用于调节SMN2的化合物和方法与流程

医药医疗技术的改进;医疗器械制造及应用技术用于调节smn2的化合物和方法1.序列表2.本技术与电子格式的序列表一起提交。所述序列表以创建于2021 年2月26日的标题为biol0367woseq_st25.txt的文件形式提供，其大小为44kb。电子格式的序列表中的信息通过引用整体并入本文。技术领域3.提供了用于调节细胞或受试者中的smn2 rna的化合物、方法和药物组合物。此类化合物、方法和药物组合物可用于改善神经退行性病症的至少一种症状。此类症状包括：肌肉力量降低；不能坐直、站立和/或行走或其能力降低；神经肌肉活动减少；一处或多处肌肉的电活动减少；呼吸作用降低；在没有帮助的情况下不能进食、饮水和/或呼吸或其能力降低；体重减轻或体重增加减少；和/或存活率降低。背景技术：4.近端脊髓性肌萎缩症(sma)是一种特征在于脊髓运动神经元损失的遗传性神经退行性病症。sma是一种早发的常染色体隐性疾病并且是婴儿死亡的主要遗传原因。sma的严重程度因患者而异并因此分为四种类型。i型sma是最严重的形式，在出生时或6个月内发作，并且通常在2年内导致死亡。i型sma儿童不能坐下或行走。 ii型sma是中间形式，并且患者能够坐下，但不能站立或行走。iii 型sma(疾病的一种慢性形式)患者通常在18个月龄后发展sma (lefebvre等人,hum.mol.genet.,1998,7,1531-1536)。iv型sma是一种较温和的形式并且通常在18岁后发作，有时在10岁后发作；iv 型sma患者经历有限的轻度运动障碍，在成年期能够行走并且通常没有呼吸或营养问题(farrar等人,ann.neurol.,2017,81,355-368； d'amico等人,orphanet j.of rare diseases,2011,6:71)。5.sma的分子基础是存活运动神经元基因1(survival motor neurongene 1；smn1)的两个拷贝的丢失，所述基因也可称为smn端粒并编码被认为参与snrnp生物发生和回收的多蛋白复合物的一部分的蛋白。一种几乎相同的基因smn2(也称为smn着丝粒)存在于染色体5q13上的重复区域中并调节疾病严重程度。尽管smn1和smn2 具有编码相同蛋白质的潜力，但正常smn1基因的表达仅导致全长存活运动神经元(smn)蛋白的表达，而smn2基因的表达导致两种不同的蛋白形式，即全长smn2蛋白和截短smn2蛋白(smnδ7蛋白)。 smn2在外显子7的位置+6处含有翻译沉默突变，这导致smn2转录物中外显子7的包含效率低下。因此，smn2的优势形式是缺少外显子7的截短形式，其为不稳定并且非活性的(cartegni和krainer,nat. genet.,2002,30,377-384)。smn2基因的表达导致约10-20％的全长 smn蛋白和80-90％的不稳定/非功能smnδ7蛋白。smn蛋白在剪接体的组装中发挥着公认的作用并且也可介导神经元的轴突和神经末端中的mrna运输。6.本文的目标是提供用于治疗sma的化合物、方法和药物组合物。技术实现要素：7.本文提供了用于调节细胞或受试者中的smn2 rna的剪接的化合物、方法和药物组合物。在某些实施方案中，可用于调节smn2 rna 的剪接的化合物是寡聚化合物。在某些实施方案中，寡聚化合物增加包括外显子7的smn2 rna的量。在某些实施方案中，寡聚化合物增加全长smn2蛋白表达。在某些实施方案中，寡聚化合物包含经修饰的寡核苷酸。在某些实施方案中，受试者患有神经退行性疾病。在某些实施方案中，受试者患有脊髓性肌萎缩症(sma)。8.还提供了可用于改善神经退行性疾病的至少一种症状的方法。在某些实施方案中，所述神经退行性疾病是sma。在某些实施方案中，症状包括：肌肉力量降低；不能坐直、站立和/或行走或其能力降低；神经肌肉活动减少；一处或多处肌肉的电活动减少；呼吸作用降低；在没有帮助的情况下不能进食、饮水和/或呼吸或其能力降低；体重减轻或体重增加减少；和/或存活率降低。在某些实施方案中，本文提供了用于治疗sma的经修饰的寡核苷酸。具体实施方式9.应当理解，前述一般描述和以下详细描述仅为示例性和说明性的而不具有限制性。在本文中，除非另外特别说明，否则单数的使用包括复数。如本文所用，除非另外说明，否则“或”的使用意指“和/或”。此外，术语“包括(including)”以及其他形式(例如“包括(includes)”和“包括(included)”)的使用不是限制性的。同样，除非另外特别说明，否则例如“元件”或“组件”的术语涵盖包含一个单元的元件和组件以及包含多于一个子单元的元件和组件。10.本文所用的章节标题仅用于组织目的，而不应被视为限制所描述的主题。本技术中引用的所有文件或文件的部分，包括但不限于专利、专利申请、文章、书籍和论文，以及genbank和ncbi参考序列记录在此关于本文所讨论的文件的部分以及全文通过引用明确并入。11.定义12.除非提供特定的定义，否则结合本文所述的分析化学、合成有机化学和药物和药剂化学使用的命名法以及其程序和技术是本领域中众所周知且常用的。在允许的情况下，在本公开通篇引用的所有专利、申请、公开的申请以及其他出版物和其他数据通过引用整体并入本文。13.除非另外指示，否则以下术语具有以下含义：14.如本文所用，“2'-脱氧核糖核苷”意指包含2'-h(h)脱氧核糖基糖部分的核苷。在某些实施方案中，2'-脱氧核糖核苷是2'-β-d-脱氧核糖核苷并包含2'-β-d-脱氧核糖基糖部分，其具有如在天然存在的脱氧核糖核酸(dna)中所发现的β-d构型。在某些实施方案中，2'-脱氧核糖核苷可包含经修饰的核碱基或可包含rna核碱基(尿嘧啶)。15.如本文所用，“2'-moe”意指2'-och2ch2och3基团代替核糖基糖部分的2'-oh基团。“2'-moe糖部分”是2'-och2ch2och3基团代替核糖基糖部分的2'-oh基团的糖部分。除非另外指示，否则2'-moe 糖部分呈β-d构型。“moe”意指o-甲氧基乙基。16.如本文所用，“2'-moe核苷”意指包含2'-moe糖部分的核苷。17.如本文所用，“2'-nma”意指-o-ch2-c(＝o)-nh-ch3基团代替核糖基糖部分的2'-oh基团。“2'-nma糖部分”是以 2'–o-ch2-c(＝o)-nh-ch3基团代替核糖基糖部分的2'-oh基团的糖部分。除非另外指示，否则2'-nma糖部分呈β-d构型。“nma”意指 o-n-甲基乙酰胺。18.如本文所用，“2'-nma核苷”意指包含2'-nma糖部分的核苷。19.如本文所用，“2'-ome”意指2'-och3基团代替核糖基糖部分的 2'-oh基团。“2'-ome糖部分”是2'-och3基团代替核糖基糖部分的 2'-oh基团的糖部分。除非另外指示，否则2'-ome糖部分呈β-d构型。“ome”意指o-甲基。20.如本文所用，“2'-ome核苷”意指包含2'-ome糖部分的核苷。如本文所用，“2'-取代的核苷”意指包含2'-取代的糖部分的核苷。如本文所用，关于糖部分的“2'-取代的”意指包含至少一个除h或oh以外的 2'-取代基的糖部分。21.如本文所用，“5-甲基胞嘧啶”意指经连接至5位的甲基修饰的胞嘧啶。5-甲基胞嘧啶是经修饰的核碱基。22.如本文所用，“施用”意指向受试者提供医药剂。23.如本文所用，关于治疗的“改善”意指至少一种症状相对于不存在所述治疗的情况下的相同症状的改进。在某些实施方案中，改善是症状的严重程度或频率降低或者症状的延迟发作或严重程度或频率的进展减慢。在某些实施方案中，症状为：肌肉力量降低；不能坐直、站立和/或行走或其能力降低；神经肌肉活动减少；一处或多处肌肉的电活动减少；呼吸作用降低；在没有帮助的情况下不能进食、饮水和/或呼吸或其能力降低；体重减轻或体重增加减少；和/或存活率降低。24.如本文所用，“反义活性”意指可归因于反义化合物与其靶核酸的杂交的任何可检测和/或可测量的变化。25.如本文所用，“反义化合物”意指能够实现至少一种反义活性的寡聚化合物或寡聚双链体。26.如本文所用，“双环核苷”或“bna”意指包含双环糖部分的核苷。27.如本文所用，“双环糖”或“双环糖部分”意指包含两个环的经修饰的糖部分，其中第二环经由连接第一环中两个原子的桥形成，从而形成双环结构。在某些实施方案中，双环糖部分的第一环为呋喃糖基部分。在某些实施方案中，呋喃糖基部分为核糖基部分。在某些实施方案中，双环糖部分不包含呋喃糖基部分。28.如本文所用，“脑脊髓液”或“csf”意指填充脑和脊髓周围的空间的流体。“人工脑脊髓液”或“acsf”意指经制备或制造具有脑脊髓液的某些特性的流体。29.如本文所用，“cet”意指4'至2'桥代替核糖基糖部分的2'oh-基团，其中桥具有式4'-ch(ch3)-o-2'，并且其中桥的甲基呈s构型。“cet 糖部分”为4'至2'桥代替核糖基糖部分的2'oh-基团的双环糖部分，其中桥具有式4'-ch(ch3)-o-2'，并且其中桥的甲基呈s构型。“cet”意指受约束乙基。30.如本文所用，“cet核苷”意指包含cet糖部分的核苷。31.如本文所用，“手性富集群体”意指具有相同分子式的多个分子，其中群体内在特定手性中心含有特定立体化学构型的分子的数目或百分比大于在特定手性中心为立构无规时群体内预期在相同特定手性中心含有相同特定立体化学构型的分子的数目或百分比。在每个分子内具有多个手性中心的分子的手性富集群体可含有一个或多个立构无规手性中心。在某些实施方案中，分子是经修饰的寡核苷酸。在某些实施方案中，分子是包含经修饰的寡核苷酸的化合物。32.如本文所用，关于寡核苷酸的“互补”意指当寡核苷酸与另一核酸的核碱基序列以相对方向对齐时，寡核苷酸或其一个或多个部分的至少70％核碱基与另一核酸或其一个或多个部分的核碱基能够彼此氢键键合。互补核碱基意指能够彼此形成氢键的核碱基。互补核碱基对包括腺嘌呤(a)与胸腺嘧啶(t)、腺嘌呤(a)与尿嘧啶(u)、胞嘧啶(c)与鸟嘌呤(g)以及5-甲基胞嘧啶(mc)与鸟嘌呤(g)。互补寡核苷酸和/或靶核酸不必在每个核苷处都具有核碱基互补性。相反地，一些错配是容许的。如本文所用，关于寡核苷酸或其部分的“完全互补”或“100％互补”意指寡核苷酸或其部分与另一寡核苷酸或靶核酸在两个寡核苷酸中的较短者的每个核碱基处互补，或者如果寡核苷酸为相同长度，则在每个核苷处互补。33.如本文所用，在寡核苷酸的背景中“连续”是指核苷、核碱基、糖部分或核苷间键彼此紧邻。例如，“连续核碱基”意指在序列中彼此紧邻的核碱基。34.如本文所用，“杂交”意指互补寡核苷酸和/或核酸的配对或退火。尽管不限于特定机制，但最常见的杂交机制涉及互补核碱基之间的氢键键合，其可为watson-crick、hoogsteen或反向hoogsteen氢键键合。35.如本文所用，“核苷间键联”意指寡核苷酸中连续核苷之间的共价键联。如本文所用，“经修饰的核苷间键联”意指除磷酸二酯核苷间键联以外的任何核苷间键联。“硫代磷酸酯核苷间键联”是经修饰的核苷间键联，在其中磷酸二酯核苷间键联的非桥联氧原子之一被硫原子置换。36.如本文所用，“错配”或“非互补的”意指当将第一寡核苷酸和第二寡核苷酸对齐时，第一寡核苷酸的核碱基与第二寡核苷酸或靶核酸的对应核碱基不互补。37.如本文所用，“基序”意指寡核苷酸中未经修饰和/或经修饰的糖部分、核碱基和/或核苷间键联的模式。38.如本文所用，“非双环经修饰的糖部分”意指包含修饰(例如取代基)的经修饰的糖部分，所述修饰在糖的两个原子之间不形成桥以形成第二环。39.如本文所用，“核碱基”意指未经修饰的核碱基或经修饰的核碱基。如本文所用，“未经修饰的核碱基”是腺嘌呤(a)、胸腺嘧啶(t)、胞嘧啶(c)、尿嘧啶(u)或鸟嘌呤(g)。如本文所用，“经修饰的核碱基”是除未经修饰的a、t、c、u或g以外的能够与至少一个未经修饰的核碱基配对的一组原子。“5-甲基胞嘧啶”是经修饰的核碱基。通用碱基是可与五种未经修饰的核碱基中任一者配对的经修饰的核碱基。如本文所用，“核碱基序列”意指靶核酸或寡核苷酸中连续核碱基的顺序，其与任何糖或核苷间键联修饰无关。40.如本文所用，“核苷”意指包含核碱基和糖部分的化合物。核碱基和糖部分各自独立地未经修饰或经修饰。如本文所用，“经修饰的核苷”意指包含经修饰的核碱基和/或经修饰的糖部分的核苷。“连接的核苷”是在连续序列中连接的核苷(即，在连接的核苷之间不存在额外的核苷)。41.如本文所用，“寡聚化合物”意指寡核苷酸和任选地一个或多个额外特征，例如缀合基团或末端基团。寡聚化合物可以和与第一寡聚化合物互补的第二寡聚化合物配对或可为未配对的。“单链寡聚化合物”是未配对的寡聚化合物。术语“寡聚双链体”意指由两种具有互补核碱基序列的寡聚化合物形成的双链体。寡聚双链体的每个寡聚化合物可称为“双链体寡聚化合物”。42.如本文所用，“寡核苷酸”意指经由核苷间键连接的连接核苷的链，其中每个核苷和核苷间键可经修饰或未经修饰。除非另外指示，否则寡核苷酸由8-50个连接核苷组成。如本文所用，“经修饰的寡核苷酸”意指如下寡核苷酸，其中至少一个核苷或核苷间键联经修饰。如本文所用，“未经修饰的寡核苷酸”意指不包含任何核苷修饰或核苷间修饰的寡核苷酸。43.如本文所用，“药物组合物”意指适于向受试者施用的物质的混合物。例如，药物组合物可包含寡聚化合物和无菌水溶液。44.如本文所用，“药学上可接受的载体或稀释剂”意指适用于向受试者施用的任何物质。某些此类载体使药物组合物能够配制成例如片剂、丸剂、糖衣丸、胶囊、液体、凝胶、糖浆、浆液、混悬液和锭剂，以供受试者口服摄取。在某些实施方案中，药学上可接受的载体或稀释剂是无菌水、无菌盐水、无菌缓冲溶液或无菌人工脑脊髓液。45.如本文所用，“药学上可接受的盐”意指化合物的生理学和药学上可接受的盐。药学上可接受的盐保留母体化合物的所需的生物活性并且不赋予其非所需的毒理学作用。46.除非另外指定，否则如本文所用，“rna”意指rna转录物并且包括前体mrna和成熟mrna。47.如本文所用，“立构无规手性中心”在具有相同分子式的分子群体背景下意指具有无规立体化学构型的手性中心。例如，在包含立构无规手性中心的分子群体中，具有(s)构型的立构无规手性中心的分子数目可能但未必与具有(r)构型的立构无规手性中心的分子数目相同。当由于未对合成方法进行设计以控制立体化学构型时，手性中心的立体化学构型被视为无规的。在某些实施方案中，立构无规手性中心是立构无规硫代磷酸酯核苷间键联。48.如本文所用，“受试者”意指人类或非人类动物。49.如本文所用，“糖部分”意指未经修饰的糖部分或经修饰的糖部分。如本文所用，“未经修饰的糖部分”意指如于rna中发现的2'-oh(h)β-d核糖基部分(“未经修饰的rna糖部分”)或如于dna中发现的2'-h(h)β-d脱氧核糖基部分(“未经修饰的dna糖部分”)。未经修饰的糖部分在1'、3'和4'位中的每一者处都具有一个氢，在3'位具有氧并且在5'位具有两个氢。如本文所用，“经修饰的糖部分”或“经修饰的糖”意指经修饰的呋喃糖基糖部分或糖替代物。50.如本文所用，“糖替代物”意指除呋喃糖基部分外，可将核碱基连接至寡核苷酸中的另一基团(例如核苷间键联、缀合基团或末端基团) 的经修饰的糖部分。包含糖替代物的经修饰的核苷可并入寡核苷酸内的一个或多个位置并且此类寡核苷酸能够与互补寡聚化合物或靶核酸杂交。51.如本文所用，“标准体内测定”意指实施例2中所述的测定和其合理的变型。52.如本文所用，“症状”意指指示疾病或病症的存在或程度的任何身体特征或测试结果。在某些实施方案中，症状对于受试者或检查或测试受试者的医学专业人员是显而易见的。53.如本文所用，“靶核酸”意指反义化合物经设计以影响的核酸。54.如本文所用，“靶区域”意指靶核酸中寡聚化合物经设计以杂交的一部分。55.如本文所用，“末端基团”意指与寡核苷酸的末端共价连接的化学基团或原子团。56.如本文所用，“治疗有效量”意指为受试者提供治疗益处的医药剂的量。例如，治疗有效量改进疾病的症状。57.某些实施方案58.本公开提供了以下非限制性编号实施方案：59.实施方案1.一种寡聚化合物，所述寡聚化合物包含经修饰的寡核苷酸，所述经修饰的寡核苷酸由16、17、18、19或20个连接的核苷组成并且核碱基序列包含核碱基序列seq id no:20-50中任一者的至少15或至少16个连续核碱基，其中所述经修饰的寡核苷酸包含至少一个选自经修饰的糖部分和经修饰的核苷间键联的修饰。60.实施方案2.一种寡聚化合物，所述寡聚化合物包含经修饰的寡核苷酸，所述经修饰的寡核苷酸由17、18、19或20个连接的核苷组成并且核碱基序列包含核碱基序列seq id no:20-27、29-30或32-50 中任一者的至少15、至少16或至少17个连续核碱基，其中所述经修饰的寡核苷酸包含至少一个选自经修饰的糖部分和经修饰的核苷间键联的修饰。61.实施方案3.一种寡聚化合物，所述寡聚化合物包含经修饰的寡核苷酸，所述经修饰的寡核苷酸由18、19或20个连接的核苷组成并且核碱基序列包含核碱基序列seq id no:20-27、30或33-50中任一者的至少15、至少16、或至少17或至少18个连续核碱基，其中所述经修饰的寡核苷酸包含至少一个选自经修饰的糖部分和经修饰的核苷间键联的修饰。62.实施方案4.一种寡聚化合物，所述寡聚化合物包含经修饰的寡核苷酸，所述经修饰的寡核苷酸由19或20个连接的核苷组成并且核碱基序列包含核碱基序列seq id no:20、22、24-27、30、33-50中任一者的至少15、至少16、或至少17、至少18或至少19个连续核碱基，其中所述经修饰的寡核苷酸包含至少一个选自经修饰的糖部分和经修饰的核苷间键联的修饰。63.实施方案5.一种寡聚化合物，所述寡聚化合物包含经修饰的寡核苷酸，所述经修饰的寡核苷酸由20个连接的核苷组成并且核碱基序列包含核碱基序列seq id no:20、22、25、27、35、39-46或49 中任一者的至少15、至少16、或至少17、至少18、至少19或至少 20个连续核碱基，其中所述经修饰的寡核苷酸包含至少一个选自经修饰的糖部分和经修饰的核苷间键联的修饰。64.实施方案6.如实施方案1-5中任一项所述的寡聚化合物，其中当在所述经修饰的寡核苷酸的整个核碱基序列上测量时，所述经修饰的寡核苷酸的核碱基序列与核碱基序列seq id no:1至少80％、 85％、87.5％、88.2％、89％、89.4％、90％、93.7％、94％、94.7％、 95％或100％互补。65.实施方案7.如实施方案1-6中任一项所述的寡聚化合物，其中所述经修饰的寡核苷酸具有选自以下的核苷间键联基序(5'至3')：sos osssssssssssss、ssosssssssssssoss、ssosssssosssssoss、ssosssosssosssoss、 soossssssssssooss、sooosssssssssooss、sooossssssssoooss、sssssssoooss sssss、ssossssssssssssss、ssssossssssssssss、ssssssossssssssss、sssssssso ssssssss、ssssssssssossssss、ssssssssssssossss、ssssssssssssssoss、sossss ssssssssoss、sosssssssssosssss、sosssssssosssssss、sosssssosssssssss、so sssosssssssssss、ssssosssssssssoss、ssssssosssssssoss、ssssssssosssssoss、 ssssssssssosssoss、ssssssssssssososs、soossssssssssssss、sssoossssssssss ss、sssssoossssssssss、sssssssoossssssss、sssssssssoossssss、sssssssssss oossss、sssssssssssssooss、sssssssoooossssss、ssoooosssssssssss、sssso ooosssssssss、ssssssssoooosssss、ssssssssssoooosss、sssssssssssooooss、 ssssssooooossssss、ssssssoooooosssss、soooosssssssoooss、sssssoooooo osssss、ssssssssssssssoss、ssssssssssssosss、sssssssssssssooss、sssssssss sssososs、sssssssssssosssss、sssssssssssososss、ssssssssssossosss、sssss ssssosssssss、sssssssssosssosss、ssssssssosssssoss、ssssssssossssosss、s ssssssosssssssss、sssssssoossssssss、sssssosssssssssss、sssosssssssssssss、 sosssssssssssssss、sossssssossssssss、soossssssssssssss、osssssssssssssss sso、sssssssssssssssssoo、ssssssssssssssssoss、sssssssssssssssooss、ssss ssssssssssososs、sssssssssosssssssss、sssssssssossssssoss、ssssssssoossss sssss、sosssssssssssssssss、sossssssssssssssoss、sosssssssosssssssss、so sosssssssssssssss、soossssssssssssssss、sssssssssssssssssss、sssssssssssss sssso、ossssssssssssssssss、ssssssssssssososso、sssssssssssssssoss、ssss sssssssssososs、ssssssssosssssssss、ssssssssossssssoss、sosssssssssssssss s、sosssssssssssssoss、sossssssosssssssss、sosossssssssssssss、sssssssss sooooss、ssssssssoooossss、sssssssooossssss、ssssssoooossssss、ssssss ooooosssss、sssssoooooosssss、sssssooooooossss、ssssoooossssssss、ss ossssssssssoss、ssosssssossssoss、ssosssosssossoss、ssossossossososs、s sososososososss、ssoooossssssssss、soosssssssssooss、sooossssssssooss、 sooosssssssoooss、soooossssssoooss、sssssssssooooss、ssssssssoooosss、 ssssssooossssss、ssssssoooosssss、sssssooooosssss、sssssoooooossss、s sssoooosssssss、ssssooooooossss、sssosssosssosss、ssosssssssssoss、ss ossossossosss、ssossossosososs、ssososososososs、ssoooosssssssss、so ossssssssooss、sooosssssssooss、sooossssssoooss和soooosssssoooss；其中‘s’表示硫代磷酸酯核苷间键联并且‘o’表示磷酸二酯核苷间键联。66.实施方案8.如实施方案1-6中任一项所述的寡聚化合物，其中所述经修饰的寡核苷酸具有选自以下的核苷间键联基序： sssssssssssssssxs和ssssssssssssssssx；其中‘s’表示硫代磷酸酯核苷间键联，‘o’表示磷酸二酯核苷间键联并且“x”表示甲氧基丙基膦酸酯核苷间键联。67.实施方案9.如实施方案1-6中任一项所述的寡聚化合物，其中所述经修饰的寡核苷酸具有选自以下的核苷间键联基序： zzzzzzzzzzzzzzzzz、ssssssssssszzzzzz、ssssszzzzzzssssss、 zzooooooooooooozz、zzzzooooooooooozz、zzzzzzooooooooozz、 zzzzzzzzooooooozz和ssoooooooooooooss；其中‘s’表示硫代磷酸酯核苷间键联，‘o’表示磷酸二酯核苷间键联并且“z”表示甲磺酰基氨基磷酸酯核苷间键联。68.实施方案10.如实施方案1-9中任一项所述的寡聚化合物，其中所述经修饰的寡核苷酸具有选自以下的糖基序(5'至3')：eeeeeeeeeeee eeeeeeee、eeeeeeeeeeeeeeeeeee、eeeeeeeeeeeeeeeeee、eeeeeeeeeeeeeee ee、eeeeeeeeeeeeeeee、nnnnnnnnnnnnnnnn、nnnnnnnnnnnnnnnnn、nn nnnnnnnnnnnnnnnn、nnnnnnnnnnnnnnnnnnn、nnnnnnnnnnnnnnnnnnnn、 nennnnneneennnnnnn、nnnnnnnnnnnnenneen、nennnnneneenenneen、n nnnnnnnnnnnnnnnnne、nnnnnnnnnnnnnnnnnnd、nnnnnnnnnnnnnnnnnn y、nnnnnnnnnnnnnnnnnndd、nnnnnnnnnnnnnnnnnned、nnnnnnnnnnnn nnnnnnde、nnnnnnnnnnnnnnnnnnee、eeeeeeeeeeeeeeeeeedd、eeeeeeeee eeeeeeeeeed、eeeeeeeeeeeeeeeeeede、nnnnnnnnnnnnnnnnnnd、nnnnnnn nnnnnnnnnnne、eeeeeeeeeeeeeeeeeed、keekeekeekeekeeeek、keeekeee keeekeeeek、keeeeekeeeeekeeeek、keeeeeeekeeeeeeeek、keeeeeeeeeeee eeeek、eeekeekeekeekeekek、eeekeekeekeekeekee、eeeeeekeekeekeeke e、eeeeeekeekeekeeeee、eeeeeekeeeeekeeeee、keekeekeekeeeeeeee、ee eeeeeekeekeekeek、keekeekeeeeeeeeeee、eeeeeeeeeeekeekeek、keekeee eeeeeeeeeee、eeeeeeeeeeeeeekeek、keekeekeekeekeeek、keeekeeekeeek eeek、keeeekeeeeekeeeek、keeeeeeekeeeeeeek、keeeeeeeeeeeeeeek、ee keekeekeekeekek、eekeekeekeekeekee、eeeeekeekeekeekee、eeeeekeek eekeeeee、eeeeekeeeeekeeeee、keekeekeekeeeeeee、eeeeeeekeekeekeek、 keekeekeeeeeeeeee、eeeeeeeeeekeekeek、keekeeeeeeeeeeeee、eeeeeeee eeeeekeek、keekeekeekeekeek、keeekeeekeeekeek、keeeekeeeekeeeek、keeeeeeekeeeeeek、keeeeeeeeeeeeeek、kekeekeekeekeeke、eekeekeeke ekeeke、eeeeekeekeekeeke、eeeeekeekeekeeee、eeeeekeeeeekeeee、ke ekeekeekeeeeee,eeeeeekeekeekeek、keekeekeeeeeeeee、eeeeeeeeekeeke ek、keekeeeeeeeeeeee、eeeeeeeeeeeekeek、eeeeeeeeeeeeeeeeeed、eeee eeeeeeeeeeeeeey、ennnnnnnnnnnnnnnnnn和ennnnnnnnnnnnnnnnnne；其中‘e’表示2'-moe糖部分，‘n’表示2'-nma糖部分，‘k’表示cet糖部分，‘d’表示2'-β-d-脱氧核糖基糖部分并且‘y’表示2'-ome糖部分。69.实施方案11.如实施方案1-9中任一项所述的寡聚化合物，其中所述经修饰的寡核苷酸具有选自以下的糖基序(5'至3')： nnnnnnnnnnnnnnnenn和nnnnnnnnnnnnnnnnen，其中‘e’表示2'-moe 糖部分并且‘n’表示2'-nma糖部分。70.实施方案12.如实施方案1-9中任一项所述的寡聚化合物，其中所述经修饰的寡核苷酸具有糖基序(5'至3')qqnqqqqqnqnnqnqqnn，其中每个‘n’表示2'-nma糖部分，并且每个‘q’独立地选自2'-o-(n,n‑ꢀ二甲基)乙酰胺糖部分、2'-o-(n-乙基)乙酰胺糖部分、2'-o-(n-丙基) 乙酰胺糖部分、2'o-(n-环丙基)乙酰胺糖部分和2'-o-(n-环丙基甲基) 乙酰胺糖部分。71.实施方案13.如实施方案1-9中任一项所述的寡聚化合物，其中所述经修饰的寡核苷酸包含至少一个经修饰的糖部分。72.实施方案14.如实施方案13所述的寡聚化合物，其中所述经修饰的寡核苷酸包含至少一个双环糖部分。73.实施方案15.如实施方案14所述的寡聚化合物，其中所述双环糖部分具有4'-2'桥，其中所述4'-2'桥选自-ch2-o-和-ch(ch3)-o。74.实施方案16.如实施方案13所述的寡聚化合物，其中所述经修饰的寡核苷酸包含至少一个非双环经修饰的糖部分。75.实施方案17.如实施方案16所述的寡聚化合物，其中所述非双环经修饰的糖部分是2'-moe糖部分、2'-nma糖部分、2'-ome糖部分或2'-f糖部分中的任一者。76.实施方案18.如实施方案13所述的寡聚化合物，其中所述经修饰的寡核苷酸包含至少一个糖替代物。77.实施方案19.如实施方案18所述的寡聚化合物，其中所述糖替代物是吗啉基、经修饰的吗啉基、pna、thp和f-hna中的任一者。78.实施方案20.如实施方案1-6和10-19中任一项所述的寡聚化合物，其中所述经修饰的寡核苷酸包含至少一个经修饰的核苷间键联。79.实施方案21.如实施方案20所述的寡聚化合物，其中所述经修饰的寡核苷酸的每个核苷间键联为经修饰的核苷间键联。80.实施方案22.如实施方案20或实施方案21所述的寡聚化合物，其中所述经修饰的核苷间键联为硫代磷酸酯核苷间键联。81.实施方案23.如实施方案1-20或22中任一项所述的寡聚化合物，其中所述经修饰的寡核苷酸包含至少一个磷酸二酯核苷间键联。82.实施方案24.如实施方案20、22或23所述的寡聚化合物，其中每个核苷间键联独立地选自磷酸二酯核苷间键联和硫代磷酸酯核苷间键联。83.实施方案25.如实施方案13-19中任一项所述的寡聚化合物，其中所述经修饰的寡核苷酸具有选自以下的核苷间键联基序(5'至3')：sososssssssssssss、soossssssssssssss、sosssosssssssssss、sosssssosssssssss、sosssssssosssssss、sssoossssssssssss、sssssssoossssssss、sssssssssoossssss和sssssssssssoossss；其中‘s’表示硫代磷酸酯核苷间键联并且‘o’表示磷酸二酯核苷间键联。84.实施方案26.如实施方案1-25中任一项所述的寡聚化合物，其中所述经修饰的寡核苷酸包含经修饰的核碱基。85.实施方案27.如实施方案26所述的寡聚化合物，其中所述经修饰的核碱基为5-甲基胞嘧啶。86.实施方案28.如实施方案1-27中任一项所述的寡聚化合物，其中所述经修饰的寡核苷酸由16、17、18、19或20个连接的核苷组成。87.实施方案29.如实施方案1-28中任一项所述的寡聚化合物，其中所述经修饰的寡核苷酸包含1个或2个非互补核碱基。88.实施方案30.如实施方案1-29中任一项所述的寡聚化合物，其中所述经修饰的寡核苷酸包含1个或2个可切割部分。89.实施方案31.如实施方案30所述的寡聚化合物，其中所述可切割部分为磷酸二酯核苷间键联。90.实施方案32.如实施方案1-31中任一项所述的寡聚化合物，所述寡聚化合物由所述经修饰的寡核苷酸组成。91.实施方案33.如实施方案1-32中任一项所述的寡聚化合物，其中所述寡聚化合物为单链寡聚化合物。92.实施方案34.一种寡聚化合物，所述寡聚化合物包含根据以下化学记法的经修饰的寡核苷酸：mcesaeomcesteotestesmcesaestesaesaestesgesmcestesgesgesmce(seqidno:21)，其中：93.a＝腺嘌呤核碱基，94.mc＝5-甲基胞嘧啶核碱基，95.g＝鸟嘌呤核碱基，96.t＝胸腺嘧啶核碱基，97.e＝2'-moe糖部分，98.s＝硫代磷酸酯核苷间键联，并且99.o＝磷酸二酯核苷间键联。100.实施方案35.一种寡聚化合物，所述寡聚化合物包含根据以下化学记法的经修饰的寡核苷酸：teotesmcesaesmcestestestesmcesaestesaesaestesgesmcestesgesgeomce(seqidno:22)，其中：101.a＝腺嘌呤核碱基，102.mc＝5-甲基胞嘧啶核碱基，103.g＝鸟嘌呤核碱基，104.t＝胸腺嘧啶核碱基，105.e＝2'-moe糖部分，106.s＝硫代磷酸酯核苷间键联，并且107.o＝磷酸二酯核苷间键联。108.实施方案36.一种寡聚化合物，所述寡聚化合物包含根据以下化学记法的经修饰的寡核苷酸：teotnsmcnsansmcnstnstnstnsmcnsanstnsansanstnsgnsmcnstnsgnsgnomce(seqidno:22)，其中：109.a＝腺嘌呤核碱基，110.mc＝5-甲基胞嘧啶核碱基，111.g＝鸟嘌呤核碱基，112.t＝胸腺嘧啶核碱基，113.e＝2'-moe糖部分，114.n＝2'-nma糖部分，115.s＝硫代磷酸酯核苷间键联，并且116.o＝磷酸二酯核苷间键联。117.实施方案37.一种寡聚化合物，所述寡聚化合物包含根据以下化学记法的经修饰的寡核苷酸：mcnsanomcnstnotnstnsmcnsanstnsansanstnsgnsmcnstnsgnsgnsmcn(seqidno:21)，其中：118.a＝腺嘌呤核碱基，119.mc＝5-甲基胞嘧啶核碱基，120.g＝鸟嘌呤核碱基，121.t＝胸腺嘧啶核碱基，122.n＝2'-nma糖部分，123.s＝硫代磷酸酯核苷间键联，并且124.o＝磷酸二酯核苷间键联。125.实施方案38.一种根据以下化学结构的经修饰的寡核苷酸：[0126][0127](seq id no:21)，或其盐。[0128]实施方案39.如实施方案38所述的经修饰的寡核苷酸，其为钠盐或钾盐。[0129]实施方案40.一种根据以下化学结构的经修饰的寡核苷酸：[0130][0131](seq id no:21)。[0132]实施方案41.一种根据以下化学结构的经修饰的寡核苷酸：[0133][0134](seq id no:22)，或其盐。[0135]实施方案42.如实施方案41所述的经修饰的寡核苷酸，其为钠盐或钾盐。[0136]实施方案43.一种根据以下化学结构的经修饰的寡核苷酸：[0137][0138](seq id no:22)。[0139]实施方案44.一种根据以下化学结构的经修饰的寡核苷酸：[0140][0141](seq id no:22)，或其盐。[0142]实施方案45.如实施方案44所述的经修饰的寡核苷酸，其为钠盐或钾盐。[0143]实施方案46.一种对应于以下化学结构的经修饰的寡核苷酸：[0144][0145](seq id no:22)。[0146]实施方案47.一种根据以下化学结构的经修饰的寡核苷酸：[0147][0148](seq id no:21)，或其盐。[0149]实施方案48.如实施方案47所述的经修饰的寡核苷酸，其为钠盐或钾盐。[0150]实施方案49.一种根据以下化学结构的经修饰的寡核苷酸：[0151][0152](seq id no:21)。[0153]实施方案50.一种药物组合物，所述药物组合物包含实施方案 1-36中任一项所述的寡聚化合物或实施方案38-49中任一项所述的经修饰的寡核苷酸和药学上可接受的稀释剂或载体。[0154]实施方案51.如实施方案50所述的药物组合物，所述药物组合物包含药学上可接受的稀释剂，并且其中所述药学上可接受的稀释剂是人工csf(acsf)或pbs。[0155]实施方案52.如实施方案51所述的药物组合物，其中所述药物组合物基本上由所述经修饰的寡核苷酸和人工csf(acsf)组成。[0156]实施方案53.如实施方案51所述的药物组合物，其中所述药物组合物基本上由所述经修饰的寡核苷酸和pbs组成。[0157]实施方案54.一种如实施方案38-49中任一项所述的经修饰的寡核苷酸的手性富集群体，其中所述群体富集包含至少一个具有特定立体化学构型的特定硫代磷酸酯核苷间键联的经修饰的寡核苷酸。[0158]实施方案55.如实施方案54所述的手性富集群体，其中所述群体富集包含至少一个具有(sp)构型的特定硫代磷酸酯核苷间键联的经修饰的寡核苷酸。[0159]实施方案56.如实施方案54所述的手性富集群体，其中所述群体富集包含至少一个具有(rp)构型的特定硫代磷酸酯核苷间键联的经修饰的寡核苷酸。[0160]实施方案57.如实施方案54所述的手性富集群体，其中所述群体富集在每个硫代磷酸酯核苷间键联处具有特定经独立选择的立体化学构型的经修饰的寡核苷酸。[0161]实施方案58.如实施方案57所述的手性富集群体，其中所述群体富集在每个硫代磷酸酯核苷间键联处具有(sp)构型的经修饰的寡核苷酸或在每个硫代磷酸酯核苷间键联处具有(rp)构型的经修饰的寡核苷酸。[0162]实施方案59.如实施方案57所述的手性富集群体，其中所述群体富集在一个特定硫代磷酸酯核苷间键联处具有(rp)构型并且在每个其余硫代磷酸酯核苷间键联处具有(sp)构型的经修饰的寡核苷酸。[0163]实施方案60.如实施方案57所述的手性富集群体，其中所述群体富集在5'至3'方向上具有呈sp、sp和rp构型的至少3个连续硫代磷酸酯核苷间键联的经修饰的寡核苷酸。[0164]实施方案61.一种如实施方案38-49中任一项所述的经修饰的寡核苷酸的群体，其中所述经修饰的寡核苷酸的所有硫代磷酸酯核苷间键联都是立构无规的。[0165]实施方案62.一种治疗与smn1或smn2相关的疾病的方法，所述方法包括向患有与smn1或smn2相关的疾病或处于发展所述疾病的风险中的受试者施用治疗有效量的实施方案50-53中任一项所述的药物组合物；以及由此治疗所述与smn1或smn2相关的疾病。[0166]实施方案63.如实施方案62所述的方法，其中所述与smn1或 smn2相关的疾病为神经退行性疾病。[0167]实施方案64.如实施方案63所述的方法，其中所述神经退行性疾病为脊髓性肌萎缩症(sma)。[0168]实施方案65.如实施方案64所述的方法，其中所述sma是i 型sma、ii型sma、iii型sma或iv型sma中的任一者。[0169]实施方案66.如实施方案64或实施方案65所述的方法，其中 sma的至少一种症状得以改善。[0170]实施方案67.如实施方案66所述的方法，其中所述症状是以下中任一者：肌肉力量降低；不能坐直、站立和/或行走或其能力降低；神经肌肉活动减少；一处或多处肌肉的电活动减少；呼吸作用降低；在没有帮助的情况下不能进食、饮水和/或呼吸或其能力降低；体重减轻或体重增加减少；和/或存活率降低。[0171]实施方案68.如实施方案62-67中任一项所述的方法，其中向中枢神经系统或全身施用所述药物组合物。[0172]实施方案69.如实施方案68所述的方法，其中向中枢神经系统并且全身施用所述药物组合物。[0173]实施方案70.如实施方案62-67中任一项所述的方法，其中以鞘内、全身、皮下或肌内中任一方式施用所述药物组合物。[0174]实施方案71.一种增加包括外显子7的smn2 rna的方法，所述方法包括将细胞、组织或器官与实施方案1-37中任一项所述的寡聚化合物、实施方案38-49中任一项所述的经修饰的寡核苷酸或实施方案50-53中任一项所述的药物组合物接触。[0175]某些寡核苷酸[0176]在某些实施方案中，本文提供了包含由连接的核苷组成的寡核苷酸的寡聚化合物。寡核苷酸可为未经修饰的寡核苷酸(rna或dna) 或者可为经修饰的寡核苷酸。相对于未经修饰的rna或dna，经修饰的寡核苷酸包含至少一种修饰。也就是说，经修饰的寡核苷酸包含至少一个经修饰的核苷(包含经修饰的糖部分和/或经修饰的核碱基) 和/或至少一个经修饰的核苷间键联。[0177]某些经修饰的核苷[0178]经修饰的核苷包含经修饰的糖部分、或经修饰的核碱基、或经修饰的糖部分和经修饰的核碱基两者。[0179]某些糖部分[0180]在某些实施方案中，经修饰的糖部分为非双环经修饰的糖部分。在某些实施方案中，经修饰的糖部分为双环或三环糖部分。在某些实施方案中，经修饰的糖部分为糖替代物。此类糖替代物可包含一个或多个对应于其他类型经修饰的糖部分的取代。[0181]在某些实施方案中，经修饰的糖部分为非双环经修饰的糖部分，其包含具有一个或多个取代基的呋喃糖基环，所述一个或多个取代基均不桥联呋喃糖基环的两个原子以形成双环结构。此类非桥联取代基可位于呋喃糖基的任何位置，包括但不限于在2'、4'和/或5'位的取代基。在某些实施方案中，非双环经修饰的糖部分的一个或多个非桥联取代基是支链的。适于非双环经修饰的糖部分的2'-取代基的实例包括但不限于：2'-f、2'-och3(“ome”或“o-甲基”)和2'-o(ch2)2och3 (“moe”或“o-甲氧基乙基”)以及2'-o-n-烷基乙酰胺，例如，2'-o-n‑ꢀ甲基乙酰胺(“nma”)、2'-o-n-二甲基乙酰胺、2'-o-n-乙基乙酰胺或 2'-o-n-丙基乙酰胺。例如，参见u.s.6,147,200,prakash等人,2003,org. lett.,5,403-6。下文示出“2'-o-n-甲基乙酰胺核苷”或“2'-nma核苷”：[0182][0183]在某些实施方案中，2'-取代基选自：卤基、烯丙基、氨基、叠氮基、sh、cn、ocn、cf3、ocf3、o-c1-c10烷氧基、o-c1-c10取代的烷氧基、o-c1-c10烷基、o-c1-c10取代的烷基、s-烷基、n(rm)-烷基、o-烯基、s-烯基、n(rm)-烯基、o-炔基、s-炔基、n(rm)-炔基、 o-烷烯基-o-烷基、炔基、烷芳基、芳烷基、o-烷芳基、o-芳烷基、 o(ch2)2sch3、o(ch2)2on(rm)(rn)或och2c(＝o)-n(rm)(rn)，其中每个rm和rn独立地为h、氨基保护基或者被取代或未被取代的c1-c10烷基，以及cook等人,u.s.6,531,584；cook等人,u.s.5,859,221；和 cook等人,u.s.6,005,087中所述的2'-取代基。这些2'-取代基的某些实施方案可进一步被一个或多个独立地选自以下的取代基取代：羟基、氨基、烷氧基、羧基、苯甲基、苯基、硝基(no2)、硫醇、硫代烷氧基、硫代烷基、卤素、烷基、芳基、烯基和炔基。适于非双环经修饰的糖部分的4'-取代基的实例包括但不限于烷氧基(例如，甲氧基)、烷基和manoharan等人,wo 2015/106128中所述者。适于非双环经修饰的糖部分的5'-取代基的实例包括但不限于：5'-甲基(r或s)、 5'-乙烯基和5'-甲氧基。在某些实施方案中，非双环经修饰的糖部分包含多于一个非桥联糖取代基，例如2'-f-5'-甲基糖部分以及migawa 等人,wo 2008/101157和rajeev等人,us2013/0203836中所述的经修饰的糖部分和经修饰的核苷。[0184]在某些实施方案中，2'-取代的非双环经修饰的核苷包含包括选自以下的非桥联2'-取代基的糖部分：f、nh2、n3、ocf3、och3、 o(ch2)3nh2、ch2ch＝ch2、och2ch＝ch2、och2ch2och3、 o(ch2)2sch3、o(ch2)2on(rm)(rn)、o(ch2)、on(ch3)2、 o(ch2)2o(ch2)2n(ch3)2和n-取代的乙酰胺(och2c(＝o)-n(rm)(rn))，其中每个rm和rn独立地为h、氨基保护基或者被取代或未被取代的 c1-c10烷基，例如och2c(＝o)-n(h)ch3(“nma”)。[0185]在某些实施方案中，2'-取代的非双环经修饰的核苷包含包括选自以下的非桥联2'-取代基的糖部分：f、ocf3、och3、och2ch2och3、 o(ch2)2sch3、o(ch2)2on(ch3)2、o(ch2)2o(ch2)2n(ch3)2和 och2c(＝o)-n(h)ch3(“nma”)。[0186]在某些实施方案中，2'-取代的非双环经修饰的核苷包含包括选自以下的非桥联2'-取代基的糖部分：f、och3、och2ch2och3和 och2c(＝o)-n(h)ch3。[0187]某些经修饰的糖部分包含取代基，其桥联呋喃糖基环的两个原子以形成第二环，从而产生双环糖部分。在某些此类实施方案中，双环糖部分在4'与2'呋喃糖环原子之间包含桥。此类4'至2'桥联糖取代基的实例包括但不限于：4'-ch2-2'、4'-(ch2)2-2'、4'-(ch2)3-2'、4'-ch2-o-2' (“lna”)、4'-ch2-s-2'、4'-(ch2)2-o-2'(“ena”)、4'-ch(ch3)-o-2'(称为“受约束乙基”或“cet”)、4'-ch2-o-ch2-2'、4'-ch2-n(r)-2'、 4'-ch(ch2och3)-o-2'(“受约束moe”或“cmoe”)和其类似物(参见例如seth等人,u.s.7,399,845；bhat等人,u.s.7,569,686；swayze等人, u.s.7,741,457和swayze等人,u.s.8,022,193)、4'-c(ch3)(ch3)-o-2' 和其类似物(参见例如seth等人,u.s.8,278,283)、4'-ch2-n(och3)-2' 和其类似物(参见例如prakash等人,u.s.8,278,425)、 4'-ch2-o-n(ch3)-2'(参见例如allerson等人,u.s.7,696,345和 allerson等人,u.s.8,124,745)、4'-ch2-c(h)(ch3)-2'(参见例如zhou 等人,j.org.chem.,2009,74,118-134)、4'-ch2-c(＝ch2)-2'和其类似物 (参见例如seth等人,u.s.8,278,426)、4'-c(rarb)-n(r)-o-2'、4'-c(rarb)-o-n(r)-2'、4'-ch2-o-n(r)-2'和4'-ch2-n(r)-o-2'，其中每个r、ra和rb独立地为h、保护基或c1-c12烷基(参见例如imanishi 等人,u.s.7,427,672)。[0188]在某些实施方案中，此类4'至2'桥独立地包含1至4个独立地选自以下的连接的基团：-[c(ra)(rb)]n-、-[c(ra)(rb)]n-o-、-c(ra)＝c(rb)-、ꢀ‑c(ra)＝n-、-c(＝nra)-、-c(＝o)-、-c(＝s)-、-o-、-si(ra)2-、-s(＝o)x‑ꢀ和-n(ra)-；[0189]其中：[0190]x为0、1或2；[0191]n为1、2、3或4；[0192]每个ra和rb独立地为h、保护基、羟基、c1-c12烷基、被取代的c1-c12烷基、c2-c12烯基、被取代的c2-c12烯基、c2-c12炔基、被取代的c2-c12炔基、c5-c20芳基、被取代的c5-c20芳基、杂环基团、被取代的杂环基团、杂芳基、被取代的杂芳基、c5-c7脂环族基团、被取代的c5-c7脂环族基团、卤素、oj1、nj1j2、sj1、n3、cooj1、酰基(c(＝o)-h)、被取代的酰基、cn、磺酰基(s(＝o)2-j1)或亚砜基 (sulfoxyl)(s(＝o)-j1)；并且[0193]每个j1和j2独立地为h、c1-c12烷基、被取代的c1-c12烷基、 c2-c12烯基、被取代的c2-c12烯基、c2-c12炔基、被取代的c2-c12炔基、c5-c20芳基、被取代的c5-c20芳基、酰基(c(＝o)-h)、被取代的酰基、杂环基团、被取代的杂环基团、c1-c12氨基烷基、被取代的c1-c12氨基烷基或保护基。[0194]其他双环糖部分是本领域中已知的，参见例如：freier等人, nucleic acids research,1997,25(22),4429-4443；albaek等人,j.org. chem.,2006,71,7731-7740；singh等人,chem.commun.,1998,4, 455-456；koshkin等人,tetrahedron,1998,54,3607-3630；kumar等人,bioorg.med.chem.lett.,1998,8,2219-2222；singh等人,j.org. chem.,1998,63,10035-10039；srivastava等人,j.am.chem.soc.,2007, 129,8362-8379；wengel等人,u.s.7,053,207；imanishi等人,u.s. 6,268,490；imanishi等人.u.s.6,770,748；imanishi等人,u.s. re44,779；wengel等人,u.s.6,794,499；wengel等人,u.s.6,670,461； wengel等人,u.s.7,034,133；wengel等人,u.s.8,080,644；wengel 等人,u.s.8,034,909；wengel等人,u.s.8,153,365；wengel等人,u.s. 7,572,582；和ramasamy等人,u.s.6,525,191；torsten等人,wo2004/106356；wengel等人,wo 1999/014226；seth等人,wo2007/134181；seth等人,u.s.7,547,684；seth等人,u.s.7,666,854； seth等人,u.s.8,088,746；seth等人,u.s.7,750,131；seth等人,u.s. 8,030,467；seth等人,u.s.8,268,980；seth等人,u.s.8,546,556；seth 等人,u.s.8,530,640；migawa等人,u.s.9,012,421；seth等人,u.s. 8,501,805；和allerson等人,美国专利公开第us2008/0039618号和 migawa等人,美国专利公开第us2015/0191727号。[0195]在某些实施方案中，双环糖部分和并有此类双环糖部分的核苷进一步由异构构型定义。例如，lna核苷(本文所述)可呈α-l构型或β-d构型。[0196][0197]已将α-l-亚甲氧基(4'-ch2-o-2')或α-l-lna双环核苷并入寡核苷酸中，显示出反义活性(frieden等人,nucleic acids research,2003,21, 6365-6372)。在本文中，双环核苷的一般描述包括两种异构构型。除非另外指明，否则当在本文中所示例的实施方案中标识出特定双环核苷(例如lna或cet)的位置时，其呈β-d构型。[0198]在某些实施方案中，经修饰的糖部分包含一个或多个非桥联糖取代基和一个或多个桥联糖取代基(例如，5'-取代和4'-2'桥联的糖)。[0199]在某些实施方案中，经修饰的糖部分为糖替代物。在某些此类实施方案中，糖部分的氧原子被例如硫、碳或氮原子置换。在某些此类实施方案中，此类经修饰的糖部分也包含如本文所述的桥联和/或非桥联取代基。例如，某些糖替代物包含4'-硫原子和在2'位(参见例如 bhat等人,u.s.7,875,733以及bhat等人,u.s.7,939,677)和/或5'位处的取代。[0200]在某些实施方案中，糖替代物包含具有除5个原子以外的环。例如，在某些实施方案中，糖替代物包含六元四氢吡喃(“thp”)。此类四氢吡喃可被进一步修饰或取代。包含此类经修饰的四氢吡喃的核苷包括但不限于己糖醇核酸(“hna”)、anitol核酸(“ana”)、甘露醇核酸 (“mna”)(参见例如leumann,cj.bioorg.&med.chem.2002,10, 841-854)、氟hna：[0201][0202](“f-hna”，参见例如swayze等人,u.s.8,088,904；swayze等人, u.s.8,440,803；swayze等人,u.s.8,796,437；和swayze等人,u.s. 9,005,906；f-hna也可称为f-thp或3'-氟四氢吡喃)和具有下式的包含其他经修饰的thp化合物的核苷：[0203][0204]其中，独立地，对于所述经修饰的thp核苷中的每一者：[0205]bx为核碱基部分；[0206]t3和t4各自独立地为将经修饰的thp核苷连接至寡核苷酸其余部分的核苷间连接基团，或者t3和t4中的一者为将经修饰的thp核苷连接至寡核苷酸其余部分的核苷间连接基团，并且t3和t4中的另一者为h、羟基保护基、连接的缀合基团或者5'或3'-末端基团；[0207]q1、q2、q3、q4、q5、q6和q7各自独立地为h、c1-c6烷基、被取代的c1-c6烷基、c2-c6烯基、被取代的c2-c6烯基、c2-c6炔基或被取代的c2-c6炔基；并且[0208]r1和r2各自独立地选自：氢、卤素、被取代或未被取代的烷氧基、nj1j2、sj1、n3、oc(＝x)j1、oc(＝x)nj1j2、nj3c(＝x)nj1j2和cn，其中x为o、s或nj1，并且j1、j2和j3各自独立地为h或c1-c6烷基。[0209]在某些实施方案中，提供经修饰的thp核苷，其中q1、q2、q3、 q4、q5、q6和q7各自为h。在某些实施方案中，q1、q2、q3、q4、q5、 q6和q7中的至少一者不为h。在某些实施方案中，q1、q2、q3、q4、 q5、q6和q7中的至少一者为甲基。在某些实施方案中，提供经修饰的 thp核苷，其中r1和r2中的一者为f。在某些实施方案中，r1为f 并且r2为h，在某些实施方案中，r1为甲氧基并且r2为h，并且在某些实施方案中，r1为甲氧基乙氧基并且r2为h。[0210]在某些实施方案中，糖替代物包含具有多于5个原子和多于一个杂原子的环。例如，已报道包含吗啉基糖部分的核苷和其在寡核苷酸中的使用(参见例如braasch等人,biochemistry,2002,41,4503-4510和 summerton等人,u.s.5,698,685；summerton等人,u.s.5,166,315； summerton等人,u.s.5,185,444；和summerton等人,u.s.5,034,506)。如本文所用，术语“吗啉基”意指具有以下结构的糖替代物：[0211][0212]在某些实施方案中，吗啉基可例如通过相较于上述吗啉基结构添加或改变各种取代基来进行修饰。此类糖替代物在本文中称为“经修饰的吗啉基”。[0213]在某些实施方案中，糖替代物包含非环部分。包含此类非环糖替代物的核苷和寡核苷酸的实例包括但不限于：肽核酸(“pna”)、非环丁基核酸(参见例如kumar等人,org.biomol.chem.,2013,11, 5853-5865)以及manoharan等人,wo2011/133876中所述的核苷和寡核苷酸。[0214]许多其他双环和三环糖和糖替代物环系是可用于经修饰核苷的技术中已知的。[0215]某些经修饰的核碱基[0216]在某些实施方案中，经修饰的寡核苷酸包含一个或多个包含未经修饰的核碱基的核苷。在某些实施方案中，经修饰的寡核苷酸包含一个或多个包含经修饰的核碱基的核苷。在某些实施方案中，经修饰的寡核苷酸包含一个或多个不包含核碱基的核苷，称为无碱基核苷。[0217]在某些实施方案中，经修饰的核碱基选自：5-取代的嘧啶、6-氮杂嘧啶、烷基或炔基取代的嘧啶、烷基取代的嘌呤以及n-2、n-6和 o-6取代的嘌呤。在某些实施方案中，经修饰的核碱基选自：2-氨基丙基腺嘌呤、5-羟甲基胞嘧啶、黄嘌呤、次黄嘌呤、2-氨基腺嘌呤、 6-n-甲基鸟嘌呤、6-n-甲基腺嘌呤、2-丙基腺嘌呤、2-硫代尿嘧啶、 2-硫代胸腺嘧啶和2-硫代胞嘧啶、5-丙炔基(-c≡c-ch3)尿嘧啶、5-丙炔基胞嘧啶、6-偶氮尿嘧啶、6-偶氮胞嘧啶、6-偶氮胸腺嘧啶、5-核糖基尿嘧啶(假尿嘧啶)、4-硫代尿嘧啶；8-卤基、8-氨基、8-硫醇、8‑ꢀ硫烷基、8-羟基、8-氮杂和其他8-取代的嘌呤；5-卤基、特别是5-溴、 5-三氟甲基、5-卤尿嘧啶和5-卤胞嘧啶；7-甲基鸟嘌呤、7-甲基腺嘌呤、2-f-腺嘌呤、2-氨基腺嘌呤、7-脱氮鸟嘌呤、7-脱氮腺嘌呤、3‑ꢀ脱氮鸟嘌呤、3-脱氮腺嘌呤、6-n-苯甲酰基腺嘌呤、2-n-异丁酰基鸟嘌呤、4-n-苯甲酰基胞嘧啶、4-n-苯甲酰基尿嘧啶、5-甲基4-n-苯甲酰基胞嘧啶、5-甲基4-n-苯甲酰基尿嘧啶、通用碱基、疏水碱基、混杂碱基、尺寸扩大的碱基和氟化碱基。其他经修饰的核碱基包括三环嘧啶，例如1,3-二氮杂吩噁嗪-2-酮、1,3-二氮杂吩噻嗪-2-酮和9-(2‑ꢀ氨基乙氧基)-1,3-二氮杂吩噁嗪-2-酮(g-钳)。经修饰的核碱基也可包括其中嘌呤或嘧啶碱基被其他杂环置换的核碱基，例如7-脱氮-腺嘌呤、 7-脱氮鸟嘌呤、2-氨基吡啶和2-吡啶酮。其他核碱基包括以下所公开者：merigan等人,u.s.3,687,808；the concise encyclopedia of polymerscience and engineering,kroschwitz,j.i.编,john wiley&sons,1990, 858-859；englisch等人,angewandte chemie,international edition,1991, 30,613；sanghvi,y.s.,第15章,antisense research and applications, crooke,s.t.和lebleu,b.编,crc press,1993,273-288；以及第6和15 章,antisense drug technology,crooke s.t.编,crc press,2008, 163-166和442-443。[0218]教导某些上文所说明的经修饰的核碱基以及其他经修饰的核碱基的制备的公开包括但不限于：manoharan等人,us2003/0158403； manoharan等人,us2003/0175906；dinh等人,u.s.4,845,205； spielvogel等人,u.s.5,130,302；rogers等人,u.s.5,134,066； bischofberger等人,u.s.5,175,273；urdea等人,u.s.5,367,066；benner 等人,u.s.5,432,272；matteucci等人,u.s.5,434,257；gmeiner等人, u.s.5,457,187；cook等人,u.s.5,459,255；froehler等人,u.s. 5,484,908；matteucci等人,u.s.5,502,177；hawkins等人,u.s. 5,525,711；haralambidis等人,u.s.5,552,540；cook等人,u.s. 5,587,469；froehler等人,u.s.5,594,121；switzer等人,u.s.5,596,091； cook等人,u.s.5,614,617；froehler等人,u.s.5,645,985；cook等人, u.s.5,681,941；cook等人,u.s.5,811,534；cook等人,u.s.5,750,692； cook等人,u.s.5,948,903；cook等人,u.s.5,587,470；cook等人,u.s. 5,457,191；matteucci等人,u.s.5,763,588；froehler等人,u.s. 5,830,653；cook等人,u.s.5,808,027；cook等人,6,166,199；以及 matteucci等人,u.s.6,005,096。[0219]某些经修饰的核苷间键联[0220]在某些实施方案中，经修饰的寡核苷酸的核苷可使用任何核苷间键联连接在一起。通过是否存在磷原子来定义核苷间连接基团的两种主要类别。代表性含磷核苷间键联包括但不限于：磷酸二酯，其含有磷酸二酯键(p(o2)＝o)(也称为未经修饰或天然存在的键联)；磷酸三酯；甲基膦酸酯；甲氧基丙基膦酸酯(“mop”)；氨基磷酸酯；甲磺酰氨基磷酸酯；硫代磷酸酯(p(o2)＝s)和二硫代磷酸酯(hs-p＝s)。代表性的不含磷核苷间连接基团包括但不限于：亚甲基甲基亚氨基 (-ch2-n(ch3)-o-ch2-)；硫代二酯；硫羰基氨基甲酸酯 (-o-c(＝o)(nh)-s-)；硅氧烷(-o-sih2-o-)；和n,n'-二甲基肼 (-ch2-n(ch3)-n(ch3)-)。与天然存在的磷酸酯键联相比，经修饰的核苷间键联可用于改变(通常增加)寡核苷酸的核酸酶抗性。在某些实施方案中，可将具有手性原子的核苷间键联制备成外消旋混合物或分开的对映异构体。含磷和不含磷核苷间键联的制备方法是本领域技术人员众所周知的。[0221]具有手性中心的代表性核苷间键联包括但不限于烷基膦酸酯和硫代磷酸酯。可将包含具有手性中心的核苷间键联的经修饰的寡核苷酸制备成包含立构无规核苷间键联的经修饰的寡核苷酸的群体，或包含呈特定立体化学构型的硫代磷酸酯核苷间键联的经修饰的寡核苷酸的群体。在某些实施方案中，经修饰的寡核苷酸的群体包含其中所有硫代磷酸酯核苷间键联都是立构无规的硫代磷酸酯核苷间键联。此类经修饰的寡核苷酸可使用使得随机选择每个硫代磷酸酯核苷间键联的立体化学构型的合成方法来生成。尽管如此，如本领域技术人员充分了解的，每个个别寡核苷酸分子的每个个别硫代磷酸酯具有确定的立体构型。在某些实施方案中，经修饰的寡核苷酸的群体富集了包含呈特定独立选择的立体化学构型的一个或多个特定硫代磷酸酯核苷间键联的经修饰的寡核苷酸。在某些实施方案中，特定构型的特定硫代磷酸酯核苷间键联存在于群体中至少65％的分子中。在某些实施方案中，特定构型的特定硫代磷酸酯核苷间键联存在于群体中至少 70％的分子中。在某些实施方案中，特定构型的特定硫代磷酸酯核苷间键联存在于群体中至少80％的分子中。在某些实施方案中，特定构型的特定硫代磷酸酯核苷间键联存在于群体中至少90％的分子中。在某些实施方案中，特定构型的特定硫代磷酸酯核苷间键联存在于群体中至少99％的分子中。经修饰的寡核苷酸的此类手性富集群体可使用本领域中已知的合成方法，例如oka等人,jacs,2003,125,8307； wan等人,nuc.acid.res.,2014,42,13456和wo 2017/015555中所述的方法生成。在某些实施方案中，经修饰的寡核苷酸的群体富集了具有至少一个呈(sp)构型的所指示硫代磷酸酯的经修饰的寡核苷酸。在某些实施方案中，经修饰的寡核苷酸的群体富集了具有至少一个呈 (rp)构型的硫代磷酸酯的经修饰的寡核苷酸。在某些实施方案中，包含(rp)和/或(sp)硫代磷酸酯的经修饰的寡核苷酸分别包含下式中的一者或多者，其中“b”指示核碱基：[0222][0223]除非另外指出，否则本文所述的经修饰的寡核苷酸的手性核苷间键联可为立构无规的或呈特定立体化学构型。[0224]在某些实施方案中，经修饰的寡核苷酸包含核苷间基序(5'至3') sooosssssssssssssss。在某些实施方案中，经修饰的寡核苷酸的特定立体化学构型为(5'至3')sp-o-o-o-sp-sp-sp-rp-sp-sp-rp-sp-sp-sp-sp-spꢀ‑sp-sp-sp或sp-o-o-o-sp-sp-sp-rp-sp-sp-sp-sp-sp-sp-sp-sp-sp-sp-sp；其中每个‘sp’表示呈s构型的硫代磷酸酯核苷间键联；rp表示呈r 构型的硫代磷酸酯核苷间键联；并且‘o’表示磷酸二酯核苷间键联。[0225]中性核苷间键联包括但不限于磷酸三酯、甲基膦酸酯、mmi (3'-ch2-n(ch3)-o-5')、酰胺-3(3'-ch2-c(＝o)-n(h)-5')、酰胺-4 (3'-ch2-n(h)-c(＝o)-5')、甲缩醛(3'-o-ch2-o-5')、甲氧基丙基和硫代甲缩醛(3'-s-ch2-o-5')。其他中性核苷间键联包括非离子键联，其包含硅氧烷(二烷基硅氧烷)、羧酸酯、羧酰胺、硫化物、磺酸酯和酰胺(参见例如carbohydrate modifications in antisense research；y.s.sanghvi 和p.d.cook编,acs symposium series 580；第3章和第4章,40-65)。其他中性核苷间键联包括包含混合的n、o、s和ch2组成部分的非离子键联。[0226]在某些实施方案中，经修饰的核苷间键联是通过引用并入本文的 wo 2021/030778中所述那些中的任一者。[0227]某些基序[0228]在某些实施方案中，经修饰的寡核苷酸包含一个或多个包含经修饰的糖部分的经修饰的核苷。在某些实施方案中，经修饰的寡核苷酸包含一个或多个包含经修饰的核碱基的经修饰的核苷。在某些实施方案中，经修饰的寡核苷酸包含一个或多个经修饰的核苷间键联。在此类实施方案中，经修饰的寡核苷酸的经修饰、未经修饰和经不同修饰的糖部分、核碱基和/或核苷间键联限定模式或基序。在某些实施方案中，糖部分、核碱基和核苷间键联的模式各自彼此独立。因此，经修饰的寡核苷酸和通过其糖基序、核碱基基序和/或核苷间键联基序来描述(如本文所用，核碱基基序描述与核碱基的序列无关的对核碱基的修饰)。[0229]某些糖基序[0230]在某些实施方案中，寡核苷酸包含以限定模式或糖基序沿寡核苷酸或其部分排列的一种或多种类型的经修饰的糖和/或未经修饰的糖部分。在某些情况下，此类糖基序包括但不限于本文所讨论的任何糖修饰。[0231]在某些实施方案中，经修饰的寡核苷酸具有间隔体(gapmer)基序，其由两个外部区域或“侧翼”和中央或内部区域或“间隙”限定。间隔体基序的三个区(5'-侧翼、间隙和3'-侧翼)形成核苷的连续序列，其中每个侧翼的核苷的至少一些糖部分不同于间隙的核苷的至少一些糖部分。具体来说，每个侧翼中最接近间隙的核苷(5'-侧翼的最3'端核苷和3'-侧翼的最5'端核苷)的至少糖部分与相邻间隙核苷的糖部分不同，因此限定侧翼与间隙之间的边界(即，侧翼/间隙接点)。在某些实施方案中，间隙内的糖部分彼此相同。在某些实施方案中，间隙包括一个或多个核苷，其糖部分与间隙的一个或多个其他核苷的糖部分不同。在某些实施方案中，两个侧翼的糖基序彼此相同(对称间隔体)。在某些实施方案中，5'-侧翼的糖基序与3'-侧翼的糖基序不同(不对称间隔体)。[0232]在某些实施方案中，间隔体的侧翼包含1-6个核苷。在某些实施方案中，间隔体的每个侧翼的每个核苷包含经修饰的糖部分。在某些实施方案中，间隔体的每个侧翼的至少一个、至少两个、至少三个、至少四个、至少五个或至少六个核苷包含经修饰的糖部分。[0233]在某些实施方案中，间隔体的间隙包含7-12个核苷。在某些实施方案中，间隔体的间隙的每个核苷包含2-脱氧核糖基糖部分。在某些实施方案中，间隔体的间隙的至少一个核苷包含经修饰的糖部分并且每个其余核苷包含2'-脱氧核糖基糖部分。[0234]在本文中，间隔体的三个区域的长度(核苷数目)可使用记法[5'‑ꢀ侧翼中的核苷数目]-[间隙中的核苷数目]-[3'-侧翼中的核苷数目]来提供。因此，5-10-5间隔体由每个侧翼中的5个连接的核苷和间隙中的 10个连接的核苷组成。在此类命名法随后为特定修饰的情况下，所述修饰是每个侧翼的每个糖部分中的修饰并且间隙核苷包含2'-脱氧核糖基糖部分。因此，5-10-5moe间隔体由5'-侧翼中的5个连接的 2'-moe核苷、间隙中的10个连接的2'-脱氧核糖核苷和3'-侧翼中的 5个连接的2'-moe核苷组成。[0235]在某些实施方案中，经修饰的寡核苷酸的每个核苷或其一部分包含2'-取代的糖部分、双环糖部分、糖替代物或2'-脱氧核糖基糖部分。在某些实施方案中，2'-取代的糖部分选自2'-moe糖部分、2'-nma 糖部分、2'-ome糖部分和2'-f糖部分。在某些实施方案中，双环糖部分选自cet糖部分和lna糖部分。在某些实施方案中，糖替代物选自吗啉基、经修饰的吗啉基、pna、thp和f-hna。[0236]在某些实施方案中，经修饰的寡核苷酸包含至少12、至少13、至少14、至少15、至少16、至少17、至少18、至少19或至少20 个包含经修饰的糖部分的核苷。在某些实施方案中，经修饰的糖部分独立地选自2'-取代的糖部分、双环糖部分或糖替代物。在某些实施方案中，2'-取代的糖部分选自2'-moe糖部分、2'-nma糖部分、2'-ome 糖部分和2'-f糖部分。在某些实施方案中，双环糖部分选自cet糖部分和lna糖部分。在某些实施方案中，糖替代物选自吗啉基、经修饰的吗啉基、thp和f-hna。[0237]在某些实施方案中，经修饰的寡核苷酸的每个核苷均包含经修饰的糖部分(“经完全修饰的寡核苷酸”)。在某些实施方案中，经完全修饰的寡核苷酸的每个核苷包含2'-取代的糖部分、双环糖部分或糖替代物。在某些实施方案中，2'-取代的糖部分选自2'-moe糖部分、 2'-nma糖部分、2'-ome糖部分和2'-f糖部分。在某些实施方案中，双环糖部分选自cet糖部分和lna糖部分。在某些实施方案中，糖替代物选自吗啉基、经修饰的吗啉基、thp和f-hna。在某些实施方案中，经完全修饰的寡核苷酸的每个核苷均包含相同经修饰的糖部分(“经均一修饰的糖基序”)。在某些实施方案中，经均一修饰的糖基序的长度为7至20个核苷。在某些实施方案中，经均一修饰的糖基序的每个核苷包含2'-取代的糖部分、双环糖部分或糖替代物。在某些实施方案中，2'-取代的糖部分选自2'-moe糖部分、2'-nma糖部分、2'-ome糖部分和2'-f糖部分。在某些实施方案中，双环糖部分选自cet糖部分和lna糖部分。在某些实施方案中，糖替代物选自吗啉基、经修饰的吗啉基、thp和f-hna。在某些实施方案中，具有至少一个经完全修饰的糖基序的经修饰的寡核苷酸也可包含至少 1、至少2、至少3或至少4个2'-脱氧核糖核苷。[0238]某些核碱基基序[0239]在某些实施方案中，寡核苷酸包含以限定模式或基序沿寡核苷酸或其部分排列的经修饰和/或未经修饰的核碱基。在某些实施方案中，每个核碱基经修饰。在某些实施方案中，没有核碱基经修饰。在某些实施方案中，每个嘌呤或每个嘧啶经修饰。在某些实施方案中，每个腺嘌呤经修饰。在某些实施方案中，每个鸟嘌呤经修饰。在某些实施方案中，每个胸腺嘧啶经修饰。在某些实施方案中，每个尿嘧啶经修饰。在某些实施方案中，每个胞嘧啶经修饰。在某些实施方案中，经修饰的寡核苷酸中一些或所有嘧啶核碱基为5-甲基胞嘧啶。在某些实施方案中，所有胞嘧啶核碱基为5-甲基胞嘧啶，并且经修饰的寡核苷酸的所有其他核碱基均为未经修饰的核碱基。[0240]在某些实施方案中，经修饰的寡核苷酸包含经修饰的核碱基的嵌段。在某些此类实施方案中，嵌段在寡核苷酸的3'端处。在某些实施方案中，嵌段在寡核苷酸的3'端的3个核苷内。在某些实施方案中，嵌段在寡核苷酸的5'端处。在某些实施方案中，嵌段在寡核苷酸的5' 端的3个核苷内。[0241]在某些实施方案中，具有间隔体基序的寡核苷酸包含包括经修饰的核碱基的核苷。在某些此等实施方案中，一个包含经修饰的核碱基的核苷在具有间隔体基序的寡核苷酸的中央间隙中。在某些此等实施方案中，核苷的糖部分为2'-脱氧核糖基糖部分。在某些实施方案中，经修饰的核碱基选自：2-硫代嘧啶和5-丙炔嘧啶。[0242]某些核苷间键联基序[0243]在某些实施方案中，寡核苷酸包含以限定模式或基序沿寡核苷酸或其部分排列的经修饰和/或未经修饰的核苷间键联。在某些实施方案中，每个核苷间连接基团为磷酸二酯核苷间键联。在某些实施方案中，经修饰的寡核苷酸的每个核苷间键联为硫代磷酸酯核苷间键联。在某些实施方案中，经修饰的寡核苷酸的每个核苷间键联独立地选自硫代磷酸酯核苷间键联和磷酸二酯核苷间键联。在某些实施方案中，每个硫代磷酸酯核苷间键联独立地选自立构无规硫代磷酸酯、(sp)硫代磷酸酯和(rp)硫代磷酸酯。在某些实施方案中，经修饰的寡核苷酸的糖基序为间隔体并且间隙内的核苷间键联全部经修饰。在某些此类实施方案中，侧翼中一些或所有核苷间键为未经修饰的磷酸二酯核苷间键联。在某些实施方案中，末端核苷间键联经修饰。在某些实施方案中，经修饰的寡核苷酸的糖基序为间隔体，并且核苷间键联基序在至少一个侧翼中包含至少一个磷酸二酯核苷间键联，其中所述至少一个磷酸二酯核苷间键联不为末端核苷间键联，并且其余核苷间键联为硫代磷酸酯核苷间键联。在某些此类实施方案中，所有硫代磷酸酯核苷间键联都是立构无规的。在某些实施方案中，侧翼中所有硫代磷酸酯核苷间键联均为(sp)硫代磷酸酯，并且间隙包含至少一个sp,sp,rp 基序。在某些实施方案中，经修饰的寡核苷酸的群体富集了包含此类核苷间键联基序的经修饰的寡核苷酸。在某些实施方案中，一个或多个核苷间键联为甲磺酰氨基磷酸酯核苷间键联。在某些实施方案中，每个核苷间键联独立地选自磷酸二酯核苷间键联、硫代磷酸酯核苷间键联和甲磺酰氨基磷酸酯核苷间键联。在某些实施方案中，每个核苷间键联独立地选自硫代磷酸酯核苷间键联和甲磺酰氨基磷酸酯核苷间键联。在某些实施方案中，一个或多个核苷间键联为甲氧基丙基膦酸酯核苷间键联。在某些实施方案中，每个核苷间键联独立地选自磷酸二酯核苷间键联、硫代磷酸酯核苷间键联和甲氧基丙基膦酸酯核苷间键联。在某些实施方案中，每个核苷间键联独立地选自硫代磷酸酯核苷间键联和甲氧基丙基膦酸酯核苷间键联。[0244]在某些实施方案中，经修饰的寡核苷酸包含至少1、至少2、至少3、至少4、至少5、至少6、至少7、至少8、至少9、至少10、至少11、至少12、至少13、至少14、至少15、至少16、至少17、至少18或至少19个磷酸二酯核苷间键联。在某些实施方案中，经修饰的寡核苷酸包含至少1、至少2、至少3、至少4、至少5、至少6、至少7、至少8、至少9、至少10、至少11、至少12、至少13、至少14、至少15、至少16、至少17、至少18或至少19个硫代磷酸酯核苷间键联。在某些实施方案中，经修饰的寡核苷酸包含至少1、至少2、至少3、至少4或至少5个磷酸二酯核苷间键联，并且其余核苷间键联为硫代磷酸酯核苷间键联。[0245]某些长度[0246]有可能在不消除活性的情况下增加或减小寡核苷酸的长度。例如，在woolf等人,proc.natl.acad.sci.usa,1992,89,7305-7309, 1992)中，测试了一系列长度为13-25个核碱基的寡核苷酸在卵母细胞注入模型中诱导靶核酸切割的能力。长度为25个核碱基并且在寡核苷酸末端附近具有8或11个错配碱基的寡核苷酸能够引导靶核酸的特异性切割，不过程度比不含错配的寡核苷酸低。类似地，使用13 个核碱基的寡核苷酸，包括具有1或3个错配的那些寡核苷酸实现靶特异性切割。[0247]在某些实施方案中，寡核苷酸(包括经修饰的寡核苷酸)可具有多种长度范围中的任一者。在某些实施方案中，寡核苷酸由x至y个连接的核苷组成，其中x表示范围内的最少核苷数目并且y表示范围内的最大核苷数目。在某些此类实施方案中，x和y各自独立地选自8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、 22、23、24、25、26，27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、 37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49和50；条件是x≤y。例如，在某些实施方案中，寡核苷酸由12至13、12至 14、12至15、12至16、12至17、12至18、12至19、12至20、12 至21、12至22、12至23、12至24、12至25、12至26、12至27、 12至28、12至29、12至30、13至14、13至15、13至16、13至 17、13至18、13至19、13至20、13至21、13至22、13至23、13 至24、13至25、13至26、13至27、13至28、13至29、13至30、 14至15、14至16、14至17、14至18、14至19、14至20、14至 21、14至22、14至23、14至24、14至25、14至26、14至27、14 至28、14至29、14至30、15至16、15至17、15至18、15至19、 15至20、15至21、15至22、15至23、15至24、15至25、15至 26、15至27、15至28、15至29、15至30、16至17、16至18、16 至19、16至20、16至21、16至22、16至23、16至24、16至25、 16至26、16至27、16至28、16至29、16至30、17至18、17至 19、17至20、17至21、17至22、17至23、17至24、17至25、17 至26、17至27、17至28、17至29、17至30、18至19、18至20、 18至21、18至22、18至23、18至24、18至25、18至26、18至 27、18至28、18至29、18至30、19至20、19至21、19至22、19 至23、19至24、19至25、19至26、19至29、19至28、19至29、 19至30、20至21、20至22、20至23、20至24、20至25、20至26、20至27、20至28、20至29、20至30、21至22、21至23、21 至24、21至25、21至26、21至27、21至28、21至29、21至30、 22至23、22至24、22至25、22至26、22至27、22至28、22至 29、22至30、23至24、23至25、23至26、23至27、23至28、23 至29、23至30、24至25、24至26、24至27、24至28、24至29、 24至30、25至26、25至27、25至28、25至29、25至30、26至 27、26至28、26至29、26至30、27至28、27至29、27至30、28 至29、28至30或29至30个连接的核苷组成。[0248]在某些实施方案中，寡核苷酸由16个连接的核苷组成。在某些实施方案中，寡核苷酸由17个连接的核苷组成。在某些实施方案中，寡核苷酸由18个连接的核苷组成。在某些实施方案中，寡核苷酸由 19个连接的核苷组成。在某些实施方案中，寡核苷酸由20个连接的核苷组成。[0249]某些经修饰的寡核苷酸[0250]在某些实施方案中，将上述修饰(糖、核碱基、核苷间键联)并入经修饰的寡核苷酸中。在某些实施方案中，经修饰的寡核苷酸的特征在于其修饰基序和总体长度。在某些实施方案中，此类参数彼此独立。因此，除非另外指示，否则具有间隔体糖基序的寡核苷酸的每个核苷间键联可经修饰或未经修饰并且可遵循或可不遵循糖修饰的间隔体修饰模式。例如，糖间隔体的侧翼区域内的核苷间键联可彼此相同或不同，并且可与糖基序的间隙区域的核苷间键联相同或不同。同样，此类糖间隔体寡核苷酸可包含一个或多个与糖修饰的间隔体模式无关的经修饰的核碱基。除非另外指示，否则所有修饰均与核碱基序列无关。[0251]某些经修饰的寡核苷酸的群体[0252]经修饰的寡核苷酸的群体(其中群体的所有经修饰的寡核苷酸具有相同分子式)可为立构无规群体或手性富集群体。立构无规群体中所有经修饰的寡核苷酸的所有手性中心都是立构无规的。在手性富集群体中，群体的经修饰的寡核苷酸中至少一个特定手性中心不是立构无规的。在某些实施方案中，手性富集群体的经修饰的寡核苷酸富集β-d核糖基糖部分，并且所有硫代磷酸酯核苷间键联都是立构无规的。在某些实施方案中，手性富集群体的经修饰的寡核苷酸富集β-d 核糖基糖部分和至少一个呈特定立体化学构型的特定硫代磷酸酯核苷间键联。[0253]核碱基序列[0254]在某些实施方案中，通过核碱基序列进一步描述寡核苷酸(未经修饰或经修饰的寡核苷酸)。在某些实施方案中，寡核苷酸的核碱基序列与第二寡核苷酸或经鉴定的参考核酸(例如靶核酸)互补。在某些此类实施方案中，寡核苷酸的一部分的核碱基序列与第二寡核苷酸或经鉴定的参考核酸(例如靶核酸)互补。在某些实施方案中，寡核苷酸的一部分或整个长度的核碱基序列与第二寡核苷酸或核酸(例如靶核酸)至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或100％互补。[0255]某些寡聚化合物[0256]在某些实施方案中，本文提供了寡聚化合物，其由寡核苷酸(经修饰或未经修饰)和任选地一个或多个缀合基团和/或末端基团组成。缀合基团由一个或多个缀合部分和将缀合部分连接至寡核苷酸的缀合接头组成。缀合基团可连接至寡核苷酸的任一端或两端和/或任何内部位置处。在某些实施方案中，缀合基团连接至经修饰的寡核苷酸的核苷的2'位。在某些实施方案中，连接至寡核苷酸的任一端或两端的缀合基团为末端基团。在某些此类实施方案中，缀合基团或末端基团连接于寡核苷酸的3'端和/或5'端。在某些此类实施方案中，缀合基团(或末端基团)连接于寡核苷酸的3'端。在某些实施方案中，缀合基团连接于寡核苷酸的3'端附近。在某些实施方案中，缀合基团(或末端基团)连接于寡核苷酸的5'端。在某些实施方案中，缀合基团连接于寡核苷酸的5'端附近。[0257]末端基团的实例包括但不限于缀合基团、加帽基团、磷酸酯部分、保护基、无碱基核苷、经修饰或未经修饰的核苷和两个或更多个独立地经修饰或未经修饰的核苷。[0258]某些缀合基团[0259]在某些实施方案中，寡核苷酸共价连接至一个或多个缀合基团。在某些实施方案中，缀合基团修饰连接的寡核苷酸的一种或多种特性，包括但不限于药效学、药物动力学、稳定性、结合、吸收、组织分布、细胞分布、细胞摄取、电荷和清除。在某些实施方案中，缀合基团在连接的寡核苷酸上赋予新特性，例如，能够检测寡核苷酸的荧光团或报告基团。先前已描述某些缀合基团和缀合部分，例如：胆固醇部分(letsinger等人,proc.natl.acad.sci.usa,1989,86, 6553-6556)；胆酸(manoharan等人,bioorg.med.chem.lett.,1994,4, 1053-1060)；硫醚，例如己基-s-三苯甲基硫醇(manoharan等人,ann. n.y.acad.sci.,1992,660,306-309；manoharan等人,bioorg.med. chem.lett.,1993,3,2765-2770)；硫胆固醇(oberhauser等人,nucl. acids res.,1992,20,533-538)；脂肪族链，例如十二烷-二醇或十一烷基残基(saison-behmoaras等人,embo j.,1991,10,1111-1118； kabanov等人,febs lett.,1990,259,327-330；svinarchuk等人, biochimie,1993,75,49-54)；磷脂，例如二-十六烷基-外消旋-甘油或 1,2-二-o-十六烷基-外消旋-甘油-3-h-膦酸三乙基-铵(manoharan等人, tetrahedron lett.,1995,36,3651-3654；shea等人,nucl.acids res., 1990,18,3777-3783)；聚胺或聚乙二醇链(manoharan等人,nucleosides &nucleotides,1995,14,969-973)或金刚烷乙酸棕榈酰基部分(mishra 等人,biochim.biophys.acta,1995,1264,229-237)；十八烷基胺或己氨基-羰基-羟胆固醇部分(crooke等人,j.pharmacol.exp.ther.,1996, 277,923-937)；生育酚基团(nishina等人,molecular therapy nucleicacids,2015,4,e220；和nishina等人,molecular therapy,2008,16, 734-740)或galnac簇(例如wo2014/179620)。[0260]缀合部分[0261]缀合部分包括但不限于嵌插物、报告分子、聚胺、聚酰胺、肽、碳水化合物、维生素部分、聚乙二醇、硫醚、聚醚、胆固醇、硫胆固醇、胆酸部分、叶酸盐、脂质、亲脂基团、磷脂、生物素、吩嗪、菲啶、蒽醌、金刚烷、吖啶、荧光素、罗丹明、香豆素、荧光团和染料。[0262]在某些实施方案中，缀合部分包含活性原料药，例如阿司匹林 (aspirin)、华法林(warfarin)、苯基保泰松(phenylbutazone)、布洛芬 (ibuprofen)、舒洛芬(suprofen)、芬布芬(fen-bufen)、酮洛芬(ketoprofen)、 (s)-(+)-普拉洛芬(pranoprofen)、卡洛芬(carprofen)、丹磺酰肌胺酸 (dansylsarcosine)、2,3,5-三碘苯甲酸、芬戈莫德(fingolimod)、氟灭酸、亚叶酸、苯并噻二嗪、氯噻嗪、二氮呯、吲哚美辛(indo-methicin)、巴比妥酸盐(barbiturate)、头孢菌素(cephalosporin)、磺胺药、抗糖尿病药、抗细菌剂或抗生素。[0263]缀合接头[0264]缀合部分通过缀合接头连接至寡核苷酸。在某些寡聚化合物中，缀合接头是单化学键(即，缀合部分通过单键直接连接至寡核苷酸)。在某些寡聚化合物中，缀合部分经由包含一个或多个缀合接头部分的更复杂缀合接头连接至寡核苷酸，所述一个或多个缀合接头部分是构成缀合接头的次单元。在某些实施方案中，缀合接头包含链结构(例如烃基链)或重复单元(例如乙二醇、核苷或氨基酸单元)的寡聚物。[0265]在某些实施方案中，缀合接头包含一个或多个选自以下的基团：烷基、氨基、氧代基、酰胺、二硫化物、聚乙二醇、醚、硫醚和羟氨基。在某些此类实施方案中，缀合接头包含选自以下的基团：烷基、氨基、氧代基、酰胺和醚基团。在某些实施方案中，缀合接头包含选自烷基和酰胺基团的基团。在某些实施方案中，缀合接头包含选自烷基和醚基团的基团。在某些实施方案中，缀合接头包含至少一个磷部分。在某些实施方案中，缀合接头包含至少一个磷酸酯部分。在某些实施方案中，缀合接头包括至少一个中性连接基团。[0266]在某些实施方案中，缀合接头，包括上文所述的缀合接头，是双官能连接部分，例如本领域中已知可用于将缀合基团连接至母体化合物的那些，例如本文所提供的寡核苷酸。一般来说，双官能连接部分包含至少两个官能团。选择一个官能团以结合母体化合物上的特定位点，并且选择另一官能团以结合缀合基团。用于双官能连接部分中的官能团的实例包括但不限于用于与亲核基团反应的亲电子剂和用于与亲电子基团反应的亲核剂。在某些实施方案中，双官能连接部分包含一个或多个选自以下的基团：氨基、羟基、羧酸、硫醇、烷基、烯基和炔基。[0267]缀合接头的实例包括但不限于吡咯烷、8-氨基-3,6-二氧杂辛酸 (ado)、4-(n-顺丁烯二酰亚胺基甲基)环己烷-1-甲酸丁二酰亚胺酯 (smcc)和6-氨基己酸(ahex或aha)。其他缀合接头包括但不限于被取代或未被取代的c1-c10烷基、被取代或未被取代的c2-c10烯基或被取代或未被取代的c2-c10炔基，其中优选取代基的非限制性列表包括羟基、氨基、烷氧基、羧基、苯甲基、苯基、硝基、硫醇、硫代烷氧基、卤素、烷基、芳基、烯基和炔基。[0268]在某些实施方案中，缀合接头包含1-10个接头-核苷。在某些实施方案中，缀合接头包含2-5个接头-核苷。在某些实施方案中，缀合接头包含确切地3个接头-核苷。在某些实施方案中，缀合接头包含 tca基序。在某些实施方案中，此类接头-核苷是经修饰的核苷。在某些实施方案中，此类接头-核苷包含经修饰的糖部分。在某些实施方案中，接头-核苷未经修饰。在某些实施方案中，接头-核苷包含选自以下的任选地被保护的杂环碱基：嘌呤、被取代的嘌呤、嘧啶或被取代的嘧啶。在某些实施方案中，可切割部分是选自以下的核苷：尿嘧啶、胸腺嘧啶、胞嘧啶、4-n-苯甲酰基胞嘧啶、5-甲基胞嘧啶、4-n‑ꢀ苯甲酰基-5-甲基胞嘧啶、腺嘌呤、6-n-苯甲酰基腺嘌呤、鸟嘌呤和 2-n-异丁酰基鸟嘌呤。通常希望在寡聚化合物到达靶组织之后使其从寡聚化合物切割。因此，接头-核苷通常通过可切割键彼此连接并且与寡聚化合物的其余部分连接。在某些实施方案中，此类可切割键是磷酸二酯键。[0269]在本文中，接头-核苷不被视为寡核苷酸的一部分。因此，在寡聚化合物包含由指定数目或范围的连接的核苷组成和/或与参考核酸有指定互补性百分比的寡核苷酸和/或寡聚化合物也包含包括具有接头-核苷的缀合接头的缀合基团的实施方案中，那些接头-核苷不计入寡核苷酸的长度并且不用于确定寡核苷酸对于参考核酸的互补性百分比。例如，寡聚化合物可包含(1)由8-30个核苷组成的经修饰的寡核苷酸和(2)包含1-10个与经修饰的寡核苷酸的核苷连续的接头-核苷的缀合基团。此类寡聚化合物中连续的连接核苷的总数多于30个。或者，寡聚化合物可包含由8-30个核苷组成并且无缀合基团的经修饰的寡核苷酸。此类寡聚化合物中连续的连接核苷的总数不多于30 个。除非另外指示，否则缀合接头包含不多于10个接头-核苷。在某些实施方案中，缀合接头包含不多于5个接头-核苷。在某些实施方案中，缀合接头包含不多于3个接头-核苷。在某些实施方案中，缀合接头包含不多于2个接头-核苷。在某些实施方案中，缀合接头包含不多于1个接头-核苷。[0270]在某些实施方案中，希望从寡核苷酸切割缀合基团。例如，在某些情况下，包含特定缀合部分的寡聚化合物可被特定细胞类型更好地摄取，但一旦寡聚化合物经摄取，则希望将缀合基团切割以释放未缀合或母体寡核苷酸。因此，某些缀合接头可包含一个或多个可切割部分。在某些实施方案中，可切割部分是可切割键。在某些实施方案中，可切割部分是包含至少一个可切割键的一组原子。在某些实施方案中，可切割部分包含具有一个、两个、三个、四个或多于四个可切割键的一组原子。在某些实施方案中，可切割部分在细胞或亚细胞区室如溶酶体内被选择性切割。在某些实施方案中，可切割部分通过例如核酸酶的内源性酶选择性切割。[0271]在某些实施方案中，可切割键选自：酰胺、酯、醚、磷酸二酯的一个或两个酯、磷酸酯、氨基甲酸酯或二硫化物。在某些实施方案中，可切割键是磷酸二酯的一个或两个酯。在某些实施方案中，可切割部分包含磷酸酯或磷酸二酯。在某些实施方案中，可切割部分是寡核苷酸与缀合部分或缀合基团之间的磷酸酯键联。[0272]在某些实施方案中，可切割部分包含一个或多个接头-核苷或由其组成。在某些此类实施方案中，所述一个或多个接头-核苷通过可切割键彼此连接和/或与寡聚化合物的其余部分连接。在某些实施方案中，此类可切割键是未经修饰的磷酸二酯键。在某些实施方案中，可切割部分是2'-脱氧核糖核苷，其通过磷酸酯核苷间键联连接至寡核苷酸的3'或5'末端核苷并通过磷酸酯或硫代磷酸酯核苷间键联共价连接至缀合接头或缀合部分的其余部分。在某些此类实施方案中，可切割部分是2'-脱氧腺苷。[0273]某些末端基团[0274]在某些实施方案中，寡聚化合物包含一个或多个末端基团。在某些此类实施方案中，寡聚化合物包含经稳定化的5'-磷酸酯。经稳定化的5'-磷酸酯包括但不限于5'-膦酸酯，包括但不限于5'-乙烯基膦酸酯。在某些实施方案中，末端基团包含一个或多个无碱基核苷和/或反向核苷。在某些实施方案中，末端基团包含一个或多个2'-连接的核苷。在某些此类实施方案中，2'-连接的核苷是无碱基核苷。[0275]寡聚双链体[0276]在某些实施方案中，本文所述的寡聚化合物包含核碱基序列与靶核酸的序列互补的寡核苷酸。在某些实施方案中，寡聚化合物与第二寡聚化合物配对以形成寡聚双链体。此类寡聚双链体包含一部分与靶核酸互补的第一寡聚化合物和一部分与第一寡聚化合物互补的第二寡聚化合物。在某些实施方案中，寡聚双链体的第一寡聚化合物包含以下或由以下组成：(1)经修饰或未经修饰的寡核苷酸和任选地缀合基团和(2)第二经修饰或未经修饰的寡核苷酸和任选地缀合基团。寡聚双链体的任一种或两种寡聚化合物可包含缀合基团。寡聚双链体的每个寡聚化合物的寡核苷酸可包括非互补的悬突核苷。[0277]反义活性[0278]在某些实施方案中，寡聚化合物和寡聚双链体能够与靶核酸杂交，产生至少一种反义活性；此类寡聚化合物和寡聚双链体是反义化合物。在某些实施方案中，当反义化合物在标准细胞测定中使靶核酸的量或活性降低、调节或增加25％或更多时，其具有反义活性。在某些实施方案中，反义化合物选择性影响一种或多种靶核酸。此类反义化合物包含以下核碱基序列，其与一种或多种靶核酸杂交，产生一种或多种所需反义活性，并且不与一种或多种非靶核酸杂交，或者不以产生显著非所需反义活性的方式与一种或多种非靶核酸杂交。[0279]在某些反义活性中，反义化合物与靶核酸的杂交导致切割靶核酸的蛋白质的募集。例如，某些反义化合物导致rna酶h介导的靶核酸切割。rna酶h是使rna:dna双链体的rna链切割的细胞核酸内切酶。这种rna:dna双链体中的dna不必为未经修饰的dna。在某些实施方案中，本文提供了足够“dna样”以引发rna酶h活性的反义化合物。在某些实施方案中，在间隔体间隙中的一个或多个非 dna样核苷是容许的。[0280]在某些反义活性中，反义化合物或反义化合物的一部分被加载至 rna诱导的沉默复合物(risc)，最终导致靶核酸切割。例如，某些反义化合物通过argonaute导致靶核酸切割。加载至risc中的反义化合物为rnai化合物。rnai化合物可为双链(sirna)或单链 (ssrna)。[0281]在某些实施方案中，反义化合物与靶核酸的杂交不导致切割所述靶核酸的蛋白质的募集。在某些实施方案中，反义化合物与靶核酸的杂交导致靶核酸的剪接的改变。在某些实施方案中，反义化合物与靶核酸的杂交导致靶核酸与蛋白质或其他核酸之间的结合相互作用的抑制。在某些实施方案中，反义化合物与靶核酸的杂交导致靶核酸的翻译的改变。在某些实施方案中，反义化合物与靶核酸的杂交导致外显子包涵。在某些实施方案中，反义化合物与靶核酸的杂交导致靶核酸的量或活性增加。在某些实施方案中，与靶核酸互补的反义化合物的杂交导致剪接的改变，从而导致mrna中外显子的包涵。[0282]反义活性可直接或间接观察到。在某些实施方案中，观察或检测反义活性涉及观察或检测靶核酸或由所述靶核酸编码的蛋白质的量的变化、核酸或蛋白质的剪接变异体比率的变化和/或细胞或受试者的表型变化。[0283]某些靶核酸[0284]在某些实施方案中，寡聚化合物包含一部分与靶核酸互补的寡核苷酸或由其组成。在某些实施方案中，靶核酸是内源性rna分子。在某些实施方案中，靶核酸编码蛋白质。在某些此类实施方案中，靶核酸选自：成熟mrna和前体mrna，包括内含子、外显子和未翻译区。在某些实施方案中，靶核酸是成熟mrna。在某些实施方案中，靶核酸是前体mrna。在某些实施方案中，靶区域完全在内含子内。在某些实施方案中，靶区域跨越内含子/外显子接点。在某些实施方案中，靶区域至少50％在内含子内。[0285]与靶核酸互补/错配[0286]有可能在不消除活性的情况下引入错配碱基。例如，gautschi等人(j.natl.cancer inst.93:463-471,2001年3月)证明了与bcl-2mrna 具有100％互补性并且与bcl-xl mrna具有3个错配的寡核苷酸在体内和在体外降低bcl-2和bcl-xl的表达的能力。此外，这种寡核苷酸在体内显示了有效的抗肿瘤活性。maher和dolnick(nuc.acid.res. 16:3341-3358,1988)测试了一系列串联的14个核碱基的寡核苷酸和包含两个或三个串联寡核苷酸的序列的28个和42个核碱基的寡核苷酸分别在兔网织红细胞测定中抑制人类dhfr的翻译的能力。三个 14个核碱基的寡核苷酸各自单独地能够抑制翻译，不过与28个或42 个核碱基的寡核苷酸相比处于更适中的水平。[0287]在某些实施方案中，寡核苷酸在寡核苷酸的整个长度上与靶核酸互补。在某些实施方案中，寡核苷酸与靶核酸99％、95％、90％、85％或80％互补。在某些实施方案中，寡核苷酸在寡核苷酸的整个长度上与靶核酸至少80％互补并且一部分与靶核酸100％或完全互补。在某些实施方案中，完全互补的部分的长度为6、7、8、9、10、11、12、 13、14、15、16、17、18、19或20个核碱基。[0288]在某些实施方案中，寡核苷酸相对于靶核酸包含一个或多个错配核碱基。在某些实施方案中，错配在从寡核苷酸的5'端起的1、2、3、 4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或 20位处。[0289]smn2[0290]在某些实施方案中，寡聚化合物包含与编码smn2的靶核酸或其一部分互补的经修饰的寡核苷酸或由其组成。在某些实施方案中， smn2具有seq id no:1(genbank登录号nt_006713.14，从核苷酸19939708至19967777截短)中所示的序列。[0291]在某些实施方案中，将细胞与和seq id no:1互补的寡聚化合物接触调节细胞中smn2 rna的剪接。在某些实施方案中，将细胞与和seq id no:1互补的寡聚化合物接触增加包括外显子7的 smn2 rna的量。在某些实施方案中，将细胞与和seq id no:1互补的寡聚化合物接触增加全长smn2蛋白表达。在某些实施方案中，寡聚化合物由经修饰的寡核苷酸组成。[0292]在某些实施方案中，将受试者的细胞与和seq id no:1互补的寡聚化合物接触改善神经退行性疾病的一种或多种症状。在某些实施方案中，神经退行性疾病是sma，包括i型sma、ii型sma、iii 型sma和iv型sma。在某些实施方案中，症状是以下中任一者：肌肉力量降低；不能坐直、站立和/或行走或其能力降低；神经肌肉活动减少；一处或多处肌肉的电活动减少；呼吸作用降低；在没有帮助的情况下不能进食、饮水和/或呼吸或其能力降低；体重减轻或体重增加减少；和/或存活率降低。[0293]在某些实施方案中，当根据标准体内测定施用时，与seq id no: 1互补的寡聚化合物能够在体内使包括外显子7的smn2 rna增加至少1倍、2倍或3倍。在某些实施方案中，当根据标准体内测定施用时，与seq id no:1互补的寡聚化合物能够在体内使全长smn2 蛋白增加至少1倍、2倍或3倍。[0294]某些组织中的某些靶核酸[0295]在某些实施方案中，寡聚化合物包含一部分与靶核酸互补的寡核苷酸或由其组成，其中靶核酸在药理学相关组织中表达。在某些实施方案中，药理学相关组织是构成中枢神经系统(cns)的细胞和组织。此类组织包括脑组织，例如脊髓、皮质和冠状脑组织。[0296]某些药物组合物[0297]在某些实施方案中，本文描述了包含一种或多种寡聚化合物的药物组合物。在某些实施方案中，所述一种或多种寡聚化合物各自由经修饰的寡核苷酸组成。在某些实施方案中，药物组合物包含药学上可接受的稀释剂或载体。在某些实施方案中，药物组合物包含无菌盐水溶液和一种或多种寡聚化合物或由其组成。在某些实施方案中，无菌盐水是医药级盐水。在某些实施方案中，药物组合物包含一种或多种寡聚化合物和无菌水或由其组成。在某些实施方案中，无菌水是医药级水。在某些实施方案中，药物组合物包含一种或多种寡聚化合物和磷酸盐缓冲盐水(pbs)或由其组成。在某些实施方案中，无菌pbs是医药级pbs。在某些实施方案中，药物组合物包含一种或多种寡聚化合物和人工脑脊髓液(“人工csf”或“acsf”)或由其组成。在某些实施方案中，人工脑脊髓液为医药级。[0298]在某些实施方案中，药物组合物包含经修饰的寡核苷酸和人工脑脊髓液。在某些实施方案中，药物组合物由经修饰的寡核苷酸和人工脑脊髓液组成。在某些实施方案中，药物组合物基本上由经修饰的寡核苷酸和人工脑脊髓液组成。在某些实施方案中，人工脑脊髓液为医药级。[0299]在某些实施方案中，药物组合物包含一种或多种寡聚化合物和一种或多种赋形剂。在某些实施方案中，赋形剂选自水、盐溶液、乙醇、聚乙二醇、明胶、乳糖、淀粉酶、硬脂酸镁、滑石、硅酸、粘性石蜡、羟甲基纤维素和聚乙烯吡咯烷酮。[0300]在某些实施方案中，可将寡聚化合物与药学上可接受的活性和/ 或惰性物质混合以用于制备药物组合物或制剂。药物组合物的配制的组成和方法取决于许多标准，包括但不限于施用途径、疾病程度或待施用的剂量。[0301]在某些实施方案中，包含寡聚化合物的药物组合物涵盖寡聚化合物的任何药学上可接受的盐、寡聚化合物的酯或此类酯的盐。在某些实施方案中，包含包括一种或多种寡核苷酸的寡聚化合物的药物组合物，在向受试者(包括人类)施用时，能够提供(直接或间接)生物活性代谢物或其残余物。因此，例如，本公开也涉及寡聚化合物的药学上可接受的盐、前药、此类前药的药学上可接受的盐和其他生物等效物。合适的药学上可接受的盐包括但不限于钠盐和钾盐。在某些实施方案中，前药包含一个或多个连接至寡核苷酸的缀合基团，其中缀合基团在体内通过内源性核酸酶切割。在某些实施方案中，前药包含一个或多个连接至寡核苷酸的缀合基团，其中缀合基团在体内通过内源性核酸酶切割。[0302]在多种方法中已将脂质部分用于核酸疗法中。在某些此类方法中，将核酸(例如寡聚化合物)引入至预制脂质体或由阳离子脂质和中性脂质的混合物制成的脂质复合物(lipoplex)中。在某些方法中，在不存在中性脂质的情况下形成具有单阳离子脂质或聚阳离子脂质的 dna复合物。在某些实施方案中，选择脂质部分以增加医药剂向特定细胞或组织的分布。在某些实施方案中，选择脂质部分以增加医药剂向脂肪组织的分布。在某些实施方案中，选择脂质部分以增加医药剂向肌肉组织的分布。[0303]在某些实施方案中，药物组合物包含递送系统。递送系统的实例包括但不限于脂质体和乳液。某些递送系统可用于制备某些药物组合物，包括包含疏水性化合物的药物组合物。在某些实施方案中，使用某些有机溶剂，例如二甲亚砜。[0304]在某些实施方案中，药物组合物包含一种或多种组织特异性递送分子，其经设计以将一种或多种包含本文所提供的寡聚化合物的医药剂递送至特定组织或细胞类型。例如，在某些实施方案中，药物组合物包括用组织特异性抗体包被的脂质体。[0305]在某些实施方案中，药物组合物包含共溶剂体系。此类共溶剂体系中的某些包含例如苯甲醇、非极性表面活性剂、与水混溶的有机聚合物和水相。在某些实施方案中，此类共溶剂体系用于疏水性化合物。此类共溶剂体系的非限制性实例为vpd共溶剂体系，其为包含3％ w/v苯甲醇、8％w/v非极性表面活性剂聚山梨醇酯80tm和65％w/v 聚乙二醇300的绝对乙醇溶液。此类共溶剂体系的比例可在不显著改变其溶解度和毒性特征的情况下变化明显。此外，共溶剂组分的身份可变化：例如，可使用其他表面活性剂代替聚山梨醇酯80tm；聚乙二醇的级分大小可变化；其他生物相容性聚合物可代替聚乙二醇，例如，聚乙烯吡咯烷酮；并且其他糖或多糖可取代右旋糖。[0306]在某些实施方案中，药物组合物经制备用于口服施用。在某些实施方案中，药物组合物经制备用于经颊施用。在某些实施方案中，药物组合物经制备用于通过注射(例如静脉内、皮下、肌内、鞘内(it)、脑室内(icv)等)进行施用。在某些此类实施方案中，药物组合物包含载体并且在水溶液中配制，所述水溶液是例如水或生理学相容性缓冲液，例如汉克氏溶液(hanks's solution)、林格氏溶液(ringer's solution) 或生理盐水缓冲液。在某些实施方案中，包括其他成分(例如帮助溶解或充当防腐剂的成分)。在某些实施方案中，使用适当的液体载体、悬浮剂等制备可注射混悬液。某些注射用药物组合物以单位剂型存在于例如安瓿中或多剂量容器中。某些注射用药物组合物是在油性或水性媒介物中的混悬液、溶液或乳液，并且可含有配制剂，例如悬浮剂、稳定剂和/或分散剂。适用于注射用药物组合物的某些溶剂包括但不限于：亲脂性溶剂和脂肪油，例如芝麻油；合成脂肪酸酯，例如油酸乙酯或三酸甘油酯；和脂质体。[0307]在某些条件下，本文所公开的某些化合物充当酸。虽然此类化合物可以质子化(游离酸)形式或离子化以及与阳离子缔合(盐)的形式绘制或描述，但此等化合物的水溶液以此等形式平衡存在。例如，水溶液中寡核苷酸的磷酸酯键联以游离酸、阴离子和盐形式平衡存在。除非另外指出，否则本文所描述的化合物旨在包括所有此等形式。此外，某些寡核苷酸具有若干此等键联，其中各者是平衡的。因此，溶液中的寡核苷酸以一系列形式存在于多个位置，全部处于平衡状态。术语“寡核苷酸”旨在包括所有此类形式。绘制的结构必须描绘单一形式。然而，除非另外指出，否则此等绘图同样旨在包括对应形式。在本文中，描绘化合物的游离酸的结构后接术语“或其盐”明确地包括可为完全或部分质子化/去质子化/与阳离子缔合的所有此等形式。在某些情况下，鉴定一种或多种特定阳离子。[0308]在某些实施方案中，经修饰的寡核苷酸或寡聚化合物在含钠的水溶液中。在某些实施方案中，经修饰的寡核苷酸或寡聚化合物在含钾的水溶液中。在某些实施方案中，经修饰的寡核苷酸或寡聚化合物在 pbs中。在某些实施方案中，经修饰的寡核苷酸或寡聚化合物在水中。在某些此类实施方案中，用naoh和/或hcl调节溶液的ph值以达到所需ph值。[0309]在本文中，描述某些特定剂量。剂量可呈剂量单位形式。为清楚起见，经修饰的寡核苷酸或寡聚化合物的剂量(或剂量单位)(毫克)指示游离酸形式的经修饰的寡核苷酸或寡聚化合物的质量。如上文所描述，在水溶液中，游离酸与阴离子和盐形式平衡。然而，出于计算剂量的目的，假定经修饰的寡核苷酸或寡聚化合物以无溶剂、无乙酸钠、无水、游离酸形式存在。例如，在经修饰的寡核苷酸或寡聚化合物在包含钠的溶液(例如盐水)中的情况下，经修饰的寡核苷酸或寡聚化合物可为部分或完全去质子化的并且与na+离子缔合。然而，质子的质量仍然计入剂量的重量，而na+离子的质量不计入剂量的重量。因此，例如，10mg化合物编号1263789、化合物编号1287717、化合物编号1287745和化合物编号1358996的剂量或剂量单位等于重10mg的完全质子化分子的数目。这等效于：10.53mg无溶剂、无乙酸钠、无水钠离子化(sodiated)化合物编号1263789；10.53mg无溶剂、无乙酸钠、无水钠离子化化合物编号1287717；10.52mg无溶剂、无乙酸钠、无水钠离子化化合物编号1287745；和10.51mg无溶剂、无乙酸钠、无水钠离子化化合物编号1358996。当寡聚化合物包含缀合基团时，在计算此等寡聚化合物的剂量时包括缀合基团的质量。如果缀合基团也具有酸，则出于计算剂量的目的，同样假定缀合基团为完全质子化的。[0310]某些组合物[0311]化合物编号：1263789[0312]在某些实施方案中，化合物编号1263789被表征为具有序列(5'至3')cactttcataatgctggc(seqidno:21)的经修饰的寡核苷酸，其中每个核苷包含2'-moe糖部分，其中核苷2至3和4至5之间的核苷间键联为磷酸二酯核苷间键联，并且核苷1至2、3至4、5至6、6至7、7至8、8至9、9至10、10至11、11至12、12至13、13至14、14至15、15至16、16至17和17至18之间的核苷间键联为硫代磷酸酯核苷间键联，并且其中每个胞嘧啶为5-甲基胞嘧啶。[0313]在某些实施方案中，化合物编号1263789由以下化学记法表示(5'至3')：mcesaeomcesteotestesmcesaestesaesaestesgesmcestesgesgesmce(seqidno:21)，[0314]其中，[0315]a＝腺嘌呤核碱基，[0316]mc＝5-甲基胞嘧啶核碱基，[0317]g＝鸟嘌呤核碱基，[0318]t＝胸腺嘧啶核碱基，[0319]e＝2'-moe糖部分，[0320]s＝硫代磷酸酯核苷间键联，并且[0321]o＝磷酸二酯核苷间键联。[0322]在某些实施方案中，化合物编号1263789由以下化学结构表示：[0323][0324](seqidno:21)。[0325]结构1.化合物编号1263789[0326]在某些实施方案中，化合物编号1263789的钠盐由以下化学结构表示：[0327][0328](seqidno:21)。[0329]结构2.化合物编号1263789的钠盐[0330]化合物编号：1287717[0331]在某些实施方案中，化合物编号1287717被表征为具有序列(5'至3')ttcactttcataatgctggc(seqidno:22)的经修饰的寡核苷酸，其中每个核苷包含2'-moe糖部分，其中核苷1至2和19至20之间的核苷间键联为磷酸二酯核苷间键联，并且核苷2至3、3至4、4至5、5至6、6至7、7至8、8至9、9至10、10至11、11至12、12至13、13至14、14至15、15至16、16至17、17至18和18至19之间的核苷间键联为硫代磷酸酯核苷间键联，并且其中每个胞嘧啶为5-甲基胞嘧啶。[0332]在某些实施方案中，化合物编号1287717由以下化学记法表示(5'至3')：[0333]teotesmcesaesmcestestestesmcesaestesaesaestesgesmcestesgesgeomce(seqidno:22)[0334]其中，[0335]a＝腺嘌呤核碱基，[0336]mc＝5-甲基胞嘧啶核碱基，[0337]g＝鸟嘌呤核碱基，[0338]t＝胸腺嘧啶核碱基，[0339]e＝2'-moe糖部分，[0340]s＝硫代磷酸酯核苷间键联，并且[0341]o＝磷酸二酯核苷间键联。[0342]在某些实施方案中，化合物编号1287717由以下化学结构表示：[0343][0344](seq id no:22)。[0345]结构3.化合物编号1287717[0346]在某些实施方案中，化合物编号1287717的钠盐由以下化学结构表示：[0347][0348](seqidno:22)。[0349]结构4.化合物编号1287717的钠盐[0350]化合物编号：1287745[0351]在某些实施方案中，化合物编号1287745被表征为具有序列(5'至3')ttcactttcataatgctggc(seqidno:22)的经修饰的寡核苷酸，其中核苷1和20中的每一者包含2'-moe糖部分，核苷2-19中的每一者包含2'-nma糖部分，其中核苷1至2和19至20之间的核苷间键联为磷酸二酯核苷间键联，并且核苷2至3、3至4、4至5、5至6、6至7、7至8、8至9、9至10、10至11、11至12、12至13、13至14、14至15、15至16、16至17、17至18和18至19之间的核苷间键联为硫代磷酸酯核苷间键联，并且其中每个胞嘧啶为5-甲基胞嘧啶。[0352]在某些实施方案中，化合物编号1287745由以下化学记法表示(5'至3')：[0353]teotnsmcnsansmcnstnstnstnsmcnsanstnsansanstnsgnsmcnstnsgnsgnomce(seqidno:22)[0354]其中，[0355]a＝腺嘌呤核碱基，[0356]mc＝5-甲基胞嘧啶核碱基，[0357]g＝鸟嘌呤核碱基，[0358]t＝胸腺嘧啶核碱基，[0359]e＝2'-moe糖部分，[0360]n＝2'-nma糖部分，[0361]s＝硫代磷酸酯核苷间键联，并且[0362]o＝磷酸二酯核苷间键联。[0363]在某些实施方案中，化合物编号1287745由以下化学结构表示：[0364][0365](seq id no:22)。[0366]结构5.化合物编号1287745[0367]在某些实施方案中，化合物编号1287745的钠盐由以下化学结构表示：[0368][0369](seqidno:22)。[0370]结构6.化合物编号1287745的钠盐[0371]化合物编号：1358996[0372]在某些实施方案中，化合物编号1358996被表征为具有序列(5'至3')cactttcataatgctggc(seqidno:21)的经修饰的寡核苷酸，其中每个核苷包含2'-nma糖部分，其中核苷2至3和4至5之间的核苷间键联为磷酸二酯核苷间键联，并且核苷1至2、3至4、5至6、6至7、7至8、8至9、9至10、10至11、11至12、12至13、13至14、14至15、15至16、16至17和17至18之间的核苷间键联为硫代磷酸酯核苷间键联，并且其中每个胞嘧啶为5-甲基胞嘧啶。[0373]在某些实施方案中，化合物编号1358996由以下化学记法表示(5'至3')：[0374]mcnsanomcnstnotnstnsmcnsanstnsansanstnsgnsmcnstnsgnsgnsmcn(seqidno:21)[0375]其中，[0376]a＝腺嘌呤核碱基，[0377]mc＝5-甲基胞嘧啶核碱基，[0378]g＝鸟嘌呤核碱基，[0379]t＝胸腺嘧啶核碱基，[0380]n＝2'-nma糖部分，[0381]s＝硫代磷酸酯核苷间键联，并且[0382]o＝磷酸二酯核苷间键联。[0383]在某些实施方案中，化合物编号1358996由以下化学结构表示：[0384][0385](seq id no:21)。[0386]结构7.化合物编号1358996[0387]在某些实施方案中，化合物编号1358996的钠盐由以下化学结构表示：[0388][0389](seq id no:21)。[0390]结构8.化合物编号1358996的钠盐[0391]某些比较组合物[0392]在某些实施方案中，经批准用于治疗sma的(通名 nusinersen；化合物编号396443)是比较化合物(参见例如chiroboga等人,neurology,86(10):890-897,2016；finkel等人,lancet，338(10063): 3017-3026,2016；finkel等人,n.engl.j.med.,377(18):1723-1732 2017；mercuri等人,n.engl.j.med.,378(7):625-635,2018；montes 等人,muscle nerve.60(4):409-414,2019；darras等人,neurology, 92(21):e2492-e2506,2019)。先前描述于wo2010120820(其通过引用并入本文)中并且具有序列(5'至3') tcactttcataatgctgg(seq id no:23)，其中每个核苷包含 2'-moe糖部分，每个核苷间键联为硫代磷酸酯核苷间键联，并且每个胞嘧啶为5-甲基胞嘧啶。[0393]在某些实施方案中，尽管未批准用于人类治疗，但其他先前描述的化合物，包括化合物编号387954、396442、443305和819735是比较化合物。[0394]化合物编号387954先前描述于通过引用并入本文的wo 2014/179620中。化合物编号387954具有序列(5'至3') attcactttcataatgctgg(seq id no:20)，其中每个核苷包含 2'-moe糖部分，每个核苷间键联为硫代磷酸酯核苷间键联，并且每个胞嘧啶为5-甲基胞嘧啶。[0395]化合物编号396442先前描述于通过引用并入本文的wo2010/120820中。化合物编号396442具有序列(5'至3')cactttcataatgctggc(seqidno:21)，其中每个核苷包含2'-moe糖部分，每个核苷间键联为硫代磷酸酯核苷间键联，并且每个胞嘧啶为5-甲基胞嘧啶。[0396]化合物编号443305先前描述于通过引用并入本文的wo2018/014041中。化合物编号443305具有序列(5'至3')tcactttcataatgctgg(seqidno:23)，其中每个核苷包含2'-nma糖部分，每个核苷间键联为硫代磷酸酯核苷间键联，并且每个胞嘧啶为5-甲基胞嘧啶。[0397]化合物编号819735先前描述于通过引用并入本文的wo2018/014041中。化合物编号819735具有序列(5'至3')cactttcataatgctggc(seqidno:21)，其中每个核苷包含2'-nma糖部分，每个核苷间键联为硫代磷酸酯核苷间键联，并且每个胞嘧啶为5-甲基胞嘧啶。[0398]表1[0399]某些比较组合物[0400][0401]在某些实施方案中，本文所述的化合物相对于wo2007/002390、wo2010/120820、wo2015/161170和wo2018/014041中所述的化合物是优异的，因为它们展现出一种或多种改进的特性，例如效力、功效和耐受性。[0402]例如，化合物编号1263789、化合物编号1287745和化合物编号1358996各自表现出相较于化合物编号396443改进的体内效力。如实施例5中所示，化合物编号1263789、化合物编号1287745和化合物编号1358996分别实现在脊髓中13.3、8.8和7.4的ed50。相比之下，化合物编号396443实现在脊髓中22.0的ed50。因此，化合物编号1263789、化合物编号1287745和化合物编号1358996中的每一者在此测定中比化合物编号396443更有效。[0403]例如，化合物编号1263789、化合物编号1287717、化合物编号1287745和化合物编号1358996各自表现出相较于化合物编号 396443、化合物编号387954和化合物编号443305改进的3小时fob 得分。如实施例6中所示，在700μg下，化合物编号1263789、化合物编号1287717、化合物编号1287745和化合物编号1358996分别实现3小时fob得分0、3.25、1和0。相比之下，在一半剂量(350μg) 下，化合物编号396443实现3小时fob得分4.0；并且在相同剂量 (700μg)下，化合物编号387954和化合物编号443305分别实现3小时fob得分4.0和4.75。因此，化合物编号1263789、化合物编号 1287717、化合物编号1287745和化合物编号1358996的每一者在此测定中比化合物编号396443、化合物编号387954和化合物编号 443305更耐受。[0404]例如，化合物编号1263789、化合物编号1287717、化合物编号 1287745和化合物编号1358996各自表现出相较于化合物编号396442 和化合物编号819735改进的长期耐受性。如实施例7中所示，化合物编号1263789、化合物编号1287717、化合物编号1287745和化合物编号1358996显示无不良作用、无浦肯野细胞(purkinje cell)损失和小于2倍对照的皮质gfap mrna。相比之下，396442和819735各自在某些经处理的动物中表现出不良事件、浦肯野细胞损失和大于2 倍对照的皮质gfap mrna。因此，化合物编号1263789、化合物编号1287717、化合物编号1287745和化合物编号1358996的每一者在此测定中比化合物编号396442和化合物编号819735更耐受。[0405]非限制性公开和通过引用并入[0406]本文所列出的文献和专利公开各自通过引用整体并入本文。尽管已经根据某些实施方案特别描述了本文所述的某些化合物、组合物和方法，但以下实施例仅用于说明本文所述的化合物并且不旨在对其加以限制。本技术中所引用的参考文献、genbank登录号等中的每一者均通过引用整体并入本文。[0407]尽管伴随此申请的序列表按需要将每个序列鉴定为“rna”或“dna”，但实际上，那些序列可用化学修饰的任何组合进行修饰。本领域技术人员将容易了解，此类描述经修饰的寡核苷酸的例如“rna”或“dna”的命名在某些情况下是任意的。例如，可将包含包括2'-oh 糖部分和胸腺嘧啶碱基的核苷的寡核苷酸描述为具有经修饰的糖部分(2'-oh代替dna的一个2'-h)的dna或描述为具有经修饰的碱基 (胸腺嘧啶(甲基化尿嘧啶)代替rna的尿嘧啶)的rna。因此，本文所提供的核酸序列，包括但不限于序列表中的核酸序列，旨在涵盖含有天然或经修饰的rna和/或dna的任何组合的核酸，包括但不限于具有经修饰的核碱基的此等核酸。进一步举例来说但不加以限制，具有核碱基序列“atcgatcg”的寡聚化合物涵盖具有此类核碱基序列的任何寡聚化合物，无论是经修饰还是未经修饰，包括但不限于：包含rna碱基的此类化合物，例如具有序列“aucgaucg”的序列；以及具有一些dna碱基和一些rna碱基者，例如“aucgatcg”；以及具有其他经修饰的核碱基的寡聚化合物，例如“atmcgaucg”，其中mc表示在5位包含甲基的胞嘧啶碱基。[0408]本文所述的某些化合物(例如经修饰的寡核苷酸)具有一个或多个不对称中心并因此产生对映异构体、非对映异构体和其他立体异构构型，其可根据绝对立体化学定义为(r)或(s)、α或β(例如对于糖变旋异构体)或(d)或(l)(例如对于氨基酸)等。本文所提供的绘制或描述为具有某些立体异构构型的化合物仅包括所指示的化合物。除非另外指明，否则本文所提供的绘制或描述为具有不确定的立体化学的化合物包括所有此等可能的异构体，包括其立构无规和光学纯形式。同样，除非另外指出，否则也包括本文化合物的所有顺式和反式异构体以及互变异构形式。本文所述的寡聚化合物包括手性纯或手性富集混合物以及外消旋混合物。例如，具有多个硫代磷酸酯核苷间键联的寡聚化合物包括硫代磷酸酯核苷间键联的手性受控制或为无规的此等化合物。除非另外指出，否则本文所述的化合物旨在包括对应的盐形式。[0409]本文所述的化合物包括其中一个或多个原子被所指示的元素的非放射性同位素或放射性同位素代替的变型。例如，本文包含氢原子的化合物涵盖每个1h氢原子的所有可能的氘取代。本文化合物所涵盖的同位素取代包括但不限于：2h或3h代替1h；13c或14c代替12c；15n代替14n；17o或18o代替16o；以及33s、34s、35s或36s代替32s。在某些实施方案中，非放射性同位素取代可赋予寡聚化合物有益于用作治疗或研究工具的新特性。在某些实施方案中，放射性同位素取代可使化合物适于研究或诊断目的，例如成像。[0410]实施例[0411]以下实施例说明了本公开的某些实施方案但不为限制性的。此外，在提供特定实施方案的情况下，本发明人考虑了那些特定实施方案的通用应用。[0412]实施例1：与人类smn2核酸互补的经修饰的寡核苷酸的设计[0413]如下表中所指示设计并合成与人类smn2核酸互补的经修饰的寡核苷酸。[0414]下表中经修饰的寡核苷酸的长度为16、17、18、19或20个核苷，如所指定。经修饰的寡核苷酸包含2'-moe糖部分、2'-nma糖部分、 cet糖部分、2'-ome糖部分和/或2'-β-d-脱氧核糖基糖部分，如所指定。整个经修饰的寡核苷酸的每个核苷间键联为硫代磷酸酯核苷间键联或磷酸二酯核苷间键联，如所指定。胞嘧啶为非甲基化胞嘧啶或 5-甲基胞嘧啶，如所指定。[0415]除非另外特别说明，否则下表中列出的每个经修饰的寡核苷酸与 seq id no:1(genbank登录号nt_006713.14，从核苷19939708 至19967777截短)100％互补。非互补核碱基在核碱基序列栏中以下划线、粗体、斜体字体指定。下表中列出的每个经修饰的寡核苷酸靶向smn2转录物的活性位点以包括外显子7。“起始位点”指示在靶核酸序列中与经修饰的寡核苷酸互补的最5'-核苷。“终止位点”指示在靶核酸序列中与经修饰的寡核苷酸互补的最3'-核苷。[0416]表2[0417]以下表2中经修饰的寡核苷酸的长度为16、17、18、19或20个核苷。每个核苷包含2'-moe糖部分。每个经修饰的寡核苷酸的糖基序提供于糖基序栏中，其中每个‘e’表示2'-moe糖部分。每个核苷间键联为硫代磷酸酯核苷间键联或磷酸二酯核苷间键联。每个经修饰的寡核苷酸的核苷间键联基序提供于核苷间键联基序栏中，其中每个‘s’表示硫代磷酸酯核苷间键联，并且每个‘o’表示磷酸二酯核苷间键联。每个胞嘧啶为5-甲基胞嘧啶。[0418]除非另外特别说明，否则以下表2中列出的每个经修饰的寡核苷酸与seq id no:1(genbank登录号nt_006713.14，从核苷 19939708至19967777截短)100％互补。非互补核碱基在核碱基序列栏中以下划线、粗体、斜体字体指定。“起始位点”指示在靶核酸序列中与经修饰的寡核苷酸互补的最5'-核苷。“终止位点”指示在靶核酸序列中与经修饰的寡核苷酸互补的最3'-核苷。[0419]表2[0420]具有ps或混合ps/po核苷间键联的2'-moe修饰的寡核苷酸[0421][0422][0423][0424][0425][0426][0427][0428][0429][0430]表3[0431]以下表3中经修饰的寡核苷酸的长度为16、17、18、19或20个核苷。每个核苷包含2'-nma糖部分。每个经修饰的寡核苷酸的糖基序提供于糖基序栏中，其中每个‘n’表示2'-nma糖部分。每个核苷间键联为硫代磷酸酯核苷间键联或磷酸二酯核苷间键联。每个经修饰的寡核苷酸的核苷间键联基序提供于核苷间键联基序栏中，其中每个‘s’表示硫代磷酸酯核苷间键联，并且每个‘o’表示磷酸二酯核苷间键联。每个胞嘧啶为5-甲基胞嘧啶。[0432]以下表3中列出的每个经修饰的寡核苷酸与seq id no:1 (genbank登录号nt_006713.14，从核苷19939708至19967777截短)100％互补。“起始位点”指示在靶核酸序列中与经修饰的寡核苷酸互补的最5'-核苷。“终止位点”指示在靶核酸序列中与经修饰的寡核苷酸互补的最3'-核苷。[0433]表3[0434]具有ps或混合ps/po核苷间键联的2'-nma修饰的寡核苷酸[0435][0436][0437][0438]表4[0439]以下表4中经修饰的寡核苷酸的长度为18或19个核苷。每个核苷包含2'-moe糖部分或2'-nma糖部分。每个经修饰的寡核苷酸的糖基序提供于糖基序栏中，其中每个‘e’表示2'-moe糖部分，并且每个‘n’表示2'-nma糖部分。每个核苷间键联为硫代磷酸酯核苷间键联。每个经修饰的寡核苷酸的核苷间键联基序提供于核苷间键联基序栏中，其中每个‘s’表示硫代磷酸酯核苷间键联。每个胞嘧啶为5-甲基胞嘧啶。[0440]除非另外特别说明，否则以下表4中列出的每个经修饰的寡核苷酸与seq id no:1(genbank登录号nt_006713.14，从核苷 19939708至19967777截短)100％互补。非互补核碱基在核碱基序列栏中以下划线、粗体、斜体字体指定。“起始位点”指示在靶核酸序列中与经修饰的寡核苷酸互补的最5'-核苷。“终止位点”指示在靶核酸序列中与经修饰的寡核苷酸互补的最3'-核苷。[0441]表4[0442]具有ps核苷间键联的混合2'-moe/2'-nma修饰的寡核苷酸[0443][0444]表5[0445]以下表5中经修饰的寡核苷酸的长度为16、17或18个核苷。每个核苷包含2'-moe糖部分或cet糖部分。每个经修饰的寡核苷酸的糖基序提供于糖基序栏中，其中每个‘e’表示2'-moe糖部分，并且每个‘k’表示cet糖部分。每个核苷间键联为硫代磷酸酯核苷间键联。每个经修饰的寡核苷酸的核苷间键联基序提供于核苷间键联基序栏中，其中每个‘s’表示硫代磷酸酯核苷间键联。每个胞嘧啶为5-甲基胞嘧啶。[0446]以下表5中列出的每个经修饰的寡核苷酸与seq id no:1 (genbank登录号nt_006713.14，从核苷19939708至19967777截短)100％互补。“起始位点”指示在靶核酸序列中与经修饰的寡核苷酸互补的最5'-核苷。“终止位点”指示在靶核酸序列中与经修饰的寡核苷酸互补的最3'-核苷。[0447]表5[0448]具有ps核苷间键联的混合2'-moe/cet修饰的寡核苷酸[0449][0450][0451][0452]表6[0453]以下表6中经修饰的寡核苷酸的长度为19或20个核苷。每个核苷包含2'-moe糖部分、2'-nma糖部分、2'-ome糖部分或2'-β-d-脱氧核糖基糖部分。每个经修饰的寡核苷酸的糖基序提供于糖基序栏中，其中每个‘e’表示2'-moe糖部分，每个‘n’表示2'-nma糖部分，每个‘y’表示2'-ome糖部分，并且每个‘d’表示2'-β-d-脱氧核糖基糖部分。每个核苷间键联为硫代磷酸酯核苷间键联或磷酸二酯核苷间键联。提供于核苷间键联基序栏中的每个经修饰的寡核苷酸的核苷间键联基序为(5'至3')：ssssssssssssssssso；其中每个‘s’表示硫代磷酸酯核苷间键联，并且每个‘o’表示磷酸二酯核苷间键联。胞嘧啶为非甲基化胞嘧啶或5-甲基胞嘧啶，其中核碱基序列栏中的每个小写字母‘c’表示非甲基化胞嘧啶，并且核碱基序列栏中的每个大写字母‘c’表示5‑ꢀ甲基胞嘧啶。[0454]除非另外特别说明，否则以下表6中列出的经修饰寡核苷酸中的每个核碱基与seq id no:1(genbank登录号nt_006713.14，从核苷19939708至19967777截短)互补。非互补核碱基在核碱基序列栏中以下划线、粗体、斜体字体指定。“起始位点”指示在靶核酸序列中与经修饰的寡核苷酸互补的最5'-核苷。“终止位点”指示在靶核酸序列中与经修饰的寡核苷酸互补的最3'-核苷。[0455]表6[0456]具有混合ps/po核苷间键联的经修饰的寡核苷酸[0457][0458][0459]表7[0460]以下表7中经修饰的寡核苷酸的长度为19或20个核苷。每个核苷包含2'-moe糖部分、2'-nma糖部分或2'-β-d-脱氧核糖基糖部分。每个经修饰的寡核苷酸的糖基序提供于糖基序栏中，其中每个‘e’表示 2'-moe糖部分，每个‘n’表示2'-nma糖部分，并且每个‘d’表示2'-β-d‑ꢀ脱氧核糖基糖部分。每个核苷间键联为硫代磷酸酯核苷间键联或磷酸二酯核苷间键联。提供于核苷间键联基序栏中的每个经修饰的寡核苷酸的核苷间键联基序为(5'至3')：sssssssssssssssssoo；其中每个‘s’表示硫代磷酸酯核苷间键联，并且每个‘o’表示磷酸二酯核苷间键联。每个胞嘧啶为5-甲基胞嘧啶。[0461]除非另外特别说明，否则以下表6中列出的经修饰寡核苷酸中的每个核碱基与seq id no:1(genbank登录号nt_006713.14，从核苷19939708至19967777截短)互补。非互补核碱基在核碱基序列栏中以下划线、粗体、斜体字体指定。“起始位点”指示在靶核酸序列中与经修饰的寡核苷酸互补的最5'-核苷。“终止位点”指示在靶核酸序列中与经修饰的寡核苷酸互补的最3'-核苷。[0462]表7[0463]具有混合ps/po核苷间键联的经修饰的寡核苷酸[0464][0465]id no:1(genbank登录号nt_006713.14，从核苷19939708至19967777截短)互补。非互补核碱基在核碱基序列栏中以下划线、粗体、斜体字体指定。“起始位点”指示在靶核酸序列中与经修饰的寡核苷酸互补的最5'-核苷。“终止位点”指示在靶核酸序列中与经修饰的寡核苷酸互补的最3'-核苷。[0470]表8[0471]具有混合ps/po核苷间键联的经修饰的寡核苷酸[0472][0473]表9[0474]以下表9中经修饰的寡核苷酸的长度各自为19个核苷。每个核苷包含2'-moe糖部分、2'-nma糖部分或2'-β-d-脱氧核糖基糖部分。每个经修饰的寡核苷酸的糖基序提供于糖基序栏中，其中每个‘e’表示 2'-moe糖部分，每个‘n’表示2'-nma糖部分，并且每个‘d’表示2'-β-d‑ꢀ脱氧核糖基糖部分。每个核苷间键联为硫代磷酸酯核苷间键联或磷酸二酯核苷间键联。提供于核苷间键联基序栏中的每个经修饰的寡核苷酸的核苷间键联基序为(5'至3')：ssssssssssssssosso；其中每个‘s’表示硫代磷酸酯核苷间键联，并且每个‘o’表示磷酸二酯核苷间键联。每个胞嘧啶为5-甲基胞嘧啶。[0475]除非另外特别说明，否则以下表9中列出的经修饰寡核苷酸中的每个核碱基与seq id no:1(genbank登录号nt_006713.14，从核苷19939708至19967777截短)互补。非互补核碱基在核碱基序列栏中以下划线、粗体、斜体字体指定。“起始位点”指示在靶核酸序列中与经修饰的寡核苷酸互补的最5'-核苷。“终止位点”指示在靶核酸序列中与经修饰的寡核苷酸互补的最3'-核苷。[0476]表9[0477]具有混合ps/po核苷间键联的经修饰的寡核苷酸[0478][0479]表10[0480]以下表10中经修饰的寡核苷酸的长度各自为19个核苷。每个核苷包含2'-moe糖部分或2'-nma糖部分。每个经修饰的寡核苷酸的糖基序提供于糖基序栏中，其中每个‘e’表示2'-moe糖部分，并且每个‘n’表示2'-nma糖部分。每个核苷间键联为硫代磷酸酯核苷间键联或磷酸二酯核苷间键联。提供于核苷间键联基序栏中的每个经修饰的寡核苷酸的核苷间键联基序为(5'至3')：osssssssssssssssss；其中每个‘s’表示硫代磷酸酯核苷间键联，并且每个‘o’表示磷酸二酯核苷间键联。每个胞嘧啶为5-甲基胞嘧啶。[0481]除非另外特别说明，否则以下表10中列出的经修饰寡核苷酸中的每个核碱基与seq id no:1(genbank登录号nt_006713.14，从核苷19939708至19967777截短)互补。非互补核碱基在核碱基序列栏中以下划线、粗体、斜体字体指定。“起始位点”指示在靶核酸序列中与经修饰的寡核苷酸互补的最5'-核苷。“终止位点”指示在靶核酸序列中与经修饰的寡核苷酸互补的最3'-核苷。[0482]表10[0483]具有混合ps/po核苷间键联的经修饰的寡核苷酸[0484][0485]表11[0486]以下表11中经修饰的寡核苷酸的长度各自为20个核苷。每个核苷包含2'-moe糖部分或2'-nma糖部分。每个经修饰的寡核苷酸的糖基序提供于糖基序栏中，其中每个‘e’表示2'-moe糖部分，并且每个‘n’表示2'-nma糖部分。每个核苷间键联为硫代磷酸酯核苷间键联或磷酸二酯核苷间键联。提供于核苷间键联基序栏中的每个经修饰的寡核苷酸的核苷间键联基序为(5'至3')：ossssssssssssssssso；其中每个‘s’表示硫代磷酸酯核苷间键联，并且每个‘o’表示磷酸二酯核苷间键联。每个胞嘧啶为5-甲基胞嘧啶。[0487]以下表11中列出的每个经修饰的寡核苷酸与seq id no:1 (genbank登录号nt_006713.14，从核苷19939708至19967777截短)100％互补。“起始位点”指示在靶核酸序列中与经修饰的寡核苷酸互补的最5'-核苷。“终止位点”指示在靶核酸序列中与经修饰的寡核苷酸互补的最3'-核苷。[0488]表11[0489]具有混合ps/po核苷间键联的经修饰的寡核苷酸[0490][0491]实施例2：在转基因小鼠中与人类smn2互补的经修饰的寡核苷酸的活性，单一剂量(35μg)[0492]在人类smn2转基因小鼠中测试了上文所述的所选经修饰的寡核苷酸的活性。sma iii型小鼠的中国台湾品系获自美国杰克逊实验室(b ar harbor,maine)。这些小鼠缺乏小鼠smn并且是人类smn2同型接合的(msmn-/-；hsmn2+/+；fvb.cg-tg(smn2)2hungsmn1tm1 hung/j，库存编号005058；bar harbor,maine)，或者是小鼠smn 异型接合的并且是通过将hom/hom(库存编号00005058)与fvb/n j(库存编号001800)育种获得的人类smn2(msmn+/-；hsmn2+/ꢀ‑；fvb.cg-tg(smn2)2hungsmn1tm1hung/j)异型接合的。[0493]处理[0494]将同型接合或异型接合转基因小鼠分组，每组4只小鼠。每只小鼠接受35μg经修饰的寡核苷酸的单次icv推注。此测定中也测试了比较化合物编号387954、396442和396443。一组4只小鼠接受pbs 作为阴性对照。[0495]rna分析[0496]处理之后两周，将小鼠处死，并且从皮质脑组织和脊髓提取出r na以用于smn2 rna的实时qpcr分析。使用引物探针组hsmn2 vd#4_lts00216_mgb(正向序列：gctgatgctttgggaagtatg tta(seq id no:11)；反向序列：caccttccttctttttgattt tgtc，本文中命名为seq id no:12；探针序列：tacatgagtg gctatcatact(seq id no:13))确定包括外显子7(外显子7+) 的smn2 rna的量。使用引物探针组hsmn2_sumner68_pps50481 (正向序列：catggtacatgagtggctatcatactg(seq id no: 14)；反向序列：tggtgtcatttagtgctgctctatg(seq idno:15)；探针序列ccagcatttccatataatagc(seq id no: 16))确定不包括外显子7(外显子7-)的smn2 rna的量。使用引物探针组hsmn2_lts00935(正向序列：caggaggattccgtgctgt t(seq id no:17)；反向序列：cagtgctgtatcatcccaaatg tc,(seq id no:18)；探针序列：acaggccagagcgat(seq i d no:19))测量总smn2 rna水平。[0497]结果呈针对总smn2水平归一化的rna水平相对于pbs对照的倍数变化来呈现。表12-18中的每一者表示不同实验。[0498]表12[0499]同型接合转基因小鼠中经修饰的寡核苷酸对人类smn2 rna剪接的影响[0500][0501][0502]表13[0503]同型接合转基因小鼠中经修饰的寡核苷酸对人类smn2 rna剪接的影响[0504][0505][0506]表14[0507]同型接合转基因小鼠中经修饰的寡核苷酸对人类smn2 rna剪接的影响[0508][0509]表15[0510]异型接合转基因小鼠中经修饰的寡核苷酸对人类smn2 rna剪接的影响[0511][0512]表16[0513]异型接合转基因小鼠中经修饰的寡核苷酸对人类smn2 rna剪接的影响[0514][0515][0516]表17[0517]异型接合转基因小鼠中经修饰的寡核苷酸对人类smn2 rna剪接的影响[0518][0519]表18[0520]异型接合转基因小鼠中经修饰的寡核苷酸对人类smn2 rna剪接的影响[0521][0522]实施例3：在转基因小鼠中与人类smn2互补的经修饰的寡核苷酸的活性，单一剂量(15μg)[0523]基本上如上文在实施例2中所述，测试了人类smn2转基因小鼠中上文所述的选定经修饰的寡核苷酸的活性。此测定中也测试了比较化合物编号396443和819735。将转基因小鼠分组，每组4只小鼠。每只小鼠接受15μg经修饰的寡核苷酸的单次icv推注。一组4只小鼠接受pbs作为阴性对照。处理之后两周，将小鼠处死，并且从皮质脑组织和脊髓提取出rna以用于smn2 rna的实时qpcr分析。结果呈针对总smn2水平归一化的rna水平相对于pbs对照的倍数变化来呈现。表19-23中的每一者表示不同实验。[0524]表19[0525]同型接合转基因小鼠中经修饰的寡核苷酸对人类smn2 rna剪接的影响[0526][0527]表20[0528]异型接合转基因小鼠中经修饰的寡核苷酸对人类smn2 rna剪接的影响[0529][0530]表21[0531]异型接合转基因小鼠中经修饰的寡核苷酸对人类smn2 rna剪接的影响[0532][0533]表22[0534]异型接合转基因小鼠中经修饰的寡核苷酸对人类smn2 rna剪接的影响[0535][0536]表23[0537]异型接合转基因小鼠中经修饰的寡核苷酸对人类smn2 rna剪接的影响[0538][0539]实施例4：在转基因小鼠中与人类smn2互补的经修饰的寡核苷酸的活性，单一剂量(70μg)[0540]基本上如上文在实施例2中所述，测试了人类smn2转基因小鼠中经修饰的寡核苷酸的活性。将转基因小鼠分组，每组4只小鼠。每只小鼠接受70μg经修饰的寡核苷酸的单次icv推注。一组4只小鼠接受pbs作为阴性对照。处理之后两周，将小鼠处死，并且从皮质脑组织和脊髓提取出rna以用于smn2 rna的实时qpcr分析。结果呈针对总smn2水平归一化的rna水平相对于pbs对照的倍数变化来呈现。[0541]表24[0542]同型接合转基因小鼠中经修饰的寡核苷酸对人类smn2 rna剪接的影响[0543][0544]实施例5：在转基因小鼠中与人类smn2互补的经修饰的寡核苷酸的活性，多次剂量[0545]基本上如上文在实施例2中所述，测试了人类smn2转基因小鼠中上文所述的选定经修饰的寡核苷酸的活性。此测定中也测试了比较化合物编号396443。将转基因小鼠分组，每组4只小鼠。每只小鼠以如下表中所指示的多次剂量接受经修饰的寡核苷酸的单次icv推注。一组4只小鼠接受pbs作为阴性对照。处理之后两周，将小鼠处死，并且从冠状脑和脊髓提取出rna以用于smn2 rna的实时 qpcr分析。结果呈针对总smn2水平归一化的rna水平相对于pbs 对照的倍数变化来呈现。在graphpad prism 7中，使用非线性回归4 参数剂量反应曲线[y＝底部+(顶部-底部)/(1+(10^logec50/x)^hill斜率)]计算外显子包涵(外显子7+)的ed50。[0546]表25[0547]同型接合转基因小鼠中经修饰的寡核苷酸对人类smn2 rna剪接的影响[0548][0549]实施例6：在野生型小鼠中与smn2互补的经修饰的寡核苷酸的耐受性，3小时研究[0550]在野生型雌性c57/bl6小鼠中对上文所述的经修饰的寡核苷酸进行测试，以评估耐受性。野生型雌性c57/bl6小鼠各自接受700μg 下表中列出的经修饰的寡核苷酸的单一icv剂量。此测定中也以350 μg的剂量测试了比较化合物编号396443。此测定中也以700μg的剂量测试了比较化合物编号387954、396442、443305和819735。每个处理组由4只小鼠组成。一组4只小鼠接受pbs作为每个实验的阴性对照(以下单独的表中所识别)。在注射后3小时，根据七个不同标准对小鼠进行评价。所述标准是(1)小鼠是聪明的、警觉的并且具反应性；(2)在没有刺激的情况下小鼠站立或弓起背部；(3)在没有刺激的情况下小鼠显示任何移动；(4)小鼠在其被提起之后展现向前移动；(5) 小鼠在其被提起之后展现任何移动；(6)小鼠对尾部夹捏作出反应；(7) 均匀呼吸。对于7个标准中的每一者，如果小鼠满足标准，则给予小鼠子得分0，并且如果其不满足标准，则给予子得分1(功能观测实验组合得分或fob)。在评价所有7个标准之后，对得分求和并且在每个处理组内取平均值。结果呈现于下表中。表26-49中的每一者表示不同实验。[0551]表26[0552]在350μg剂量下在小鼠中的耐受性得分[0553][0554]表27[0555]在700μg剂量下在小鼠中的耐受性得分[0556][0557]表28[0558]在700μg剂量下在小鼠中的耐受性得分[0559][0560][0561]表29[0562]在700μg剂量下在小鼠中的耐受性得分[0563][0564][0565]表30[0566]在700μg剂量下在小鼠中的耐受性得分[0567]化合物编号3小时fobpbs0.003964423.2512129610.0012129631.0012129642.0012129651.2512129661.2512129680.0012129711.0012129723.2512129730.5012129742.0012129750.5012129761.75[0568]表31[0569]在700μg剂量下在小鼠中的耐受性得分[0570][0571][0572]表32[0573]在700μg剂量下在小鼠中的耐受性得分[0574]化合物编号3小时fobpbs0.0012129937.0012129946.5012129954.2512129963.2512129974.0012129982.0012129991.0012130001.2512130013.0012130022.0012130034.0012130043.0012130053.7512130064.0012130074.0012130083.50[0575]表33[0576]在700μg剂量下在小鼠中的耐受性得分[0577][0578][0579]表34[0580]在700μg剂量下在小鼠中的耐受性得分[0581][0582]表35[0583]在700μg剂量下在小鼠中的耐受性得分[0584][0585][0586]表36[0587]在700μg剂量下在小鼠中的耐受性得分[0588][0589][0590]表37[0591]在700μg剂量下在小鼠中的耐受性得分[0592]化合物编号3小时fobpbs0.0012638260.00[0593]表38[0594]在700μg剂量下在小鼠中的耐受性得分[0595]化合物编号3小时fobpbs0.003879544.0012870480.0012870490.0012870502.0012870513.2512870523.5012870532.7512870542.0012870553.2512870564.0012870573.0012870584.0012870594.0012870604.0012870614.0012870623.50[0596]表39[0597]在700μg剂量下在小鼠中的耐受性得分[0598]化合物编号3小时fobpbs0.0012871063.5012871074.0012871083.7512871093.2512871103.0012871114.7512871124.0012871133.5012871143.2512871153.5012871164.0012871174.2512871183.0012871193.5012871203.7512871212.75[0599]表40[0600]在700μg剂量下在小鼠中的耐受性得分[0601]化合物编号3小时fobpbs0.0012870630.0012870640.0012870651.0012870663.7512870671.0012870682.5012870692.2512870711.0012870723.0012870733.7512870741.7512870753.5012870762.00[0602]表41[0603]在700μg剂量下在小鼠中的耐受性得分[0604]化合物编号3小时fobpbs0.0012870702.0012877012.5012877023.7512877033.7512877054.0012877064.0012877074.0012877094.7512877104.0012877114.7512877124.0012877134.0012877143.5012877154.0012877164.0012877173.25[0605]表42[0606]在700μg剂量下在小鼠中的耐受性得分[0607][0608][0609]表43[0610]在700μg剂量下在小鼠中的耐受性得分[0611]化合物编号3小时fobpbs0.0012871220.0012871230.0012871243.5012871253.0012871263.0012871270.0012871280.0012871294.0012871302.7512871312.5012871322.7512871333.2512877043.5012877083.50[0612]表44[0613]在700μg剂量下在小鼠中的耐受性得分[0614][0615][0616]表45[0617]在700μg剂量下在小鼠中的耐受性得分[0618]化合物编号3小时fobpbs0.0013187574.0013187584.2513187593.7513187603.7513187614.0013187624.0013187634.0013187643.7513187663.7513187684.0013187694.00[0619]表46[0620]在700μg剂量下在小鼠中的耐受性得分[0621][0622][0623]表47[0624]在700μg剂量下在小鼠中的耐受性得分[0625]化合物编号3小时fobpbs0.0013322471.7513322480.2513322490.0013322503.7513322510.0013322523.0013322632.0013322651.5013322661.0013322673.7513322682.7513322691.2513322702.2513322712.5013335080.00[0626]表48[0627]在700μg剂量下在小鼠中的耐受性得分[0628]化合物编号3小时fobpbs0.0013322551.0013322562.0013322571.2513322581.2513322592.2513322602.2513322612.5013322622.00[0629] 表49[0630]在700μg剂量下在小鼠中的耐受性得分[0631]化合物编号3小时fobpbs0.0013589960.0013647772.0013647783.0013647793.5013647803.5013647815.2513647822.5013647833.5013647843.50[0632]实施例7：在大鼠中与人类smn2互补的经修饰的寡核苷酸的耐受性，长期评估[0633]在相同条件下进行的单独研究中，在sprague dawley大鼠中测试了上文所述的选定经修饰的寡核苷酸以评估长期耐受性。此测定中也测试了比较化合物编号396442和819735。sprague dawley大鼠各自接受3mg寡核苷酸的单一鞘内(it)递送剂量或pbs。治疗后1周开始，将每只动物称重并由经训练的观察人员每周评价不良事件。不良事件定义为在pbs处理的对照动物中不典型的神经功能障碍，包括但不限于：肢体张开异常、步态异常、震颤、呼吸异常、麻痹和痉挛。不良事件的发作定义为给药后首次记录功能障碍的一周。如果未实现不良事件，则无发作(-)。不良事件的发作通常与如通过缺乏体重增加/ 维持所定义的成长障碍有关，与pbs处理的动物类似。类似的耐受性评估描述于oestergaard等人,nucleic acids res.,2013年11月, 41(21),9634-9650和southwell等人,mol ther.,2014年12月,22(12), 2093-2106。[0634]在研究结束时，处死大鼠并收集组织。使用钙结合蛋白(calbindin) 染色在小脑切片上进行组织病理学检查。如下表所指示，在钙结合蛋白染色的小脑切片中观察到浦肯野细胞损失。也使用对经修饰的寡核苷酸具有特异性的抗体评价了小脑和脊髓。从组织病理学分析中排除显示无寡核苷酸摄取的动物。对于因不良事件而提前处死的动物，组织学未完成。此外，使用rt-pcr测量了皮质gfap，星状细胞增生 (astrogliosis)的标志物(abdelhak等人,scientific reports,2018,8, 14798)，并且下文说明了》2倍的平均升高。[0635]表50[0636]在3mg剂量下在大鼠中的长期耐受性[0637][0638]实施例8：在非人类灵长类动物中经修饰的寡核苷酸的耐受性和药物动力学，单次或重复给药[0639]用经修饰的寡核苷酸处理食蟹猴以确定经修饰的寡核苷酸的局部和全身耐受性以及药物动力学。每个组接受人工csf或呈单次鞘内腰部推注剂量注射(it)的经修饰的寡核苷酸，或对于重复给药组，研究第1天为it推注剂量，接着在以后时间点接受it推注剂量。最后一次注射后1周收集组织。[0640]在单剂量研究中，向猴子施用单剂量经修饰的寡核苷酸并评估耐受性。成年食蟹猴中单剂量研究的代表性剂量包括1mg、3mg、7mg 和35mg。[0641]在重复给药研究中，在研究第1天向猴子施用it推注剂量，接着每周(例如，四周研究的第8天、第15天和第22天)或每月(例如， 13周研究的第29天、第57天和第84天)进行it推注给药。成年食蟹猴研究中重复剂量研究的代表性剂量包括1mg、3mg、7mg和35 mg。[0642]耐受性的评估是基于临床观察、体重、食物消耗、身体和神经学检查(包括感觉运动反射、脑反射和脊柱反射)、凝血、血液学、临床化学(血液和脑脊髓液(csf))、细胞计数和解剖病理学评价。进行完整的尸体剖检，记录任何宏观异常。进行器官称重并进行显微镜检查。收集血液以用于补充分析。另外，收集血液、csf和组织(尸体剖检时)以用于毒物动力学评价。[0643]通过测量用经修饰的寡核苷酸或对照处理的食蟹猴的aif1和 gfap水平，分析脑和脊髓组织中经修饰的寡核苷酸的耐受性。收集脑和脊髓样品并在液氮中速冻并冷冻(-60℃至-90℃)储存。在取样时，使用2mm活检打孔器从冷冻组织收集样品以用于rna分析。在多个脑和脊髓区域进行打孔。[0644]实施例9：以化合物编号1263789、1287717、1287745或1358996 的ia期人类临床试验[0645]在临床试验环境中评价了与人类smn2互补的经修饰的寡核苷酸的安全性、耐受性、药物动力学、药效学和功效。在具有确认的 sma(例如i型sma、ii型sma、iii型sma或iv型sma)的患者中评价经修饰的寡核苷酸的单次和/或多次剂量。[0646]在研究期间密切监测患者安全性。安全性和耐受性评价包括：体格检查和标准神经学评估(包括基底)、生命体征(hr、bp、体位变化、体重)、ecg、ae和伴随用药、哥伦比亚自杀严重程度量表(columbiasuicide severity rating scale；c-ssrs)、csf安全性实验室(细胞计数、蛋白质、葡萄糖)、血浆实验室测试(临床化学、血液学)和尿分析。[0647]选择适合年龄和类型的功效评价并且包括例如：汉默史密斯功能性动作量表扩展版(hammersmith motor function scale-expanded； hfmse)，其为用于评估sma儿童的运动功能的可靠且经过验证的工具；儿童生活质量问卷(pedsqltm)测量4.0普通适用核心量表；儿童生活质量问卷3.0神经肌肉模块；复合肌肉动作电位(compoundmuscle action potential；cmap)；运动单元估计(motor unit numberestimation；mune)；上肢模块(upper limb module；ulm)以及6分钟行走测试(6mwt)(darras等人,neurology,2019,92:e2492-e2506)。[0648]实施例10：与人类smn2核酸互补的经修饰的寡核苷酸的设计[0649]如下表中所指示设计并合成与人类smn2核酸互补的经修饰的寡核苷酸。[0650]以下各表中列出的每个经修饰的寡核苷酸与seq id no:1 (genbank登录号nt_006713.14，从核苷19939708至19967777截短)100％互补。“起始位点”指示在靶核酸序列中与经修饰的寡核苷酸互补的最5'-核苷。“终止位点”指示在靶核酸序列中与经修饰的寡核苷酸互补的最3'-核苷。[0651]下表中经修饰的寡核苷酸的长度为18个核苷。每个核苷包含2'-moe糖部分或2'-nma糖部分。每个经修饰的寡核苷酸的糖基序提供于糖基序栏中，其中每个‘e’表示2'-moe糖部分，并且每个‘n’表示2'-nma糖部分。每个核苷间键联为硫代磷酸酯核苷间键联、磷酸二酯核苷间键联、甲氧基丙基膦酸酯核苷间键联或甲磺酰氨基磷酸酯(msp)核苷间键联。每个经修饰的寡核苷酸的核苷间键联基序提供于核苷间键联基序栏中，其中每个‘s’表示硫代磷酸酯核苷间键联，每个‘o’表示磷酸二酯核苷间键联，每个‘x’表示甲氧基丙基膦酸酯核苷间键联，并且每个‘z’表示甲磺酰氨基磷酸酯(msp)核苷间键联。每个胞嘧啶为5-甲基胞嘧啶。经修饰的寡核苷酸449320先前已描述于 wo2015/161170a2中。[0652]表51[0653]具有混合po/ps、po/msp、均一msp或ps/mop核苷间键联的moe 和nma修饰的寡核苷酸[0654][0655]下表中经修饰的寡核苷酸全部由以下序列组成(5'至3')： tcactttcataatgctgg(seq id no:23)。以下各表中列出的每个经修饰的寡核苷酸与seq id no:1(本文在上文描述)100％互补。“起始位点”指示在靶核酸序列中与经修饰的寡核苷酸互补的最5'-核苷。“终止位点”指示在靶核酸序列中与经修饰的寡核苷酸互补的最3'‑ꢀ核苷。[0656]下表中经修饰的寡核苷酸的长度为18个核苷。每个核苷包含 2'-moe糖部分或2'-nma糖部分。每个经修饰的寡核苷酸的糖基序提供于糖基序栏中，其中每个‘e’表示2'-moe糖部分，并且每个‘n’表示2'-nma糖部分。每个核苷间键联为硫代磷酸酯核苷间键联、磷酸二酯核苷间键联或甲磺酰氨基磷酸酯(msp)核苷间键联。每个经修饰的寡核苷酸的核苷间键联基序提供于核苷间键联基序栏中，其中每个‘s’表示硫代磷酸酯核苷间键联，每个‘o’表示磷酸二酯核苷间键联，并且每个‘z’表示甲磺酰氨基磷酸酯(msp)核苷间键联。每个胞嘧啶为 5-甲基胞嘧啶。下表中经修饰的寡核苷酸与连接至寡核苷酸的5'-oh 的6-棕榈酰胺基己基磷酸酯缀合基团缀合。缀合基团的结构为：[0657][0658]表52[0659]6-棕榈酰胺基己基磷酸酯缀合的具有混合po/ps、po/msp或均一 msp核苷间键联的moe和nma修饰的寡核苷酸[0660][0661]下表中经修饰的寡核苷酸全部由以下序列组成(5'至3')： tcactttcataatgctgg(seq id no:23)，起始位点为seq id no: 1(本文在上文描述)上的27062并且终止位点为27079，其中“起始位点”指示在靶核酸序列中与经修饰的寡核苷酸互补的最5'-核苷，并且其中“终止位点”指示在靶核酸序列中与经修饰的寡核苷酸互补的最 3'-核苷。[0662]下表中经修饰的寡核苷酸的长度为18个核苷。每个经修饰的寡核苷酸的糖和核苷间键联基序提供于序列和化学记法栏中，其中每个下标‘n’表示2'-nma糖部分，每个下标‘[dma]’表示2'-o-(n,n-二甲基)乙酰胺部分，每个下标‘[nea]’表示2'-o-(n-乙基)乙酰胺部分，每个下标‘[npa]’表示2'-o-(n-丙基)乙酰胺部分，每个下标‘[ncpa]’表示 2'o-(n-环丙基)乙酰胺部分，每个下标‘[mcpa]’表示2'-o-(n-环丙基甲基)乙酰胺部分，并且每个下标‘s’表示硫代磷酸酯核苷间键联。每个胞嘧啶为5-甲基胞嘧啶，其中在胞嘧啶残基(mc)之前的下标‘m’表示 5-甲基胞嘧啶。下表中表示的每个糖的结构为：[0663][0664]表53[0665]具有均一ps核苷间键联的nma和nma类似物修饰的寡核苷酸[0666][0667]实施例11：在转基因小鼠中与人类smn2互补的经修饰的寡核苷酸的活性，单一剂量(35μg)[0668]基本上如上文在实施例2中所述，测试了人类smn2转基因小鼠中上文所述的选定经修饰的寡核苷酸的活性。[0669]处理[0670]将转基因小鼠分组，每组4只小鼠。每只小鼠以如下表中所指示的剂量接受经修饰的寡核苷酸的单次icv推注。一组4只小鼠接受 pbs作为阴性对照。处理之后两周，将小鼠处死，并且从冠状脑和脊髓提取出rna以用于smn2 rna的实时qpcr分析。结果呈针对总 smn2水平归一化的rna水平相对于pbs对照的倍数变化来呈现。在graphpad prism 7中，使用非线性回归4参数剂量反应曲线[y＝底部+(顶部-底部)/(1+(10^logec50/x)^hill斜率)]计算外显子包涵(外显子7+)的ed50。[0671]rna分析[0672]处理之后两周，将小鼠处死，并且从皮质脑组织和脊髓提取出 rna以用于smn2 rna的实时qpcr分析。使用引物探针组 hsmn2vd#4_lts00216_mgb确定包括外显子7(外显子7+)的smn2 rna的量。使用引物探针组hsmn2_sumner68_pps50481确定不包括外显子7(外显子7-)的smn2 rna的量。使用引物探针组hsmn2_lts00935测量总smn2 rna水平。结果呈针对总smn2水平归一化的rna水平相对于pbs对照的倍数变化来呈现。[0673]表54[0674]异型接合转基因小鼠中经修饰的寡核苷酸对人类smn2 rna剪接的影响[0675][0676]表55[0677]异型接合转基因小鼠中经修饰的寡核苷酸对人类smn2 rna剪接的影响[0678][0679]指示少于四个样品可用[0680]实施例12：在转基因小鼠中与人类smn2互补的经修饰的寡核苷酸的活性，单一剂量(15μg)[0681]基本上如上文在实施例2中所述，测试了人类smn2转基因小鼠中上文所述的选定经修饰的寡核苷酸的活性。[0682]处理[0683]将转基因小鼠分组，每组4只小鼠。每只小鼠以如下表中所指示的剂量接受经修饰的寡核苷酸的单次icv推注。一组4只小鼠接受 pbs作为阴性对照。处理之后两周，将小鼠处死，并且从冠状脑和脊髓提取出rna以用于smn2 rna的实时qpcr分析。结果呈针对总 smn2水平归一化的rna水平相对于pbs对照的倍数变化来呈现。在graphpad prism 7中，使用非线性回归4参数剂量反应曲线[y＝底部+(顶部-底部)/(1+(10^logec50/x)^hill斜率)]计算外显子包涵(外显子7+)的ed50。[0684]rna分析[0685]处理之后两周，将小鼠处死，并且从皮质脑组织和脊髓提取出 rna以用于smn2 rna的实时qpcr分析。使用引物探针组 hsmn2vd#4_lts00216_mgb确定包括外显子7(外显子7+)的smn2 rna的量。使用引物探针组hsmn2_sumner68_pps50481确定不包括外显子7(外显子7-)的smn2 rna的量。使用引物探针组 hsmn2_lts00935测量总smn2 rna水平。结果呈针对总smn2水平归一化的rna水平相对于pbs对照的倍数变化来呈现。[0686]表56[0687]异型接合转基因小鼠中经修饰的寡核苷酸对人类smn2 rna剪接的影响[0688][0689][0690]实施例13：在转基因小鼠中与人类smn2互补的经修饰的寡核苷酸的活性，多次剂量[0691]基本上如上文在实施例2中所述，测试了人类smn2转基因小鼠中上文所述的选定经修饰的寡核苷酸的活性。[0692]处理[0693]将转基因小鼠分组，每组4只小鼠。每只小鼠以如下表中所指示的多次剂量接受经修饰的寡核苷酸的单次icv推注。一组4只小鼠接受pbs作为阴性对照。处理之后两周，将小鼠处死，并且从冠状脑和脊髓提取出rna以用于smn2 rna的实时qpcr分析。结果呈针对总smn2水平归一化的rna水平相对于pbs对照的倍数变化来呈现。在graphpad prism 7中，使用非线性回归4参数剂量反应曲线 [y＝底部+(顶部-底部)/(1+(10^logec50/x)^hill斜率)]计算外显子包涵 (外显子7+)的ed50。[0694]rna分析[0695]处理之后两周，将小鼠处死，并且从皮质脑组织和脊髓提取出 rna以用于smn2 rna的实时qpcr分析。使用引物探针组 hsmn2vd#4_lts00216_mgb确定包括外显子7(外显子7+)的smn2 rna的量。使用引物探针组hsmn2_sumner68_pps50481确定不包括外显子7(外显子7-)的smn2 rna的量。使用引物探针组 hsmn2_lts00935测量总smn2 rna水平。结果呈针对总smn2水平归一化的rna水平相对于pbs对照的倍数变化来呈现。[0696]表57[0697]异型接合转基因小鼠中经修饰的寡核苷酸对人类smn2 rna剪接的影响[0698][0699]表58[0700]异型接合转基因小鼠中经修饰的寡核苷酸对人类smn2 rna剪接的影响[0701][0702][0703]指示少于四个样品可用[0704]表59[0705]异型接合转基因小鼠中经修饰的寡核苷酸对人类smn2 rna剪接的影响[0706][0707]实施例15：在野生型小鼠中与smn2互补的经修饰的寡核苷酸的耐受性[0708]在野生型雌性c57/bl6小鼠中对上文所述的经修饰的寡核苷酸进行测试，以评估寡核苷酸的耐受性。野生型雌性c57/bl6小鼠各自接受700μg下表中所列的经修饰的寡核苷酸的单一icv剂量。每个处理组由4只小鼠组成。一组4只小鼠接受pbs作为每个实验的阴性对照(以下单独的表中所识别)。在注射后3小时，根据七个不同标准对小鼠进行评价。所述标准是(1)小鼠是聪明的、警觉的并且具反应性； (2)在没有刺激的情况下小鼠站立或弓起背部；(3)在没有刺激的情况下小鼠显示任何移动；(4)小鼠在其被提起之后展现向前移动；(5)小鼠在其被提起之后展现任何移动；(6)小鼠对尾部夹捏作出反应；(7) 均匀呼吸。对于7个标准中的每一者，如果小鼠满足标准，则给予小鼠子得分0，并且如果其不满足标准，则给予子得分1(功能观测实验组合得分或fob)。在评价所有7个标准之后，对每只小鼠的得分求和并且在每个处理组内取平均值。结果呈现于下表中。[0709]表60[0710]在700μg剂量下在小鼠中的耐受性得分[0711]化合物编号3小时fobpbs0.0012877232.0012877241.0012877272.00









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