以介白素24或介白素20拮抗剂治疗组织纤维化和/或损伤和/或器官衰竭的制作方法

医药医疗技术的改进;医疗器械制造及应用技术1.本发明是关于治疗和/或预防组织纤维化和/或损伤和/或器官衰竭的领域。特定而言，本发明表示关于il-24或其激动剂及il-20拮抗剂(例如抗il-20抗体)治疗或预防组织纤维化和/或损伤和/或器官衰竭的用途。2.先前技术3.介白素24(il-24)亦称为黑色素瘤分化相关蛋白7(mda-7)，其是属于il-10家族的细胞介素。il-24主要由免疫细胞(例如活化单核细胞、巨噬细胞及t细胞)产生。已报导，il-24可用于藉由诱导转录因子stat1及stat3的快速活化来控制细胞存活及增殖。4.介白素il-20(il-20)是il-10家族(其包含il-10、il-19、il-20、il-22、il-24及il-26)的成员。blumberg等人，2001,cell 104:9-19；pestka等人，2004,annu rev immunol 22:929-979。il-20表达于单核细胞、上皮细胞及内皮细胞上且藉由活化异源二聚体受体复合物il-20r1/il-20r2或il-22r1/il-20r2来作用于多个细胞类型上。dumoutier等人，2001,j immunol 167:3545-3549)。已发现，il-20涉及各种发炎性疾病，例如牛皮癣(blumberg等人，2001；sa等人，2007,j immunol 178:2229-2240；及wei等人，2005,clin immunol 117:65-72)、类风湿性关节炎(hsu等人，2006,arthritis rheum 54:2722-2733)、动脉粥样硬化(caligiuri等人，2006,arterioscler thromb vasc biol 26:1929-1930；及chen等人，2006,arterioscler thromb vasc biol 26:2090-2095)、缺血性中风(chen等人，2009,j immunol 182:5003-5012)及肾衰竭(li等人，2008,genes immun 9:395-404)。亦参见wei等人，2006,j biomed sci 13:601-612。5.仍需要增加器官疾病治疗的效能。技术实现要素：6.本发明基于如下意外结果：il-24或il-20拮抗剂成功地减少了组织纤维化和/或损伤和/或器官衰竭(例如肾纤维化及肺纤维化)的症状且延长了患有肾及肺损伤的小鼠的存活率。7.因此，本发明的一方面描述缓解或延迟(发作)或治疗发生于肾或肺中的组织纤维化和/或损伤和/或器官衰竭的方法，其包括向需要缓解或延迟(发作)或治疗发生于肺中的组织纤维化和/或损伤和/或器官衰竭的受试者施用有效量的介白素24(il-24)蛋白或介白素20(il-20)拮抗剂；或向需要缓解或延迟(发作)或治疗发生于肾中的组织纤维化和/或损伤和/或器官衰竭的受试者施用有效量的介白素24(il-24)。8.在一些实施例中，受试者患有或怀疑患有组织纤维化和/或损伤和/或器官衰竭的人类患者。在一些实施例中，发生于肾中的组织纤维化和/或损伤和/或器官衰竭选自由以下组成的组：肾纤维化、慢性肾病、化学疗法诱导的肾纤维化(例如多柔比星(doxorubicin)诱导的肾纤维化)及糖尿病诱导的肾病变。在一些实施例中，发生于肺中的组织纤维化和/或损伤和/或器官衰竭选自由以下组成的：肺纤维化、肺发炎、特发性肺纤维化、空气污染诱导的肺纤维化(例如pm2.5诱导的肺纤维化)、化学疗法诱导的肺纤维化(例如博来霉素(bleomycin)诱导的肺纤维化)、抗生素诱导的肺纤维化(例如二醇-肽抗生素诱导的肺纤维化)及感染诱导的肺纤维化(例如sars-cov-2感染诱导的肺纤维化)。9.在本文所阐述的任一方法中，可藉由全身性途径施用医药组合物。在一些实施例中，以非经肠方式施用医药组合物。举例而言，可经由静脉内输注或腹膜内注射施用医药组合物。10.在本文所阐述的任一方法中，医药组合物包括il-24蛋白及介白素20拮抗剂。11.il-20拮抗剂可为结合至人类il-20的抗体或结合至人类il-20受体(例如本文所阐述者)的抗体。在一些实施例中，il-20拮抗剂可为结合至il-20或il-20受体以由此抑制由il-20介导的信号传导路径的抗体。举例而言，此一抗体可结合至il-20蛋白(例如人类il-20)或可结合至il-20受体(例如人类il-20受体，例如il-20的r1亚单元)。本文所阐述方法中所使用的任一实例性抗体可为全长抗体或其抗原结合片段。或者，抗体可为人类抗体、人类化抗体、嵌合抗体或单链抗体。12.在一方面中，本文所使用结合人类il-20的实例性抗体可为单株抗体mab7e、其抗原结合片段或其功能变体。在一实例中，mab7e的功能变体与mab7e包括相同的互补决定区(cdr)。在另一实例中，功能变体是mab7e的人类化抗体。此人类化抗体可包括重链可变区(vh)，其包括seq id no:8的氨基酸序列；及轻链可变区(vl)，其包括seq id no:12或seq id no:13的氨基酸序列。13.在一些实施例中，il-20拮抗剂是结合至人类il-20的抗体或结合至人类il-20受体的抗体，且il-24蛋白及抗体偶联为一个单一分子。14.亦在本发明范围内是包括本文所揭示的任一il-24蛋白或il-20拮抗剂的医药组合物，其用于治疗组织纤维化和/或损伤和/或器官衰竭；及任一il-24或il-20拮抗蛋白用以制造用于治疗组织纤维化和/或损伤和/或器官衰竭的药剂的用途。15.本发明一个或多个实施例的详细内容陈述于下文说明书中。根据下列图式及若干实施例的详细说明亦及随附申请专利范围，本发明的其他特征或优点将显而易见。16.图式简单说明17.图1.患有ckd的肾组织的纤维化区域中的il-24表达有所下调。展示ckd患者的肾切片中的il-24的免疫荧光染色。进展性肾纤维化动物模型的诱导及进行uuo手术的肾组织中的胶原累积。图1a：使用免疫组织化学检测hil-24的表达含量。使用苏木素(hematoxylin)将细胞核染色。原始放大率：200×。图1b：使用免疫组织化学检测il-20、il-24、tgf-β、α-sma的表达含量且使用天狼猩红染色(sirius red stain)分析胶原沉积。原始放大率：200×及400×。图1c：与假对照相比的il-24、tgf-β、α-sma的量化。图1d：遵循uuo手术后时间来检测肌酸酐及血尿氮(bun)的血清含量。与假组相比，*p《0.05，**p《0.001，***p《0.001。18.图2.il-24蛋白治疗可预防长期uuo小鼠的肾纤维化。诱导uuo小鼠4周以确立长期肾纤维化。在uuo手术24小时之后开始使用小鼠重组il-24蛋白(il-24)进行治疗。(n＝4/组)。图2a：使用免疫组织化学检测纤维生成因子–tgf-β、α-sma的表达含量且使用天狼猩红染色分析长期uuo小鼠中的胶原沉积。原始放大率：200×及400×。图2b：肾组织中的tgf-β、α-sma表达及胶原沉积的量化。图2c：使用实时pcr利用特异性引子分析tgfb、acta2、il11、il1b、il6及tnfa的mrna转录物。使用gapdh作为内部对照。图2d：检测肌酸酐及血尿氮(bun)的血清含量以评价肾功能。数据是平均值±sem。与假组相比，*p《0.05，**p《0.001，***p《0.001；与uuo+pbs组相比，#p《0.05，##p《0.01，###p《0.001。19.图3.保护il-24小鼠以免于uuo诱导的肾纤维化。将uuo小鼠诱导2周。在进行uuo手术2周之后，向小鼠注射il-24蛋白。(n＝5/组)。图3a：使用免疫组织化学检测纤维生成因子–tgf-β、α-sma的表达含量且使用天狼猩红染色分析长期uuo诱导的肾纤维化模型中的胶原累积。原始放大率：200×及400×。图3b：肾组织中的tgf-β、α-sma表达及胶原沉积的量化。图3c：使用实时pcr利用特异性引子分析tgfb、acta2、il11、dem、il1b及col1a1的mrna转录物。图3d：在il-24治疗之后量测血清肌酸酐及血尿氮(bun)。使用gapdh作为内部对照。数据是平均值±sem。与假组相比，*p《0.05，**p《0.001，***p《0.001；与uuo+pbs组相比，#p《0.05，##p《0.01，###p《0.001。20.图4.il-24治疗可缓解多柔比星诱导的肾毒性。藉由多柔比星(dox)(5mg/kg/周)连续诱导小鼠4周以确立肾毒性模型。在对小鼠实时多柔比星诱导之后2周开始使用小鼠重组il-24蛋白(1mg/kg)进行治疗(两次/周)并在第42天实施安乐死(n＝5/组)。图4a：使用免疫组织化学检测il-24表达含量并加以量化。图4b：使用ihc检测纤维生成因子–tgf-β、α-sma的表达含量且使用天狼猩红染色分析胶原累积。原始放大率：200×。图4c：在il-24治疗之后量测血清肌酸酐及血尿氮(bun)。数据是平均值±sd。与dox组相比，*p《0.05，**p《0.001，***p《0.001；与dox+pbs组治疗相比，#p《0.05，##p《0.01，###p《0.001。21.图5：来自经博来霉素治疗的小鼠模型及健康对照的肺组织中胶原沉积的苏木素及伊红染色、免疫染色及天狼猩红染色的代表性影像。22.图6：在肺纤维化模型中，藉由flexivent呼吸机(scireq)量测小鼠的肺功能。博来霉素(与pbs或igg组合)组中的所有功能指数皆高于健康组，从而指示了肺功能的降低。经细胞介素24治疗及经抗20抗体治疗的小鼠皆展示可防止博来霉素诱导的肺功能障碍。(分别地，*p《0.01，**p《0.01，***p《0.001)。23.实施方式24.本发明基于如下意外结果：介白素24(il-24)或介白素20(il-20)拮抗剂在公认小鼠模型中展示针对人类组织纤维化和/或损伤和/或器官衰竭的保护效应。具体而言，已发现，il-24会保护小鼠免于慢性肾病及长期单侧输尿管堵塞中的肾纤维化，降低血清肌酸酐及bun，降低促纤维生成因子的表达，减少胶原产生，维持肾功能，抑制及逆转tgf-β诱导的上皮-间质转变，抵抗小鼠中的多柔比星诱导的肾损伤。具体而言，已发现，il-24或介白素20拮抗剂会改善肺纤维化且降低肺组织中的tgfβ、αsma表达及胶原沉积。因此，本文提供使用有效量的il-24蛋白或介白素20拮抗剂缓解组织纤维化和/或损伤和/或器官衰竭和/或延迟其发作的方法。25.i.il-24蛋白26.il-24是il-10细胞介素超家族的成员。此细胞介素的结构及功能信息在业内已众所周知。il-24结合两种异源二聚体受体il-20r1/il-20r2及il-22r1/il-20r2且快速活化在细胞存活及增殖中发挥重要作用的转录因子stat-1及stat-3。wang等人，immunology,114:166-170(2005)。il-24蛋白在各物种中高度同源。人类il-24与小鼠及大鼠il-24共有接近70％的序列一致性，从而指示此细胞介素可在各物种中发挥作用。已发现，啮齿类动物il-24蛋白能够活化人类il-24受体。wang等人，genes immun 5:363-370(2004)。27.成熟人类il-24是分子量为约33,000kdal的醣蛋白。实例性人类il-24的氨基酸序列可发现于基因库登录号aah09681.1下。成熟大鼠及小鼠il-24具有约23,000kdal的分子量。实例性大鼠及小鼠il-24的氨基酸序列可发现于基因库登录号np_579845.1及np_444325.2下。28.本文所阐述的il-24蛋白是指与天然il-24具有相同生物活性的多肽，例如人类il-24。在一些实施例中，本文所阐述方法中所使用的il-24蛋白是自适宜物种(例如人类、非人类灵长类动物(例如猴)、大鼠、小鼠、猪、牛、兔等)获得的天然il-24蛋白。该等天然il-24蛋白包含天然同种型，诸如多型性变体及剪接变体。29.在一些实例中，il-24蛋白是人类蛋白。实例包含基因库登录号aah09681.1中所阐述的il-24蛋白、基因库登录号np_006841.1中所阐述的人类il-24同种型1、基因库登录号np_001172085.1中所阐述的人类il-24同种型3、基因库登录号np_001172086.1中所阐述的人类il-24同种型4、基因库登录号np_001172087.1中所阐述的人类il-24同种型5、基因库登录号aav52800.1中所阐述的人类il-24剪接变体dele3及基因库登录号aav52801.1中所阐述的人类il-24剪接变体dele5。30.在其他实例中，il-24蛋白是衍生自适宜哺乳动物(例如非人类灵长类动物、大鼠、小鼠、猪、牛、兔等)的天然il-24蛋白。实例包含大猩猩il-24(例如在基因库登录号xp_004028343下揭示的)、黑猩猩il-24(例如在基因库登录号xp_008974768.1下揭示额)、红毛猩猩il-24(例如在基因库登录号xp_002809582.1及xp_009236749.1下揭示的)、牛il-24(例如在基因库登录号xp_010363962下阐述的)及啮齿类动物il-24(例如上述大鼠及小鼠il-24蛋白)。31.本文所阐述的il-24蛋白可为与人类对应体(如本文所阐述的)共有至少约65％(例如约70％、75％、80％、85％、90％、95％、98％或更高)序列一致性的天然il-24蛋白。术语“约”容许自参考值变化最多5％。使用karlin及altschul proc.natl.acad.sci.usa 87:2264-68,1990的算法(在karlin及altschul proc.natl.acad.sci.usa 90:5873-77,1993中加以修改)来测定两个氨基酸序列的“一致性百分比”。此一算法纳入altschul等人，j.mol.biol.215:403-10,1990的nblast及xblast程序(2.0版)中。可使用xblast程序(评分＝50，字长＝3)来实施blast蛋白质搜索以获得与所关注蛋白质分子同源的氨基酸序列。在两个序列之间存在空位的情形下，可利用gapped blast，如altschul等人，nucleic acids res.25(17):3389-3402,1997中所阐述。在使用blast及gapped blast程序时，可使用各别程序(例如xblast及nblast)的预设参数。32.或者，il-24蛋白可为天然il-24蛋白的功能变体。天然il-24的功能变体可与天然对应体共有高序列同源性(例如至少约80％、85％、90％、95％、98％或更高)且相对于天然对应体含有一个或多个突变。通常，该等突变应出现于不实质上影响il-24蛋白的生物活性的区域处。作为il-19子家族的成员，il-24的结构特征在业内已众所周知。zdanov,vitam horm,74:61-76(2006)。亦可藉由比较特定il-24蛋白与il-24家族和/或il-10/il-19家族的其他成员的氨基酸序列来鉴别il-24的功能结构域。在一些情况下，与天然对应体相比，功能变体含有最多10(例如9、8、7、6、5、4、3、2或1)个氨基酸取代。可藉由常规方法验证候选功能变体的活性。33.本领域技术人员应认识到，可对野生型il-24进行保守氨基酸取代以提供功能变体，亦即保留特定il-24蛋白的功能能力的变体。如本文中所使用，“保守氨基酸取代”是指并不改变进行氨基酸取代的蛋白质中的相对电荷或大小特性的氨基酸取代。可根据本领域技术人员所已知改变多肽序列的方法来制备变体，该等方法可(例如)参见编译该等方法的参考文献，例如molecular cloning:a laboratory manual,j.sambrook等人编辑，第二版，cold spring harbor laboratory press,cold spring harbor,n.y.,1989；或current protocols in molecular biology,f.m.ausubel等人编辑，john wiley&sons,inc.,new york。氨基酸的保守取代包含在下列群组内的氨基酸中进行的取代：(a)m、i、l、v；(b)f、y、w；(c)k、r、h；(d)a、g；(e)s、t；(f)q、n；及(g)e、d。34.通常藉由改变编码天然il-24的核酸来对天然il-24的氨基酸序列实施保守氨基酸取代以产生功能变体。可藉由本领域技术人员已知的各种方法进行该等取代。举例而言，可藉由pcr引导的突变、定点诱变(根据kunkel的方法(kunkel,pnas 82:488-492,1985))或藉由以化学方式合成编码il-24蛋白的核酸分子来进行氨基酸取代。35.本文所阐述的任一il-24蛋白可藉由常规技术(例如重组技术)制得。亦可自适宜天然来源分离天然il-24蛋白。36.ii.il-20拮抗剂37.实例性il-20可包含属il-10细胞介素家族的促发炎性细胞介素。本文所阐述的il-20是指介白素-20及保留至少一部分il-20活性的其变体。如本文中所使用，il-20包含所有哺乳动物物种(包含人类、犬类、猫、马或牛)的天然il-20序列。在一实例中，il-20是人类il-20(基因库登录号np_061194.2)。38.il-20经由结合至il-20受体来活化il-20信号传导路径，该受体是含有亚单元il-20r1及il-20r2(亦称为ra及rb)的二聚体复合物。此il-20受体由三种在功能上不同的细胞介素(亦即il-19、il-20及il-24)共享，从而表明此受体取决于其与特定细胞介素的结合来介导不同信号传导路径。il-20亦能够结合至含有il-20r2及il-22r1的二聚体复合物。本文所揭示的il-20受体是指一种或多种能够结合至il-20且由其活化的多肽。本文所揭示的il-20受体包含任何哺乳动物物种(包含(但不限于)人类、犬类、猫、马、灵长类动物或牛)的il-20r1、il-20r2及il-22r1。人类il-20受体的实例包含hil-20r1(基因库登录号nm_014432.2)、hil-20r2(基因库登录号nm_144717.2)及hil-22r1(nm_181309.1)。人类il-20受体的序列已阐述于(例如)美国专利第6,610,286号、第7,122,632号、第7,393,684号及第7,537,761号及美国专利申请公开案第2006/0263850 a1号、第2006/0263851 a1号、第2008/0247945 a1号及第2009/0074661 a1号中。39.拟用于本文所阐述方法中的il-20拮抗剂是阻断、抑制或减小(包含显着减小)il-20(包含由il-20信号传导介导的下游路径)的生物活性(例如受体结合和/或诱发对il-20的细胞反应)的分子。参见us2011/0064731，其全部内容以引用方式并入本文中。术语“拮抗剂”并不暗示生物作用的任何具体机制，且可视为明确包含及涵盖所有可能的与il-20的药理学、生理学及生物化学相互作用(不论直接抑或间接)。出于本发明目的，应明确理解，术语“拮抗剂”涵盖所有先前所指定的术语、名称以及功能状态及特性，其中il-20本身(例如人类il-20)、il-20生物活性(包含(但不限于)其介导胰脏癌的任何方面的能力)或生物活性结果实质上发生抵消、降低或中和(以任何显着程度，例如至少20％、50％、70％、85％、90％、100％、150％、200％、300％或500％或10倍、20倍、50倍、100倍、1000倍或10000倍)。40.实例性il-20拮抗剂包含(但不限于)抗il-20抗体、针对il-20的反义核酸分子(包含针对编码il-20的核酸的反义核酸)、针对il-20核酸的小干扰rna(sirna)、针对il-20核酸的微rna、il-20抑制性化合物、抗il-20r抗体(例如特异性结合il-20r1、il-20r2或由此形成的二聚体复合物的抗体)、针对il-20受体的亚单元的反义核酸分子、针对编码il-20受体的亚单元的核酸的sirna或微rna或il-20r抑制性化合物。在一些实施例中，il-20拮抗剂结合il-20或il-20受体且防止形成il-20-il-20r复合物，由此抑制il-20信号传导路径。在其他实施例中，il-20拮抗剂抑制或减小il-20合成和/或产生(释放)。该等拮抗剂包含反义分子、sirna及微rna。41.能够干扰il-20信号传导路径的抗体42.抗体(可与复数形式互换使用)是能够经由位于免疫球蛋白分子的可变区中的至少一个抗原识别位点特异性结合至靶(例如碳水化合物、多核苷酸、脂质、多肽等)的免疫球蛋白分子。如本文中所使用，术语“抗体”不仅涵盖完整(亦即全长)多株或单株抗体，且亦涵盖其抗原结合片段(例如fab、fab'、f(ab')2、fv)、单链(scfv)、其突变体、包括抗体部分的融合蛋白、人源化抗体、嵌合抗体、二价抗体、线性抗体、单链抗体、多特异性抗体(例如双特异性抗体)及包括具有所需特异性的抗原识别位点的免疫球蛋白分子的任何其他经修饰构形(包含抗体的醣基化变体、抗体的氨基酸序列变体及共价修饰抗体)。抗体包含任何种类的抗体，例如igd、ige、igg、iga或igm(其亚种类)，且抗体无需为任何特定种类。取决于重链的恒定结构域的抗体氨基酸序列而定，可将免疫球蛋白归类为不同种类。存在5大类免疫球蛋白：iga、igd、ige、igg及igm，且该等种类中的若干者可进一步分成亚类(同型)，例如igg1、igg2、igg3、igg4、iga1及iga2。对应于不同种类的免疫球蛋白的重链恒定结构域分别称为α、δ、ε、γ及μ。不同种类的免疫球蛋白的亚单元结构及三维构形已众所周知。43.本文所阐述方法中所使用的抗体可为鼠类、大鼠、人类或任何其他起源(包括嵌合或人源化抗体)。在一些实例中，抗体包括经修饰恒定区，例如免疫学惰性(例如不触发补体介导的裂解或不刺激抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(adcc))的恒定区。可使用美国专利第5,500,362号中所揭示的方法来评价adcc活性。在其他实施例中，如eur.j.immunol.(1999)29:2613-2624、pct申请案第pct/gb99/01441号和/或uk专利申请案第9809951.8号中所阐述来修饰恒定区。44.本文所阐述的任一抗体可为单株或多株的。“单株抗体”是指均质抗体群体且“多株抗体”是指异质抗体群体。该两个术语并不限制抗体来源或其制备方式。45.在一实施例中，本文所阐述方法中所使用的抗体是人源化抗体。人源化抗体是指是含有衍生自非人类免疫球蛋白的最小序列的特异性嵌合免疫球蛋白、免疫球蛋白链或其抗原结合片段的非人类(例如鼠类)抗体形式。在大多数情况下，人源化抗体是人类免疫球蛋白(接受者抗体)，其中来自接受者的互补决定区(cdr)的残基经来自诸如小鼠、大鼠或兔等非人类物种(供体抗体)的cdr且具有期望特异性、亲和力及能力的残基代替。在一些情况下，人类免疫球蛋白的fv框架区(fr)残基由相应非人类残基代替。另外，人源化抗体可包括既不于抗体中亦不于导入cdr或框架序列中发现、但经包含以进一步改进并优化抗体性能的残基。一般而言，人源化抗体包括实质上全部的至少一个且通常两个可变结构域，其中全部的或实质上全部的cdr区对应于非人类免疫球蛋白的彼等cdr区，且全部的或实质上全部的fr区是人类免疫球蛋白共有序列的fr区。人源化抗体最佳地亦包括至少一部分免疫球蛋白恒定区或结构域(fc)(通常为人类免疫球蛋白的恒定区或结构域)。抗体可具有如wo 99/58572中所阐述进行修饰的fc区。其他形式的人源化抗体具有一个或多个相对于原始抗体有所改变的cdr(一个、两个、三个、四个、五个、六个)，该等cdr亦称为一个或多个“衍生自”来自原始抗体的一个或多个cdr的cdr。人源化抗体亦可涉及亲和力成熟。46.在另一实施例中，本文所阐述的抗体是嵌合抗体，其可包含来自人类抗体的重链恒定区及轻链恒定区。嵌合抗体是指具有来自第一物种的可变区或可变区部分及来自第二物种的恒定区的抗体。通常，在该等嵌合抗体中，轻链及重链二者的可变区模拟衍生自一种哺乳动物物种(例如非人类哺乳动物，例如小鼠、兔及大鼠)的抗体的可变区，而恒定部分与衍生自另一哺乳动物(例如人类)的抗体中的序列同源。在一些实施例中，可在可变区和/或恒定区中进行氨基酸修饰。47.在其他实施例中，本文所揭示的抗体特异性结合靶抗原(例如人类il-20或人类il-20受体的两个亚单元之一(例如il-20r1))。“特异性结合”(可在本文中互换使用)靶或表位的抗体是在业内充分理解的术语，且用以测定该特异性结合的方法亦在业内众所周知。若某一分子与特定靶抗原较频繁、较快、以较大持续时间和/或以较大亲和力发生反应或缔合(较替代靶)，则该分子可视为展现“特异性结合”。若某一抗体较其结合至其他物质以更大亲和力、亲合力、更易于和/或以更大持续时间结合，则该抗体“特异性结合”至靶抗原。举例而言，特异性(或优先)结合至il-20表位的抗体较其结合至其他il-20表位或非il-20表位以更大亲和力、亲合力、更易于和/或以更大持续时间结合此il-20表位的抗体。藉由阅读此定义亦应理解，举例而言，特异性结合至第一靶抗原的抗体可或可不特异性或优先结合至第二靶抗原。因此，“特异性结合”或“优先结合”不一定需要(但其可包含)排他性结合。通常但不一定，在提及结合时意指优先结合。48.能够干扰il-20信号传导路径的抗体可为结合il-20(例如人类il-20)且抑制il-20生物活性和/或由il-20介导的下游路径的抗体。或者，该等抗体可为结合il-20受体(il-20r)(例如结合至il-20受体的一个或两个亚单元)且抑制由il-20触发的受体介导的下游信号传导路径的抗体。49.(i)抗il-20抗体50.抗il-20抗体是能够结合至il-20且抑制il-20生物活性和/或由il-20信号传导介导的下游路径的抗体。在一些实例中，本文所阐述方法中所使用的抗il-20抗体将il-20信号传导路径抑制至少20％、至少40％、至少50％、至少75％、至少90％、至少100％或至少2倍、至少5倍、至少10倍、至少20倍、至少50倍、至少100倍或至少1000倍。抗il-20抗体的实例包含(但不限于)揭示于以下案件中者：美国专利第7,435,800号、第7,115,714号、第7,119,175号、第7,151,166号及第7,393,684号及pct公开案wo 2007/081465、wo 99/27103、wo 2004/085475及wo 2005052000。51.抗il-20抗体与il-20(例如人类il-20)的结合亲和力可小于约100nm、约50nm、约10nm、约1nm、约500pm、约100pm或约50pm中的任一者至小于约2pm中的任一者。结合亲和力可表示为kd或解离常数，且结合亲和力增加对应于kd降低。测定抗体与il-20的结合亲和力的一种方式是量测抗体的单功能fab片段的结合亲和力。为获得单功能fab片段，可使用木瓜酶裂解抗体(例如igg)或重组表达。可藉由表面电浆共振(biacore3000.tm.表面电浆共振(spr)系统，biacore,inc,piscaway n.j.)测定抗体的抗il-20fab片段的亲和力。获得动力学缔合速率(k缔合)及解离速率(k解离)(通常在25℃下量测)；且平衡解离常数(kd)值计算为k解离/k缔合。52.在一些实施例中，抗体结合人类il-20，且并不显着结合来自另一哺乳动物物种的il-20。在一些实施例中，抗体结合人类il-20以及来自另一哺乳动物物种的一种或多种il-20。在再其他实施例中，抗体结合il-20且不显着与其他细胞介素(例如相关细胞介素il-10、il-17a、il-19、il-22、il-24及il-26)交叉反应。由抗体结合的表位可连续或不连续。53.在一些实施例中，本文所阐述的抗il-20抗体是抗il-20抗体7e，其是指单株抗体mab 7e及其功能变体。mab 7e是由寄存于美国模式培养物保藏所(american type culture collection),10801university boulevard,manassas,va.20110-2209,u.s.a.处且指派寄存号pta-8687的杂交瘤细胞系所产生。此杂交瘤细胞系在本技术获得美国专利后将不可撤销地且无限制/条件地公开给公众，且将在atcc中保存自寄存之日起至少30年时间、专利有效期时间或最近日期之后5年时间。亦参见美国专利第8,206,712号及第7,611,705号，其中的每一者的相关揭示内容以引用方式并入本文中。54.mab7e的重链可变区(vh)及轻链可变区(vl)的氨基酸序列及编码核苷酸序列如下所示。55.mab 7e重链可变区的核苷酸序列(seq id no:1)及氨基酸序列(seq id no:2)[0056][0057]mab 7e轻链可变区的核苷酸序列(seq id no:3)及氨基酸序列(seq id no:4)acids res.25(17):3389-3402,1997中所阐述。在使用blast及gapped blast程序时，可使用各别程序(例如xblast及nblast)的预设参数。[0064]在其他实例中，mab7e的功能变体包括vh链，其与mab7e的vh cdr相比在vh cdr区(vh cdr1、cdr2,和/或cdr3)中包含多至5(例如1、2、3、4或5)个氨基酸残基变化；及/或vl链，其与mab7e的vh cdr相比在vl cdr区(vl cdr1、cdr2和/或cdr3)中包含多至5(例如1、2、3、4或5)个氨基酸残基变化。[0065]mab7e的功能变体亦揭示于美国专利第7,611,705号及us2011/0064731中，二者皆以引用方式并入本文中。[0066]在一个实例中，mab7e的功能变体是衍生自mab7e的人源化抗体。下文提供实例性人源化mab7e抗体hl1及hl2；亦参见美国专利第8,597,647号，其中的相关揭示内容以引用方式并入本文中。[0067]人源化抗il-20抗体hl1及hl2的vh链的氨基酸序列及编码核苷酸序列：[0068]harbor laboratory,new york。[0077]在一些实施例中，对靶抗原(例如人类il-20或il-20r1)具有特异性的抗体可藉由常规杂交瘤技术制得。可使用视情况偶合至载体蛋白(例如klh)的全长靶抗原或其片段对宿主动物实施免疫以生成结合至该抗原的抗体。宿主动物免疫化的途径及时间表通常与用于抗体刺激及产生的所确立常规技术保持一致，如本文进一步所阐述。用于产生小鼠、人源化及人类抗体的一般技术为业内所已知且阐述于本文中。请考虑，任何哺乳动物个体(包含人类或自其产生抗体的细胞)可经操纵以用作用于产生哺乳动物(包含人类杂交瘤细胞系)的基础。通常，经腹膜内、经肌内、经口、经皮下、经足跖和/或经真皮内向宿主动物接种一定量的免疫原(包含如本文所阐述的免疫原)。[0078]可使用kohler,b.及milstein,c.(1975)nature 256:495-497或如由buck,d.w.等人，in vitro,18:377-381(1982)所修改的一般体细胞细胞杂交技术自淋巴球及永生化骨髓瘤细胞制备杂交瘤。可在杂交中使用可用骨髓瘤细胞系，包含(但不限于)x63-ag8.653及来自salk institute,cell distribution center,san diego,calif.,usa。通常，该技术涉及使用融合剂(例如聚乙二醇)或藉由本领域技术人员熟知的电构件融合骨髓瘤细胞及淋巴细胞。在融合之后，自融合培养基分离细胞并使其在选择性生长培养基(例如次黄嘌呤-胺喋呤-胸苷(hat)培养基)中生长以消除未杂交的亲代细胞。补充有或没有血清的本文所阐述培养基中的任一者皆可用于培养分泌单株抗体的杂交瘤。作为细胞融合技术的另一替代方案，ebv无限增殖的b细胞可用于产生本发明的抗il-20单株抗体。使杂交瘤扩增并亚选殖，若期望，并藉由常规免疫分析程序(例如放射免疫分析、酶免疫分析或荧光免疫分析)分析上清液的抗免疫原活性。[0079]可用作抗体来源的杂交瘤涵盖产生能够干扰il-20信号传导路径的单株抗体的亲代杂交瘤的所有衍生物、子代细胞。可使用已知程序使产生该等抗体的杂交瘤在活体外或活体内生长。若期望，可藉由常规免疫球蛋白纯化程序(例如硫酸铵沉淀、凝胶电泳、透析、层析及超滤)自培养基或体液分离单株抗体。可藉由(例如)使制剂流经由附接至固相的免疫原制得的吸附剂并自免疫原洗脱或释放期望抗体来去除不期望活性(若存在)。利用靶抗原或含有结合至在拟免疫物种中具有免疫原性的蛋白质(例如钥孔帽贝血蓝蛋白、血清白蛋白、牛甲状腺球蛋白或大豆胰蛋白酶抑制剂)的靶氨基酸序列的片段使用双功能试剂或衍生剂(例如马来酰亚胺基苯甲酰基磺基琥珀酰亚胺酯(经由半胱胺酸残基结合)、n-羟基琥珀酰亚胺(经由离胺酸残基)、戊二醛、琥珀酸酐、socl或r1n＝c＝nr(其中r及r1是不同烷基)对宿主动物进行免疫可产生抗体(例如单株抗体)的群体。[0080]若期望，可对所关注抗体(单株或多株，例如藉由杂交瘤产生)进行测序且随后可将多核苷酸序列选殖至载体中以供表达或繁殖。可将编码所关注抗体的序列维持于宿主细胞中的载体中且随后可使宿主细胞扩增并冷冻以供将来使用。或者，多核苷酸序列可用于基因操纵以“人源化”抗体或改良抗体的亲和力(亲和力成熟)或其他特性。举例而言，若抗体用于人类中的临床试验及治疗中，则恒定区可经改造以更类似于人类恒定区以避免免疫反应。可期望基因操纵抗体序列以获得与靶抗原的较大亲和力及抑制由il-20介导的信号传导路径介导的较大效能。本领域技术人员应明了，可对抗体作出一种或多种多核苷酸变化且仍维持其与抗原的结合靶特异性。[0081]在其他实施例中，可藉由使用经改造以表达特定人类免疫球蛋白的市售小鼠来获得全人类抗体。亦可使用经设计以产生更期望(例如全人类抗体)或更稳定免疫反应的转基因动物来生成人源化或人类抗体。该技术的实例来自amgen,inc.(fremont,calif.)的xenomousertm及来自medarex,inc.(princeton,n.j.)的humab-mousertm及tc mousetm。在另一替代方式中，可以重组方式藉由噬菌体显示技术来制备抗体。例如参见美国专利第5,565,332号、第5,580,717号、第5,733,743号及第6,265,150号；及winter等人(1994)annu.rev.immunol.12:433-455。或者，可在活体外使用噬菌体显示技术(mccafferty等人(1990)nature 348:552-553)自来自未免疫化供体的免疫球蛋白可变(v)结构域基因组库来产生人类抗体及抗体片段。[0082]可经由常规方法制备完整抗体(全长抗体)的抗原结合片段。举例而言，可藉由抗体分子的胃蛋白酶消解来产生f(ab')2片段，且可藉由还原f(ab')2片段的二硫桥来生成fab片段。[0083]可经由(例如)常规重组技术产生经基因改造的抗体(例如人源化抗体、嵌合抗体、单链抗体及双特异性抗体)。在一实例中，编码对靶抗原具有特异性的单株抗体的dna可易于使用常规程序来分离并测序(例如藉由使用能够特异性结合至编码单株抗体的重链及轻链的基因的寡核苷酸探针)。杂交瘤细胞用作该dna的较佳来源。在分离后，可立即将dna置于一个或多个表达载体中，然后将其转染至原本不产生免疫球蛋白的宿主细胞(例如大肠杆菌(e.coli)细胞、猿cos细胞、中国仓鼠卵巢(cho)细胞或骨髓瘤细胞)中以在重组宿主细胞中合成单株抗体。例如参见pct公开案第wo 87/04462号。然后可(例如)藉由以下方式来修饰dna：使用人类重链及轻链恒定结构域编码序列代替同源鼠类序列(morrison等人(1984)proc.nat.acad.sci.81:6851)，或共价接合免疫球蛋白编码序列与非免疫球蛋白多肽的所有或一部分编码序列。以该方式，可制备对靶抗原具有结合特异性的基因改造抗体(例如“嵌合”或“杂合”抗体)。[0084]经研发用于产生“嵌合抗体”的技术在业内已众所周知。例如参见morrison等人(1984)proc.natl.acad.sci.usa 81,6851；neuberger等人(1984)nature 312,604；及takeda等人(1984)nature 314:452。[0085]构筑人源化抗体的方法亦在业内众所周知。例如参见queen等人，proc.natl.acad.sci.usa,86:10029-10033(1989)。在一实例中，遵循业内已知方法对亲代非人类抗体的可变区vh及vl实施三维分子建模分析。接下来，使用相同分子建模分析来鉴别预计对于形成正确cdr结构较为重要的框架氨基酸残基。同时，使用亲代vh及vl序列作为搜索查询序列，自任何抗体基因数据库来鉴别具有与亲代非人类抗体的氨基酸序列同源的氨基酸序列的人类vh及vl链。然后选择人类vh及vl受体基因。[0086]所选人类受体基因内的cdr区可经来自亲代非人类抗体或其功能变体的cdr区代替。在需要时，可使用亲代链的框架区内预计对于与cdr区相互作用较为重要的残基(参见上文的说明)来代替人类受体基因中的相应残基。[0087]可经由重组技术藉由连接编码重链可变区的核苷酸序列及编码轻链可变区的核苷酸序列来制备单链抗体。较佳地，将挠性连接体纳入两个可变区之间。[0088]可使用业内熟知方法表征遵循业内已知且阐述于本文中的方法所获得的抗体。举例而言，一种方法是鉴别抗原结合表位或“表位定位”。业内已知定位及表征蛋白质上的表位位置的许多方法，包含解析抗体-抗原复合物的晶体结构、竞争分析、基因片段表达分析及基于合成肽的分析，如(例如)harlow及lane,using antibodies,a laboratory manual，第11章，cold spring harbor laboratory press,cold spring harbor,n.y.,1999中所阐述。在其他实例中，可使用表位定位来测定抗体结合序列。表位可为线性表位，亦即含于单一氨基酸段中；或由氨基酸的三维相互作用形成的构形表位，其可能未必含于单段(主要结构线性序列)中。可分离或合成(例如以重组方式)具有不同长度(例如至少4-6个氨基酸长)的肽且用于与抗体的结合分析。在另一实例中，可在系统性筛选中藉由使用衍生自靶抗原序列的重迭肽且测定抗体结合来测定抗体结合表位。根据基因片段表达分析，随机地或根据特定基因构造使编码靶抗原的开放阅读框片段化，且测定抗原的表达片段与拟测试抗体的反应性。可(例如)藉由pcr产生基因片段且然后在活体外于放射性氨基酸存在下转录及转译成蛋白质。然后藉由免疫沉淀及凝胶电泳测定抗体与经放射性标记的抗原片段的结合。亦可藉由使用显示于噬菌体颗粒表面上的随机肽序列的大型库(噬菌体库)来鉴别某些表位。或者，可在简单结合分析中测试所定义库的重迭肽片段与测试抗体的结合。在其他实例中，可实施抗原结合结构域诱变、结构域交换实验及丙氨酸扫描诱变以鉴别表位结合所需、胜任和/或需要的残基。举例而言，可使用靶抗原的突变体实施结构域交换实验，其中该突变体中il-20多肽的各个片段已经来自密切相关但抗原性不同的蛋白质(例如神经滋养蛋白家族的另一成员)的序列代替(交换)。藉由评价抗体与突变il-20的结合，可评价特定抗原片段与抗体的结合的重要性。[0089]或者，可使用已知结合至相同抗原的其他抗体实施竞争分析以测定某一抗体与其他抗体是否结合至相同表位。竞争分析为本领域技术人员所熟知。[0090](iii)其他il-20拮抗剂[0091]可在本文所阐述方法中使用除能够干扰如上文所阐述的il-20信号传导路径的抗体外的il-20拮抗剂。[0092]在本发明的一些实施例中，il-20拮抗剂包括至少一种能够阻断或降低功能il-20(例如人类il-20)或il-20受体的亚单元(例如il-20r1)的表达的反义核酸分子。il-20及il-20受体亚单元的核苷酸序列是已知的且易于自可公开获得的数据库获得。参见上述揭示内容。通常制备特异性结合靶mrna而不与其他多核苷酸交叉反应的反义寡核苷酸分子。实例性靶向位点包含(但不限于)起始密码子、5'调控区、编码序列及3'未转译区。在一些实施例中，寡核苷酸长约10至100个核苷酸、长约15至50个核苷酸、长约18至25个核苷酸或更长。寡核苷酸可包括主链修饰，例如业内熟知的硫代磷酸酯键联及2'-0糖修饰。[0093]或者，可使用基因敲低、吗啉基寡核苷酸、小干扰rna(sirna或rnai)、微rna或核酶、业内熟知方法来降低il-20/il-20r表达和/或释放。rna干扰(rnai)是dsrna引导信使rna的同源序列特异性降解的过程。在哺乳动物细胞中，rnai可由小干扰rna(sirna)的21核苷酸双链体触发而不激活宿主干扰素反应。本文所揭示方法中所使用的dsrna可为sirna(含有两个单独及互补的rna链)或短发夹rna(亦即形成紧发夹结构的rna链)，二者皆可基于靶基因的序列来设计。或者，其可为微rna。[0094]视情况，如上文所阐述的拟用于本文所阐述方法中的核酸分子(例如反义核酸、小干扰rna或微rna)含有非天然核碱基、糖或共价核苷间键联(主链)。此一经修饰寡核苷酸赋予期望性质，例如增强的细胞摄取、改良的靶核酸亲和力及增加的活体内稳定性。[0095]在一实例中，核酸具有经修饰主链，该主链包含保留磷原子者(例如参见美国专利3,687,808；4,469,863；5,321,131；5,399,676；及5,625,050)及不具有磷原子者(例如参见美国专利5,034,506；5,166,315；及5,792,608)。含磷经修饰主链的实例包含(但不限于)硫代磷酸酯、对掌性硫代磷酸酯、二硫代磷酸酯、磷酸三酯、氨基烷基-磷酸三酯、膦酸甲酯及其他膦酸烷基酯(包含膦酸3'-伸烷基酯、膦酸5'-伸烷基酯及对掌性膦酸酯)、次膦酸酯、胺基磷酸酯(包含胺基磷酸3'-胺基酯及胺基烷基胺基磷酸酯)、硫羰基胺基磷酸酯、硫羰基烷基膦酸酯、硫羰基烷基磷酸三酯、硒基磷酸酯及具有3'-5'键联或2'-5'键联的硼烷磷酸酯。该等主链亦包含具有反向极性(亦即3'至3'、5'至5'或2'至2'键联)者。不包含磷原子的经修饰主链是藉由短链烷基或环烷基核苷间键联、混合杂原子及烷基或环烷基核苷间键联或一个或多个短链杂原子或杂环核苷间键联所形成。该等主链包含具有吗啉基键联者(部分地自核苷的糖部分形成)；硅氧烷主链；硫化物、亚砜及砜主链；甲酰乙酰基及硫基甲酰乙酰基主链；亚甲基甲酰乙酰基及硫基甲酰乙酰基主链；核乙酰基主链；含烯烃主链；胺基磺酸酯主链；亚甲基亚胺基及亚甲基肼基主链；磺酸酯及磺酰胺主链；酰胺主链；及其他具有混合n、o、s及ch2组分部分者。[0096]在另一实例中，所揭示方法中所使用的核酸包含一个或多个经取代糖部分。该等经取代糖部分可在其2'位处包含下列基团中的一者：oh；f；o-烷基、s-烷基、n-烷基、o-烯基、s-烯基、n-烯基；o-炔基、s-炔基、n-炔基；及o-烷基-o-烷基。在该等基团中，烷基、烯基及炔基可为经取代或未经取代的c1-c10烷基或c2-c10烯基及炔基。其亦可在其2’位处包含杂环烷基、杂环烷芳基、胺基烷基胺基、聚烷基胺基、经取代硅基、rna裂解基团、报告基因基团、嵌入剂、用于改良寡核苷酸的药物动力学性质的基团或用于改良寡核苷酸的药效动力学性质的基团。较佳经取代糖部分包含具有2'-甲氧基乙氧基、2'-二甲基胺基氧基乙氧基及2'-二甲基胺基乙氧基乙氧基者。参见martin等人，helv.chim.acta,1995,78,486-504。[0097]在又一实例中，核酸包含一个或多个经修饰天然核碱基(亦即腺嘌呤、鸟嘌呤、胸腺嘧啶、胞嘧啶及尿嘧啶)。经修饰核碱基包含以下文献中所阐述者：美国专利3,687,808；the concise encyclopedia of polymer science and engineering，第858-859页；kroschwitz,j.i.编辑，john wiley&sons,1990；englisch等人，angewandte chemie，国际版，1991,30,613；及sanghvi,y.s.，第15章，antisense research and applications，第289-302页，crc press,1993。某些该等核碱基尤其可用于增加反义寡核苷酸与其靶核酸的结合亲和力。该等核碱基包含5-取代嘧啶、6-氮杂嘧啶及n-2、n-6及o-6取代嘌呤(例如2-胺基丙基-腺嘌呤、5-丙炔基尿嘧啶及5-丙炔基胞嘧啶)。参见sanghvi等人编辑，antisense research and applications,crc press,boca raton,1993,pp.276-278)。[0098]任一核酸可藉由业内已知方法来合成。例如参见caruthers等人，1992,methods in enzymology 211,3-19；wincott等人，1995,nucleic acids res.23,2677-2684；wincott等人，1997,methods mol.bio.74,59；brennan等人，1998,biotechnol bioeng.,61,33-45；及brennan，美国专利第6,001,311号。其亦可自表达载体转录并使用标准技术分离。[0099]在其他实施例中，il-20拮抗剂包括至少一种il-20或il-20r抑制性化合物。如本文中所使用，“il-20抑制性化合物”或“il-20r抑制性化合物”是指除直接或间接减小、抑制、中和或消除il-20/il-20r生物活性的抗il-20或抗il-20r抗体外的化合物。il-20/il-20r抑制性化合物应展现下列特性中的任一者或多者：(a)结合至il-20或il-20r并抑制其生物活性和/或由il-20信号传导功能介导的下游路径；(b)预防、改善或治疗眼病的任一方面；(c)阻断或降低il-20受体活化；(d)增加il-20或il-20r的清除；(e)抑制(减小)il-20或il-20r的合成、产生或释放。本领域技术人员可制备其他小分子抑制性化合物。[0100]在一些实施例中，il-20或il-20r抑制性化合物是可结合至il-20受体但不能诱发信号转导的il-20突变体、il-19突变体或il-24突变体。此一突变体可阻断野生型il-20与il-20受体的结合，由此防止il-20信号转导。[0101]在其他实施例中，本文所阐述的il-20或il-20r抑制性化合物是小分子，其分子量可约为100道尔顿至20,000道尔顿、500道尔顿至15,000道尔顿或1000道尔顿至10,000道尔顿中的任一者。小分子的库市面有售。小分子可使用业内已知的任一方式施用，包含吸入、经腹膜内、经静脉内、经肌内、经皮下、经鞘内、经室内、经口、经肠、非经肠、经鼻内或经真皮。一般而言，在本发明的il-20拮抗剂是小分子时，其将以0.1-300mg/kg患者体重的速率来施用且分成一至三个或更多个剂量。对于具有正常体重的成人患者而言，可施用介于1mg/剂量至5g/剂量之间的剂量。[0102]上文所提及的小分子可自化合物库获得。该等库可为空间可寻址的平行固相或液相库。例如参见zuckermann等人，j.med.chem.37,2678-2685,1994；及lam anticancer drug des.12:145,1997。合成化合物库的方法在业内已众所周知，例如参见dewitt等人，pnas usa 90:6909,1993；erb等人，pnas usa 91:11422,1994；zuckermann等人，j.med.chem.37:2678,1994；cho等人，science 261:1303,1993；carrell等人，angew chem.int.ed.engl.33:2059,1994；carell等人，angew chem.int.ed.engl.33:2061,1994；及gallop等人，j.med.chem.37:1233,1994。化合物库可呈现于溶液中(例如houghten biotechniques 13:412-421,1992)或呈现于珠粒(lam nature 354:82-84,1991)、芯片(fodor nature 364:555-556,1993)、细菌(美国专利第5,223,409号)、孢子(美国专利第5,223,409号)、质体(cull等人，pnas usa 89:1865-1869,1992)或噬菌体(scott及smith science 249:386-390,1990；devlin science 249:404-406,1990；cwirla等人，pnas usa 87:6378-6382,1990；felici j.mol.biol.222:301-310,1991；及美国专利第5,223,409号)上。[0103]在其他实施例中，il-20拮抗剂可为包括il-20受体(例如il-20r1、il-20r2或il-22r1)的细胞外部分的多肽，其中该多肽特异性结合至11-20并阻断其与一种或多种il-20受体的相互作用。在一些实施例中，il-20受体的细胞外部分融合至抗体的fc结构域。可溶性受体的实例阐述于pct wo 01/46232中。[0104](iv)il-20拮抗剂的鉴别[0105]可使用业内已知方法来鉴别或表征il-20拮抗剂，其中检测和/或量测il-20生物活性的减小、改善或中和。举例而言，elisa型分析可适于藉由量测经由il-20级联活化的蛋白质的磷酸化来定性或定量量测il-20介导的激酶活化。实例包含jnk、erk、akt、p38、stat3及traf6。[0106]亦可藉由将候选药剂与il-20或il-20r一起培育并监测下列特性中的任一者或多者来鉴别il-20拮抗剂：(a)结合至il-20或il-20r并抑制其生物活性和/或由il-20信号传导功能介导的下游路径；(b)预防、改善或治疗眼病的任一方面；(c)阻断或降低il-20受体活化；(d)增加il-20或il-20r的清除；(e)抑制(减小)il-20的合成、产生或释放。在一些实施例中，藉由将候选药剂与il-20或il-20r一起培育并监测il-20或il-20r的结合及其生物活性的伴随减小或中和来鉴别il-20拮抗剂。可使用经纯化il-20或il-20r多肽或使用天然表达或经转染以表达il-20或il-20r多肽的细胞来实施结合分析。在一实施例中，结合分析是竞争性结合分析，其中评估候选抗体与已知il-20拮抗剂竞争il-20或il-20r结合的能力。该分析可以各种形式(包含elisa形式)来实施。在其他实施例中，藉由将候选药剂与il-20或il-20r(例如il-20r1)一起培育并监测il-20r1/il-20r2复合物形成或il-20r2/il-22r1复合物形成的伴随抑制来鉴别il-20拮抗剂。在初始鉴别后，可藉由已知测试靶向生物活性的生物分析进一步证实候选il-20拮抗剂的活性并细化。或者，可使用生物分析来直接筛选候选者。[0107]下文所提供实例提供可用于筛选候选il-20拮抗剂的诸多分析。生物分析包含(但不限于)流式细胞术，其测定在候选il-20拮抗剂存在下il-20与细胞的竞争性结合及肾上皮细胞中il-20诱导的细胞凋亡的抑制。另外，可使用rt-pcr或实时pcr直接量测il-20表达或量测由il-20上调的基因(例如tnfα、mcp-1、il-1(、il-6及vegf)的表达。[0108]ii.医药组合物[0109]可使如本文所阐述的il-24蛋白或介白素20拮抗剂与医药上可接受的载剂(赋形剂，包含缓冲剂)混合以形成用于缓解组织纤维化和/或损伤和/或器官衰竭的医药组合物。“可接受”意指，载剂必须与组合物的活性成分兼容(且较佳地能够稳定活性成分)且不有害于拟治疗的受试者。医药上可接受的赋形剂(载剂，包含缓冲剂)在业内已众所周知。例如参见remington:the science and practice of pharmacy，第20版(2000)lippincott williams and wilkins，k.e.hoover编辑。[0110]拟用于本发明方法中的医药组合物可包括医药上可接受的载剂、赋形剂或稳定剂且呈冻干调配物或水溶液的形式。(remington:the science and practice of pharmacy，第20版(2000)lippincott williams and wilkins，k.e.hoover编辑)。可接受的载剂、赋形剂或稳定剂在所用剂量及浓度下对接受者无毒，且可包括缓冲剂，例如磷酸盐、柠檬酸盐及其他有机酸；抗氧化剂，包含抗坏血酸及甲硫胺酸；防腐剂(例如十八烷基二甲基苄基氯化铵；氯化六甲双铵；苯扎氯铵、苄索氯铵；苯酚、丁醇或苄醇；对羟基苯甲酸烷基酯，例如对羟基苯甲酸甲酯或对羟基苯甲酸丙酯；儿茶酚；间苯二酚；环己醇；3-戊醇；及间甲酚)；低分子量(小于约10个残基)多肽；蛋白质，例如血清白蛋白、明胶或免疫球蛋白；亲水性聚合物，例如聚乙烯基吡咯啶酮；氨基酸，例如甘胺酸、麸酰胺酸、天门冬酰胺酸、组胺酸、精胺酸或离胺酸；单糖、二糖及其他碳水化合物，包含葡萄糖、甘露糖或糊精；鳌合剂，例如edta；糖，例如蔗糖、甘露醇、海藻糖或山梨醇；成盐相对离子，例如钠；金属错合物(例如zn-蛋白质错合物)；和/或非离子型表面活性剂，例如tweentm、pluronicstm或聚乙二醇(peg)。本文进一步阐述医药上可接受的赋形剂。[0111]在一些实例中，本文所阐述的医药组合物包括含有il-24蛋白的脂质体，该等脂质体可藉由业内已知方法制得，如以下文献中所阐述：epstein等人，proc.natl.acad.sci.usa 82:3688(1985)；hwang等人，proc.natl.acad.sci.usa 77:4030(1980)；及美国专利第4,485,045号及第4,544,545号。具有增加的循环时间的脂质体揭示于美国专利第5,013,556号中。尤其有用的脂质体可藉由反相蒸发方法使用包括磷脂酰胆碱、胆固醇及peg衍生的磷脂酰乙醇胺(peg-pe)的脂质组合物来生成。经由具有界定孔径的过滤器挤出脂质体以获得具有期望直径的脂质体。[0112]亦可将活性成分(例如il-24蛋白或介白素20拮抗剂)分别装入藉由(例如)凝聚技术或界面聚合制备的微胶囊中，例如羟甲基纤维素或明胶微胶囊及聚(甲基丙烯酸甲酯)微胶囊，该等微胶囊呈胶体药物递送系统(例如脂质体、白蛋白微球体、微乳液、奈米颗粒及奈米胶囊)形式或呈粗乳液形式。该等技术在业内已知，例如参见remington,the science and practice of pharmacy，第20版，mack publishing(2000)。[0113]在其他实例中，本文所阐述的医药组合物可调配成持续释放形式。持续释放制剂的适宜实例包含含有il-24蛋白的固体疏水性聚合物的半渗透性基质，该等基质呈成形对象形式，例如薄膜或微胶囊。持续释放基质的实例包含聚酯、水凝胶(例如聚(甲基丙烯酸-2-羟乙基酯)或聚(乙烯醇))、聚交酯(美国专利第3,773,919号)、l-麸胺酸与l-麸胺酸7-乙基酯的共聚物、不可降解的乙烯-乙酸乙烯酯、可降解的乳酸-乙醇酸共聚物(例如lupron depottm(由乳酸-乙醇酸共聚物及乙酸亮丙瑞林(leuprolide acetate)组成的可注射微球体))、蔗糖乙酸异丁酸酯及聚-d-(-)-3-羟基丁酸。[0114]用于活体内施用的医药组合物必须无菌。此可藉由(例如)经由无菌过滤膜过滤来容易地完成。通常将含有il-24或介白素20拮抗剂的治疗性组合物置于具有无菌出入孔的容器中，例如具有可由皮下注射针头刺入的塞子的静脉内注射溶液袋或小瓶。[0115]本文所阐述的医药组合物可呈用于经口、非经肠或直肠施用或藉由吸入或吹入施用的单位剂型，例如锭剂、丸剂、胶囊、粉剂、颗粒、溶液或悬浮液或栓剂。[0116]对于制备固体组合物(例如锭剂)而言，可将主要活性成分与医药载剂(例如常规制锭成分，例如玉米淀粉、乳糖、蔗糖、山梨醇、滑石粉、硬脂酸、硬脂酸镁、磷酸二钙或树胶)及其他医药稀释剂(例如水)混合以形成含有本发明化合物或其医药上可接受的无毒盐的均质混合物的固体预调配组合物。在提及该等预调配组合物为均质时，其意指活性成分均匀分散于整个组合物中，从而可容易地将组合物再分成等效单位剂型(例如锭剂、丸剂及胶囊)。随后将此固体预调配组合物再分成上述类型的单位剂型，其含有0.1mg至约500mg的本发明活性成分。本发明的锭剂或丸剂可经包衣或者复合以提供具有持久作用优点的剂型。举例而言，锭剂或丸剂可包括内部剂量组分及外部剂量组分，后者为前者的包膜形式。该两种组分可藉由肠溶性层分开，该肠溶性层用以抵抗胃内的分解作用并允许内部组分完整地进入十二指肠或延迟释放。该等肠溶性层或包衣可使用多种材料，该等材料包含多种聚合酸及聚合酸与诸如虫胶、十六烷醇及乙酸纤维素等材料的混合物。[0117]适宜表面活性剂包含(特定而言)非离子试剂，例如聚氧乙烯山梨醇酐(例如tweentm 20、40、60、80或85)及其他山梨醇酐(例如spantm 20、40、60、80或85)。具有表面活性剂的组合物将便捷地包括介于0.05％与5％之间的表面活性剂，且可介于0.1％与2.5％之间。应了解，若需要，则可添加其他成分，例如甘露醇或其他医药上可接受的媒剂。[0118]可使用市售脂肪乳液(例如intralipidtm、liposyntm、infonutroltm、lipofundintm及lipiphysantm)来制备适宜乳液。可将活性成分溶于预混合乳液组合物中，或替代地可将其溶于油(例如大豆油、红花油、棉籽油、芝麻油、玉米油或杏仁油)中且在与磷脂(例如卵磷脂、大豆磷脂或大豆卵磷脂)及水混合时形成乳液。应了解，可添加其他成分(例如甘油或葡萄糖)以调节乳液的张力。适宜乳液通常将含有多至20％的油，例如介于5％与20％之间。脂肪乳液可包括介于0.1μm与1.0μm、尤其0.1μm与0.5μm之间的脂肪小滴，且具有在5.5至8.0范围内的ph。[0119]乳液组合物可为藉由混合il-24蛋白与intralipidtm或其组分(大豆油、卵磷脂、甘油及水等)制备者。[0120]供吸入或吹入的医药组合物包含于医药上可接受的水性或有机溶剂或其混合物中的溶液及悬浮液及粉剂。该等液体或固体组合物可含有如上文所述的医药上可接受的适宜赋形剂。在一些实施例中，藉由口服或鼻呼吸途径施用该等组合物以获得局部或全身效应。[0121]于医药上可接受的较佳无菌溶剂中的组合物可藉由使用气体雾化。经雾化溶液可直接自雾化装置吸入，或可将该雾化装置连接至面罩、帐篷或间歇式正压呼吸机。溶液、悬浮液或粉剂组合物可较佳地经口或经鼻以适当方式递送调配物的装置施用。[0122]iii.治疗组织纤维化和/或损伤和/或器官衰竭[0123]为实践本文所揭示的方法，可经由适宜途径将有效量的上述医药组合物施用于需要治疗的个体(例如人类)，诸如静脉内施用，例如以速注(bolus)或藉由连续输注一段时间，藉由肌内、腹膜内、脑脊髓内、皮下、关节内、滑膜内、鞘内、口服、吸入或局部途径。用于液体调配物的市售雾化器(包含喷射雾化器及超音波雾化器)可用于施用。液体调配物可直接雾化，且冻干粉剂可在复原后雾化。或者，可使用氟碳调配物及计量吸入器将il-24蛋白气溶胶化，或以冻干及研磨粉剂吸入。[0124]拟藉由本文所阐述方法治疗的受试者可为哺乳动物，更佳是人类。哺乳动物包含(但不限于)农场动物、运动动物、宠物、灵长类动物、马、狗、猫、小鼠及大鼠。需要治疗的人类受试者可为患有组织纤维化和/或损伤和/或器官衰竭、处于其风险下或怀疑患有组织纤维化和/或损伤和/或器官衰竭的人类患者，该组织纤维化和/或损伤和/或器官衰竭包含肾纤维化、慢性肾病、化学疗法诱导的肾纤维化、糖尿病诱导的肾病变、肺纤维化、肺发炎、特发性肺纤维化、空气污染诱导的肺纤维化、化学疗法诱导的肺纤维化、抗生素诱导的肺纤维化及感染诱导的肺纤维化。可藉由常规医学检查(例如实验室测试、器官功能测试、器官生检、ct扫描或超音波)来鉴别患有组织纤维化和/或损伤和/或器官衰竭(例如本文所阐述者)的受试者。怀疑患有发生于肾中的组织纤维化和/或损伤和/或器官衰竭(例如肾纤维化)的受试者可展示一种或多种(例如)以下病症症状：增加血清肌酸酐及bun，降低促纤维生成因子的表达，减少胶原产生，维持肾功能，抑制及逆转tgf-β诱导的上皮-间质转变，抵抗小鼠中的多柔比星诱导的肾损伤。怀疑患有发生于肺中的组织纤维化和/或损伤和/或器官衰竭(例如肺纤维化)的受试者可展示一种或多种病症症状，例如降低tgfβ、αsma表达及肺组织中的胶原沉积。[0125]本文所用的“有效量”是指每一活性剂单独或与一种或多种其他活性剂相组合赋予受试者治疗效应所需的量。如本领域技术人员所公认，有效量取决于以下因素而有所变化：所治疗特定病状、病状严重程度、个别患者参数(包含年龄、身体状况、身材、性别及体重)、治疗持续时间、并行疗法(若存在)的性质、具体施用途径及健康从业人员已知及鉴定的类似因素。该等因素为本领域技术人员所熟知且仅需常规实验即可解决。通常较佳地，使用个别组分或其组合的最大剂量，亦即根据合理医学判断的最高安全剂量。本领域技术人员应理解，然而，患者可出于医学原因、心理学原因或实际上任何其他原因而坚持使用较低剂量或可耐受剂量。[0126]经验考虑因素(例如半衰期)通常将有助于剂量的确定。举例而言，可使用基于人类的il-24蛋白或介白素20拮抗剂来延长细胞介素的半衰期并防止细胞介素由宿主的免疫系统攻击。可确定施用频率并在治疗过程中加以调节，且通常(但未必)基于组织纤维化和/或损伤和/或器官衰竭的治疗和/或抑制和/或改善和/或延迟。或者，il-24蛋白或介白素20拮抗剂的持续释放调配物可较为适当。用于达成持续释放的各种调配物及装置为业内已知。[0127]在一实例中，对于已施用一种或多种次il-24蛋白或介白素20拮抗剂的个体而言，可根据经验来确定如本文所阐述il-24蛋白或介白素20拮抗剂的剂量。给予个体递增剂量的细胞介素。为评价细胞介素的效能，可追踪发生于肾中的组织纤维化和/或损伤和/或器官衰竭(例如肾纤维化)的指示(例如血清肌酸酐及bun的含量)。为评价细胞介素的效能，可追踪发生于肺中的组织纤维化和/或损伤和/或器官衰竭(例如肺纤维化)的指示(例如tgfβ及αsma的含量)。[0128]通常，对于施用本文所阐述的任一il-24蛋白或介白素20拮抗剂而言，初始候选剂量可为约0.5-2mg/kg。出于本发明目的，取决于上文所提及因素，典型日剂量的范围可为约0.1μg/kg至3μg/kg至30μg/kg至300μg/kg至3mg/kg至30mg/kg至100mg/kg或更高中的任一者。对于重复施用数天或更长时间而言，取决于病状，持续治疗直至发生期望症状抑制为止或直至达成足够治疗程度以缓解组织纤维化和/或损伤和/或器官衰竭或其症状为止。实例性投药方案包括施用约2mg/kg的初始剂量，之后每周约1mg/kg il-24蛋白或介白素20拮抗剂的维持剂量或每隔一周约1mg/kg的维持剂量。然而，取决于从业人员希望达成的药物动力学衰减的模式而定，其他剂量方案可为有用的。举例而言，考虑每周投药一至四次。在一些实施例中，可使用介于约3μg/mg至约2mg/kg之间(例如约3μg/mg、约10μg/mg、约30μg/mg、约100μg/mg、约300μg/mg、约1mg/kg及约2mg/kg)的投药。在一些实施例中，投药频率是每周、每2周、每4周、每5周、每6周、每7周、每8周、每9周或每10周一次；或每月、每2个月或每3个月一次；或每更长时间一次。此疗法的进展易于藉由常规技术及分析来监测。投药方案(包含所用il-24蛋白或介白素20拮抗剂)可随时间而变化。特定剂量方案(亦即剂量、时刻及重复次数)将取决于特定个体及该个体的病史以及个别药剂的性质(例如药剂半衰期及业内熟知的其他考虑因素)。[0129]出于本发明目的，il-24蛋白或介白素20拮抗剂的适当剂量将取决于所采用的具体il-24蛋白或介白素20拮抗剂、组织纤维化和/或损伤和/或器官衰竭的类型及严重程度、施用il-24或介白素20拮抗剂是出于预防目的抑或治疗目的、先前疗法、患者的病史及拮抗剂反应以及主治医师的判断。通常，临床医师将施用il-24蛋白(例如人类il-24蛋白)或介白素20拮抗剂，直至达到达成期望结果的剂量为止。il-24蛋白或介白素20拮抗剂的施用可为连续的或间歇的，此取决于(例如)接受者的生理学状况、施用目的是治疗抑或防治及本领域技术人员已知的其他因素。il-24蛋白或介白素20拮抗剂的施用可在预选时间段中基本上连续；或可为一系列间隔剂量，例如在发生组织纤维化和/或损伤和/或器官衰竭之前、期间或之后。[0130]如本文中所使用，术语“治疗”是指向患有发生于肾中的组织纤维化和/或损伤和/或器官衰竭(例如肾纤维化)或发生于肺中的组织纤维化和/或损伤和/或器官衰竭(例如肺纤维化)、该疾病的症状或具有该疾病倾向的受试者施加或施用包含一种或多种活性剂的组合物，其目的在于治愈、愈合、缓解、减轻、改变、补救、改善、改良或影响病症、疾病症状或疾病倾向。[0131]缓解发生于肾中的组织纤维化和/或损伤和/或器官衰竭(例如肾纤维化)或发生于肺中的组织纤维化和/或损伤和/或器官衰竭(例如肺纤维化)包含延迟疾病的发生或进展，或减小疾病严重程度。缓解疾病未必需要治愈性结果。如其中所使用，“延迟”疾病(例如组织纤维化和/或损伤和/或器官衰竭)的发生意指推迟、阻止、减缓、迟滞、稳定和/或展缓疾病进展。取决于疾病史和/或所治疗个体，此延迟可为不同时间长度。“延迟”或缓解疾病发生或延迟疾病发作的方法是与不使用该方法相比达成以下效应的方法：减小在既定时间范围中发生一种或多种疾病症状的机率，和/或减小既定时间范围中的症状程度。该等对比通常是基于使用诸多足以给出统计学显着结果的受试者的临床研究。[0132]疾病的“发生”或“进展”意指疾病的初始表达和/或随后进展。可使用业内熟知的标准临床技术来检测及评价疾病发生。然而，发生亦是指不可检测的进展。出于本发明目的，发生或进展是指症状的生物过程。“发生”包含出现、复发及发作。如本文中所使用，组织纤维化和/或损伤和/或器官衰竭的“发作”或“出现”包含初始发作和/或复发。[0133]在一些实施例中，将本文所阐述的il-24蛋白或介白素20拮抗剂施用于需要治疗的个体，其量足以将该个体中血清肌酸酐及bun的活性程度或tgfβ及αsma表达程度减小至少约20％(例如30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或更大)。在其他实施例中，用于治疗的il-24蛋白或介白素20拮抗剂的量足以延长患者的存活率。替代地或另外，il-24蛋白或介白素20拮抗剂的量足以将一种或多种纤维化和/或发炎因子(例如tgf-β、α-sma、mip-2β、timp-1、mcp-1、il-1β、kc及tnf-α)减少至少约20％(例如30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或更大)。[0134]取决于拟治疗疾病类型或疾病部位，可使用熟习医学技术者已知的常规方法来将医药组合物施用于受试者。此组合物亦可经由其他常规途径施用，例如经口、非经肠、藉由吸入喷雾、经局部、经直肠、经鼻、经颊、经阴道或藉由植入型药盒施用。本文所用的术语“非经肠”包含皮下、皮内、静脉内、肌内、动脉内、关节内、滑膜内、胸骨内、鞘内、病灶内、腹膜内及颅内注射或输注技术。另外，可经由可注射储积施用途径来施用受试者，例如使用1-、3-或6个月储积可注射或生物可降解材料及方法。[0135]可注射组合物可含有各种载剂，例如植物油、二甲基乙酰胺、二甲基甲酰胺、乳酸乙酯、碳酸乙酯、肉豆蔻酸异丙基酯、乙醇及多元醇(甘油、丙二醇、液体聚乙二醇及诸如此类)。对于静脉内注射而言，可藉由滴注方法来施用水可溶性抗体，其中输注含有il-24蛋白或介白素20拮抗剂及生理上可接受的赋形剂的医药调配物。生理上可接受的赋形剂可包含(例如)5％右旋糖、0.9％盐水、林格氏溶液(ringer's solution)或其他适宜赋形剂。可将肌内制剂(例如il-24蛋白或介白素20拮抗剂的适宜可溶性盐形式的无菌调配物)溶于及施用医药赋形剂(例如注射用水、0.9％盐水或5％葡萄糖溶液)中。[0136]在一实施例中，经由位点特异性或靶向局部递送技术来施用il-24蛋白或介白素20拮抗剂。位点特异性或靶向局部递送技术的实例包含il-24蛋白或介白素20拮抗剂的多种可植入储积源或局部递送导管，例如输注导管、留置导管或针导管、合成移植物、外膜套、分流器及支架或其他可植入装置、位点特异性载剂、直接注射或直接施加。例如参见pct公开案第wo 00/53211号及美国专利第5,981,568号。[0137]可使用基因递送媒剂来递送本文所阐述的治疗性il-24蛋白或介白素20拮抗剂。基因递送媒剂可为病毒或非病毒来源(通常参见jolly,cancer gene therapy(1994)1:51；kimura,human gene therapy(1994)5:845；connelly,human gene therapy(1995)1:185；及kaplitt,nature genetics(1994)6:148)。可使用内源性哺乳动物或异源性启动子和/或增强子来诱导该等编码序列的表达。编码序列的表达可为组成型或调控型。[0138]用于递送期望多核苷酸且表达于期望细胞中的基于病毒的载体在业内已众所周知。基于病毒的实例性媒剂包含(但不限于)重组逆转录病毒(例如参见pct公开案第wo 90/07936号、第wo 94/03622号、第wo 93/25698号、第wo 93/25234号、第wo 93/11230号、第wo 93/10218号、第wo 91/02805号；美国专利第5,219,740号及第4,777,127号；gb专利第2,200,651号；及ep专利第0 345 242号)、基于甲病毒属(alphavirus)的载体(例如辛得比斯病毒(sindbis virus)载体、塞姆利基森林病毒(semliki forest virus)(atcc vr-67；atcc vr-1247)、罗氏河病毒(ross river virus)(atcc vr-373；atcc vr-1246)及委内瑞拉马脑炎病毒(venezuelan equine encephalitis virus)(atcc vr-923；atcc vr-1250；atcc vr 1249；atcc vr-532))及腺相关病毒(aav)载体(例如参见pct公开案第wo 94/12649号、第wo 93/03769号、第wo 93/19191号、第wo 94/28938号、第wo 95/11984号及第wo 95/00655号)。亦可采用施用连接至杀灭腺病毒的dna，如curiel,hum.gene ther.,(1992),3:147中所阐述。[0139]亦可采用非病毒递送媒剂及方法，包含但不限于单独的连接或未连接至杀灭腺病毒的聚阳离子缩合dna(例如参见curiel,hum.gene ther.,(1992),3:147)；与配体连接的dna(例如参见wu,j.biol.chem.,(1989),264:16985)；真核细胞递送媒剂细胞(例如参见美国专利第5,814,482号；pct公开案第wo 95/07994号、第wo 96/17072号、第wo 95/30763号及第wo 97/42338号)及与细胞膜进行核电荷中和或融合。亦可采用裸dna。实例性裸dna引入方法阐述于pct公开案第wo 90/11092号及美国专利第5,580,859号中。可用作基因递送媒剂的脂质体阐述于美国专利第5,422,120号、pct公开案第wo 95/13796号、第wo 94/23697号、第wo 91/14445号及ep专利第0524968号中。其他方式阐述于philip,mol.cell biol.,(1994),14:2411及woffendin,proc.natl.acad.sci.,(1994),91:1581中。[0140]亦显而易见，可使用表达载体直接表达il-24蛋白或介白素20拮抗剂中的任一者。本文所阐述方法中所使用的特定剂量方案(亦即剂量、时刻及重复次数)将取决于特定受试者及该受试者的病史。[0141]治疗效能可藉由业内熟知方法来评价，例如监测经受治疗的患者中的ast和/或alt的含量。例如参见下文的实例1。亦参见美国专利第8,603,470号。[0142]iv.套组[0143]本发明亦提供用于缓解发生于肾中的组织纤维化和/或损伤和/或器官衰竭(例如肾纤维化)或发生于肺中的组织纤维化和/或损伤和/或器官衰竭(例如肺纤维化)的套组。该等套组可包含一个或多个包括il-24蛋白(例如本文所阐述者)或介白素20拮抗剂的容器。在一些实施例中，il-24蛋白或介白素20拮抗剂是人类蛋白。[0144]在一些实施例中，该套组可包括本文所阐述的任一方法的使用说明书。所包含说明书可包括根据本文所阐述的任一方法施用il-24蛋白或介白素20拮抗剂以治疗、延迟(发作)或缓解组织纤维化和/或损伤和/或器官衰竭的说明。该套组可进一步包括基于鉴别个体是否患有靶疾病来选择适于治疗的个体的说明。在再其他实施例中，说明书包括将il-24蛋白施用处于疾病风险下的个体的说明。[0145]关于使用il-24蛋白或介白素20拮抗剂的说明书通常包含关于剂量、投药时间表及用于预期治疗的施用途径的信息。容器可为单位剂量、本体包装(例如多剂量包装)或亚单位剂量。本发明套组中所提供的说明书通常是标记或包装插页(例如套组中所包含的纸页)上的书面说明书，但亦可接受机读说明书(例如载于磁性或光学存储盘上的说明书)。[0146]标记或包装插页指示，组合物是用于治疗、延迟(发作)和/或缓解组织纤维化和/或损伤和/或器官衰竭。可提供说明书以实践本文所阐述的任一方法。[0147]本发明套组呈适宜包装形式。适宜包装包含(但不限于)小瓶、瓶、广口瓶、挠性包装(例如密封mylar或塑料袋)及诸如此类。亦涵盖与特定装置(例如吸入器、经鼻施用装置(例如雾化器)或输注装置(例如微型帮浦)组合使用的包装。套组可具有无菌出入孔(例如容器可为静脉内溶液袋或具有可由皮下注射针刺穿的塞子的小瓶)。容器亦可具有无菌出入孔(例如容器可为静脉内溶液袋或具有可由皮下注射针刺穿的塞子的小瓶)。组合物中的至少一种活性剂为il-24蛋白或介白素20拮抗剂。[0148]套组可视情况提供其他组分，例如缓冲液及解释性信息。通常，套组包括容器及位于该容器上或与该容器相连的标记或包装插页。在一些实施例中，本发明提供包括上述套组的内容物的制品。[0149]v.组合疗法[0150]本文所阐述的任一il-24蛋白或介白素20拮抗剂可与一种或多种可用于治疗组织纤维化和/或损伤和/或器官衰竭(包含本文所阐述者)和/或延迟其发作的其他医药药剂(例如治疗性和/或防治性活性剂)组合使用。il-24蛋白或介白素20拮抗剂或含有其的组合物可与其他医药药剂组合施用，该等其他医药药剂会改良其治疗有需要的受试者的靶组织纤维化和/或损伤和/或器官衰竭和/或减小其风险的活性(例如活性，包含功效和/或效能)，改良生物可用性，改良安全性，减小抗药性，减小和/或改良代谢，抑制排泄，和/或改良受试者、生物试样、组织或细胞中的分布。亦应了解，所采用疗法可达成相同病症的期望效应，和/或其可达成不同效应。在某些实施例中，本文所阐述包含il-24蛋白或介白素20拮抗剂(如本文所阐述)及其他医药药剂的医药组合物展示协同效应，该协同效应不存在于包含il-24蛋白或介白素20拮抗剂及其他医药药剂中的一者(而非二者)的医药组合物中。[0151]il-24蛋白或介白素20拮抗剂或含有其的组合可与一种或多种其他医药药剂(例如治疗活性剂或防治活性剂)同时、在之前或之后施用，该等物质可用作(例如组合疗法)来治疗组织纤维化和/或损伤和/或器官衰竭(例如本文所阐述者)和/或减小其风险。医药药剂包含小有机分子(例如药物化合物或其共晶体(例如由美国食品药物监督管理局(u.s.food and drug administration)批准用于人类或兽医应用的化合物，如联邦条例法典(code of federal regulations，cfr)中所提供))、肽、蛋白质、碳水化合物、单醣、寡醣、多醣、核蛋白、黏蛋白、脂蛋白、合成多肽或蛋白质、抗体、连接至蛋白质(例如抗体)的小分子、醣蛋白、类固醇、核酸、dna、rna、核苷酸、核苷、寡核苷酸、反义寡核苷酸、脂质、激素、维他命及细胞。在某些实施例中，其他医药药剂可用于治疗受试者的神经精神性病症或葡萄糖或脂质代谢病症和/或减小其风险的医药药剂。在某些实施例中，其他医药药剂是藉由监管机构(例如us fda)批准用于治疗受试者中如本文所阐述的组织纤维化和/或损伤和/或器官衰竭和/或减小其风险的医药药剂。每一其他医药药剂可以针对该医药药剂所确定的剂量和/或时间表来施用。其他医药药剂亦可与彼此和/或与il-24蛋白或介白素20拮抗剂或含有其的组合物以单一剂量一起施用或以不同剂量分开施用。用于方案中的特定组合将考虑本文所阐述的il-24蛋白或介白素20拮抗剂与其他医药药剂的兼容性和/或拟达成的期望治疗和/或防治效应。一般而言，预计组合中的其他医药药剂是以不超过个别利用其时的量的量来利用。在一些实施例中，用于组合中的量将低于个别利用的彼等。[0152]无需赘述，据信，本领域技术人员可基于上述说明来最大程度地利用本发明。因此，下列具体实施例仅应理解为阐释的目的，且不论如何不应理解为以任何方式限制其余揭示内容。出于本文所提及的目的或目标，本文所引用的所有出版物皆以引用方式并入本文中。[0153]实例1：治疗发生于肾中的组织纤维化和/或损伤和/或器官衰竭的il-24[0154]材料及方法[0155]试剂[0156]自invitrogen购买针对il-24的抗体(303308)及(ma5-27141)。如先前所阐述来制备针对il-20的抗体(7e)(wei,c.c.等人，detection of il-20 and its receptors on psoriatic skin.clin immunol,2005.117(1):p.65-72)。自abcam购买针对α-sma(ab124964)及n-钙黏蛋白(ab18203)的抗体。自proteintech购买针对tgf-β(18978-1-ap)、β-肌动蛋白(20536-1-ap)及e-钙黏蛋白(20874-1-ap)的抗体。[0157]临床样品[0158]临床研究方案与1975 declaration of helsinki的伦理导则一致且是由台湾成功大学医院伦理委员会(irb号：b-er-108-068)批准。自患者收集肾生检。自每一患者获得书面知情同意书。[0159]免疫荧光(if)[0160]亦使用if染色来评价α-sma表达。制备用于使用α-sma抗体(abcam,ab164964)在4℃下过夜实施免疫荧光染色的细胞培养物。在第二天，将其与alexa594偶联的山羊抗兔二级抗体(jackson immunoresearch laboratories,usa)一起培育2h，且最后加入dapi(vector laboratories,peterborough,uk)。应用if染色以分析活化肌纤维母细胞标记物–α-sma的表达含量。使用数字显微照相机(dp12；olympus co.,tokyo,japan)拍摄影像。[0161]免疫组织化学(ihc)[0162]使用抗il-24抗体(invitrogen,ma5-27141)对自ckd患者(n＝5)获得的肾生检石蜡切片进行ihc染色。使用与migg同型(纯系11711；r&d systems,minneapolis,mn)一起培育的切片作为阴性对照。藉由histoquest以平均强度形式(像素)来量化il-24的蛋白质表达。实施ihc染色以分析tgf-β及α-sma在鼠肾组织中的表达含量。简言之，将石蜡切片与针对tgf-β(proteintech,18978-1-ap)或α-sma(abcam,ab124964)的一级抗体一起在4℃下过夜培育。第二天，使用pbs洗涤切片并与二级抗体一起培育一小时。使用aec色素原染色剂检测反应，且使用苏木素复染细胞核。[0163]流式细胞术分析[0164]为分析巨噬细胞表面标记物表达，使用与apc、pe及fitc偶联的ab抗小鼠cd80、cd206及f4/80。亦使用小鼠同型对照。洗涤细胞并在4℃下使用最佳稀释度的每一抗体染色1小时。再次洗涤细胞并藉由流式细胞术(cytoflextm,beckman coulter)分析。使用flowjo软件(ashland,or)进行数据分析。将所有分析至少独立重复三次。[0165]动物实验[0166]自台湾实验动物中心(台湾成功大学，台南，台湾，中国)购买6至8周龄c57bl/6jnarl野生型小鼠。所有动物实验皆是根据基于台湾卫生研究院-实验室动物护理与使用标准及指南(standards and guidelines for the care and use of experimental animals)的方案来实施。[0167]试样收集及血清生物化学[0168]经由眼窝窦后穿刺或心脏穿刺来收集血液。在3500rpm下离心血清。在-80℃下冷冻血清以使用自动生物化学分析仪(olympus)分析肌酸酐及血尿氮(bun)。[0169]实时pcr[0170]使用trizol试剂自冷冻肾试样提取总rna且使用逆转录酶(primescript rt-pcr套组)根据制造商方案来实施逆转录。在steponeplustm上扩增cdh1(e-钙黏蛋白)、cdh2(n-钙黏蛋白)、tgfb(tgf-β)、acta2(α-sma)、col1a1(胶原-1)、cspg4(ng2)、dem(结蛋白)、vim(波形蛋白)、nos2(inos)、arg1(精胺酸酶)、tnfa(tnf-α)、il1b(il-1β)、il6(il-6)、il11(il-11)、il20(il-20)及il24(il-24)的表达含量，其中使用sybr green(applied biosystem)作为内部对照以用于经甘油醛磷酸去氢酶(gapdh)正规化的定量分析。藉由计算2‑△△ct来测定mrna表达变化的相对倍数。[0171]小鼠il-24的表达及纯化[0172]自鼠类hcc ml-14a细胞系(中国台湾食品工业研究发展研究所)分离小鼠il24 mrna。将重组质体pet22b-il-24转变成bl21胜任细胞(life technologies)。再悬浮所富集包涵体并通过q管柱(ge healthcare)。收集流出物并经由0.22-μm millipore过滤器(millipore)过滤。[0173]细胞培养及实验[0174]在此研究中使用小鼠肾上皮细胞系(m-1)。藉由mtt分析来评价m-1的细胞增殖。简言之，使用pbs或小鼠il-24蛋白(400ng/ml)处理细胞，在24之后添加mtt试剂(sigma-aldrich)。在添加mtt试剂之后两小时，将mtt甲瓒溶于dmso中并在od550 nm下量测。[0175]单侧输尿管堵塞(uuo)诱导的肾纤维化[0176]在uuo诱导的肾纤维化动物模型中，用于此研究中的野生型雄性小鼠(c57bl/6j)及il-20r1缺陷型小鼠介于8周龄至10周龄之间(n≧5/实验组)。短期是诱导2周且长期是诱导4周。为测试il-24对长期模型的效应，在uuo手术之后24hr向小鼠给予重组小鼠il-24蛋白(1mg/kg)。每周注射il-24蛋白两次且持续4周。将来自经处死动物的肾切片保存于福尔马林(formalin)中并以石蜡组织处理方法进行处理，或立即冷冻于液氮中并储存以供rna萃取。应用天狼猩红染色以分析肾纤维化及胶原沉积。[0177]统计学分析[0178]数据表示为平均值±平均值标准误差(sem)。使用未配对双尾司徒登氏t测试(student’s t-test)评价两组之间的差异。p《0.05可视为统计学显着。将所有数据收集于microsoft excel(microsoft inc.)及graphpad prism 6中。[0179]结果[0180]il-24下调且与ckd中的肾纤维化有关。[0181]为探究il-24与ckd在临床中的关联，分析il-24在ckd患者的肾组织中的表达含量。免疫组织化学(ihc)染色展示，il-24强烈表达于肾小管上皮细胞的区域处(图1a)。然而，纤维化区域(黑色箭头)中的il-24表达有所下调。结果指示，il-24主要表达于肾小管中，但在纤维化区域中有所下调。[0182]为进一步探究il-24在活体内肾纤维化进展中的动态表达特征，建立患有肾纤维化的鼠类的单侧输尿管堵塞(uuo)模型。uuo小鼠包含若干纤维化蛋白及il-24。免疫组织化学染色展示，tgf-β及α-sma(其识别为纤维化的主要驱动因子)在uuo手术之后高度表达(图1b、1c)。应用天狼猩红染色以使胶原纤维可视化。在uuo小鼠中，肾间质性组织中的胶原沉积程度逐渐升高。然而，il-24(其主要表达于肾小管中)在第21天之后显着下调(图1b)。另外，肾功能有所恶化，如由血清肌酸酐及bun的增加所指示(图1d)。该等数据展示，已成功地藉由uuo手术建立肾纤维化模型且il-24在肾损伤之后有所减弱。[0183]施用il-24可保护小鼠免于长期uuo中的肾纤维化。[0184]为探究il-24在肾纤维化中的作用，分析il-24对肾纤维化的疾病模型的效应。在uuo手术之后24小时，使用il-24重组蛋白治疗小鼠。每周两次以1mg kg-1经腹膜内施用il-24。经由天狼猩红染色发现，il-24治疗小鼠所展示的胶原累积小于对照组(图2a、2b)。在il-24治疗组中，肾纤维化因子α-sma及tgf-β的蛋白质含量亦有所下调(图2b)。在il-24治疗小鼠中，tgfb、acta2、il11、des、il1b及tnfa的mrna表达显着下调(图2c)。另外，与经pbs治疗的患有uuo者相比，在il-24治疗组中，由肌酸酐及bun的血清含量指示的肾功能得以保护(图2d)。该等结果表明，il-24潜在地预防小鼠的肾纤维化。[0185]基于uuo手术的动态，在14天后经由天狼猩红染色发现，过量胶原累积于肾实质上。为测定il-24在肾纤维化之后作为治疗药物是否亦具有效能，使用il-24蛋白在uuo手术2周之后治疗小鼠以测定il-24对肾纤维化的效应。结果展示，il-24治疗小鼠可减弱uuo诱导的肾纤维化，降低促纤维生成因子的表达，减少胶原产生(图3b、3c)且维持肾功能(图3d)。因此，il-24亦在发生肾损伤之后具有治疗效应。据推断，il-24对肾纤维化具有显着保护及治疗效应。[0186]il-24治疗小鼠抵抗多柔比星诱导的肾损伤[0187]在临床中，多柔比星(dox)是用于人类癌症的常用化学疗法药物，然而，其可引起严重副效应(包含心脏损害及肾毒性)(mitry,m.a.及j.g.edwards,doxorubicin induced heart failure:phenotype and molecular mechanisms.int j cardiol heart vasc,2016.10:p.17-24；octavia,y.等人，doxorubicin-induced cardiomyopathy:from molecular mechanisms to therapeutic strategies.j mol cell cardiol,2012.52(6):p.1213-25；rea,d.等人，strain analysis in the assessment of a mouse model of cardiotoxicity due to chemotherapy:sample for preclinical research.in vivo,2016.30(3):p.279-90)。为评估是否il-24用于肾中的保护作用的效应，分析il-24在dox诱导的动物模型中的表达。免疫组织化学染色展示，il-24包含于肾组织中且在dox诱导的小鼠中的肾组织的小管上皮细胞上有所下调(图4a)。为进一步证实il-24是否亦在肾损伤之后具有保护效能，藉由在14天之后每周以1mg kg-1注射il-24两次来治疗dox诱导的小鼠以测定il-24对肾毒性的效应。il-24治疗小鼠防止肾损害，下调促纤维生成因子的表达，降低胶原累积(图4b)且亦维持肾功能(图4c)。因此，il-24在肾损伤之后对肾组织具有保护效应。[0188]实例2：il-24治疗发生于肺中的组织纤维化和/或损伤和/或器官衰竭[0189]材料及方法[0190]动物[0191]自台湾成功大学动物中心购买7周龄c57bl/6j雌性小鼠，并在22±2℃下保持于12小时亮-暗循环。将动物保持于独立通风的无菌饲养笼(ivc)中且给予标准饮用水及进食。所有动物实验皆根据基于台湾卫生研究院-实验室动物护理与使用标准及指南的方案来实施。台湾成功大学动物伦理委员会批准了研究程序。该等方法根据所批准导则来实施。尽全力最小化动物痛苦并减小所用动物的数量。在所有程序中，藉由经腹膜内注射标准剂量的戊巴比妥(pentobarbital)来达成麻醉。[0192]治疗[0193]在麻醉之后，藉由气管内滴注使用50μg(于50μl盐水中)博来霉素(nippon kayaku co.,ltd.)来治疗每一小鼠。在博来霉素治疗之前24小时，藉由腹膜内注射(1mg/kg,n＝5)将il-24给予小鼠，且随后每周注射两次。使用经pbs处理的小鼠作为对照组。在博来霉素治疗之后1小时，给予抗il-20抗体(7e)(3mg/kg,n＝3)，且随后每周注射两次。小鼠igg同型对照(3mg/kg,n＝3)。在博来霉素治疗之后三周，分析小鼠的肺功能。[0194]肺呼吸系统功能量测[0195]藉由flexivent呼吸机(scireq)量测小鼠的肺功能。首先，向小鼠给予戊巴比妥，此并不影响其呼吸。将软管插入其气管中且连接至该机器。雾化喷嘴向气管提供pbs，且该机器使用不同振动方法藉由计算机软件来计算参数。最后，获得小鼠中的肺功能变化。[0196]免疫组织化学(ihc)[0197]实施ihc染色以分析α-sma在小鼠肺中的表达含量。简言之，将石蜡切片与针对α-sma的一级抗体(abcam,ab124964)一起在4℃下培育过夜。第二天，使用pbs洗涤切片并与二级抗体一起培育一小时。使用aec色素原染色剂检测反应，且使用苏木素复染细胞核。[0198]il-24或其激动剂及抗il-20抗体用于治疗纤维化、任何损伤及器官衰竭的用途[0199]肺纤维化是慢性及进展性发炎性疾病。因不易诊断，故肺纤维化大部分发现于晚期且死亡率较高。近年来，发生率持续升高。当前，尚未理解特发性肺纤维化(ipf)的病因。先天性基因因素或后天性环境因素及衰老可为其原因。在肺泡上皮细胞损害之后，活化纤维母细胞产生过量细胞外基质(ecm)，从而产生肺纤维化。最后，肺失去其原始弹性，且逐渐增厚的肺泡壁将引起异常换气。因此，发生诸如喘息、干咳及呼吸困难等症状，从而降低肺功能。迄今为止，仍无治疗肺纤维化的有效基团药物。肺纤维化治疗大多用于预防继续恶化。因此，存在探寻用于治疗ipf的新颖药物的未满足医学需求。[0200]博来霉素是用于治疗头颈癌、生殖细胞肿瘤及淋巴瘤的临床抗癌药物。作为衍生自轮丝链霉菌(streptomyces verticillus)的二醇-肽抗生素，博来霉素具有可引起肺发炎且最终引起纤维化的严重副效应。因肺中缺乏博来霉素水解酶，故博来霉素具有可引起上皮细胞损害的肺毒性。当前，许多研究使用博来霉素来开发肺纤维化鼠类模型。在三周博来霉素治疗之后，观察到严重肺纤维化。[0201]介白素-24(il-24)及介白素-20(il-20)是介白素-10家族的成员，其共享相同受体il-20r1/il-20r2及il-20r2/il-22r1。其皆涉及许多发炎性疾病。il-24可视为重要的多效免疫调控性细胞介素。il-24能够对抗黑色素瘤细胞并引起细胞凋亡，且对正常细胞并无效应。il-20是涉及各种发炎性疾病(例如类风湿性关节炎、骨质疏松症)的发病机制的促发炎性细胞介素。然而，尚未论述il-24及il-20在肺纤维化中的作用。在此研究中，探究il-24及抗il-20单株抗体(7e)在肺纤维化鼠类模型中的治疗效应。[0202]鉴于上述情形，经活体内数据证实，il-24及il-20的确涉及肺纤维化。施用il-24或抗il-20抗体(7e)治疗可有效地保护小鼠的肺功能免受博来霉素影响。亦在病理学组织中观察到，il-24治疗组具有较小纤维化区域且纤维生成因子(α-sma)有所减少。进一步经由活体外实验来探究其作用机制。总而言之，结果证实，il-24及抗il-20单株抗体(7e)可为治疗肺纤维化的治疗剂。[0203]il-24或抗20抗体减小了纤维化区域且抑制肺中的纤维生成因子的产生。[0204]为有效且迅速地了解il-24或il-20是否涉及肺纤维化，使用博来霉素来建立鼠类肺纤维化模型。经由腹膜内注射施用il-24或抗20抗体以测试治疗潜力。基于该等结果，il-24及抗20抗体显着减小肺纤维化区域，且抑制若干纤维化因子的表达。[0205]经由如图5中所展示的苏木素及伊红染色观察到，使用博来霉素的小鼠的肺组织显着增厚，此可视为纤维化的标志。在il-24治疗及抗20抗体治疗组中，形态较类似于健康组且并无过量组织增殖。进一步分别藉由免疫组织化学及天狼猩红染色来检验纤维生成因子、α平滑肌肌动蛋白(α-sma)及胶原的表达。据观察，细胞介素a治疗组及抗x抗体治疗组中的α-sma及胶原的产生显着降低。[0206]il-24或抗20抗体保护小鼠的肺功能免受博来霉素损伤[0207]发现与健康对照肺相比，纤维化肺中的il-24有所减少且纤维化肺中的il-20有所增加。因此可推测，il-24可发挥保护作用，而il-20可在肺纤维化的发病机制中发挥有害(发炎性)作用。[0208]为有效且迅速地了解il-24或il-20是否涉及肺纤维化，使用博来霉素来建立鼠类肺纤维化模型。经由腹膜内注射施用介白素-24或抗il-20抗体以测试治疗潜力。基于图6中所展示的结果，il-24及抗20抗体显着改良肺功能。[0209]尽管上述实例进一步详细阐述本发明的某些方面及实施例，但其应仅视为阐释性且不以任何方式限制申请专利范围的范围。









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