一种纳米载体、纳米诊疗剂及其制备方法与应用 专利技术说明

医药医疗技术的改进;医疗器械制造及应用技术1.本发明涉及纳米生物医学材料领域，涉及一种能进行光声成像和协同治疗脑胶质瘤的纳米诊疗剂，具体涉及普鲁士蓝原位还原负载的mxene纳米片的制备方法及其应用。背景技术：2.胶质瘤是最常见的中枢神经系统原发恶性肿瘤，发病率约为每年3-6.4/10万人，占所有中枢神经系统恶性肿瘤的81.9％。根据肿瘤的和分子病理特点，世界卫生组织(world health organization,who)中枢神经系统分类指南已将弥漫性胶质瘤进一步分为ⅱ、iii、ⅳ级，其中gbm是最高级别的ⅳ级癌症，年发病率最高，约为3.23/10万人，占全部原发恶性中枢神经系统肿瘤的49.1％和胶质瘤的60.8％。目前的标准治疗方案是保留患者神经功能状态下最大范围的切除肿瘤，术后3-5周内进行放射治疗联合口服替莫唑胺同步化疗序贯替莫唑胺辅助化疗的stupp标准治疗方案。在2005年stupp方案引入之前，胶质母细胞瘤中位生存期约为12个月，后来由于治疗的多方面改进，包括术中成像保护的全切除和放疗技术的进步，中位生存期已增加到16个月。可是，在此之后几乎没有新的治疗方法显示出对减轻胶质母细胞瘤的显著疗效和突破性进展。大多数临床数据显示5年生存率低于5％，所有gbm患者最终都会复发，这种局部复发与显著缩短无进展生存期(pfs)相关。人脑胶质瘤与大多数恶性肿瘤相似，因肿瘤组织高活性的糖酵解和缺少足够的血液供应导致肿瘤微环境酸化和乏氧。人脑胶质瘤细胞表面相对正常细胞表面cd44高表达，细胞质中透明质酸酶表达水平升高。3.纳米材料具有的独特光热、光动力或声动力等性能赋予了其新型治疗和成像功能，同时基于纳米技术的药物递送技术，可显著改善药物溶解性，能够特异性地响应肿瘤微环境，提高药物的生物利用度，因此集成疾病诊断和治疗功能于一体的纳米诊疗剂展现出了巨大潜力。4.光热疗法(photothermal therapy,ptt)是用具有良好光热转换性能的材料作为治疗剂，利用光热剂(photothermal agents,ptas)在外部光源照射下产生的热能可以杀死癌细胞。随着纳米技术的发展，具有近红外吸收特性的ptas纳米材料因其穿透深度深、优异的光稳定性和多功能而在肿瘤治疗中显示出更大的潜力。然而，仍有许多方面需要改进，如光热转换效率不足和ptt过程中引起的炎症可导致肿瘤复发和迁移，这对临床pta提出了更高的要求。mxenes是一种过渡金属碳化物、氮化物或碳氮化物，通式mn+1xntx，其中m代表过渡金属位点(ti,v,sc,cr,zr,mo,ta,nb等)，x代表碳和/或氮，tx(其中x是可变的)表示外层过渡金属层表面的官能团，如-o，-oh，-f。到目前为止，已经有70多种不同元素制备的mxenes，因其独特的电子、(电)化学和物理性质被应用于催化、能量储存和转换。值得注意的是，得益于对近红外光的吸收和特殊的表面活性，ti3c2最近被广泛应用于生物医学领域，如生物传感器、抗菌活性和ptt。然而，对于癌症治疗，ti3c2 mxenes仅表现出单一的光热能力，杀死癌细胞效率相对较低，因此有必要赋予ti3c2 mxenes额外的性质，以实现有效的癌症治疗。普鲁士蓝(pb)纳米颗粒是美国食品和药物管理局(fda)批准的临床治疗铊中毒的解毒剂，因其优异的生物相容性和生物安全性而受到广泛关注，同时是一种多功能的纳米酶，具有多种清除活性氧(ros)的类酶活性。是一种具有多种酶样活性的纳米材料，在炎症治疗和肿瘤治疗中有着广阔的应用前景。在实际应用中，单一的pb在808nm处的光热转换效率同样相对较低(约30％)。5.光声成像(photoacoustic imaging,pai)是一种混合成像方式，通过光声效应声学检测光学吸收对比度，可与光学成像和超声成像相补充和兼容。pai具有如下优势：(1)由于生物组织对声音的透明程度比对光的透明程度高几个数量级，就散射平均自由程而言，pai在可伸缩的空间分辨率上提供了比光学显微镜大得多的穿透能力；(2)pai可通过内源性造影剂即生物组织中的固有成分进行功能、代谢和组织学成像，也可以通过外源性造影剂进行分子、细胞和组织成像。外源性造影剂优化了生物组织局部的光学和声学性质，提高对比度和分辨率，可应用于肿瘤组织、脉管、脑组织等非侵入性的实时成像中。因此，开发具有生物相容性、高分辨率、高穿透深度的光声成像造影剂具有重要意义。6.现有脑胶质瘤光热纳米诊疗剂中存在光热效率低、光热治疗导致的严重炎症反应和难以用于颅内胶质瘤精确定位成像等问题，为了进一步开发mxene在纳米生物医学材料领域更广泛的应用，希望构建具备光声成像和载药诊疗一体化的纳米制剂，对癌症临床检测和治疗起到积极推动作用。技术实现要素：7.为了解决上述问题，本发明的目的在于提供一种纳米载体、纳米诊疗剂及其制备方法与应用，该纳米诊疗剂在808nm等激光照射下表现出优于单一组分的高光热转换效率和光声信号，并具有类过氧化物酶等活性，可消除治疗过程中产生的各种ros，从而有效抑制炎症反应和肿瘤复发。8.为了达到上述目的，本发明提供了一种纳米载体，其组成包括mxene纳米材料、普鲁士蓝，其中，所述普鲁士蓝原位合成于所述mxene纳米材料上。9.根据本发明的具体实施方案，优选地，所述mxene纳米材料包括ti3c2tx纳米片、nb2ctx纳米片和mo2ctx纳米片等中的一种或两种以上的组合。10.根据本发明的具体实施方案，优选地，所述纳米载体的制备方法包括以下步骤：取mxene纳米材料，滴加k3[fe(cn)6]和fecl3混合溶液，经搅拌、离心洗涤、干燥，得到所述纳米载体；其中，所述k3[fe(cn)6]和fecl3·6h2o质量之和与所述mxene纳米材料的质量之比为(1-5):1，所述k3[fe(cn)6]和fecl3·6h2o的物质的量比为1:(0.8-1.5)，更优选为1:1。[0011]根据本发明的具体实施方案，优选地，所述mxene纳米材料可以为任意合适的形状，例如mxene纳米片。[0012]根据本发明的具体实施方案，优选地，所述mxene纳米片是通过以下方式制备的：取max相固体，经刻蚀液原位刻蚀后，超声分散，得到所述mxene纳米片。[0013]根据本发明的具体实施方案，优选地，在上述刻蚀过程中，所述刻蚀液为hcl/lif混合溶液。[0014]根据本发明的具体实施方案，优选地，在上述刻蚀过程中，所述hcl/lif混合溶液中，hcl浓度为5-20mol·l-1。[0015]根据本发明的具体实施方案，优选地，在上述刻蚀过程中，所述原位刻蚀为将max相固体加入hcl/lif混合溶液，于室温下刻蚀24-48h。[0016]根据本发明的具体实施方案，优选地，在上述刻蚀过程中，超声分散后得到mxene纳米片分散液，再经差速离心收集，得到所述mxene纳米片。[0017]根据本发明的具体实施方案，优选地，在上述刻蚀过程中，所述mxene纳米片分散液为mxene纳米片的水分散液，浓度为1-10mg/ml，更优选为2mg/ml。[0018]根据本发明的具体实施方案，优选地，在上述刻蚀过程中，所述差速离心收集为5000-8000rpm下离心20-60min沉淀，以使纳米片的粒径分布尽量集中。[0019]根据本发明的具体实施方案，优选地，在上述刻蚀过程中，所述mxene纳米片的平均直径为100nm-500nm。[0020]根据本发明的具体实施方案，优选地，在上述制备过程中，将k3[fe(cn)6]和fecl3·6h2o混合溶解于预先酸化的kcl溶液中，超声溶解后得到所述k3[fe(cn)6]和fecl3混合溶液。[0021]根据本发明的具体实施方案，优选地，在上述制备过程中，所述预先酸化的kcl溶液中kcl浓度为0.1m，ph为1-3。[0022]本发明还提供了一种纳米诊疗剂，其是由上述的纳米载体负载药物制得。[0023]根据本发明的具体实施方案，优选地，所述药物为小分子化疗药物。[0024]根据本发明的具体实施方案，优选地，所述小分子化疗药物包括盐酸阿霉素、长春新碱、替莫唑胺、洛莫司汀、丙卡巴肼中的一种或两种以上的组合。[0025]根据本发明的具体实施方案，优选地，所述药物与所述纳米载体的质量比为(1-3):1。[0026]根据本发明的具体实施方案，优选地，所述纳米诊疗剂进一步经过糖胺聚糖包被封装。[0027]根据本发明的具体实施方案，优选地，所述糖胺聚糖包括透明质酸和/或硫酸软骨素，更优选为透明质酸；透明质酸的包被一方面提高了纳米载体在体液中的稳定性，长时间放置不聚沉，另一方面透明质酸、硫酸软骨素可以识别胶质母细胞瘤表面过表达的cd44，实现靶向作用；另外，胶质母细胞瘤内表达透明质酸酶，可以分解纳米载体表面包被的透明质酸，从而实现纳米载体负载化疗药物在肿瘤细胞内的可控缓释。[0028]根据本发明的具体实施方案，优选地，所述透明质酸的相对分子质量为40-100kda。[0029]根据本发明的具体实施方案，优选地，进行透明质酸包被封装时，载药后的纳米诊疗剂与透明质酸的质量比为(2-10):1。[0030]本发明还提供了上述纳米载体或上述纳米诊疗剂作为光声成像剂或者在制备光热-化学协同治疗药物中的应用。[0031]根据本发明的具体实施方案，优选地，所述光热-化学协同治疗药物用于治疗脑胶质瘤。[0032]根据本发明的具体实施方案，优选地，所述纳米诊疗剂在激光(波长例如808nm或1064nm)照射下进行光声成像和/或光热转换。[0033]根据本发明的具体实施方案，上述纳米诊疗剂的制备方法具体包括以下步骤：[0034](1)mn+1xntx是从max相陶瓷的层状结构中选择性地去除a元素(通常是al)。取max相固体，经刻蚀液原位刻蚀后，超声分散得mxene纳米片的分散液，再通过差速离心收集，得到mxene纳米片；[0035](2)称取一定质量的k3[fe(cn)6]和fecl3·6h2o，混合溶解于预先酸化的kcl溶液中，超声充分溶解后，缓慢滴加至步骤(1)中得到的mxene纳米片溶液，室温搅拌，离心洗涤收集，冷冻干燥，得到纳米载体pb@mxene；[0036](3)将小分子化疗药物溶液与pb@mxene纳米载体溶液按一定比例混合，室温搅拌过夜，离心除去未负载的小分子化疗药物；[0037](4)将负载了小分子化疗药物的pb@mxene纳米载体重新溶解在一定浓度的糖胺聚糖溶液(例如透明质酸溶液)中，室温搅拌过夜，离心收集沉淀，即得到所述的纳米诊疗剂。[0038]本发明具有如下有益效果：[0039](1)mxene纳米片原位还原负载普鲁士蓝，其制备方法简单、成本低廉、条件温和，组分分布均匀、颗粒尺寸小，能够批量化或工业化生产；[0040](2)在水中具有良好的分散性、稳定性，无明显溶血行为和细胞毒性，具有良好的生物安全性(生物相容性)；[0041](3)保留了mxene纳米片和原位还原普鲁士蓝纳米颗粒结构的完整性，兼具mxene和普鲁士蓝的优异性能；[0042](4)本发明制备的脑胶质瘤纳米诊疗剂光热转换效率提升至47.3％，比单纯普鲁士蓝和mxene的性能有所提高，既可作为光声造影剂实现光声成像诊断肿瘤，又能对肿瘤进行光热-化学协同治疗；在1w/cm2，808nm或1064nm激光照射下，对脑胶质瘤细胞具有选择性杀伤作用，抗肿瘤效果显著；在808nm或1064nm激光激发下进行光声成像；[0043](5)本发明制备的脑胶质瘤纳米诊疗剂利用普鲁士蓝纳米颗粒广泛的ros清除活性，缓解在光热治疗过程中产生的氧化应激，从而避免炎症和肿瘤复发：普鲁士蓝纳米颗粒具有良好的类过氧化氢酶(cat)、类过氧化物酶(pod)和类超氧化物歧化酶(sod)等模拟酶性质，可以有效地清除各种ros，体内可以抑制中性粒细胞和多种促炎细胞因子的招募，在各种炎症疾病中都有很好的应用；[0044](6)透明质酸、硫酸软骨素的包被提高了纳米诊疗剂的稳定性和靶向性，同时能够优化实现可控释药。附图说明[0045]图1为脑胶质瘤纳米诊疗剂的制备流程图；[0046]图2为实施例2制得的纳米载体的扫描电镜图；[0047]图3为实施例2制得的纳米载体的元素分布图；[0048]图4为zeta电位图；[0049]图5为纳米诊疗剂的光热稳定性结果图；[0050]图6为实施例2制得的脑胶质瘤纳米诊疗剂治疗u87-mg细胞实验结果图；[0051]图7为纳米诊疗剂的体内光声图像；[0052]图8为纳米诊疗剂的体内光热-化学协同治疗结果图；[0053]图9为纳米诊疗剂体内抗炎考察结果图。具体实施方式[0054]为了对本发明的技术特征、目的和有益效果有更加清楚的理解，现对本发明的技术方案进行以下详细说明，但不能理解为对本发明的可实施范围的限定。所述实验试剂如无特殊说明均可通过商业途径获得，所述实验方法如无特殊说明均为常规实验方法。[0055]实施例1：ti3c2tx纳米片的制备[0056]本实施例提供了一种ti3c2tx纳米片，其制备流程如图1所示，具体包括如下步骤：[0057](1)将1.5g lif溶解在20ml、12m hcl中，充分溶解后缓慢加入1.0g ti3alc2粉末，室温下500rpm搅拌蚀刻40h；[0058](2)用去离子水离心洗涤酸性混合液，多次循环，直至上清液ph值为4-5；[0059](3)采用超声剥离法使分散的粘土状固体悬浮液(水溶液)剥落1小时，3500rpm离心20min后，取上清液5000rpm离心30min，沉淀重悬于水中，得到ti3c2tx纳米片的水分散液(胶体分散液)。[0060]实施例2：普鲁士蓝负载的ti3c2tx(pb@ti3c2tx)的制备[0061]本实施例提供了一种普鲁士蓝负载的ti3c2tx(pb@ti3c2tx)，其制备流程如图1所示，具体包括如下步骤：[0062](1)配置0.1mm kcl溶液，盐酸调节ph值为2；[0063](2)称取16.5mg k3[fe(cn)6]和13.5mg fecl3·6h2o溶解于10ml上述kcl溶液，超声振荡使其充分溶解，得到混合溶液；[0064](3)向5ml浓度为2mg·ml-1的实施例1所得的ti3c2tx纳米片水分散液边搅拌边缓慢滴加5ml步骤(2)中配置的混合溶液，并在室温下反应40min；[0065](4)用去离子水离心洗涤反应液，循环三次，最后在5000rpm离心30min，得到普鲁士蓝负载的ti3c2tx(pb@ti3c2tx)，普鲁士蓝原位生长于ti3c2tx之上。[0066]以上通过透射电子显微镜(tem)、能量色散谱仪(eds)、x射线多晶衍射(xrd)、x射线光电子能谱(xps)证明了脑胶质瘤纳米诊疗剂pb@mxene纳米载体被成功合成，该纳米载体的透射电镜图和元素分布分别如图2和图3所示。该纳米载体的平均直径为481nm。[0067]实施例3：载药纳米诊疗剂(pb@ti3c2tx/dox-ha)的制备[0068]本实施例提供一种载药纳米诊疗剂(pb@ti3c2tx/dox-ha)，其制备流程如图1所示，具体包括如下步骤：[0069](1)将2.0ml pb@ti3c2tx水溶液(2.0mg·ml-1)与4.0ml dox水溶液(2.0mg·ml-1)混合，在黑暗中搅拌过夜；[0070](2)将步骤(1)混合物5000rpm离心30min，收集上清液；[0071](3)沉淀用4.0ml、40-100kda透明质酸水溶液(4.0mg·ml-1)重悬，搅拌6小时后离心收集沉淀，得到pb@ti3c2tx/dox-ha；[0072](4)将得到的pb@ti3c2tx/dox-ha再分散到pbs中，4℃保存，避光备用。[0073]以上通过zeta电位的变化证明了所述的脑胶质瘤纳米诊疗剂的载药和包封成功，如图4所示。本实施例采用抗肿瘤化疗药物盐酸阿霉素(dox)为模型药物，构建pb@mxene包载dox的纳米诊疗剂(简称pb@mxene/dox-ha)，以mxene的质量计算，采用紫外可见吸收光谱检测pb@mxene/dox-ha的载药量为0.72±0.09μgdox/μg mxene，包封率为36.11±4.59％。[0074]测试例1：载药纳米诊疗剂的光热性能评估[0075]测试过程如下：[0076](1)在室温下用1w·cm-2，808nm激光照射100ppm(0.1mg/ml)实施例3所得载药纳米诊疗剂pb@ti3c2tx/dox-ha480s，采用红外热像仪拍摄并记录每15s的温度变化和热像，作为空白对照，pbs溶液在相同条件下被辐照；[0077](2)当升温基本维持稳定，停止激光照射，采用红外热像仪记录降温过程每15s的温度变化，直至温度恢复室温；[0078](3)作为对比，在室温下用1w·cm-2，808nm激光照射100ppm实施例1所得ti3c2tx纳米片和纯普鲁士蓝纳米颗粒，采用红外热像仪记录相同浓度下0-480s升温曲线和480-960s降温曲线；[0079](4)计算光热转换效率，公式为：[0080][0081]其中，tmax为样品溶液的平衡温度，tsurr对应实验环境温度；i表示808nm激光的功率密度(1w·cm-2)，aλ是样品溶液在808nm处的吸光度；qdis表示容器本身光吸收引起的热损失，根据qdis＝(5.4×10-4)×i。hs的值可以用另一个公式计算：[0082][0083]其中，m是样品溶液的质量，cwater是水的比热容4.2j·g-1·k-1，τs为系统的时间常数。[0084]结合上述数值，计算出pb@ti3c2tx/dox-ha纳米诊疗剂的光热转换效率为47.3％，纯ti3c2tx纳米片的光热转换效率为25.2％，纯pb颗粒的光热转换效率为32.5％；此外，反复交替进行步骤(1)和步骤(2)五次，以验证纳米诊疗剂的光热稳定性，结果如图5所示，证明该纳米诊疗剂具有良好的光热稳定性。[0085]测试例2：纳米载体的生物相容性评估[0086]细胞验证实验按照国家标准gb/t16886.5(医疗器械生物学评价：体外细胞毒性试验)和国际医疗器械生物学评价标准iso10993-5相关规定，以人脑胶质瘤细胞u87-mg为研究对象，对实施例2所得pb@ti3c2tx的体外生物安全性进行评价。[0087]取实施例2制备的pb@ti3c2tx的pbs溶液1ml紫外灭菌4h，加入u87-mg专用培养基(含10％胎牛血清)，配置浓度分别为10、50、100、200、500ppm的实验组培养基。选取生长旺盛的u87-mg细胞以约10000个/孔接种于96孔板，实验组每孔加入100μl各个浓度的实验组培养基，对照组每孔加入100μl完全培养基，空白组不加细胞只加完全培养基。置于37℃、5％co2培养箱中24h后，吸弃培养基，加入pbs轻轻冲洗3次，在每孔加入100μl完全培养基后，再加入10μl cck8试剂，培养4h后用酶标仪测定每孔溶液在450nm吸光度，根据计算公式：[0088][0089]计算细胞的存活率。经过计算，使用pb@ti3c2tx与u87-mg细胞共培养，当浓度达到200ppm时细胞存活率仍大于95％，表明pb@ti3c2tx纳米载体具有良好的生物安全性。[0090]测试例3：载药纳米诊疗剂的体外治疗效果评估[0091]对实施例3制得的载药纳米诊疗剂的ptt和化疗在体外的协同作用进行评价。[0092]选取生长旺盛的u87-mg细胞以约10000个/孔接种于96孔板，设置6个平行组，对照组和激光照射组每孔加入100μl完全培养基，化疗组和激光照射加化疗组每孔加入100μl含50μg/ml的dox完全培养基，光热治疗组每孔加入100μl浓度为100ppm的pb@ti3c2tx，协同治疗组每孔加入100μl浓度为100ppm的pb@ti3c2tx/dox-ha；置于37℃、5％co2培养箱中共孵育6h后，吸弃培养基，加入pbs轻轻冲洗3次，在每孔加入100μl完全培养基后，用1w·cm-2 808nm激光分别照射激光照射组、激光照射加化疗组、光热治疗组和协同治疗组每孔10min。置于37℃、5％co2培养箱中6h后，每孔加入10μl cck8试剂，培养4h后用酶标仪测定每孔溶液在450nm吸光度，根据测试例2中的计算公式计算细胞的存活率。实验结果如图6所示，结果表明pb@ti3c2tx/dox-ha载药纳米诊疗剂对u87-mg细胞具有显著的化学-光热协同治疗效果。[0093]测试例4：载药纳米诊疗剂的体外纳米酶活性测定[0094]分别采用钼酸铵比色法过氧化氢酶活性检测试剂盒、愈创木酚比色法过氧化物酶活性检测试剂盒和氮蓝四唑比色法超氧化物歧化酶活性检测试剂盒检测纳米诊疗剂的三种纳米酶活性。所有试剂盒均购买自北京盒子生工(boxbio)科技有限公司，实验操作均严格按照试剂盒说明书执行。结果如表1所示。[0095]表1[0096]类酶种类catpodsod酶活性(u/ml)24.87±0.8243.29±6.8530.80±6068[0097]测试例5：载药纳米诊疗剂的类pod纳米酶反应动力学测定[0098]测试过程为：25℃下，在h2o2存在时，以3,3',5,5'-四甲基联苯胺(tmb)为底物，在ph 7.4的pbs缓冲溶液中，对实施例3所得的pb@ti3c2tx/dox-ha载药纳米诊疗剂进行酶反应动力学研究。使用紫外可见分光光度计测定反应体系随时间在波长625nm处的吸光度变化。为了获得稳态动力学参数，分别测定5、15、30、60和90mm过氧化氢浓度下的反应动力学曲线。根据lambert beer定律，计算oxtmb的浓度变化率：[0099]a＝εlc(lambert beer定律)；[0100]绘制过氧化氢浓度和初始反应速率变化图，拟合曲线遵循michaelis方程：[0101][0102]其中，v0为初始反应速率，vmax为最大反应速率，[s]为底物浓度，km为michaelis常数；根据拟合的michaelis-menten饱和曲线，计算michaelis常数。方程变形可得：[0103][0104]结合上述数值，计算出在室温和ph 7.4条件下，pb@ti3c2tx/dox-ha纳米诊疗剂与底物h2o2结合的km值为19.7mm，vmax＝9.4×10-8m·s-1。[0105]测试例6：载药纳米诊疗剂用于肿瘤的光声成像诊断[0106]动物实验按照国家和北京市实验动物相关法律法规及技术规范规定，对实施例3所得的载药纳米诊疗剂的动物体内光声成像进行评估。[0107]雄性balb/c裸鼠右侧腹股沟皮下注射0.1ml密度为107的人脑胶质瘤u87-mg细胞，当肿瘤体积达到约100mm3时，即可用于体内实验。对肿瘤原位注射实施例3载药纳米诊疗剂，分别在注射后的0、6、12、24h测定肿瘤在808nm处的光声图像，如图7所示(图7中：窗宽(window width，ww)和窗位(window level，wl))。[0108]测试例7：载药纳米诊疗剂用于肿瘤的体内光热-化学协同治疗[0109]本测试例对实施例3所得的载药纳米诊疗剂的动物体内肿瘤杀伤效果进行评价。[0110]取实施例3所得的载药纳米诊疗剂用于脑胶质瘤治疗，操作同测试例6，尾静脉注射载药纳米诊疗剂24h后采用808nm激光器照射肿瘤部位10min。上述尾静脉注射实施例3载药纳米诊疗剂且施加辐射作为光热-化学协同治疗组，同时以肿瘤未处理作为空白对照组，肿瘤部位注射实施例1所得ti3c2tx纳米片且施加辐照作为热疗组，肿瘤部位注射实施例3载药纳米诊疗剂但未施加辐照作为化疗组。实验结果表明，在光热-化学协同治疗的作用下能更有效杀伤肿瘤细胞，实现化疗与热疗协同治疗肿瘤，如图8所示。[0111]测试例8：载药纳米诊疗剂体内抗炎效果评估[0112]在测试例7的小鼠经纳米诊疗剂及激光处理后，将实验动物安乐死处理，摘取肿瘤组织，按照组织质量(g)：提取液体积(ml)为1：10的比例处理样品，冰浴匀浆，4℃8000g离心10min，取上清置于冰上待测，通过elisa技术分析样本中环氧合酶-2(cox-2)和髓过氧化物酶(mop)的含量。结果如图9所示，在ti3c2tx纳米片且施加辐照的热疗组肿瘤组织中，cox-2和mop水平明显高于其他组。相反在pb@ti3c2tx/dox-ha协同治疗组肿瘤组织中cox-2和mop水平低于其他组，说明pb负载可明显缓解ptt诱导的炎症。[0113]测试例9：载药纳米诊疗剂的释药评估[0114]本测试例考察在不同ph、近红外光照射与否及透明质酸酶存在与否的条件下，纳米诊疗剂中化疗药物的累积释放情况。在37℃下，分别在ph 7.4或ph 6.5的缓冲液中，使用或不使用1.0w cm-2、808nm激光照射的条件下(照射溶液的温度加热至约50℃)，以不同的时间间隔(0、0.5、1、2、3、6、9、12、24和48h)将实施例3所得的载药纳米诊疗剂溶液离心，收集0.15ml上清液，用紫外-可见法测定阿霉素的释放量。对于透明质酸酶反应性药物释放，采用相同剂量的pb@ti3c2tx/dox-ha与含有0.5mg/ml透明质酸酶的ph 7.4缓冲液孵育，按照上述操作测定阿霉素的释放量。[0115]结果显示，pb@mxene/dox-ha中dox的释放呈ph和温度敏感性，ph降低和近红外光照射都可以使dox的释放增加：ph 6.5近红外光照组24小时的dox累积释放量(20.61％)是ph 7.4无光照组(7.48％)的近3倍，表明近红外光照可显著提高纳米诊疗剂中dox的释放，从而增加化疗的敏感性。透明质酸酶可明显提高同等条件下pb@mxene/dox-ha中dox的累积释放量，在ph 7.4近红外光照的条件下，含透明质酸酶组的dox累积释放量高达60.65％。[0116]以上所述仅为本发明的较佳实施例而己，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。









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