同时检测阿散酸、硝苯胂酸、洛克沙胂和卡巴胂的方法与流程

测量装置的制造及其应用技术1.本发明属于分析检测技术领域，涉及一种同时检测阿散酸、硝苯胂酸、洛克沙胂和卡巴胂的方法。背景技术：2.胂为有机化合物的一种，是砷化氢分子中的氢原子部分或全部被羟基取代而成的衍生物。随着分析技术的提高，发展了部分有机胂形态分析的方法，但在净化富集技术、灵敏度和分离度上仍有问题。前处理方法减少不同形态之间的转化，使各种形态在得到良好分离的基础上满足超痕量分析的要求。国家标准gb/t 22146-2008规定饲料中洛克沙胂的测定高效液相色谱法，但该标准只能检测洛克沙胂。sn/t 2316-2019出口动物源食品中阿散酸、硝苯胂酸、洛克沙胂残留量的检测方法，但该方法易被无机砷干扰。目前，有机胂的检测多是针对饲料和动物源食品中洛克沙胂的检测，未见采用高效液相色谱同时检测阿散酸、硝苯胂酸、洛克沙胂、卡巴胂等4种有机胂的公开。技术实现要素：3.本发明的目的在于提供一种同时检测阿散酸、硝苯胂酸、洛克沙胂和卡巴胂的方法，检测种类多，检测效率高；前处理简便，节约成本，净化效果好。4.为实现上述目的，本发明采用以下技术方案：本发明提供一种同时检测阿散酸、硝苯胂酸、洛克沙胂和卡巴胂的方法，包括以下步骤：a、称取待测品，加入30％的甲醇水溶液，震荡5min，40℃超声提取30min，6000r/min离心5min，重复提起两次，合并上清液；b、于旋转蒸发仪蒸发浓缩至3-4ml，过阴离子固相萃取柱，用5％甲酸甲醇洗脱，氮吹，用30％的甲醇水溶液溶解，过滤膜，供高效液相色谱测定；c、液相色谱选用zorbax sb-c18色谱柱，规格为250mm×4.6mm，5μm；进样量40μl，流速为1ml/min，柱温25℃，检测波长为260nm，流动相a为甲醇，流动相b为0.1％甲酸和20mmol/l磷酸二氢钾的混合溶液。5.在一个优选地技术方案中，步骤b中滤膜的孔径为0.45μm。6.在一个优选地技术方案中，步骤c中流动相a与流动相b的体积比为7：93。7.相比现有技术，本发明的有益效果在于：本发明方法可同时检测出阿散酸、硝苯胂酸、洛克沙胂和卡巴胂等4种有机胂物质，检测种类多，检测效率高；前处理简便，节约成本，净化效果好；方法对阿散酸、卡巴胂的检出限为0.01mg/kg，硝苯胂酸的检出限为0.02mg/kg，洛克沙胂的检出限为0.04mg/kg，灵敏度高，准确度、精密度、稳定性均满足残留分析检测要求。附图说明8.图1为ec-c18色谱柱对有机胂的分离结果。9.图2为sb-aq色谱柱对有机胂的分离结果。10.图3为本发明sb-c18色谱柱对有机胂的分离结果。11.图4为流动相甲醇比例为15％时的分离效果。12.图5为流动相甲醇比例为10％时的分离效果。13.图6为本发明流动相甲醇比例为7％时的分离效果。具体实施方式14.以下实施例用于说明本发明，但不用来限定本发明的保护范围。若未特别指明，实施例中所用技术手段为本领域技术人员所熟知的常规手段。下述实施例中的试验方法，如无特别说明，均为常规方法。15.实施例一1试验部分1.1仪器与试剂agilent 1200高效液相色谱仪，配有四元泵、自动进样器、柱温箱、二极管阵列(dad)检测器；梅特勒xp205分析天平(精确度0.01mg)；超声波仪器；密理博超纯水仪；离心机。16.卡巴胂标准储备溶液：100mg·l-1，称取10.0mg于100ml的容量瓶中，用水溶解并稀释至刻度。17.混合标准溶液：10mg·l-1，移取1ml 100mg·l-1阿散酸、100mg·l-1硝苯胂酸、100mg·l-1洛克沙胂、100mg·l-1卡巴胂标准溶液于10ml容量瓶中，用水稀释至刻度。18.混合标准溶液系列：移取一定量的10mg·l-1混合标准溶液，用水稀释至0.05mg·l-1、0.1mg·l-1、0.2mg·l-1、0.5mg·l-1、1mg·l-1。19.甲醇为色谱纯；磷酸二氢钾、甲酸为优级纯；水为超纯水。20.1.2样品处理称取1g(产蛋后备鸡后期复合预混合饲料，来自新乡金维正大生物饲料有限公司)饲料于离心管中，加入10ml甲醇：水溶液(体积比3:7)，震荡5min，40℃超声提取30min，6000r·min-1离心5min，取上清液于鸡心瓶中，重复提取一次，合并上清液；于旋转蒸发仪蒸至3-4ml，过阴离子固相萃取柱max柱，用3ml 5％甲酸甲醇洗脱，氮吹，用1ml甲醇：水溶液(体积比3:7)溶解，过0.45μm滤膜，供高效液相色谱检测。21.1.3仪器工作条件色谱柱：zorbax sb-c18，ec-c18，sb-aq，规格为250mmⅹ4.6mm，5μm；流速1ml·min-1；柱温25℃；检测波长260nm；进样量40μl；流动相a为甲醇，b为0.1％甲酸+20mmol·l-1磷酸二氢钾溶液，等度洗脱。22.1.4建立标准曲线从0.05mg·l-1、0.1mg·l-1、0.2mg·l-1、0.5mg·l-1、1mg·l-1各浓度的混合标准溶液中各取1.0ml，分别加入到空白试料，经提取、浓缩后的残余物，用1ml甲醇水溶液溶解，过滤膜，上机测定。以特征离子质量色谱峰面积y为纵坐标，混合标准溶液浓度为横坐标，绘制标准曲线，四种有机胂的标准曲线和相关系数如表1所示。23.表1四种有机胂的标准曲线和相关系数有机胂标准曲线方程相关系数阿散酸(asa)y＝970.16823x-0.6460211.00000硝苯胂酸(napp)y＝500.97863x-0.6837830.99998洛克沙胂(rox)y＝183.59993x-0.2926920.99995卡巴胂(cbs)y＝1071.41676x-0.8361600.999991.5色谱柱选择选用1mg·l-1的混合标准溶液，经样品处理后，上机测定。比较了ec-c18、sb-aq、sb-c18三种色谱柱对四种有机胂的分离效果，结果分别如图1～3所示。24.由图1～3可知，ec-c18色谱柱在分离时，峰存在拖尾，且洛克沙胂、硝苯胂酸出现双峰甚至三峰现象；sb-aq色谱柱能够较好分离阿散酸和卡巴胂，但洛克沙胂和硝苯胂酸分离度效果不好，调整甲醇比例无明显改善；而sb-c18能够完全分离四种有机胂。25.1.6流动相比例选择选用1mg·l-1的混合标准溶液，经样品处理后，上机测定。比较了甲醇—0.1％甲酸—20mmol·l-1磷酸二氢钾流动相体系中，不同甲醇比例(15％、10％、7％)对分离效果的影响，结果如图4～6所示。26.由图4～6可知，当甲醇比例为15％时，阿散酸和卡巴胂两个色谱峰不能完全分开，当甲醇比例为10％时，在15min内四个有机胂色谱峰能出完，且四个峰能完全分离，但存在一定的基质干扰；当甲醇比例下降到7％时，四个峰能完全分离且无基质干扰，故采用流动相a与流动相b的体积比为7：93。27.1.7回收率及精密度实验平行称取6份鸡饲料，向鸡饲料样品中加入0.1mg/kg、0.2mg/kg、0.5mg/kg三个水平四种有机胂混合标准溶液进行加标回收试验，每个水平做6次平行试验，计算出回收率和相对标准偏差(rsd)，结果见表2。28.表2方法的加标回收率和精密度(n＝6)1.8灵敏度实验在空白样品中分别添加个不同水平的四种有机胂混合标准溶液，分别为0.01mg/kg、0.02mg/kg、0.03mg/kg、0.04mg/kg，按试样制备与测定方法进行测定。计算信噪比，以信噪比s/n》3为检出限，得到检出限分别为：阿散酸0.01mg/kg，卡巴胂0.01mg/kg，洛克沙胂0.04mg/kg，硝苯胂酸0.02mg/kg。29.以上所述之实施例，只是本发明的较佳实施例而已，仅仅用以解释本发明，并非限制本发明实施范围，对于本技术领域的技术人员来说，当然可根据本说明书中所公开的技术内容，通过置换或改变的方式轻易做出其它的实施方式，故凡在本发明的原理上所作的变化和改进等，均应包括于本发明申请专利范围内。









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