突变型转谷氨酰胺酶的制作方法

食品,饮料机械,设备的制造及其制品加工制作,储藏技术1.本发明涉及耐酸性低的突变型转谷氨酰胺酶(突变型tg)及其应用。背景技术：：：2.转谷氨酰胺酶(transglutaminase、tg)已知为催化蛋白质交联的酶，被用于食品物性的改善。例如，已知利用tg的酸乳的制造方法(专利文献1)。3.此外，还已知功能被改变的各种突变型tg。作为突变型tg，已知例如具有耐热性降低、耐热性提高、抗氧化性提高等性质的突变型tg(专利文献2)，耐热性提高了的突变型tg(专利文献3)，耐热性和/或ph稳定性提高了的突变型tg(专利文献4)，比活性提高了的突变型tg(专利文献5)。作为使tg的耐热性和/或ph稳定性提高的突变，具体来说，已知例如将d46等的氨基酸残基取代为半胱氨酸残基而引入二硫键的突变(专利文献4)。作为使tg的比活性提高的突变，具体来说，已知例如m16t等m16处的突变、y34f等y34处的突变、s199a等s199处的突变、w38f等w38处的突变(专利文献5)。4.但是，使tg的耐酸性降低的突变是未知的。5.现有技术文献专利文献专利文献1：日本特开平6-197688专利文献2：wo2019/107288a1专利文献3：wo2010/101256a1专利文献4：wo2008/099898a1专利文献5：日本特开2008-194004。技术实现要素：6.发明所要解决的技术问题本发明以提供耐酸性低的突变型tg为课题。7.解决技术问题所采用的技术方案本发明人等发现使tg的耐酸性降低的突变，完成了本发明。8.即，本发明可示例如下；[1]一种食品的制造方法，其中，该方法包含用突变型转谷氨酰胺酶对食品原料进行处理的工序，所述食品为下述食品(a)或(b)：(a)在制造时伴有ph降低的食品；(b)含有所述食品(a)的食品，所述突变型转谷氨酰胺酶是在野生型转谷氨酰胺酶的氨基酸序列中具有特定的突变，且具有转谷氨酰胺酶活性的蛋白质，所述特定的突变是使耐酸性降低的突变；[2]上述方法，其中，作为将所述突变型转谷氨酰胺酶在ph6.0于37℃处理1小时后的残余活性设为100％时的相对值，将所述突变型转谷氨酰胺酶在ph4.0于37℃处理1小时后的残余活性为80％以下；[3]上述方法，其中，作为将所述突变型转谷氨酰胺酶在ph6.0于37℃处理1小时后的残余活性设为100％时的相对值，将所述突变型转谷氨酰胺酶在ph4.0于37℃处理1小时后的残余活性为50％以下；[4]上述方法，其中，所述特定的突变为在选自下述氨基酸残基中的1个或数个(更多个)氨基酸残基处的突变：a261、v271、a322、v326、d46、m16、y34、w38、s199；[5]上述方法，其中，所述特定的突变包含在选自下述氨基酸残基中的1个或数个氨基酸残基处的突变：a261、v271、a322、v326、d46；[6]上述方法，其中，所述特定的突变包含选自下述突变中的1个或数个突变：a261c、v271c、a322c、v326c、d46p、m16t、y34f、w38f、s199a；[7]上述方法，其中，所述特定的突变包含选自下述突变中的1个或数个突变：a261c、v271c、a322c、v326c、d46p；[8]上述方法，其中，所述特定的突变包含下述突变中的任一种突变：a261c/a322c、a261c/a322c/s199a、v271c/v326c、m16t/y34f、m16t/s199a；[9]上述方法，其中，所述野生型转谷氨酰胺酶是包含链霉菌(streptomyces)属细菌的成熟转谷氨酰胺酶的氨基酸序列的蛋白质；[10]上述方法，其中，所述链霉菌(streptomyces)属细菌是茂原链霉菌(streptomycesmobaraensis)；[11]上述方法，其中，所述野生型转谷氨酰胺酶是下述(a)～(c)中的任一种蛋白质：(a)包含seqidno:2所示的氨基酸序列的蛋白质；(b)包含在seqidno:2所示的氨基酸序列中包括1～10个氨基酸残基的取代、缺失、插入和/或添加的氨基酸序列的蛋白质；(c)包含与seqidno:2所示的氨基酸序列具有90％以上的同一性的氨基酸序列的蛋白质；[12]上述方法，其中，所述食品(a)为酸乳(yogurt)或乳酪(cheese)，所述食品原料为乳原料；[13]上述方法，其中，所述食品(b)为含有酸乳或乳酪的冰淇淋；[14]上述方法，其中，在所述食品原料的ph为5.0以上的时刻，将所述突变型转谷氨酰胺酶添加至该食品原料中；[15]一种用于制造食品的组合物，其中，该组合物含有突变型转谷氨酰胺酶，所述食品为下述食品(a)或(b)：(a)在制造时伴有ph降低的食品；(b)含有所述食品(a)的食品，所述突变型转谷氨酰胺酶是在野生型转谷氨酰胺酶的氨基酸序列中具有特定的突变，且具有转谷氨酰胺酶活性的蛋白质，所述特定的突变是使耐酸性降低的突变；[16]上述组合物，其中，作为将所述突变型转谷氨酰胺酶在ph6.0于37℃处理1小时后的残余活性设为100％时的相对值，将所述突变型转谷氨酰胺酶在ph4.0于37℃处理1小时后的残余活性为80％以下；[17]上述组合物，其中，作为将所述突变型转谷氨酰胺酶在ph6.0于37℃处理1小时后的残余活性设为100％时的相对值，将所述突变型转谷氨酰胺酶在ph4.0于37℃处理1小时后的残余活性为50％以下；[18]上述组合物，其中，所述特定的突变为在选自下述氨基酸残基中的1个或数个氨基酸残基处的突变：a261、v271、a322、v326、d46、m16、y34、w38、s199；[19]上述组合物，其中，所述特定的突变包含在选自下述氨基酸残基中的1个或数个氨基酸残基处的突变：a261、v271、a322、v326、d46；[20]上述组合物，其中，所述特定的突变包含选自下述突变中的1个或数个突变：a261c、v271c、a322c、v326c、d46p、m16t、y34f、w38f、s199a；[21]上述组合物，其中，所述特定的突变包含选自下述突变中的1个或数个突变：a261c、v271c、a322c、v326c、d46p；[22]上述组合物，其中，所述特定的突变包含下述突变中的任一种突变：a261c/a322c、a261c/a322c/s199a、v271c/v326c、m16t/y34f、m16t/s199a；[23]上述组合物，其中，所述野生型转谷氨酰胺酶是包含链霉菌(streptomyces)属细菌的成熟转谷氨酰胺酶的氨基酸序列的蛋白质；[24]上述组合物，其中，所述链霉菌(streptomyces)属细菌是茂原链霉菌(streptomycesmobaraensis)；[25]上述组合物，其中，所述野生型转谷氨酰胺酶是下述(a)～(c)中的任一种蛋白质：(a)包含seqidno:2所示的氨基酸序列的蛋白质；(b)包含在seqidno:2所示的氨基酸序列中包括1～10个氨基酸残基的取代、缺失、插入和/或添加的氨基酸序列的蛋白质；(c)包含与seqidno:2所示的氨基酸序列具有90％以上的同一性的氨基酸序列的蛋白质；[26]上述组合物，其中，所述食品(a)为酸乳或乳酪，所述食品原料为乳原料；[27]上述组合物，其中，所述食品(b)为含有酸乳或乳酪的冰淇淋；[28]一种突变型转谷氨酰胺酶，其是在野生型转谷氨酰胺酶的氨基酸序列中具有特定的突变，且具有转谷氨酰胺酶活性的突变型转谷氨酰胺酶，其中，所述特定的突变是使耐酸性降低的突变，所述特定的突变为在选自下述氨基酸残基中的1个或数个氨基酸残基处的突变：a261、v271、a322、v326、d46、m16、y34、w38、s199，但是，在m16、y34、w38和s199处的突变均不被单独选择，在单独选择d46处的突变的情况下，d46处的突变为除d46c以外的突变；[29]上述突变型转谷氨酰胺酶，其中，作为将所述突变型转谷氨酰胺酶在ph6.0于37℃处理1小时后的残余活性设为100％时的相对值，将所述突变型转谷氨酰胺酶在ph4.0于37℃处理1小时后的残余活性为80％以下；[30]上述突变型转谷氨酰胺酶，其中，作为将所述突变型转谷氨酰胺酶在ph6.0于37℃处理1小时后的残余活性设为100％时的相对值，将所述突变型转谷氨酰胺酶在ph4.0于37℃处理1小时后的残余活性为50％以下；[31]上述突变型转谷氨酰胺酶，其中，所述特定的突变为在选自下述氨基酸残基中的1个或数个氨基酸残基处的突变：a261、v271、a322、v326、d46；[32]上述突变型转谷氨酰胺酶，其中，所述特定的突变包含选自下述突变中的1个或数个突变：a261c、v271c、a322c、v326c、d46p、m16t、y34f、w38f、s199a；[33]上述突变型转谷氨酰胺酶，其中，所述特定的突变包含选自下述突变中的1个或数个突变：a261c、v271c、a322c、v326c、d46p；[34]上述突变型转谷氨酰胺酶，其中，所述特定的突变包含下述突变中的任一种突变：a261c/a322c、a261c/a322c/s199a、v271c/v326c、m16t/y34f、m16t/s199a；[35]上述突变型转谷氨酰胺酶，其中，所述野生型转谷氨酰胺酶是包含链霉菌(streptomyces)属细菌的成熟转谷氨酰胺酶的氨基酸序列的蛋白质；[36]上述突变型转谷氨酰胺酶，其中，所述链霉菌(streptomyces)属细菌是茂原链霉菌(streptomycesmobaraensis)；[37]上述突变型转谷氨酰胺酶，其中，所述野生型转谷氨酰胺酶是下述(a)～(c)中的任一种蛋白质：(a)包含seqidno:2所示的氨基酸序列的蛋白质；(b)包含在seqidno:2所示的氨基酸序列中包括1～10个氨基酸残基的取代、缺失、插入和/或添加的氨基酸序列的蛋白质；(c)包含与seqidno:2所示的氨基酸序列具有90％以上的同一性的氨基酸序列的蛋白质；[38]一种基因，其编码上述突变型转谷氨酰胺酶；[39]一种载体，其搭载上述基因；[40]一种微生物，其具有上述基因；[41]上述微生物，其为细菌或酵母；[42]上述微生物，其为棒状菌群(coryneformbacterium)或肠杆菌科(enterobacteriaceae)的细菌；[43]上述微生物，其中，其为棒状杆菌(corynebacterium)属细菌或埃希氏菌(escherichia)属细菌；[44]上述微生物，其中，其为谷氨酸棒状杆菌(corynebacteriumglutamicum)或大肠杆菌(escherichiacoli)。[0009]附图的简单说明图1是表示利用野生型tg或各突变型tg制造的酸乳的断裂强度的图；图2是表示利用野生型tg或各突变型tg制造的酸乳的上清液中的tg活性(基于异羟肟酸法(hydroxamatemethod)的吸光度)的图；图3是表示利用野生型tg或突变型tg(a261c/a322c)制造酸乳时的tg活性(基于荧光法的荧光强度)的经时变化的图；图4是表示利用野生型tg或突变型tg(a261c/a322c)制造酸乳时的ph和tg活性(基于异羟肟酸法的吸光度)的经时变化的图。具体实施方式[0010]＜1＞突变型转谷氨酰胺酶(突变型tg)本发明提供本说明书中记载的具有“特定的突变”的转谷氨酰胺酶(transglutaminase、tg)。[0011]“转谷氨酰胺酶(transglutaminase、tg)”可指具有催化蛋白质中的谷氨酰胺残基的酰胺基与伯胺之间的酰基转移反应的活性的蛋白质(ec2.3.2.13等)。该活性也称为“tg活性”。编码tg的基因也称为“tg基因”。作为伯胺，可举出蛋白质中的赖氨酸残基。即，“tg活性”具体可指催化蛋白质中的谷氨酰胺残基与蛋白质中的赖氨酸残基间的交联反应的活性。通过交联反应，可产生分子内交联和/或分子间交联。通过交联反应，典型的是可至少产生分子间交联。[0012]tg活性可通过例如异羟肟酸法(lorand,l.,etal.:anal.biochem.,44,221-213(1971))或荧光法(takagi,j.,etal.:anal.biochem.,153,296-298(1986))进行测定。只要没有特别说明，“tg活性”可指通过异羟肟酸法测定的tg活性。[0013]基于异羟肟酸法的tg活性的测定步骤如下。即，tg活性可如下测定：在37℃、ph6.0的条件下将酶与底物(即，苄氧羰基-l-谷氨酰胺酰甘氨酸和羟胺)进行孵育，对依赖于酶和底物的异羟肟酸的生成进行测定。异羟肟酸的生成可如下测定：在三氯乙酸的存在下形成异羟肟酸的铁配合物，以525nm处的吸光度的增大为指标进行测定。将在上述条件下在1分钟内催化1μmol的异羟肟酸的生成的酶量定义为1u(单位)。[0014]基于荧光法的tg活性的测定步骤如下。即，tg活性可如下测定：在37℃、ph7.5的条件下将酶与底物(即，二甲基化酪蛋白和单丹磺酰戊二胺(monodansylcadaverine,mdc))进行孵育，对依赖于酶和底物的mdc向二甲基化酪蛋白的摄入进行测定。mdc的摄入可以将荧光(激发波长350nm，发射波长480nm)的增大作为指标进行测定。[0015]具有“特定的突变”的tg也称为“突变型tg”。此外，编码突变型tg的基因也称为“突变型tg基因”。[0016]不具有“特定的突变”的tg也称为“野生型tg”。此外，编码野生型tg的基因也称为“野生型tg基因”。应予说明，这里所说的“野生型”是为了便于将“野生型”的tg与“突变型”的tg进行区分的记载，只要不具有“特定的突变”，不限于天然获得的tg。“tg不具有‘特定的突变’”可指tg不具有被选作“特定的突变”的突变。只要不具有被选作“特定的突变”的突变，野生型tg可具有未被选作“特定的突变”的突变，也可不具有。[0017]某野生型tg与某突变型tg除“特定的突变”的有无以外相同的情况下，该野生型tg也称为“与某突变型tg对应的野生型tg”，该突变型tg也称为“与某野生型tg对应的突变型tg”。[0018]以下，对野生型tg进行说明。[0019]只要与其对应的突变型tg具有tg活性，野生型tg可具有tg活性，也可不具有。野生型tg通常可具有tg活性。[0020]作为野生型tg，可举出放线菌的tg(appl.environ.microbiol.,2003,69(1),358-366)。作为放线菌，可举出链霉菌(streptomyces)属细菌。作为链霉菌属细菌，可举出茂原链霉菌(streptomycesmobaraensis)、肉桂链霉菌(streptomycescinnamoneus)、灰肉链霉菌(streptomycesgriseocarneus)。应予说明，“链霉菌属细菌”中也包括曾经被分类为轮枝链霉菌(streptoverticillium)属的细菌。例如，“茂原链霉菌(streptomycesmobaraensis)”中也包括曾经被分类为茂原链轮丝菌(streptoverticilliummobaraense)或拉达克链轮丝菌(streptoverticilliumladakanum)的细菌。此外，“肉桂链霉菌(streptomycescinnamoneus)”中也包括曾经被分类为肉桂链轮丝菌(streptoverticilliumcinnamoneum)的细菌。此外，“灰肉链霉菌(streptomycesgriseocarneus)”中也包括曾经被分类为灰肉色链轮丝菌(streptoverticilliumgriseocarneum)的细菌。对于tg而言，可以以包含前结构部(pro-structuremoiety)的形态表达，除去前结构部而形成成熟蛋白质。tg的成熟蛋白质也称为“成熟tg”。即，作为上述示例的生物的tg，具体可举出上述示例的生物的成熟tg。茂原链轮丝菌(streptoverticilliummobaraense)的tg基因的编码成熟tg的部分的碱基序列示于seqidno:1，该基因编码的成熟tg的氨基酸序列示于seqidno:2。即，野生型tg基因可以是例如具有上述示例的生物的tg基因的碱基序列(例如seqidno:1所示的碱基序列)的基因。此外，野生型tg可以是例如具有上述示例的生物的tg的氨基酸序列(例如seqidno:2所示的氨基酸序列)的蛋白质。应予说明，只要没有特别记载，“基因或蛋白质具有碱基序列或氨基酸序列”的表达可指基因或蛋白质包含该碱基序列或氨基酸序列，也可包括基因或蛋白质由该碱基序列或氨基酸序列形成的情况。[0021]只要编码的tg不具有“特定的突变”，野生型tg基因可以是上述示例的野生型tg基因(例如具有seqidno:1所示的碱基序列的基因)的变体(variant)。同样地，只要不具有“特定的突变”，野生型tg可以是上述示例的野生型tg(例如具有seqidno:2所示的氨基酸序列的蛋白质)的变体。即，术语“野生型tg基因”除了上述示例的野生型tg基因(例如具有seqidno:1所示的碱基序列的基因)之外，还可包括它们的变体。同样地，术语“野生型tg”除了上述示例的野生型tg(例如具有seqidno:2所示的氨基酸序列的蛋白质)之外，还可包括它们的变体。应予说明，以来源的物种(organism)特定的基因不仅限于该物种中所发现的基因本身，包括具有该物种中所发现的基因的碱基序列的基因及它们的变体。此外，以来源的物种特定的蛋白质不仅限于该物种中所发现的蛋白质本身，包括具有该物种中所发现的蛋白质的氨基酸序列的基因及它们的变体。这些变体可以在该物种中被发现，也可以未在物种中被发现。即，例如，“轮枝链霉菌属细菌的tg”不仅限于在轮枝链霉菌属细菌中所发现的tg本身，包括具有轮枝链霉菌属细菌中所发现的tg的氨基酸序列的蛋白质及它们的变体。作为变体，可举出例如上述示例的基因或蛋白质的同源物或人工修饰体。[0022]野生型tg基因的同源物或野生型tg的同源物例如可通过将上述示例的野生型tg基因的碱基序列或上述示例的野生型tg的氨基酸序列用作查询序列的blast检索或fasta检索从公开数据库容易地确定。此外，野生型tg基因的同源物例如可通过以各种生物的染色体为模板，将基于上述示例的野生型tg基因的碱基序列制作的寡核苷酸用作引物的pcr来获得。[0023]此外，只要编码的tg不具有“特定的突变”，野生型tg基因可以是编码具有“在上述氨基酸序列(例如seqidno:2所示的氨基酸序列)中在1个或数个位置的1个或数个氨基酸发生了取代、缺失、插入和/或添加而成的氨基酸序列”的蛋白质的基因。例如，对于所编码的蛋白质而言，其n末端和/或c末端可被延长或缩短。应予说明，上述“1个或数个”也根据氨基酸残基在蛋白质的立体结构中的位置和种类而不同，具体可以是例如1～50个、1～40个、1～30个、1～20个、1～10个、1～5个、或1～3个。[0024]上述的1个或多个氨基酸的取代、缺失、插入或添加是蛋白质的原有功能被维持的保守性突变。保守性突变的代表为保守性取代。保守性取代是指：取代位点为芳香族氨基酸的情况下，在phe、trp、tyr之间相互取代的突变；取代位点为疏水性氨基酸的情况下，在leu、ile、val之间相互取代的突变；取代位点为极性氨基酸的情况下，在gln、asn之间相互取代的突变；取代位点为碱性氨基酸的情况下，在lys、arg、his之间相互取代的突变；取代位点为酸性氨基酸的情况下，在asp、glu之间相互取代的突变；取代位点为具有羟基的氨基酸的情况下，在ser、thr之间相互取代的突变。作为被视作保守性取代的取代，具体可举出：由ala向ser或thr的取代，由arg向gln、his或lys的取代，由asn向glu、gln、lys、his或asp的取代，由asp向asn、glu或gln的取代，由cys向ser或ala的取代，由gln向asn、glu、lys、his、asp或arg的取代，由glu向gly、asn、gln、lys或asp的取代，由gly向pro的取代，由his向asn、lys、gln、arg或tyr的取代，由ile向leu、met、val或phe的取代，由leu向ile、met、val或phe的取代，由lys向asn、glu、gln、his或arg的取代，由met向ile、leu、val或phe的取代，由phe向trp、tyr、met、ile或leu的取代，由ser向thr或ala的取代，由thr向ser或ala的取代，由trp向phe或tyr的取代，由tyr向his、phe或trp的取代，以及由val向met、ile或leu的取代。此外，如上所述的氨基酸的取代、缺失、插入或添加中，还包括基于基因所来自的生物的个体差异、物种的差异的情况等的天然产生的突变(突变(mutant)或变异(variant))所产生的那些。[0025]此外，只要编码的tg不具有“特定的突变”，野生型tg基因可以是编码具有“相对于上述氨基酸序列整体而言具有例如50％以上、65％以上、80％以上、90％以上、95％以上、97％以上、或99％以上的同一性的氨基酸序列”的蛋白质的基因。[0026]此外，只要编码的tg不具有“特定的突变”，野生型tg基因可以是：与可由上述碱基序列(例如seqidno:1所示的碱基序列)制备的探针、例如针对上述碱基序列的整体或一部分的互补序列在严格条件下杂交的基因、例如dna。“严格条件”可指形成所谓的特异性的杂交体而不形成非特异性的杂交体的条件。如果示出一例，可举出同一性高的dna之间、例如具50％以上、65％以上、80％以上、90％以上、95％以上、97％以上、或99％以上的同一性的dna之间相互杂交而同一性低于其的dna之间不相互杂交的条件，或者作为通常的southern杂交的清洗条件的以与60℃、1×ssc、0.1％sds、较好是60℃、0.1×ssc、0.1％sds、更好是68℃、0.1×ssc、0.1％sds相当的盐浓度和温度清洗1次、较好是2～3次的条件。[0027]如上所述，用于上述杂交的探针可以是基因的互补序列的一部分。这样的探针可通过以基于公知的基因序列制作的寡核苷酸为引物、以包含上述基因的dna片段为模板的pcr来制作。例如，作为探针，可使用300bp左右的长度的dna片段。作为探针使用300bp左右的长度的dna片段的情况下，作为杂交的清洗条件，可举出50℃、2×ssc、0.1％sds。[0028]此外，由于密码子的简并性根据宿主而不同，所以野生型tg基因可以是将任意的密码子取代为与其等价的密码子的基因。即，野生型tg基因可以是基于遗传编码的简并的上述示例的野生型tg基因的变体。例如，野生型tg基因可根据使用的宿主的密码子使用频率修饰为具有最适的密码子。[0029]应予说明，氨基酸序列间的“同一性”是指通过blastp使用默认设定的评分参数(scoringparameters)(matrix,blosum62；gapcosts,existence＝11,extension＝1；compositionaladjustments,conditionalcompositionalscorematrixadjustment)算出的氨基酸序列间的同一性。此外，碱基序列间的“同一性”是指通过blastn使用默认设定的评分参数(match/mismatchscores＝1,-2；gapcosts＝linear)算出的碱基序列间的同一性。[0030]以下，对突变型tg进行说明。[0031]突变型tg具有tg活性。只要可将突变型tg用于所期望的用途，突变型tg的tg活性的程度无特别限定。突变型tg的tg活性例如换算为比活性，可以是与该突变型tg对应的野生型tg的tg活性和/或由seqidno:2所述的氨基酸序列形成的野生型tg的tg活性的50％以上、60％以上、70％以上、80％以上、90％以上、100％以上、120％以上、150％以上、或200％以上，可以是10000％以下、1000％以下、200％以下、150％以下、120％以下、或100％以下，可以是它们的不矛盾的组合。[0032]突变型tg在野生型tg的氨基酸序列中具有“特定的突变”。[0033]即，突变型tg可以是例如具有在seqidno:2所示的氨基酸序列中具有“特定的突变”的氨基酸序列的蛋白质。此外，突变型tg可以是，例如，具有在seqidno:2所示的氨基酸序列中具有“特定的突变”、在除该“特定的突变”以外的位置进而包含1个或数个氨基酸的取代、缺失、插入和/或添加的氨基酸序列，且具有tg活性的蛋白质。[0034]此外，换言之，突变型tg可以是除了具有“特定的突变”以外，具有与野生型tg相同的氨基酸序列的蛋白质。即，突变型tg可以是例如除了具有“特定的突变”以外，具有seqidno:2所示的氨基酸序列的蛋白质。此外，突变型tg可以是例如除了具有“特定的突变”以外，具有在seqidno:2所示的氨基酸序列中包含1个或数个氨基酸的取代、缺失、插入和/或添加的氨基酸序列，且具有tg活性的蛋白质。此外，突变型tg可以是例如除了具有“特定的突变”以外，具有与seqidno:2所示的氨基酸序列具有80％以上、较好是90％以上、更好是95％以上、进一步更好是97％以上、特别好是99％以上的同一性的氨基酸序列，且具有tg活性的蛋白质。[0035]除了如上述示例的突变型tg的氨基酸序列之外，突变型tg还可包含其他氨基酸序列。即，突变型tg可以是与其他氨基酸序列的融合蛋白质。此外，突变型tg可以以包含其他氨基酸序列的形态(即，作为与其他氨基酸序列的融合蛋白质)表达，且最终失去该其他氨基酸序列的一部分或全部。只要没有特别记载，“突变型tg包含其他氨基酸序列”是指最终获得的突变型tg包含其他氨基酸序列。另一方面，只要没有特别记载，“突变型tg以包含其他氨基酸序列的形态表达”是指突变型tg至少在表达时包含其他氨基酸序列，不一定是指最终获得的突变型tg包含其他氨基酸序列。对于野生型tg也是同样。只要突变型tg具有tg活性，“其他氨基酸序列”无特别限定。“其他氨基酸序列”可根据其利用目的等各项条件适当进行选择。作为“其他氨基酸序列”，可举出例如肽标签、信号肽(也称信号序列)、前结构部、蛋白酶的识别序列。“其他氨基酸序列”可连接于例如突变型tg的n末端或c末端、或者其两末端。作为“其他氨基酸序列”，可使用1种氨基酸序列，也可组合使用2种或更多种的氨基酸序列。[0036]作为肽标签，具体可举出his标签、flag标签、gst标签、myc标签、mbp(麦芽糖结合蛋白，maltosebindingprotein)、cbp(纤维素结合蛋白，cellulosebindingprotein)、trx(硫氧还蛋白，thioredoxin)、gfp(绿色荧光蛋白，greenfluorescentprotein)、hrp(辣根过氧化物酶，horseradishperoxidase)、alp(碱性磷酸酶，alkalinephosphatase)、抗体的fc区。作为his标签，可举出6×his标签。肽标签可用于例如表达的突变型tg的检测和纯化。[0037]信号肽只要是在表达突变型tg的宿主中发挥作用，则无特别限定。作为信号肽，可举出sec系分泌路径中被识别的信号肽和tat系分泌路径中被识别的信号肽。作为sec系分泌路径中被识别的信号肽，具体可举出棒状杆菌型细菌的细胞表层蛋白质的信号肽。作为棒状杆菌型细菌的细胞表层蛋白质的信号肽，具体可举出：谷氨酸棒状杆菌(c.glutamicum)的ps1信号序列和ps2(cspb)信号序列(日本特表平6-502548)、停滞棒杆菌(c.stationis)的slpa(cspa)信号序列(日本特开平10-108675)。作为tat系分泌路径中被识别的信号肽，具体可举出：大肠杆菌(e.coli)的tora信号序列、大肠杆菌(e.coli)的sufi信号序列、枯草芽孢杆菌(bacillussubtilis)的phod信号序列、枯草芽孢杆菌(bacillussubtilis)的lipa信号序列、球形节杆菌(arthrobacterglobiformis)的imd信号序列(wo2013/118544)。信号肽可用于例如突变型tg的分泌生产。利用信号肽分泌生产突变型tg的情况下，分泌时信号肽被切割，不具有信号肽的突变型tg可被分泌至菌体外。即，典型的是，最终获得的突变型tg可不具有信号肽。[0038]作为前结构部，具体可举出上述示例的各野生型tg的前结构部。包含编码前结构部的部分的茂原链轮丝菌(streptoverticilliummobaraense)的tg基因的碱基序列示于seqidno:3，包含该基因编码的前结构部的tg的氨基酸序列示于seqidno:4。seqidno:3中，1～135位相当于编码前结构部的部分，136位以后相当于编码成熟tg的部分(即，seqidno:1)。seqidno:4中，1～45位相当于前结构部，46位以后相当于成熟tg(即，seqidno:2)。突变型tg例如可以以包含前结构部的形态表达，除去前结构部而形成成熟蛋白质。突变型tg以包含前结构部的形态表达的情况下，通过除去前结构部，可激活突变型tg。因此，典型的是，最终获得的突变型tg可不具有前结构部。前结构部的除去例如可利用加工酶实施。作为加工酶，可举出sam-p45(appl.environ.microbiol.,2003,69(1),358-366)和碱性蛋白酶等蛋白酶。此外，如后所述，在前结构部与突变型tg的连接部插入蛋白酶的识别序列而使突变型tg表达的情况下，可利用对应的蛋白酶除去前结构部。[0039]作为蛋白酶的识别序列，具体可举出xa因子(factorxa)蛋白酶的识别序列和protev蛋白酶的识别序列。蛋白酶的识别序列可用于例如表达的突变型tg的切割。具体来说，例如将突变型tg作为与肽标签或前结构部等其他氨基酸序列的融合蛋白质表达的情况下，通过在突变型tg与其他氨基酸序列的连接部插入蛋白酶的识别序列，可从表达的突变型tg利用对应的蛋白酶切割其他氨基酸序列，获得不具有其他氨基酸序列的突变型tg。[0040]只要编码如上所述的突变型tg，突变型tg基因无特别限定。应注意，本发明中，术语“基因”只要编码目标蛋白质，不限于dna，可包含任意的多核苷酸。即，“突变型tg基因”可指编码突变型tg的任意的多核苷酸。突变型tg基因可以是dna，也可以是rna，还可以是它们的组合。突变型tg基因可以是单链，也可以是双链。突变型tg基因可以是单链dna，也可以是单链rna。突变型tg基因可以是双链dna，也可以是双链rna，还可以是由dna链和rna链形成的杂交链。突变型tg基因可在单一的多核苷酸链中同时包含dna残基和rna残基。突变型tg基因包含rna的情况下，上述示例的碱基序列等的关于dna的记载可对应于rna适当替换解读。突变型tg基因的形态可根据其利用方式等各项条件适当进行选择。[0041]以下，对“特定的突变”进行说明。[0042]特定的突变是使耐酸性降低的突变。即，突变型tg具有较低的耐酸性。突变型tg可具有比野生型tg低的耐酸性。突变型tg可具有例如比与该突变型tg对应的野生型tg和/或由seqidno:2所示的氨基酸序列形成的野生型tg低的耐酸性。[0043]“耐酸性”可指对于酸性条件下的失活的耐受性。即，“突变型tg具有较低的耐酸性”可指以酸性条件处理突变型tg而导致的失活程度较大，换言之，可指以酸性条件处理突变型tg后的残余活性较低。此外，“突变型tg具有比野生型tg低的耐酸性”可指以酸性条件处理突变型tg而导致的失活程度比以酸性条件处理野生型tg而导致的失活程度大，换言之，可指以酸性条件处理突变型tg后的残余活性比以酸性条件处理野生型tg后的残余活性低。[0044]“突变型tg具有较低的耐酸性”可指例如以酸性条件处理突变型tg后的残余活性为80％以下、70％以下、60％以下、50％以下、40％以下、30％以下、20％以下、10％以下、5％以下、或0％。“突变型tg具有较低的耐酸性”也可指例如，作为将以对照条件处理突变型tg后的残余活性设为100％时的相对值，以酸性条件处理突变型tg后的残余活性为80％以下、70％以下、60％以下、50％以下、40％以下、30％以下、20％以下、10％以下、5％以下、或0％。[0045]作为以酸性条件的处理，可举出ph5.0、ph4.5、或ph4.0下37℃、1小时的处理。作为以对照条件的处理，可举出ph6.0下37℃、1小时的处理。“以某种条件处理tg后的残余活性”是指以该条件处理tg后的tg活性相对于以该条件处理该tg前的tg活性的比率。“以某种条件处理tg”是指将tg置于该条件下。[0046]例如，作为将突变型tg以ph6.0于37℃处理1小时后的残余活性设为100％时的相对值，将突变型tg以ph4.0于37℃处理1小时后的残余活性可为80％以下。此外，例如，作为将突变型tg以ph6.0于37℃处理1小时后的残余活性设为100％时的相对值，将突变型tg以ph4.0于37℃处理1小时后的残余活性也可为50％以下。[0047]作为“特定的突变”，可举出以下的氨基酸残基中的突变：a261、v271、a322、v326、d46、m16、y34、w38、s199。[0048]“特定的突变”可以是1个氨基酸残基处的突变，也可以是2个或更多的氨基酸残基处的突变的组合。即，“特定的突变”可包含例如选自这些氨基酸残基中的1个或数个氨基酸残基处的突变。“特定的突变”例如可以是选自这些氨基酸残基中的1个氨基酸残基处的突变，也可以是选自这些氨基酸残基中的2个或更多的氨基酸残基处的突变的组合。[0049]任何氨基酸残基处的突变均可单独选择，也可不单独选择。应予说明，例如m16、y34、w38和s199处的突变均可不单独选择。[0050]作为“特定的突变”，可特别举出a261、v271、a322、v326和d46处的突变。即，“特定的突变”可包含例如选自a261、v271、a322、v326和d46中的1个或数个氨基酸残基处的突变。“特定的突变”例如可以是选自a261、v271、a322、v326和d46中的1个或数个氨基酸残基处的突变，也可以是选自a261、v271、a322、v326和d46中的1个或数个氨基酸残基处的突变与选自m16、y34、w38和s199中的1个或数个氨基酸残基处的突变的组合。[0051]作为“特定的突变”，可进一步特别举出a322和d46处的突变。即，“特定的突变”可包含例如a322和/或d46处的突变。“特定的突变”例如可以是a322和/或d46处的突变，也可以是a322和/或d46处的突变与选自a261、v271、v326、m16、y34、w38和s199中的1个或数个氨基酸残基处的突变的组合。[0052]用于特定氨基酸残基的上述表述中，数字表示在seqidno:2所示的氨基酸序列中的位置，数字左侧的文字表示在seqidno:2所示的氨基酸序列中的各位置的氨基酸残基(即，各位置的修饰前的氨基酸残基)。即，例如，“a261”表示在seqidno:2所示的氨基酸序列中的261位的a(ala)残基。[0053]任意的野生型tg中，这些氨基酸残基分别表示“与seqidno:2所示的氨基酸序列中的该氨基酸残基相应的氨基酸残基”。即，例如，任意的野生型tg中的“a261”表示与seqidno:2所示的氨基酸序列中的261位的a(ala)残基相应的氨基酸残基。[0054]上述各突变可以是氨基酸残基的取代。上述各突变中，只要tg的耐酸性下降，修饰后的氨基酸残基可以是除修饰前的氨基酸残基以外的任何氨基酸残基。即，作为修饰后的氨基酸残基，选择tg的耐酸性下降的氨基酸残基即可。作为修饰后的氨基酸残基，具体可举出：选自k(lys)、r(arg)、h(his)、a(ala)、v(val)、l(leu)、i(ile)、g(gly)、s(ser)、t(thr)、p(pro)、f(phe)、w(trp)、y(tyr)、c(cys)、m(met)、d(asp)、e(glu)、n(asn)、和q(gln)中的除修饰前的氨基酸残基以外的氨基酸残基。应予说明，d46处的修饰后的氨基酸残基例如可选自除c(cys)以外的氨基酸残基。例如，“特定的突变”由d46处的突变形成(即，d46处的突变被单独选择)的情况下，d46处的修饰后的氨基酸残基可选自除c(cys)以外的氨基酸残基。[0055]作为“特定的突变”，具体可举出以下的突变：a261c、v271c、a322c、v326c、d46p、m16t、y34f、w38f、s199a。[0056]即，“特定的突变”可包含例如选自这些突变中的1个或数个突变。“特定的突变”例如可以是选自这些突变中的1个突变，也可以是选自这些突变中的2个或更多的突变的组合。此外，“特定的突变”例如可以是选自这些突变中的1个或数个突变与除此以外的选自a261、v271、a322、v326、d46、m16、y34、w38、s199中的1个或数个氨基酸残基处的突变的组合。[0057]此外，换言之，a261、v271、a322、v326、d46、m16、y34、w38和s199处的突变例如分别可以是a261c、v271c、a322c、v326c、d46p、m16t、y34f、w38f和s199a。[0058]作为“特定的突变”，可特别举出a261c、v271c、a322c、v326c和d46p。即，“特定的突变”例如可包含选自a261c、v271c、a322c、v326c和d46p中的1个或数个突变。“特定的突变”例如可以是选自a261c、v271c、a322c、v326c和d46p中的1个突变，也可以是选自a261c、v271c、a322c、v326c和d46p中的2个或更多的突变的组合。此外，“特定的突变”例如可以是选自a261c、v271c、a322c、v326c和d46p中的1个或数个突变与除此以外的选自a261、v271、a322、v326、d46、m16、y34、w38和s199中的1个或数个氨基酸残基处的突变的组合。[0059]作为“特定的突变”，可进一步特别举出a322c和d46p。即，“特定的突变”例如可包含a322c和/或d46p。“特定的突变”例如可以是a322c和/或d46p。此外，“特定的突变”例如可以是a322c和/或d46p与除此以外的选自a261、v271、a322、v326、d46、m16、y34、w38和s199中的1个或数个氨基酸残基处的突变的组合。[0060]用于特定突变的上述表述中，数字及其左侧的文字的含义与前述相同。用于特定突变的上述表述中，数字右侧的文字表述各位置的修饰后的氨基酸残基。即，例如，“a261c”表示在seqidno:2所示的氨基酸序列中的261位的a(ala)残基取代为c(cys)残基的突变。[0061]任意的野生型tg中，这些突变分别表示“与seqidno:2所示的氨基酸序列中的该突变相应的突变”。任意的野生型tg中，“与seqidno:2所示的氨基酸序列中的x位的氨基酸残基取代为某个氨基酸残基的突变相应的突变”换一种方式理解为“与seqidno:2所示的氨基酸序列中的x位的氨基酸残基相应的氨基酸残基取代为某个氨基酸残基的突变”。即，例如，任意的野生型tg中，“a261c”表示与seqidno:2所示的氨基酸序列中的261位的a(ala)残基相应的氨基酸残基取代为c(cys)残基的突变。[0062]突变的组合无特别限定。作为突变的组合，可举出例如以下的组合：a261c/a322c、a261c/a322c/s199a、v271c/v326c、m16t/y34f、m16t/s199a。[0063]作为突变的组合，可特别举出a261c/a322c、a261c/a322c/s199a、v271c/v326c。[0064]作为突变的组合，可进一步特别举出a261c/a322c、a261c/a322c/s199a。[0065]即，“特定的突变”可包含例如这些中的任一种组合(这些组合中的任何一种)。“特定的突变”例如可以是这些中的任一种组合。此外，“特定的突变”例如可以是这些中的任一种组合与除此以外的选自a261、v271、a322、v326、d46、m16、y34、w38和s199中的1个或数个氨基酸残基处的突变的组合。[0066]用于特定组合的上述表述中，数字及其左侧和右侧的文字的含义与前述相同。用于特定组合的上述表述中，以“/”划分的2个或更多的突变的并列表述表示双重突变或更多的多重突变。即，例如，“a261c/a322c”表示a261c和a322c的双重突变。[0067]上述各突变中所提及的氨基酸残基的位置是为了便于特定被修饰的氨基酸残基的记载，不需要表示野生型tg中的绝对位置。即，上述各突变中的氨基酸残基的位置表示基于seqidno:2所示的氨基酸序列的相对位置，其绝对位置可能会因氨基酸残基的缺失、插入或添加等而有前后偏移。例如，在seqidno:2所示的氨基酸序列中，在相对x位靠近n末端侧的位置缺失或插入1个氨基酸残基的情况下，原来的x位的氨基酸残基分别变成从n末端起数第x-1位或第x+1位的氨基酸残基，但视作“与seqidno:2所示的氨基酸序列的x位的氨基酸残基相应的氨基酸残基”。此外，上述各突变中所提及的修饰前的氨基酸残基是为了便于特定被修饰的氨基酸残基的记载，不需要在野生型tg中是保守的。即，野生型tg不具有seqidno:2所示的氨基酸序列的情况下，上述各突变中所提及的修饰前的氨基酸残基可能会不保守。即，上述各突变中，上述各突变中所提及的修饰前的氨基酸残基不保守的情况下，可还包含该氨基酸残基取代为其他氨基酸残基(例如，上述各突变中所提及的修饰后的氨基酸残基)的突变。例如，“a261处的突变”中，不仅限于与a261对应的氨基酸残基保守(即，为a(ala)残基)的情况下将该氨基酸残基取代为其他氨基酸残基的突变，也可包含与a261对应的氨基酸残基不保守(即，不是a(ala)残基)的情况下将该氨基酸残基取代为其他氨基酸残基的突变。修饰前和修饰后的氨基酸残基以互不相同的条件进行选择。应予说明，对于任意的突变型tg，与其对应的野生型tg特别是可为上述各突变中所提及的修饰前的氨基酸残基保守的那些。[0068]任意的tg的氨基酸序列中，哪个氨基酸残基是“与seqidno:2所示的氨基酸序列中的x位的氨基酸残基相应的氨基酸残基”可通过进行该任意的tg的氨基酸序列与seqidno:2所述的氨基酸序列的比对来确定。比对例如可使用公知的基因分析软件来进行。作为具体的软件，可举出株式会社日立解决方案(hitachisolutions)制的dnasis、genetyx制的genetyx等(elizabethc.tyleretal.,computersandbiomedicalresearch,24(1)72-96,1991；bartongjetal.,journalofmolecularbiology,198(2),327-37,1987)。[0069]＜2＞突变型tg的制造突变型tg例如可通过使具有突变型tg基因的宿主表达该基因来制造。[0070]此外，突变型tg例如也可通过以无细胞蛋白质合成系统使突变型tg基因表达来制造。[0071]以下，对利用具有突变型tg基因的宿主的突变型tg的制造进行详细说明。[0072]＜2-1＞宿主具有突变型tg基因的宿主可通过将突变型tg基因引入适当的宿主来获得。“将突变型tg基因引入宿主”也可包含将宿主所具有的野生型tg基因等tg基因修饰为编码突变型tg。“具有突变型tg基因”也称为“具有突变型tg”。[0073]对于宿主而言，只要是可表达发挥功能的突变型tg的宿主，则无特别限定。作为宿主，可举出微生物、植物细胞、昆虫细胞、动物细胞。作为宿主，可特别举出微生物。作为微生物，可举出细菌和酵母。作为微生物，可特别举出细菌。[0074]作为细菌，可举出属于肠杆菌科(enterobacteriaceae)的细菌、棒状杆菌型细菌、芽孢杆菌属(bacillus)细菌。[0075]作为属于肠杆菌科的细菌，可举出属于埃希氏菌(escherichia)属、肠杆菌(enterobacter)属、泛菌(pantoea)属、克雷伯氏菌(klebsiella)属、沙雷氏菌(serratia)属、欧文氏菌(erwinia)属、光杆状菌(photorhabdus)属、普罗威登斯菌(providencia)属、沙门氏菌(salmonella)属、摩根氏菌(morganella)属等属的细菌。具体来说，可使用通过ncbi(美国国家生物信息中心，nationalcenterforbiotechnologyinformation)的数据库(http://www.ncbi.nlm.nih.gov/taxonomy/browser/wwwtax.cgi？id＝91347)中所用的分类法被分类为肠杆菌科的细菌。作为埃希氏菌属细菌，无特别限定，可举出通过微生物学的专家已知的分类被分类为埃希氏菌属的细菌。作为埃希氏菌属细菌，可举出例如neidhardt等的著作(backmannb.j.,1996,derivationsandgenotypesofsomemutantderivativesofescherichiacolik-12,pp.2460-2488,table1,inf.d.neidhardt(ed.),escherichiacoliandsalmonellacellularandmolecularbiology/secondedition,americansocietyformicrobiologypress,washington,d.c.)中所记载的细菌。作为埃希氏菌属细菌，可举出例如大肠杆菌(escherichiacoli)。作为大肠杆菌，可举出例如w3110株(atcc27325)和mg1655株(atcc47076)等大肠杆菌k-12株，大肠杆菌k5株(atcc23506)，bl21(de3)株等大肠杆菌b株，以及它们的衍生株。作为肠杆菌属细菌，可举出例如成团肠杆菌(enterobacteragglomerans)和产气肠杆菌(enterobacteraerogenes)。作为泛菌属细菌，可举出例如菠萝泛菌(pantoeaananatis)、斯氏泛菌(pantoeastewartii)、成团泛菌(pantoeaagglomerans)、柠檬泛菌(pantoeacitrea)。作为欧文氏菌属细菌，可举出例如解淀粉欧文氏菌(erwiniaamylovora)、胡萝卜软腐欧文氏菌(erwiniacarotovora)。作为克雷伯氏菌属细菌，可举出例如植生克雷伯氏菌(klebsiellaplanticola)。应予说明，属于肠杆菌科的细菌近年来通过综合性比较基因组分析被重新分类为多个科(adeloum.etal.,genome-basedphylogenyandtaxonomyofthe‘enterobacteriales’:proposalforenterobacteralesord.nov.dividedintothefamiliesenterobacteriaceae,erwiniaceaefam.nov.,pectobacteriaceaefam.nov.,yersiniaceaefam.nov.,hafniaceaefam.nov.,morganellaceaefam.nov.,andbudviciaceaefam.nov.,int.j.syst.evol.microbiol.,2016,66:5575-5599)。但是，本发明中，以前被分类为肠杆菌科的细菌视作属于肠杆菌科的细菌。[0076]作为棒状杆菌型细菌，可举出属于棒状杆菌(corynebacterium)属、短杆菌(brevibacterium)属、及微杆菌(microbacterium)属等属的细菌。[0077]作为棒状杆菌型细菌，具体可举出如下所示的种：嗜乙酰乙酸棒杆菌(corynebacteriumacetoacidophilum)醋谷氨酸棒状杆菌(corynebacteriumacetoglutamicum)解烷棒状杆菌(corynebacteriumalkanolyticum)帚石南棒状杆菌(corynebacteriumcallunae)钝齿棒杆菌(corynebacteriumcrenatum)谷氨酸棒状杆菌(corynebacteriumglutamicum)百合棒状杆菌(corynebacteriumlilium)栖糖蜜棒杆菌(corynebacteriummelassecola)嗜热产氨棒杆菌(有效棒杆菌)(corynebacteriumthermoaminogenes(corynebacteriumefficiens))力士棒杆菌(corynebacteriumherculis)散枝短杆菌(谷氨酸棒状杆菌)(brevibacteriumdivaricatum(corynebacteriumglutamicum))黄色短杆菌(谷氨酸棒状杆菌)(brevibacteriumflavum(corynebacteriumglutamicum))brevibacteriumimmariophilum乳糖发酵短杆菌(谷氨酸棒状杆菌)(brevibacteriumlactofermentum(corynebacteriumglutamicum))玫瑰色短杆菌(brevibacteriumroseum)解糖短杆菌(brevibacteriumsaccharolyticum)硫殖短杆菌(brevibacteriumthiogenitalis)产氨棒杆菌(停滞棒杆菌)(corynebacteriumammoniagenes(corynebacteriumstationis))白色短杆菌(brevibacteriumalbum)蜡状短杆菌(brevibacteriumcerinum)嗜氨微杆菌(microbacteriumammoniaphilum)。[0078]作为棒状杆菌型细菌，具体可举出如下所示的菌株：嗜乙酰乙酸棒杆菌atcc13870醋谷氨酸棒状杆菌atcc15806解烷棒状杆菌atcc21511帚石南棒状杆菌atcc15991钝齿棒杆菌as1.542谷氨酸棒状杆菌atcc13020,atcc13032,atcc13060,atcc13869,fermbp-734百合棒状杆菌atcc15990栖糖蜜棒杆菌atcc17965有效棒杆菌(嗜热产氨棒杆菌)aj12340(fermbp-1539)力士棒杆菌atcc13868散枝短杆菌(谷氨酸棒状杆菌)atcc14020黄色短杆菌(谷氨酸棒状杆菌)atcc13826,atcc14067,aj12418(fermbp-2205)brevibacteriumimmariophilumatcc14068乳糖发酵短杆菌(谷氨酸棒状杆菌)atcc13869玫瑰色短杆菌atcc13825解糖短杆菌atcc14066硫殖短杆菌atcc19240产氨棒杆菌(停滞棒杆菌)atcc6871,atcc6872白色短杆菌atcc15111蜡状短杆菌atcc15112嗜氨微杆菌atcc15354。[0079]应予说明，棒状杆菌属细菌中，也包括以前被分类为短杆菌属而现在被合并至棒状杆菌属的细菌(int.j.syst.bacteriol.,41,255(1991))。此外，停滞棒杆菌中，也包括以前被分类为产氨棒杆菌，但通过16srrna的碱基序列分析等被重新分类为停滞棒杆菌的细菌(int.j.syst.evol.microbiol.,60,874-879(2010))。[0080]作为芽孢杆菌属细菌，可举出例如枯草芽孢杆菌(bacillussubtilis)、解淀粉芽孢杆菌(bacillusamyloliquefaciens)、短小芽孢杆菌(bacilluspumilus)、地衣芽孢杆菌(bacilluslicheniformis)、巨大芽孢杆菌(bacillusmegaterium)、短芽孢杆菌(bacillusbrevis)、多粘芽孢杆菌(bacilluspolymixa)、嗜热脂肪芽孢杆菌(bacillusstearothermophilus)。作为枯草芽孢杆菌，具体可举出例如枯草芽孢杆菌168marburg株(atcc6051)和枯草芽孢杆菌py79株(plasmid,1984,12,1-9)。作为解淀粉芽孢杆菌，具体可举出例如解淀粉芽孢杆菌t株(atcc23842)和解淀粉芽孢杆菌n株(atcc23845)。[0081]作为酵母，可举出属于酿酒酵母(saccharomycescerevisiae)等的酵母菌属、产朊假丝酵母(candidautilis)等的念球菌属、巴斯德毕赤酵母(pichiapastoris)等的毕赤酵母菌属、多形汉逊酵母(hansenulapolymorpha)等的汉逊酵母属、粟酒裂殖酵母(schizosaccharomycespombe)等的裂殖酵母属等属的酵母。[0082]这些菌株例如可从美国菌种保藏中心(地址12301parklawndrive,rockville,maryland20852p.o.box1549,manassas,va20108,unitedstatesofamerica)获得。即，已赋予各菌株对应的登记编号，可采用该登记编号获取(参照http://www.atcc.org/)。与各菌株对应的登记编号记载于美国菌种保藏中心的目录。此外，这些菌株例如可从保藏各菌株的保藏机构获得。[0083]突变型tg基因例如可通过将野生型tg基因修饰为所编码的tg具有“特定的突变”来获得。作为修饰的基础的野生型tg基因例如可通过自具有野生型tg基因的生物的克隆或者通过化学合成来获得。此外，突变型tg基因也可不介由野生型tg基因而获得。突变型tg基因例如可直接通过化学合成获得。获得的突变型tg基因可直接采用，或者也可进一步修饰后采用。例如，通过对某种形态的突变型tg基因进行修饰，可获得另一种形态的突变型tg基因。[0084]基因的修饰可通过公知的方法进行。例如，可通过定点突变法向dna的目标位点引入目标突变。即，例如，可通过定点突变法，对基因的编码区域进行修饰，使得所编码的蛋白质在特定的位点包含氨基酸残基的取代、缺失、插入和/或添加。作为定点突变法，可举出使用pcr的方法(higuchi,r.,61,inpcrtechnology,erlich,h.a.eds.,stocktonpress(1989)；carter,p.,meth.inenzymol.,154,382(1987))、使用噬菌体的方法(kramer,w.和frits,h.j.,meth.inenzymol.,154,350(1987)；kunkel,t.a.等,meth.inenzymol.,154,367(1987))。[0085]将突变型tg基因引入宿主的方法无特别限定。突变型tg基因被以可表达的方式保持于宿主即可。即，宿主中，突变型tg基因以在该宿主中发挥作用的启动子的控制下可表达的方式保持即可。宿主中，突变型tg基因可像质粒那样存在于在染色体外自主复制的载体上，也可引入至染色体上。宿主可仅具有1个拷贝的突变型tg基因，也可具有2个或更多的拷贝。宿主可仅具有1种突变型tg基因，也可具有2种或更多种的突变型tg基因。[0086]用于使突变型tg基因表达的启动子只要在宿主中发挥作用，则无特别限定。“在宿主中发挥作用的启动子”是指在宿主中具有启动子活性的启动子。启动子可以是来源于宿主的启动子，也可以是来源于其他种的启动子。启动子可以是tg基因的固有的启动子，也可以是其他基因的启动子。启动子可以是比tg基因的固有的启动子更强的启动子。作为在大肠杆菌等肠杆菌科的细菌中发挥作用的强启动子，可举出例如、t7启动子、trp启动子、trc启动子、lac启动子、tac启动子、tet启动子、arabad启动子、rpoh启动子、msra启动子、来源于双歧杆菌(bifidobacterium)的pm1启动子、pr启动子、和pl启动子。此外，作为在棒状杆菌型细菌中发挥作用的强启动子，可举出经人工设计修饰的p54-6启动子(appl.microbiol.biotechnolo.,53,674-679(2000))，可在棒状杆菌型细菌内通过乙酸、乙醇、丙酮酸等诱导的pta、acea、aceb、adh、amye启动子，作为在棒状杆菌型细菌内表达量高的强启动子的cspb、sod、tuf((ef-tu))启动子(journalofbiotechnology104(2003)311-323,applenvironmicrobiol.2005dec；71(12):8587-96.)、p2启动子(wo2018/079684)、p3启动子(wo2018/079684)、lac启动子、tac启动子、trc启动子、f1启动子(wo2018/179834)。此外，作为强启动子，可通过使用各种报告基因，获得已有的启动子的高活性型来使用。例如，通过使启动子区域内的-35、-10区域接近共有序列，可提高启动子的活性(国际公开第00/18935号)。作为高活性型启动子，可举出各种tac样启动子(katashkinaji等russianfederationpatentapplication2006134574)和pnlp8启动子(wo2010/027045)。启动子的强度的评价方法和强启动子的例子记载于goldstein等的论文(prokaryoticpromotersinbiotechnology.biotechnol.annu.rev.,1,105-128(1995))等。[0087]此外，可在突变型tg基因的下游配置用于终止转录的终止子。终止子只要在宿主中发挥作用，则无特别限定。终止子可以是来源于宿主的终止子，也可以是来源于其他种的终止子。终止子可以是tg基因的固有的终止子，也可以是其他基因的终止子。作为终止子，具体可举出例如t7终止子、t4终止子、fd噬菌体终止子、tet终止子、和trpa终止子。[0088]突变型tg基因例如可使用包含该基因的载体引入宿主。包含突变型tg基因的载体也称为突变型tg基因的表达载体或重组载体。突变型tg基因的表达载体例如可通过将包含突变型tg基因的dna片段与在宿主中发挥作用的载体连结来构建。通过用突变型tg基因的表达载体转化宿主，可获得引入了该载体的转化体，即，可将该基因引入宿主。作为载体，可采用在宿主的细胞内能够自主复制的载体。载体较好是多拷贝载体。此外，为了对转化体进行选择，载体较好是具有抗生素抗性基因等标记物。此外，载体可具备用于表达所插入的基因的启动子和终止子。载体例如可以是来源于细菌质粒的载体、来源于酵母质粒的载体、来源于噬菌体的载体、粘粒或噬菌粒等。作为可在大肠杆菌等肠杆菌科的细菌中自主复制的载体，具体可举出例如puc19、puc18、phsg299、phsg399、phsg398、pbr322、pstv29(均可从宝生物(takarabio)株式会社获得)、pacyc184、pmw219(株式会社日本基因(nippongene))、ptrc99a(法玛西亚(pharmacia)公司)、pprok系载体(clontech公司)、pkk233-2(clontech公司制)、pet系载体(novagen公司)、pqe系载体(qiagen公司)、pcoldtfdna(宝生物)、pacyc系载体、广宿主谱载体rsf1010。作为可在棒状杆菌型细菌中自主复制的载体，具体可举出例如phm1519(agric.biol.chem.,48,2901-2903(1984))；pam330(agric.biol.chem.,48,2901-2903(1984))；将它们改良而得的具有耐药性基因的质粒；pcry30(日本特开平3-210184)；pcry21、pcry2ke、pcry2kx、pcry31、pcry3ke和pcry3kx(日本特开平2-72876、美国专利5185262号)；pcry2和pcry3(日本特开平1-191686)；paj655、paj611和paj1844(日本特开昭58-192900)；pcg1(日本特开昭57-134500)；pcg2(日本特开昭58-35197)；pcg4和pcg11(日本特开昭57-183799)；ppk4(美国专利6090597号)；pvk4(日本特开平9-322774号)；pvk7(日本特开平10-215883)；pvk9(wo2007/046389)；pvs7(wo2013/069634)；pvc7(日本特开平9-070291)。此外，作为可在棒状杆菌型细菌中自主复制的载体，具体还可举出例如pvc7h2等pvc7的变体(wo2018/179834)。构建表达载体时，例如，可将包含固有的启动子区域的突变型tg基因直接整合至载体，也可将突变型tg的编码区域结合至如上所述的启动子的下游后整合至载体，也可在载体上原本具备的启动子的下游整合突变型tg的编码区域。[0089]关于可在各种微生物中利用的载体、启动子、终止子，例如在“微生物学基础讲座8基因工程，共立出版，1987年”中详细记载，可利用这些。[0090]此外，突变型tg基因例如可引入至宿主的染色体上。向染色体的基因引入，例如可采用同源重组进行(milleri,j.h.experimentsinmoleculargenetics,1972,coldspringharborlaboratory)。作为利用同源重组的基因引入法，可举出例如red驱动整合(red-drivenintegration)法(datsenko,k.a和wanner,b.l.proc.natl.acad.sci.usa.97:6640-6645(2000))等使用直链dna的方法、使用包含温度敏感性复制起点的质粒的方法、使用可接合转移的质粒的方法、使用不具有在宿主内发挥作用的复制起点的自杀载体的方法、使用了噬菌体的转导法(transductionmethod)。基因可仅引入1拷贝，也可引入2拷贝或更多。例如，通过以染色体上存在多个拷贝的序列为靶标进行同源重组，可向染色体引入基因的多个拷贝。作为染色体上存在多个拷贝的序列，可举出重复dna序列(repetitivedna)、存在于转座子两端的反向重复序列。此外，也可将本发明的实施所不需要的基因等的染色体上的适当的序列作为靶标进行同源重组。此外，基因也可使用转座子或mini-mu随机地引入至染色体上(日本特开平2-109985号公报、us5882888、ep805867b1)。向染色体引入基因时，例如，可将包含固有的启动子区域的突变型tg基因直接整合至染色体，也可将突变型tg的编码区域结合至如上所述的启动子的下游后整合至染色体，也可在染色体上原本存在的启动子的下游整合突变型tg的编码区域。[0091]染色体上已引入基因例如可通过使用具有与该基因的全部或一部分互补的碱基序列的探针的southern杂交、或者使用基于该基因的碱基序列制成的引物的pcr进行确认。[0092]转化方法无特别限定，可使用目前已知的方法。作为转化方法，可举出例如关于大肠杆菌k-12报道的以氯化钙处理受体菌细胞而增加dna的透过性的方法(mandel,m.和higa,a.,j.mol.biol.1970,53,159-162)、关于枯草芽孢杆菌报道的由增殖阶段的细胞制备感受态细胞来引入dna的方法(duncan,c.h.,wilson,g.a.和young,f.e..,1977.gene1:153-167)等。此外，作为转化方法，还可应用关于枯草芽孢杆菌、放线菌类和酵母已知的将dna受体菌的细胞形成为容易纳入重组dna的原生质体或原生质球的状态来将重组dna引入dna受体菌的方法(chang,s.和choen,s.n.,1979.mol.gen.genet.168:111-115；bibb,m.j.,ward,j.m.和hopwood,o.a.1978.nature274:398-400；hinnen,a.,hicks,j.b.和fink,g.r.1978.proc.natl.acad.sci.usa75:1929-1933)。此外，作为转化方法，还可利用关于棒状杆菌型细菌报道的电脉冲法(日本特开平2-207791号公报)。[0093]此外，宿主在染色体等已具有野生型tg基因等tg基因的情况下，也可通过将该tg基因修饰为编码突变型tg，从而将宿主修饰为具有突变型tg基因。“突变型tg基因的引入”也可包括将宿主所具有的tg基因修饰为突变型tg基因。存在于染色体等的tg基因的修饰例如可通过自然突变、诱变处理或基因工程进行实施。[0094]宿主可具有野生型tg基因，也可不具有野生型tg基因。宿主特别地可不具有野生型tg基因。[0095]只要可制造突变型tg，宿主可具有任意的性质。[0096]＜2-2＞宿主的培养通过对具有突变型tg基因的宿主进行培养，可使其表达突变型tg。[0097]只要宿主可增殖，表达发挥作用的突变型tg，则使用的培养基无特别限定。作为培养基，例如可使用细菌和酵母等微生物的培养所用的通常的培养基。培养基可根据需要含有碳源、氮源、磷酸源、硫源、其他各种有机成分和无机成分等培养基成分。培养基成分的种类和浓度可根据宿主的种类等各种条件适当设定。[0098]作为碳源，具体可举出例如葡萄糖、果糖、蔗糖、乳糖、半乳糖、木糖、阿拉伯糖、黑糖蜜(blackstrapmolasses)、淀粉的水解产物、生物质的水解产物等糖类，乙酸、柠檬酸、琥珀酸、葡萄糖酸等有机酸类，乙醇、甘油、粗甘油等醇类，脂肪酸类。应予说明，作为碳源，可优选采用来源于植物的原料。作为植物，可举出例如玉米、大米、小麦、大豆、甘蔗、甜菜、棉花。作为来源于植物的原料，可举出例如根、茎、干、枝、叶、花、种子等器官、包含这些的植物体、这些植物器官的分解产物。来源于植物的原料的利用形态无特别限定，能够以例如未加工品、榨取汁液、粉碎物、纯化物等任意的形态利用。此外，木糖等五碳糖、葡萄糖等六碳糖或它们的混合物例如可由植物生物质获得并使用。具体来说，这些糖类可通过将植物生物质供于水蒸气处理、浓酸水解、稀酸水解、基于纤维素酶等酶的水解、碱处理等处理来获得。应予说明，半纤维素通常比纤维素更易水解，因此可将植物生物质中的半纤维素预先水解而使五碳糖游离，接着将纤维素水解而生成六碳糖。此外，木糖例如可使宿主保有由葡萄糖等六碳糖向木糖的转化路径而通过由六碳糖的转化进行供给。作为碳源，可使用1种碳源，也可组合使用2种或更多种的碳源。[0099]只要宿主可增殖，表达发挥作用的突变型tg，则培养基中的碳源的浓度无特别限定。培养基中的碳源的浓度例如可在不阻碍突变型tg的生产的范围内尽可能提高。培养基中的碳源的初始浓度例如通常为5～30w/v％，较好是10～20w/v％。此外，可适当向培养基中追加供给碳源。例如，可根据伴随培养进行的碳源的减少或耗尽，向培养基中追加供给碳源。只要最终生产突变型tg，则碳源可暂时耗尽，但有时培养较好是以碳源不耗尽、或者不会持续为碳源耗尽的状态的方式实施。[0100]作为氮源，具体可举出例如硫酸铵、氯化铵、磷酸铵等铵盐，蛋白胨、酵母提取物、肉提取物、大豆蛋白质分解产物等有机氮源，氨，尿素等。可将用于调整ph的氨气和氨水用作氮源。作为氮源，可使用1种氮源，也可组合使用2种或更多种的氮源。[0101]作为磷酸源，具体可举出例如磷酸二氢钾、磷酸氢二钾等磷酸盐，焦磷酸等磷酸聚合物。作为磷酸源，可使用1种磷酸源，也可组合使用2种或更多种的磷酸源。[0102]作为硫源，具体可举出例如硫酸盐、硫代硫酸盐、亚硫酸盐等无机硫化合物，半胱氨酸、胱氨酸、谷胱甘肽等含硫氨基酸。作为硫源，可使用1种硫源，也可组合使用2种或更多种的硫源。[0103]作为其他各种有机成分和无机成分，具体可举出例如氯化钠、氯化钾等无机盐类，铁、锰、镁、钙等微量金属类，维生素b1、维生素b2、维生素b6、烟酸、烟酰胺、维生素b12等维生素类，氨基酸类，核酸类，包含它们的蛋白胨、酪蛋白氨基酸、酵母提取物、大豆蛋白质分解产物等有机成分。作为其他各种有机成分和无机成分，可使用1种成分，也可组合使用2种或更多种的成分。[0104]此外，使用生长发育需要氨基酸等营养物的营养缺陷性突变株的情况下，较好是向培养基中补充该所需要的营养物。[0105]只要宿主可增殖，表达发挥作用的突变型tg，则培养条件无特别限定。培养例如可在细菌和酵母等微生物的培养所用的通常的条件下进行。培养条件可根据宿主的种类等各种条件适当设定。此外，可根据需要进行突变型tg基因的表达诱导。[0106]培养可使用液体培养基进行。培养时，例如，可将用琼脂培养基等固体培养基培养宿主而得的培养物直接接种于液体培养基，也可将对宿主用液体培养基进行种子培养(seedculture)而得的培养物接种于主要培养(mainculture)用的液体培养基。即，培养分为种子培养与主要培养进行。该情况下，种子培养与主要培养的培养条件可相同，也可不同。突变型tg至少在主要培养中表达即可。培养开始时培养基所含的宿主的量无特别限定。例如，可在培养开始时，相对于主要培养用的培养基，添加0.1质量％～100质量％、较好是1质量％～50质量％的od660＝4～100的种子培养液。[0107]培养可通过分批培养(batchculture)、补料分批培养(fed-batchculture)、连续培养(continuousculture)、或它们的组合来实施。应予说明，培养开始时的培养基也称为“初始培养基”。此外，补料分批培养或连续培养中向培养系统(例如发酵槽)中供给的培养基也称为“补料分批培养基”。此外，补料分批培养或连续培养中向培养系统中供给补料分批培养基也称为“流加”。应予说明，培养分为种子培养与主要培养的情况下，种子培养与主要培养的培养形态可相同，也可不同。例如，种子培养与主要培养可以是均以分批培养进行，也可以是种子培养以分批培养进行，主要培养以补料分批培养或连续培养进行。[0108]本发明中，碳源等各种成分可含于初始培养基、补料分批培养基，或者同时含于这两者。即，培养的过程中，碳源等各种成分可单独或以任意的组合追加供给至培养基。这些成分均可1次或多次供给，也可连续供给。初始培养基所含的成分的种类可与补料分批培养基所含的成分的种类相同，也可不同。此外，初始培养基所含的各成分的浓度可与补料分批培养基所含的各成分的浓度相同，也可不同。此外，可使用所含成分的种类和/或浓度不同的2种或更多种的补料分批培养基。例如，间歇地进行多次流加的情况下，各补料分批培养基所含的成分的种类和/或浓度可相同，也可不同。[0109]培养例如可在好氧条件(aerobiccondition)下进行。“好氧条件”可指培养基中的溶氧浓度为0.33ppm以上，较好是1.5ppm以上。氧浓度具体可控制为例如饱和氧浓度的1～50％、较好是5％左右。培养例如可通过通气培养或振荡培养实施。培养基的ph例如可为ph3～10，较好是ph4.0～9.5。培养中，可根据需要对培养基的ph进行调整。培养基的ph可使用氨气、氨水、碳酸钠、碳酸氢钠、碳酸钾、碳酸氢钾、碳酸镁、氢氧化钠、氢氧化钾、氢氧化钙、氢氧化镁等各种碱性或酸性物质进行调整。培养温度例如可为20～45℃，较好是25℃～37℃。培养时间例如可为10小时～120小时。培养可持续到培养基中的碳源被消耗，或者直到宿主的活性消失。[0110]通过这样对宿主进行培养，可获得含有突变型tg的培养物。突变型tg例如可积聚在宿主的菌体内。“菌体”可根据宿主的种类适当解读为“细胞”。此外，根据宿主的种类和/或突变型tg基因的设计，突变型tg例如可积聚于周质，也可被分泌至菌体外。[0111]突变型tg可在含于培养物(具体为培养基或菌体)的状态下直接使用，也可从培养物(具体为培养基或菌体)纯化后使用。纯化可实施至所期望的程度。即，作为突变型tg，可举出经纯化的突变型tg和含突变型tg的组分(fraction)。换言之，突变型tg可以以纯化酶的形态使用，也可以以这样的组分的形态(即，含于这样的组分的形态)使用，还可以以它们的组合的形态使用。只要以可对其底物作用的方式含有突变型tg，则这样的组分无特别限定。作为这样的组分，可举出具有突变型tg基因的宿主(即，具有突变型tg的宿主)的培养物、从该培养物回收的菌体、从该培养物回收的培养上清液、它们的处理产物(例如，菌体破碎产物、菌体溶解产物、菌体提取物、固定化菌体等菌体处理产物)、它们的部分纯化产物(即，粗纯化产物)、它们的组合。应予说明，“经纯化的突变型tg”可包含粗纯化产物。这些组分均可单独使用，也可与经纯化的突变型tg组合使用。突变型tg例如可以以不含于菌体的形态使用。此外，突变型tg例如还可以以后述的本发明的组合物的形态使用。[0112]突变型tg积聚于培养基的情况下，例如可通过离心分离等获得培养上清液，从培养上清液纯化突变型tg。此外，突变型tg积聚于宿主的菌体内的情况下，例如可将菌体供于破碎、溶解、提取等处理，从处理产物纯化突变型tg。突变型tg的纯化例如可通过用于蛋白质纯化的公知的方法实施。作为这样的方法，可举出硫酸铵分离、离子交换层析、疏水层析、亲和层析、凝胶过滤层析、等电点沉淀。这些方法可单独使用，或者适当组合使用。[0113]突变型tg的用途无特别限定。[0114]突变型tg例如可用于食品的改性。此外，突变型tg例如可用于食品的制造。利用突变型tg制造的食品可以是改性的食品。即，突变型tg具体可用于例如改性的食品的制造。换言之，通过食品的改性，可获得改性的食品。[0115]作为食品，可举出在制造时伴有ph下降的食品。作为食品，还可举出通过发酵制造的食品。发酵例如可利用乳酸菌和酵母等微生物实施。ph例如可因发酵而下降。即，在制造时伴有ph下降的食品可以是通过发酵制造的食品的一例。此外，通过发酵制造的食品可以是在制造时伴有ph下降的食品的一例。作为食品，具体可举出酸乳和乳酪。作为食品，可特别举出酸乳。酸乳和乳酪均可为在制造时伴有ph下降的食品和/或通过发酵制造的食品的一例。[0116]此外，可将利用突变型tg制造的食品作为原料，制造其他食品。为了便于说明，也将利用突变型tg制造的食品称为“中间制品”，以中间制品为原料制造的其他食品称为“最终制品”。即，作为食品，还可举出这样的最终制品。作为最终制品，可举出含有如上示例的食品(例如酸乳或乳酪)的食品。作为含有酸乳或乳酪的食品，可举出含有酸乳或乳酪的冰淇淋。通过以中间制品为原料制造最终制品，从而最终制品也被改性。最终制品的改性的种类可与中间制品的改性的种类相同，也可不同。“将突变型tg用于食品的改性或制造”也可包含通过以中间制品为原料制造最终制品，从而突变型tg被间接地用于最终制品的改性或制造的情况。[0117]作为食品的改性，可举出物性的提高。作为物性的提高，在酸乳或乳酪的情况下，可举出增大断裂强度、防止水分离(preventionofwaterseparation)、赋予顺滑口感。作为物性的提高，在酸乳或乳酪的情况下，可特别举出增大断裂强度。即，例如，通过利用突变型tg，与不利用突变型tg的情况相比，在酸乳或乳酪等食品中可获得物性的提高效果。具体来说，例如，通过利用突变型tg制造酸乳或乳酪等食品，与未利用突变型tg制造酸乳或乳酪等食品的情况相比，可获得断裂强度增大、水分离得到防止、且/或赋予了顺滑口感的酸乳或乳酪等的物性提高了的食品。[0118]＜3＞本发明的组合物本发明的组合物是含有突变型tg的组合物。[0119]本发明的组合物例如可以是用于如上示例的突变型tg的用途的组合物。即，本发明的组合物例如可以是用于酸乳或乳酪等食品的改性的组合物。此外，本发明的组合物例如可以是用于制造酸乳或乳酪等食品的组合物。此外，本发明的组合物具体而言例如可以是用于制造改性的酸乳或乳酪等的改性的食品的组合物。[0120]本发明的组合物可以是由突变型tg形成的组合物，也可以含有除突变型tg以外的成分。[0121]只要不破坏突变型tg的功能，除突变型tg以外的成分无特别限定。作为除突变型tg以外的成分，可根据本发明的组合物的用途采用可允许的成分。作为除突变型tg以外的成分，可举出掺入食品或药物的成分。[0122]作为本发明的组合物，例如可直接使用如上示例的形态的突变型tg，或者也可适当制剂化后使用。制剂化时，可根据本发明的组合物的用途适当采用可允许的添加剂。作为添加剂，可举出赋形剂、粘合剂、崩解剂、润滑剂、稳定剂、矫味除臭剂、稀释剂、表面活性剂、溶剂。添加剂例如可根据本发明的组合物的形状等各种条件适当进行选择。[0123]本发明的组合物的形状无特别限定。本发明的组合物例如可以以粉末、碎片、片剂、糊剂、液体等任意的形状提供。[0124]＜4＞本发明的方法本发明的方法是利用突变型tg的方法。[0125]本发明的方法中，突变型tg例如可用于如上示例的突变型tg的用途。即，本发明的组合物例如可以是改性酸乳或乳酪等食品的方法。此外，本发明的方法例如可以是制造酸乳或乳酪等食品的方法。此外，本发明的方法具体而言例如可以是制造改性的酸乳或乳酪等的改性的食品的方法。[0126]食品的改性或制造中，突变型tg可用于食品原料的处理。“食品原料”可指作为用于制造食品的原料的原材料。食品原料可根据食品的种类等各种条件适当进行选择。作为食品原料，可举出乳原料。例如，食品为酸乳或乳酪的情况下，食品原料可以是乳原料。以下，主要参照食品为酸乳的情况对本发明的方法进行说明。该说明也可适用于其他食品。该情况下，酸乳的改性或制造中的“乳原料”可替换解读为其他食品的改性或制造中的“食品原料”。[0127]酸乳的改性或制造中，突变型tg可用于乳原料的处理。即，作为突变型tg的利用，可举出用突变型tg对乳原料进行处理。即，本发明的方法例如可以是包括用突变型tg对乳原料进行处理的工序的改性酸乳的方法。此外，本发明的方法例如可以是包括用突变型tg对乳原料进行处理的工序的制造酸乳的方法。此外，本发明的方法具体而言例如可以是包括用突变型tg对乳原料进行处理的工序的制造改性的酸乳的方法。应予说明，“用突变型tg对乳原料进行处理”也称为“使突变型tg作用于乳原料”。此外，“用突变型tg对乳原料进行处理”的工序也称为“处理工序”。即，本发明的方法可包括处理工序。[0128]突变型tg可以以能够作用于乳原料的任意的形态用于乳原料的处理。突变型tg例如可以以如上示例的形态用于乳原料的处理。突变型tg具体而言例如可以以本发明的组合物的形态用于乳原料的处理。即，“用突变型tg对乳原料进行处理”也包含用本发明的组合物对乳原料进行处理。[0129]对于酸乳的改性或制造而言，例如，除利用突变型tg以外，可与通常的酸乳的改性或制造同样地实施。对于酸乳的改性或制造而言，例如，特别是除将突变型tg用作tg以外，可与wo2018/079687、wo2018/079686、wo2018/079685、wo2018/079684、wo2018/079683、wo2017/073701、wo2018/079705、us2018-0334693a、或us2019-0161776a等中记载的利用tg的酸乳的改性或制造同样地实施。[0130]对于酸乳的改性或制造而言，具体来说，例如，除利用突变型tg以外，可使用与通常的酸乳同样的乳原料以同样的制造条件实施。此外，乳原料和制造条件均可适当修正后用于酸乳的改性或制造。本发明的方法可包括由乳原料制造酸乳的工序。该工序也称为“酸乳的制造工序”。此外，处理工序可以是用突变型tg对乳原料进行处理而制造酸乳的工序。[0131]“乳原料”可指含有乳蛋白的原料。只要可通过本发明的方法制造酸乳，乳原料无特别限定。作为乳蛋白，可举出酪蛋白和乳清蛋白。作为乳清蛋白，可举出α-乳白蛋白和β-乳球蛋白。乳原料例如可含有这些乳蛋白的1种或更多种，也可全部含有。乳原料中的乳蛋白的含量(浓度)例如可通过以凯氏定氮法(kjeldahlmethod)测定总氮量并将总氮量乘以氮-蛋白质换算系数来进行测定。乳蛋白的情况下，氮-蛋白质换算系数可为6.38。作为乳，可举出牛乳、山羊乳、绵羊乳、水牛乳、驯鹿乳、驴乳、骆驼乳。作为乳，可特别举出牛乳。作为乳原料，例如可直接使用乳，或者将乳适当改变后使用。即，乳原料可以是生乳(原乳)，也可以不是这些。乳原料例如可经过加热、均质、干燥等处理，也可未经这些处理。乳原料例如可调整了成分，也可未进行成分调整。作为乳原料，具体可举出全乳、脱脂乳、部分脱脂乳、酪乳(buttermilk)、它们的加工品、它们的成分调整品。作为成分调整品，可举出钙强化乳。作为乳原料，可使用1种原料，也可组合使用2种或更多种的原料。[0132]酸乳可通过发酵制造。发酵例如可利用发酵剂(starter)实施。发酵具体例如可通过使发酵剂与乳原料共存来实施。发酵开始时的乳原料的ph例如可以是6.0以上，可以是7.4以下、7.2以下或7.0以下，还可以是它们的组合。发酵开始时的乳原料的ph具体例如可以是6.0～7.0。[0133]“发酵剂”是指用于发酵的微生物。只要可通过本发明的方法制造酸乳，发酵剂无特别限定。作为发酵剂，可举出乳酸菌和酵母。作为发酵剂，可特别举出乳酸菌。[0134]作为乳酸菌，可举出乳杆菌(lactobacillus)属细菌、乳球菌(lactococcus)属细菌、链球菌(streptococcus)属细菌、双歧杆菌(bifidobacterium)属细菌。[0135]作为乳杆菌属细菌，可举出德氏乳杆菌(lactobacillusdelbrueckii)、干酪乳杆菌(lactobacilluscasei)、副干酪乳杆菌(lactobacillusparacasei)、格氏乳杆菌(lactobacillusgasseri)、嗜酸乳杆菌(lactobacillusacidophilus)。德氏乳杆菌中，还包括被分类为德氏乳杆菌保加利亚亚种(lactobacillusdelbrueckiisubsp.bulgaricus)、德氏乳杆菌德氏亚种(lactobacillusdelbrueckiisubsp.delbrueckii)、德氏乳杆菌乳亚种(lactobacillusdelbrueckiisubsp.lactis)等的德氏乳杆菌的任一亚种的株。[0136]作为乳球菌属细菌，可举出乳酸乳球菌(lactococcuslactis)。乳酸乳球菌中，还包括被分类为乳酸乳球菌乳酸亚种(lactococcuslactissubsp.lactis)、乳酸乳球菌乳脂亚种(lactococcuslactissubsp.cremoris)、乳酸乳球菌叶蝉亚种(lactococcuslactissubsp.hordniae)等的乳酸乳球菌的任一亚种的株。[0137]作为链球菌属细菌，可举出嗜热链球菌(streptococcusthermophilus)。[0138]作为双歧杆菌属细菌，可举出：长双歧杆菌(bifidobacteriumlongum)、短双歧杆菌(bifidobacteriumbreve)、两歧双歧杆菌(bifidobacteriumbifidum)、青春双歧杆菌(bifidobacteriumadolescentis)、角双歧杆菌(bifidobacteriumangulatum)、齿双歧杆菌(bifidobacteriumdentium)、假小链双歧杆菌(bifidobacteriumpseudocatenulatum)、动物双歧杆菌(bifidobacteriumanimalis)、假长双歧杆菌(bifidobacteriumpseudolongum)、嗜热双歧杆菌(bifidobacteriumthermophilum)。[0139]作为发酵剂，可使用1种微生物，也可使用2种或更多种的微生物的组合。[0140]作为发酵剂，例如可采用市售的发酵剂。此外，作为发酵剂，例如可采用从保藏机构或转让机构获得的微生物。[0141]发酵例如可实施至发酵物的ph下降至所期望的程度。发酵结束时的发酵物的ph例如可以是5.0以下、4.8以下、4.6以下、4.4以下或4.2以下，可以是3.8以上、4.0以上、4.2以上或4.4以上，还可以是它们的不矛盾的组合。发酵结束时的发酵物的ph具体例如可以是4.0～4.6。“发酵物”可指发酵开始后的乳原料，也可包含最终获得的酸乳。此外，“发酵结束时的发酵物”可指最终获得的酸乳。发酵时间例如可以是1小时以上、2小时以上、3小时以上、4小时以上、5小时以上、7小时以上、10小时以上、15小时以上或20小时以上，可以是30小时以下、25小时以下、20小时以下、15小时以下、10小时以下或7小时以下，还可以是它们的不矛盾的组合。发酵温度例如可以是25℃以上、30℃以上、35℃以上或40℃以上，可以是45℃以下、40℃以下或35℃以下，还可以是它们的不矛盾的组合。[0142]通过这样实施发酵，生成酸乳。[0143]只要可获得所期望的效果(例如，酸乳的改性效果)，可使突变型tg在酸乳的制造工序的任一阶段作用于乳原料。对于突变型tg而言，可使其直接作用于乳原料、或者可通过适当制备成溶液等所期望的形态并与乳原料共存而使其作用于乳原料。例如，可将突变型tg添加至乳原料，也可将含有突变型tg的处理液与乳原料混合。这样的使突变型tg与乳原料共存的操作也总称为突变型tg的“添加”。突变型tg例如可在发酵开始前、开始时或开始后添加。突变型tg具体例如可以在发酵剂的添加前、添加时或添加后添加。突变型tg例如可在发酵结束前、结束时或结束后添加。突变型tg特别是可在发酵结束前添加。突变型tg具体可在发酵物的ph下降至所期望的程度前添加。突变型tg添加时的发酵物的ph例如可以是5.0以上、5.2以上、5.4以上、5.6以上、5.8以上或6.0以上，可以是7.4以下、7.2以下、7.0以下、6.8以下、6.6以下或6.4以下，还可以是它们的组合。突变型tg添加时的发酵物的ph具体例如可以是6.0～7.0。根据突变型tg的添加时刻和突变型tg的活性的残余期间等各种条件，在基于突变型tg的处理中乳原料的发酵进行。因此，用突变型tg处理的“乳原料”不仅限于发酵开始前的乳原料，也可包含发酵物。[0144]只要可获得所期望的效果(例如，酸乳的改性效果)，处理工序的实施条件无特别限定。处理工序的实施条件例如可根据突变型tg的性质和添加量等各种条件适当设定。处理工序例如可通过发酵的实施一并实施。即，酸乳的制造工序可兼作处理工序。但是，根据突变型tg的添加时刻和突变型tg的活性的残余期间等各种条件，可在发酵前实施处理工序的一部分或全部，也可在发酵后实施处理工序的一部分或全部。关于处理工序的温度和时间，例如可适用关于发酵温度和发酵时间的记载。[0145]突变型tg例如可在酸乳的制造中失活。突变型tg具体例如可在发酵中失活。突变型tg更具体例如可因发酵物的ph下降而失活。发酵结束时的发酵物中的突变型tg的残余活性例如为20％以下、10％以下、5％以下、3％以下、2％以下、1％以下、或0％。换言之，可实施发酵至突变型tg的残余活性下降至上述范围。“发酵结束时的发酵物中的突变型tg的残余活性”是指发酵结束时的发酵物中的突变型tg的tg活性相对于添加时的突变型tg的tg活性的比率。根据本发明的方法，特别是突变型tg可在不实施加热处理的情况下失活。因此，本发明的方法例如可不包括通过加热使突变型tg失活的处理。通过使突变型tg充分失活，例如，可在发酵结束后(例如，作为最终制品的酸乳的保管时或流通时)，可防止酸乳的物性因突变型tg而发生不必要的改变。此外，添加酶制造食品的情况下，有义务在最终制品中将未失活而残余的酶作为食品添加物进行标示。但是，通过使突变型tg充分失活，例如，可不需要作为最终制品中的食品添加物标示“酶”。[0146]本发明的方法中，只要可获得所期望的效果(例如，酸乳的改性效果)，也可采用除上述示例的成分(例如，乳原料、发酵剂和突变型tg)以外的成分。作为这样的成分，可举出除上述示例的成分以外的通常可用于酸乳的制造的原料。这样的成分可预先与乳原料混合，也可适当在酸乳的制造中添加于乳原料。[0147]只要可获得所期望的效果(例如，酸乳的改性效果)，本发明的方法中的各成分的添加量和添加量比无特别限定。本发明的方法中的各成分的添加量和添加量比可根据各成分的种类等各种条件适当设定。[0148]相对于1g乳蛋白，突变型tg的添加量例如可以是0.00033u以上、0.001u以上、0.0033u以上、0.01u以上、0.033u以上、0.1u以上、0.33u以上或1u以上，可以是100u以下、33u以下、10u以下、3.3u以下或1u以下，还可以是它们的不矛盾的组合。相对于1g乳蛋白，突变型tg的添加量具体例如为0.00033u～33u、或0.0033u～3.3u。实施例[0149]以下，参照非限定的实施例对本发明进行更具体的说明。[0150]实施例1：突变型转谷氨酰胺酶(突变型tg)的构建和分析本实施例中，实施了突变型tg的构建和分析。[0151]＜1＞实验方法只要没有特别记载，本实施例中的tg的定量和tg活性的测定按照以下的步骤实施。[0152]＜1-1＞tg的定量tg的定量以bsa为标准品通过hplc分析实施。分析条件如下所示。[0153]流动相a：0.1％三氟乙酸(tfa)流动相b：0.1％tfa、80％乙腈流速：1.0ml/min柱温：40℃检测：uv280nm柱：proteonavi、4.6×150mm、5μm(株式会社大阪曹达制)梯度：0min(b:30％)、0-20min(b:30-50％)、20-25min(b:50-100％)、25-26min(b:100％)、26-27min(b:100-30％)、27-30min(b:30％)。[0154]＜1-2＞tg活性的测定tg活性的测定通过异羟肟酸法实施。将500μl的a液(50mmmes、100mmnh2oh、10mm谷胱甘肽(还原型)、30mmcbz-gln-gly(z-qg)，用naoh调整至ph6.0)添加至1.5ml试管，在37℃加温5分钟。添加50μl酶溶液，在37℃反应10分钟后，添加500μl的b液(1nhcl、4％tca、1.67％fecl3·6h2o)，停止反应。将200μl反应停止液添加至96孔板，用酶标仪(platereader)测定525nm的吸光度。作为对照，对用20mmmesph6.0进行了同样反应的溶液的吸光度进行测定，求出与样品溶液的吸光度差。另外，使用l-谷氨酸-γ-单异羟肟酸代替酶液而制成校正曲线，利用所述吸光度差求出生成的异羟肟酸的量。将在1分钟内生成1μmol的异羟肟酸的酶活性设为1u。[0155]＜2＞向tg引入突变以tg表达质粒ppsptg1(appl.environ.microbiol.,2003,69(1),358-366)为模板，使用primestar(r)maxdnapolymerase(宝生物株式会社制)向tg引入突变。ppsptg1是茂原链轮丝菌(streptoverticilliummobaraense)的带前结构部的tg的分泌表达质粒。使用表1中记载的引物，制备2种pcr片段，使用in-fusion(r)hdcloningkit(宝生物株式会社制)连接pcr片段，从而获得作为目标的引入了突变的tg表达质粒。双重突变体通过以构建的单突变体为模板，以同样的步骤引入追加的突变来构建。三重突变体通过以构建的双重突变体为模板，以同样的步骤引入追加的突变来构建。[0156][表1]表1用于引入突变的引物[0157]＜3＞突变型tg表达株的构建将上述＜2＞中构建的突变型tg表达质粒通过电穿孔法引入谷氨酸棒状杆菌(corynebacteriumglutamicum)ydk010(wo2002/081694a1)。ydk010是谷氨酸棒状杆菌(c.glutamicum)aj12036(fermbp-734)的细胞表层蛋白质ps2的缺陷株。aj12036在1984年3月26日原本作为国际保藏保藏于工业技术院微生物工艺技术研究所(现为独立行政法人制品评价技术基盘机构专利生物保藏中心，邮政编码:292-0818，地址:日本国千叶县木更津市上总镰足2-5-8120号室)，被授予保藏编号fermbp-734。将电穿孔法后的菌体用含25mg/l的卡那霉素的cm-dex板(葡萄糖5g/l、多聚蛋白胨10g/l、酵母提取物10g/l、kh2po41g/l、mgso4·7h2o0.4g/l、尿素3g/l、feso4·7h2o0.01g/l、mnso4·5h2o0.01g/l、生物素10μg/l、大豆的盐酸水解产物(以总氮计)1.2g/l，用koh调整至ph7.0，琼脂20g/l)于30℃进行了培养。将获得的菌落用含25mg/l的卡那霉素的cm-dex板纯化，作为突变型tg表达株获得。将获得的株用含25mg/l的卡那霉素的3ml的cm-dex液体培养基于30℃培养16小时左右，将0.6ml的培养液与0.6ml的40％甘油混合，作为甘油储备品(glycerolstock)于-80℃保存。[0158]＜4＞突变型tg表达株的培养刮取少量上述＜3＞中获得的突变型tg表达株的甘油储备品，涂布于含25mg/l的卡那霉素的cm-dex板，于20℃培养3天。将板上生长的菌体接种于含25mg/l的卡那霉素的cm2g培养基(葡萄糖5g/l、多聚蛋白胨10g/l、酵母提取物10g/l、nacl5g/l、dl-蛋氨酸0.2g/l，用koh调整至ph7.0)10ml中，用粗试管于30℃进行24小时振荡培养。将所得的培养液2.5ml接种于含25mg/l的卡那霉素、50g/l的caco3的tg生产培养基(葡萄糖60g/l、mgso4·7h2o1g/l、feso4·7h2o0.01g/l、mnso4·5h2o0.01g/l、(nh4)2so430g/l、kh2po41.5g/l、dl-蛋氨酸0.15g/l、硫胺盐酸盐0.45mg/l、生物素0.45mg/l，用koh调整至ph7.5)50ml中，用摇瓶(shakeflask)于30℃培养48小时。应予说明，对于a322c表达株、v271c/v326c表达株、a261c/a322c表达株、和a261c/a322c/s199a表达株，在培养开始第5小时以最终浓度达到3mm的条件添加dtt。培养结束后，将培养液回收至塑料制瓶，于-80℃保管。[0159]＜5＞突变型tg的纯化将上述＜4＞中获得的培养液解冻(融解)后，进行离心(8000rpm、4℃、20min)，用0.45μm滤器过滤，从而获得灭菌液。将灭菌液用sephadexg25(m)(ge医疗集团制)，于室温将溶剂置换为20mm乙酸缓冲液(ph5.5)。用naoh调整至ph7.0后，以相对于突变型tg的重量比计达到0.5％的条件，添加碱性蛋白酶(sigma-aldrich公司制，p4860-50ml)，于30℃反应17小时，激活突变型tg。反应结束后，用10％乙酸调整至ph5.5，全部供于用20mm乙酸缓冲液(ph5.5)充分平衡化的阳离子交换柱(resources6ml，ge医疗集团制)。用同样的缓冲液再平衡化后，以波长280nm处的uv吸收为指标，分离通过0→0.5mnacl的线性浓度梯度洗脱的、在nacl为200mm附近洗脱的蛋白质组分(级分)。通过上述《1》中记载的方法测定各组分的tg活性和tg量，回收除去了比活性低的组分后的比活性大致同等的峰顶附近的组分。将回收的组分用hiprep26/10desalting(ge医疗集团制)将溶剂置换为20mm磷酸缓冲液(ph6.0)，作为突变型tg用于以下的实验。阳离子交换层析和缓冲液置换均于4℃进行。[0160]《6》突变型tg的比活性评价将上述《5》中获得的突变型tg以达到0.05mg/ml(bsa换算)的条件用20mmmes缓冲液(ph6.0)稀释。通过上述《1》中记载的方法测定稀释液的tg活性，算出突变型tg的比活性。此外，作为对照，通过同样的步骤对野生型tg(由activa(r)制备)进行了分析。结果示于表2。[0161][表2]表2突变型tg的比活性突变比活性(u/mg)野生型28.4w38f31.4d46p27.4s199a33.2m16t/s199a40.8m16t/y34f32.0v271c/v326c36.0a322c25.7a261c/a322c30.3a261c/a322c/s199a37.9。[0162]《7》突变型tg的耐酸性评价将上述《5》中获得的突变型tg以达到0.02mg/ml(bsa换算)的条件用20mm乙酸钠缓冲液(ph4.0、4.5、5.0或5.5)或20mmmes缓冲液(ph6.0)稀释，于37℃处理1小时。对在各ph下处理后的残余活性通过异羟肟酸法进行了测定。将500μl的a液(50mmmes、100mmnh2oh、10mm谷胱甘肽(还原型)、30mmcbz-gln-gly(z-qg)，用naoh调整至ph6.0)添加至1.5ml试管，在37℃加温5分钟。添加在各ph下处理后的酶溶液150μl，在37℃反应30分钟后，添加500μl的b液(1nhcl、4％tca、1.67％fecl3·6h2o)，停止反应。将200μl反应停止液添加至96孔板，用酶标仪测定525nm的吸光度。作为对照，对用20mmmesph6.0进行了同样反应的溶液的吸光度进行测定，求出与样品溶液的吸光度差。作为将在ph6.0下处理后的样品中的吸光度差设为100％时的相对值，算出在各ph下处理后的样品中的吸光度差。将该吸光度差的相对值视作将在ph6.0下处理后的残余tg活性设为100％时的、在各ph下处理后的残余tg活性的相对值。此外，作为对照，通过同样的步骤对野生型tg(由activa(r)制备)进行了分析。结果示于表3。野生型tg中未确认到基于酸处理的残余tg活性的下降，相对而言，突变型tg确认到基于酸处理的残余tg活性的下降。由此可知，突变型tg的耐酸性下降。[0163][表3]表3在各ph下处理后的残余tg活性的相对值ph4.0ph4.5ph5.0ph5.5ph6.0野生型96％104％106％104％100％w38f16％75％64％102％100％d46p8％16％28％79％100％s199a50％90％94％96％100％m16t/s199a14％66％84％101％100％m16t/y34f24％77％89％98％100％v271c/v326c32％53％55％84％100％a322c20％69％65％91％100％a261c/a322c7％41％43％93％100％a261c/a322c/s199a1％12％22％86％100％。[0164]实施例2利用突变型转谷氨酰胺酶(突变型tg)的酸乳的制作和分析《1》酸乳的制作将低温杀菌牛乳、水和脱脂乳粉(lowheatpowder)混合制成成分调整乳(蛋白质：3.8wt％，脂质：1.0wt％)。将制成的成分调整乳以95℃、3分钟的条件加热后，冷却至43℃，按各200g分装(分配)。将分散于成分调整乳的乳酸菌(株式会社野泽组，yf-l811乳酸菌发酵剂)1ml添加至分装的成分调整乳(最终浓度0.006％)。进而，将野生型tg(由ppsptg1的表达株制备)或实施例1的《5》中获得的突变型tg(w38f、s199a、m16t/a199a、m16t/y34f、v271c/v326c、或a261c/a322c)以相对于每1g乳蛋白成为1u的条件添加至分装的成分调整乳。添加后，迅速按约30ml小份分装，于43℃孵育约6小时至ph达到4.6以下。孵育后，确认发酵物的ph为4.5～4.6，进而于5℃冷却一晚。dtt、1wt％n,n-二甲基酪蛋白(n,n-dimethylcasein))添加50μl浓缩酶溶液，反应时间为80min，以λex350nm、λem480nm测定荧光光谱。[0173]荧光强度的经时变化示于图3。野生型tg确认了荧光的增大，相对而言a261c/a322c未确认到荧光的增大。因此，可认为野生型tg具有残余活性，相对而言a261c/a322c不具有残余活性。[0174]由实施例2的＜2＞～＜4＞可知，a261c/a322c具有与野生型tg大致同等的酸乳的改性作用，且在制品中失活而不显示残余活性。[0175]＜5＞孵育中的ph和tg活性的测定除了以相对于每1g乳蛋白成为3u的条件添加野生型tg和a261c/a322c以外，通过与实施例2的＜1＞同样的方法制作酸乳。添加乳酸菌后，于43℃在培养箱中开始发酵。以乳酸菌添加时刻为开始时刻，每隔1.5小时采样测定ph后，在冰冷的条件下保存。在酸乳的ph达到4.6以下的时刻结束发酵，于5℃冷却保存一晚。关于发酵4.5小时以后的样品，由于固化，因此用离心分离机以10000g、30min的条件分离获得上清液，用uf膜以10000g、30min的条件通过超滤进行约10倍浓缩。关于发酵不足4.5小时的样品，由于未固化，因此在不进行过滤和浓缩的情况下供于后续的分析工序。对于所有获得的样品，按照与实施例2的＜3＞同样的步骤以240分钟的反应时间实施采用异羟肟酸法的活性测定。应予说明，关于发酵3小时的样品，各样品有无固化的情况不同，难以进行横向比较，因此仅测定ph。[0176]ph和tg活性的经时变化示于图4。与野生型tg相比，a261c/a322c伴随发酵中的ph下降而失活的速度更快。特别是可认为野生型tg在ph4.6以下也显示吸光，具有残余活性，相对而言a261c/a322c在ph4.6以下不显示吸光，在制品中完全失活。[0177]工业上利用的可能性根据本发明，可提供耐酸性低的突变型tg。耐酸性低的突变型tg例如在酸乳等食品的改性和制造中有用。[0178]＜序列表的说明＞seqidno:1：茂原链轮丝菌(streptoverticilliummobaraense)的tg基因的编码成熟tg的部分的碱基序列seqidno:2：茂原链轮丝菌(streptoverticilliummobaraense)的成熟tg的氨基酸序列seqidno:3：茂原链轮丝菌(streptoverticilliummobaraense)的tg基因的碱基序列seqidno:4：茂原链轮丝菌(streptoverticilliummobaraense)的包含前结构部的tg的氨基酸序列seqidno:5～24：引物。当前第1页12当前第1页12









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