0095]德国莱布尼茨灵长类动物研究所的科研人员发现，在calu-3肺细胞系和人原代肺细胞模型上卡莫司他都能够有效阻断sars-cov-2病毒侵入细胞(cell.2020；181(2):271-280.e8.)；后续研究进一步揭示，相比于卡莫司他、萘莫司他抑制sars-cov-2的效果更加突出，其活性可达到低纳摩尔级别(antimicrob agents chemother.2020；64(6):e00754-20)。根据美国临床试验数据库(clinicaltrials.gov)公布的信息，包括美国、英国、法国等在内的多个国家的研究机构正在开展卡莫司他或萘莫司他治疗covid-19的临床试验。[0096]药物组合物[0097]本发明中，通式(i)所示化合物用于制备药物时通常为药物组合物的形式，该药物组合物包含通式(i)化合物以及一种或多种药学上可接受的辅料；所述药学上可接受的辅料为药学上可接受的载体、赋形剂、缓释剂、气味剂、香味剂等；所述药物组合物中，通式(i)所示化合物作为活性组分、其重量占药物组合物总重量的0.1～99.9％，其余为药学上可接受的辅料；所述药物组合物可以基于药物制剂领域的惯用工艺制成多种剂型，如片剂、胶囊、溶液、混悬液、气雾剂、干粉等，并可存储于适宜的消毒器具和给药装置中；[0098]本发明中，所述“有效治疗剂量”表示与没有接受该剂量治疗的对象相比，接受该剂量治疗的对象在病变或副作用等得到治愈、改善、有效预防或者其发生率显著降低；此外，它还包括增强正常生理功能的有效剂量；[0099]本发明中，通式(i)所示化合物、其盐及其药物组合物可对人和动物使用；给药途径包括口服、吸入、透皮吸收、注射等；本发明中，优选的给药途径为吸入；通式(i)所示化合物、其盐及其药物组合物用于制备药物时用作吸入剂；给药剂量和频率应根据医嘱而定；[0100]本发明中，“吸入剂”是指药物及其载体经特殊装置喷出形成雾滴，通过口鼻吸入、到达呼吸系统发挥作用的药物剂型；所述吸入剂剂型包括但不仅限于气雾剂、喷雾剂、粉雾剂；所述吸入剂可应用药物制剂领域熟练技术人员所公知的惯用方式产生，并且不以任何形式限制本发明；[0101]本发明中，通式(i)所示化合物、其盐及其药物组合物用于预防或治疗sars-cov-2病毒感染时或可与其他抗病毒机制的药物联合使用；所述药物包括但不仅限于rna依赖的rna聚合酶抑制剂(如瑞德西韦、法匹拉韦)、主蛋白酶抑制剂(如洛匹那韦、利托那韦)、木瓜样蛋白酶抑制剂、解旋酶抑制剂、弗林蛋白酶抑制剂、组织蛋白酶l抑制剂；[0102]由于目前疫苗所能提供的保护效力和持久性仍未获得验证，或许仅能在接种后一定时期内和一定程度上降低sars-cov-2病毒感染风险，因此本发明通式(i)所示化合物、其盐及其药物组合物或可在人体注射疫苗后继续使用，以协同性地增强防护效力，进一步降低感染风险；[0103]由于sars-cov-2不仅会攻击呼吸系统，还会攻击大脑、心脏、肾脏、肝脏、脾脏、肠胃道等全身多处器官，导致中风、血栓、肾损伤、胃肠道感染等并发症(nat med.2020；26(7):1017-1032.)，因此本发明通式(i)所示化合物、其盐及其药物组合物或许不仅可以用于预防和治疗sars-cov-2导致的肺、支气管等呼吸系统损伤，也能用于预防和治疗sars-cov-2导致的全身性多器官损伤及其并发症。[0104]本发明的主要优点包括：[0105](a)本发明的化合物抑制sars-cov-2的效果突出，其中6-(((2s,3r,4r,5r)-2,3,4,5,6-五羟基己基)氨甲酰基)萘-2-基4-胍基苯甲酸酯盐酸盐抑制sars-cov-2的ec50值甚至可以达到0.006μm，在极低的浓度下就能够对sars-cov-2进行抑制。[0106](b)本发明的化合物对于sars-cov-2的选择性较高，能够精准的抑制sars-cov-2病毒的复制，具有极好的临床推广价值。[0107]下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，例如sambrook等人，分子克隆：实验室手册(new york:cold spring harbor laboratory press,1989)中所述的条件，或按照制造厂商所建议的条件。除非另外说明，否则百分比和份数是重量百分比和重量份数。[0108]缩略语[0109]本实施例中用到的所有缩略语罗列如下：[0110]dcc：二环己基碳二亚胺；dcm：二氯甲烷；dipea：n,n-二异丙基乙胺；dmap：4-二甲氨基吡啶；dmf：n,n-二甲基甲酰胺；hatu：2-(7-氮杂苯并三氮唑)-n,n,n',n'-四甲基脲六氟磷酸酯；py：吡啶；thf：四氢呋喃。[0111]一、化合物的制备[0112]实施例1：6-(((2s,3r,4r,5r)-2,3,4,5,6-五羟基己基)氨甲酰基)萘-2-基4-胍基苯甲酸酯盐酸盐[0113](1)合成方法a[0114][0115]6-羟基-2-萘甲酸(10g，53.19mmol，1当量)、氯化苄(18.5ml，3当量)、碳酸钾(20g，3当量)、碘化钾(2.65g，0.3当量)置于100ml dmf中，80℃加热搅拌过夜至反应完毕。然后投于冷水中，以乙酸乙酯萃取两次，合并有机相，再以食盐水洗涤两次，na2so4干燥后以快速色谱柱进行分离，得14.47g白色固体，即中间体1-1。[0116]中间体1-1(12.25g，33.29mmol，1当量)溶于thf/meoh混合溶剂中(80/40ml)，再缓慢加入浓度为2m的koh水溶液(41.6ml，2.5当量)，然后于70℃加热反应1h。冷却后，减压蒸出大部分有机溶剂，剩余物中再加入100ml冰水，然后以6n浓度盐酸调ph值至弱酸性。过滤收集析出的沉淀，蒸馏水洗涤数次，减压抽干后再真空干燥过夜，得8.9g白色固体，即中间体1-2；ms(esi):m/z 277.1[m-h]-。[0117]中间体1-2(400mg，1.44mmol，1当量)、hatu(602mg，1.1当量)、dipea(375μl，1.5当量)于10ml dmf中，室温搅拌10min，然后加入d-萄糖胺(261mg，1当量)反应过夜。向反应液中加入10ml水和10ml乙酸乙酯，搅拌5min，然后过滤收集沉淀，真空干燥后得490mg淡红色固体，即中间体1-3；ms(esi):m/z 442.2[m+h]+。[0118]中间体1-3(490mg，1.11mmol，1当量)、钯/碳催化剂(10％pd，含水约55％，100mg)于20ml甲醇中，常压下加氢气还原，室温搅拌4h反应完毕。添加20ml dmf，加热使产物全溶，趁热过滤除去钯/碳。滤液蒸干，然后以甲醇打浆，过滤、干燥，得250mg黄色固体，即中间体1-4。1h-nmr(d6-dmso,500mhz)δ10.05(brs,1h),8.39(t,1h,j＝5.5),8.33(s,1h),7.87(d,1h,j＝8.5),7.83(dd,1h,j＝8.5,1.5),7.73(d,1h,j＝8.5),7.17-7.14(m,2h),4.95(s,1h),4.52(s,1h),4.48(s,1h),4.40(s,2h),3.82(m,1h),3.68(m,1h),3.60(m,1h),3.51(m,3h),3.40(m,1h),3.33(m,1h)；ms(esi):m/z 352.1[m+h]+。[0119]中间体1-4(140mg，0.4mmol，1当量)、4-胍基苯甲酸盐酸盐(52mg，0.6当量)、dcc(82mg，1当量)以及dmap(5mg，0.1当量)于2ml吡啶和1ml dmf中，室温搅拌4h，然后再加入52mg 4-胍基苯甲酸盐酸盐和82mg dcc，继续反应过夜。减压蒸干溶剂，向剩余物中加入2ml水和2ml甲醇，过滤除去不溶固体，滤液进制备液相色谱进行分离，以0％至15％的乙腈/水梯度洗脱，收集目标产物部溶液，减压浓缩至约1ml，再冻干过夜，得60mg白色固体，即实施例1。1h-nmr(d6-dmso,500mhz)δ10.26(s,1h),8.58(t,1h,j＝5.5),8.56(s,1h),8.24(d,2h,j＝9.0),8.15(d,1h,j＝9.0),8.05-8.01(m,2h),7.82(d,1h,j＝2.5),7.77(s,4h),7.55(dd,1h,j＝9.0,2.5),7.47(d,2h,j＝8.5),4.95(d,1h,j＝4.5),4.52(d,1h,j＝5.0),4.47(d,1h,j＝5.5),4.40(d,1h,j＝6.5),4.37(t,1h,j＝6.0),3.85(m,1h),3.70(m,1h),3.60(m,1h),3.55(m,1h),3.52(m,2h),3.42(m,1h),3.36(m,1h)；ms(esi):m/z 513.2[m+h]+,257.1[m/2+h]+。[0120](2)合成方法b[0121][0122]6-羟基-2-萘甲酸(5g，26.6mmol，1当量)、溴化苄(3.79ml，1.2当量)、碳酸氢钠(3.35g，1.5当量)于50ml dmf中，50℃加热搅拌过夜。然后投于冷水中，以乙酸乙酯萃取两次，合并有机相，再以食盐水洗涤两次，na2so4干燥后以快速色谱柱进行分离，得3.7g白色固体，即中间体1-5；ms(esi):m/z 277.1[m-h]-。[0123]中间体1-5(2.78g，10mmol，1当量)、4-胍基苯甲酸盐酸盐(3.7g，1.72当量)、dcc(4.3g，2.09当量)以及dmap(122mg，0.1当量)于20ml吡啶和10ml dmf中，室温搅拌过夜。减压蒸干溶剂，向剩余物中加入15ml水和15ml甲醇，过滤除去不溶固体，滤液再蒸干，然后拌硅胶并以快速色谱柱进行分离，得1.75g白色固体，即中间体1-6。1h-nmr(d6-dmso,500mhz)δ10.16(s,1h),8.76(s,1h),8.31(d,1h,j＝9.0),8.24(d,2h,j＝8.5),8.09(m,2h),7.97(d,1h,j＝1.5),7.78(s,4h),7.59(dd,1h,j＝9.0,2.0),7.55(d,2h,j＝6.5),7.48(d,2h,j＝9.0),7.45(t,2h,j＝6.5),7.39(t,1h,j＝6.5),5.45(s,2h)；ms(esi):m/z 440.2[m+h]+。[0124]中间体1-6(0.5g，1.05mmol，1当量)溶于15ml dmf，加入钯/碳催化剂(10％pd，干燥的，50mg)，然后室温、常压氢化反应过夜，tlc显示反应完毕。过滤除去钯/碳，滤液浓缩至少量，然后加入10ml无水甲醇，搅拌20min，过滤收集沉淀，干燥后得0.33g白色固体，即中间体1-7；ms(esi):m/z 350.1[m+h]+。[0125]中间体1-7(85mg,0.23mmol，1当量)、d-萄糖胺(83mg，2当量)、dipea(80μl，2当量)溶于3ml dmf，加入hatu(131mg，1.5当量)、然后室温搅拌2h。减压蒸干，剩余物以制备液相色谱进行分离，得65mg白色固体，即实施例1。1h-nmr(cd3od,500mhz)δ8.46(s,1h),8.31(d,2h,j＝8.5),8.08(d,1h,j＝9.0),7.97(m,2h),7.81(d,1h,j＝1.5),7.49-7.46(m,3h),4.03(m,1h),3.87(d,1h,j＝3.5),3.80(m,1h),3.74(m,3h),3.66(m,1h),3.55(dd,1h,j＝13.5,7.0)；ms(esi):m/z 513.2[m+h]+,257.1[m/2+h]+。[0126]实施例2：6-(甲基((2s,3r,4r,5r)-2,3,4,5,6-五羟基己基)氨甲酰基)萘-2-基4-胍基苯甲酸酯盐酸盐[0127][0128]实施例2的制备按照中间体1-7至实施例1的合成方法进行，除了以葡甲胺代替d-萄糖胺为原料，得例2为白色固体。1h-nmr(d6-dmso,500mhz,约1:1旋转异构体)δ10.40(brs,1h),8.24(d,2h,j＝8.5),8.10(m,2h),8.03/7.97(2x d,1h,j＝8.0),7.91/7.88(2x s,1h),7.82(brs,4h),7.62(m,1h),7.52(m,1h),7.48(d,2h,j＝9.0),4.96(d,1h,j＝4.0),4.60-4.28(m,4h),4.02/3.90(2x m,1h),3.69-3.42(m,5h),3.29(m,2h),3.06/3.04(2x s,3h)；ms(esi):m/z 527.2[m+h]+,264.1[m/2+h]+。[0129]实施例3：4-(((2s,3r,4r,5r)-2,3,4,5,6-五羟基己基)氨甲酰基)苯基4-胍基苯甲酸酯盐酸盐[0130][0131]中间体3-1至实施例3的制备按照中间体1-3至实施例1的合成方法进行，除了以4-苄氧基苯甲酸代替中间体1-2为起始原料，得例3为白色固体。1h-nmr(d6-dmso,500mhz)δ10.40(s,1h),8.48(t,1h,j＝5.5),8.19(d,2h,j＝9.0),7.99(d,2h,j＝9.0),7.84(s,4h),7.46(d,2h,j＝9.0),7.39(d,2h,j＝9.0),4.93(brs,1h),4.52-4.39(m,4h),3.81(m,1h),3.68(m,1h),3.60(m,1h),3.50(m,3h),3.43-3.28(m,2h)；ms(esi):m/z463.2[m+h]+,232.1[m/2+h]+。[0132]实施例4：4-(甲基((2s,3r,4r,5r)-2,3,4,5,6-五羟基己基)氨甲酰基)苯基4-胍基苯甲酸酯盐酸盐[0133][0134]中间体4-1至实施例4的制备按照中间体1-3至实施例1的合成方法进行，除了以4-苄氧基苯甲酸代替中间体1-2、以葡甲胺代替d-萄糖胺为起始原料，得例4为白色固体。1h-nmr(d6-dmso,500mhz,约3:2旋转异构体)δ10.31/10.28(2x s,1h),8.19(d,2h,j＝8.5),7.80(s,4h),7.57/7.54(2x d,2h,j＝8.0),7.46(d,2h,j＝9.0),7.37/7.31(2x d,2h,j＝7.5),5.00/4.93(2x d,1h,j＝5.0),4.56/4.50(2x d,1h,j＝4.0),4.45-4.30(m,3h),3.97/3.88(2x m,1h),3.66-3.41(m,5h),3.38-3.22(m,2h),3.00(s,3h)；ms(esi):m/z 477.2[m+h]+,239.1[m/2+h]+。[0135]实施例5：6-(n-((2s,3r,4r,5r)-2,3,4,5,6-五羟基己基)甲脒基)萘-2-基4-胍基苯甲酸酯二盐酸盐[0136][0137]6-羟基-2-萘亚胺酸甲酯盐酸盐(205mg，0.865mmol，1当量)、d-萄糖胺(156mg，1当量)溶于5ml无水甲醇，室温搅拌4h，然后以制备液相色谱进行分离，乙腈/水体系为流动相梯度洗脱，得150mg白色固体，即中间体5-1。1h-nmr(d6-dmso,500mhz)δ10.34(s,1h),9.66(s,1h),9.42(s,1h),8.91(s,1h),8.30(s,1h),7.95(d,1h,j＝9.5),7.90(d,1h,j＝8.5),7.68(dd,1h,j＝8.5,2.0),7.26(m,2h),5.29(d,1h),4.63(m,2h),4.59(d,1h),4.44(t,1h,j＝5.5),3.97(m,1h),3.76(m,1h),3.63(m,2h),3.55(m,3h),3.45(m,1h)；ms(esi):m/z 351.2[m+h]+。[0138]实施例5的制备按照实施例1合成方法a进行，除了以中间体5-1代替中间体1-4为原料；粗产品以制备液相色谱分离，以0％至20％的乙腈/0.1％hcl-h2o体系梯度洗脱，得例5为类白色固体。1h-nmr(d6-dmso,500mhz)δ10.55(s,1h),9.91(t,1h,j＝5.0),9.62(s,1h),9.13(s,1h),8.53(s,1h),8.24(d,2h,j＝8.5),8.23(d,1h,j＝9.0),8.18(d,1h,j＝9.0),8.03(d,1h,j＝2.0),7.90(s,4h),7.87(d,1h,j＝8.5),7.66(dd,1h,j＝9.0,2.0),7.49(d,2h,j＝9.0),5.34(brs,1h),4.65(m,3h),4.45(brs,1h),4.01(m,1h),3.79(m,1h),3.65(m,2h),3.57(m,3h),3.45(m,1h)；ms(esi):m/z 512.2[m+h]+,256.6[m/2+h]+。[0139]实施例6：5-(((2s,3r,4r,5r)-2,3,4,5,6-五羟基己基)氨甲酰基)萘-1-基4-胍基苯甲酸酯盐酸盐[0140][0141]中间体6-1至实施例6的制备按照中间体1-1至实施例1的合成方法进行，除了以5-羟基-1-萘甲酸甲酯代替6-羟基-2-萘甲酸为起始原料。1h-nmr(d6-dmso,500mhz)δ10.50(brs,1h),8.51(t,1h,j＝5.5),8.32(d,2h,j＝9.0),8.21(d,1h,j＝8.5),7.92(d,1h,j＝8.5),7.87(s,4h),7.71(dd,1h,j＝7.0,1.0),7.66(dd,1h,j＝8.5,7.5),7.61(dd,1h,j＝8.5,7.5),7.53(d,1h,j＝7.5),7.51(d,2h,j＝8.5),4.91(d,1h,j＝5.0),4.57(d,1h,j＝5.0),4.48(d,1h,j＝5.5),4.40(m,2h),3.87(m,1h),3.74(m,1h),3.62(m,1h),3.54(m,3h),3.42(m,2h)；ms(esi):m/z 513.2[m+h]+,257.1[m/2+h]+。[0142]实施例7：1-甲基-2-(((2s,3r,4r,5r)-2,3,4,5,6-五羟基己基)氨甲酰基)-1h-吲哚-6-基4-胍基苯甲酸酯盐酸盐[0143][0144]中间体7-1的制备按照中间体1-1的合成方法进行，除了以6-羟基-2-吲哚甲酸代替6-羟基-2-萘甲酸为原料；ms(esi):m/z 358.2[m+h]+。[0145]中间体7-1(750mg，2.1mmol，1当量)溶于5ml干燥的dmf，冰浴冷却，然后加入nah(60％分散于矿物油，90mg，1.07当量)搅拌10分钟，再加入碘甲烷(132μl，1当量)，继续搅拌至室温，tlc检测反应进程。待反应完成，以氯化铵饱和液淬灭，然后乙酸乙酯萃取两次，合并有机相，再以食盐水洗涤两次，na2so4干燥后以快速色谱柱进行分离，得0.66g白色固体，即中间体7-2；ms(esi):m/z 372.2[m+h]+。[0146]中间体7-3至实施例7的制备按照中间体1-2至实施例1的合成方法进行，除了以中间体7-2代替中间体1-1为原料，得例7为白色固体。1h-nmr(d6-dmso,500mhz)δ10.12(brs,1h),8.38(t,1h,j＝5.5),8.20(d,2h,j＝8.5),7.01(d,1h,j＝9.0),7.68(s,4h),7.49(d,1h,j＝2.0),7.45(d,2h,j＝8.5),7.15(s,1h),7.01(dd,1h,j＝8.5,2.0),4.89(d,1h,j＝4.5),4.52(d,1h,j＝5.0),4.45(d,1h,j＝6.0),4.38(d,1h,j＝6.5),4.37(t,1h,j＝6.0),3.98(s,3h),3.81(m,1h),3.69(m,1h),3.60(m,1h),3.51(m,3h),3.41(m,1h),3.30(m,1h)；ms(esi):m/z 516.2[m+h]+,258.6[m/2+h]+。[0147]实施例8：3-(((2s,3r,4r,5r)-2,3,4,5,6-五羟基己基)氨甲酰基)喹啉-7-基4-胍基苯甲酸酯盐酸盐[0148][0149]2-氨基-4-溴苯甲醛(1g，5mmol，1当量)、3-乙氧基丙烯酸乙酯(0.86ml，1.1当量)、对甲基苯磺酸一水合物(95mg，0.1当量)于30ml甲苯中回流反应过夜。减压蒸出甲苯，剩余物以30ml dcm复溶，然后以nahco3饱和液洗涤一次，无水na2s04干燥后以快速色谱柱分离，得1.25g固体，即中间体8-1；ms(esi):m/z 280.0[m+h]+,282.0[m+2+h]+。[0150]中间体8-1(1.24g，4.45mmol，1当量)、双联频哪醇基二硼(1.25g，1.1当量)、乙酸钾(1.3g，3当量)和pdcl2(dppf)-dcm络合物(0.35g，0.1当量)于20ml dmf中，n2保护下于100℃加热反应5h。冷却后过滤除去不溶物，乙酸乙酯洗涤，减压蒸干溶剂，剩余物以快速色谱柱进行分离，得0.83g胶状物，即中间体8-2；ms(esi):m/z 328.2[m+h]+。[0151]中间体8-2(820mg，2.5mmol)溶于20ml thf并置于冰浴中，滴加h2o2水溶液(质量分数30％，0.77ml，3eq)，10min滴完，再室温搅拌2h。加入过量硫代硫酸钠饱和液进行淬灭，乙酸乙酯萃取两次，有机相经食盐水洗涤、无水na2s04干燥后以快速色谱柱进行分离，得0.46g固体，即中间体8-3；ms(esi):m/z 218.1[m+h]+。[0152]中间体8-3(457mg,2.1mmol，1当量)、氯化苄(315μl，1.3当量)、k2co3(435mg,1.5当量)、ki(35mg,0.1当量)于15ml dmf中，60～70℃加热反应3h完毕。投于冷水中，以乙酸乙酯萃取两次，合并有机相，再以食盐水洗涤两次，na2so4干燥后以快速色谱柱进行分离，得0.42g白色固体，即中间体8-4；ms(esi):m/z 308.1[m+h]+。[0153]中间体8-4(420mg,1.37mmol，1当量)溶于thf/meoh/h2o混合溶剂中(6/6/2ml)，加入naoh(164mg,3当量)，室温搅拌3h反应完毕。蒸出大部分有机溶剂，剩余中加入冰水15ml，然后以6n盐酸调至ph值约为2，析出白色固体，过滤收集，水洗三次，真空干燥后得0.32g，即中间体8-5；ms(esi):m/z 280.1[m+h]+。[0154]中间体8-6至实施例8的制备按照中间体1-3至实施例1的合成方法进行，除了以中间体8-5代替中间体1-2为原料，得例8为白色固体。1h-nmr(d6-dmso,500mhz)δ10.40(brs,1h),9.35(d,1h,j＝2.0),8.94(d,1h,j＝2.0),8.81(t,1h,j＝6.0),8.24(m,3h),8.01(s,1h),7.84(s,4h),7.69(dd,1h,j＝9.0,2.5),7.48(d,2h,j＝8.5),4.96(d,1h,j＝5.0),4.54(d,1h,j＝5.0),4.47(d,1h,j＝5.5),4.41(d,1h,j＝7.0),4.38(t,1h,j＝6.0),3.86(m,1h),3.71(m,1h),3.63-3.52(m,4h),3.40(m,2h)；ms(esi):m/z 514.2[m+h]+,257.6[m/2+h]+。[0155]实施例9：6-(((2s,3r,4r,5r)-2,3,4,5,6-五羟基己基)氨甲酰基)吡啶-3基4-胍基苯甲酸酯盐酸盐[0156]501.2[m+h]+,251.1[m/2+h]+。[0165]实施例11：6-(乙基((2s,3r,4r,5r)-2,3,4,5,6-五羟基己基)氨甲酰基)萘-2-基4-胍基苯甲酸酯盐酸盐[0166][0167]实施例11的制备按照实施例2的合成方法进行，除了以葡乙胺代替葡甲胺为原料，得例11为白色固体。ms(esi):m/z 541.2[m+h]+,271.1[m/2+h]+。[0168]实施例12:抗sars-cov-2病毒活性评价[0169]12.1评价方法[0170]刺突蛋白(spike protein，s蛋白)是新冠病毒sars-cov-2主要的外膜蛋白，负责病毒的感染和侵入过程，通过抑制该蛋白的功能可直接阻断病毒对宿主细胞的感染，阻碍病毒正常的生命周期。因此，新冠病毒s蛋白可作为一个药物筛选靶点。hiv假病毒是一种利用hiv病毒为起始，体外人工构建并大规模制备的具有感染性的病毒颗粒。构建过程中，通过基因技术，替换hiv基因组上的膜蛋白(gp120/41)编码序列变成报告基因荧光素酶(luciferase)，并删除病毒蛋白vpr和nef。改造后的病毒颗粒具有感染能力缺陷和子代病毒生产能力缺陷。在此基础上，利用外源性表达的新冠病毒s蛋白整合在假病毒外膜上，可以修饰缺陷病毒，产生具有新冠病毒s蛋白的hiv假病毒颗粒。该假病毒颗粒感染细胞的亲嗜性和感染能力完全由新冠病毒s蛋白的活性决定。通过检测报告基因水平能够准确反应假病毒的感染能力，使之成为一个优异的靶向筛选技术。[0171]本实验筛选阻断新冠病毒s蛋白侵入calu-3肺细胞的抑制剂。calu-3细胞提前一天接种于96孔培养板，分别设活性板和细胞毒性板，置37℃，5％co2培养。活性测定板和细胞毒性测定板按同样加样方式，加入不同稀释浓度的样品和sars-cov-2假病毒悬液，设病毒对照、细胞对照和样品对照。继续培养3天后，细胞毒性板采用mtt法测定细胞存活率。活性板吸去培养液后加入100μl每孔细胞裂解液，震荡裂解5分钟后，每孔再加入100μl的luciferase反应检测液，震荡孵育5分钟后测定化学发光值。[0172]筛选结果通过细胞毒性和相对感染活性评价化合物对新冠病毒s蛋白侵入的选择性抑制活性。其中细胞毒性使用mtt法检测(mtt，od@570)，以铺种细胞但无化合物对照孔为100％，计算细胞相对存活率(viability，％)，和化合物细胞毒性结果(toxicity＝100％-viability)。对于多浓度检测样品，采用标准曲线4参数拟合方法，计算化合物cc50数值。为了检测报告基因luciferase活性，使用裂解液裂解培养细胞后加入酶反应底物及检测试剂，读取化学发光数值，并计算假病毒相对侵入活性。假病毒相对侵入活性(fluc，rlu)以铺种细胞但无化合物对照孔为100％，计算假病毒相对侵入活性(infectivity，％)，及假病毒抑制活性(inhibition＝100％-infectivity)。对于多浓度检测样品，采用标准曲线4参数拟合方法，计算ec50数值。[0173][0174]12.2筛选结果[0175]采用以上方法，对于前述实施例1-11所得化合物进行测试筛选，得到的结果如下表所示：[0176]表1实施例1-11所得化合物测试筛选结果[0177]化合物cc50(μm)ec50(μm)si例1》200.006》3333例2》200.039》512例3》200.076》263例4》200.018》1111例5》200.051》392例6》200.035》571例7》200.080》250例8》200.030》666例9》200.293》68例10》200.135》148例11》200.354》56nafamostat》200.013》1538camostat》200.222》90[0178]由筛选结果可见，相比于萘莫司他(nafamostat)或卡莫司他(camostat)、本发明通过糖基化修饰和芳杂环置换所得的通式(i)化合物具有更强效的抑制sars-cov-2病毒入侵肺细胞的活性和更好的选择性，因此在制备预防或治疗covid-19及其并发症的药物中具有潜在的应用价值。[0179]在本发明提及的所有文献都在本技术中引用作为参考，就如同每一篇文献被单独引用作为参考那样。此外应理解，在阅读了本发明的上述讲授内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本技术所附权利要求书所限定的范围。









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