OsABA8ox2基因在调控弱势粒灌浆、提高种子耐老化及幼苗耐冷性的应用

有机化合物处理,合成应用技术osaba8ox2基因在调控弱势粒灌浆、提高种子耐老化及幼苗耐冷性的应用技术领域1.本发明涉及基因编辑领域，特别是涉及osaba8ox2基因在调控弱势粒灌浆、提高种子耐老化及幼苗耐冷性的应用。背景技术：2.中国是全球最大的水稻生产者和消费者，上世纪70年代利用植物杂种优势培育出的杂交水稻，使我国水稻总产量从60年代到90年代增长了接近4.5倍，我国实现了凭借仅占世界总量7％的耕地面积以及5％的水资源，却养活了占世界总量超过20％人口的目标。但是，全球人口的增长却始终对粮食产量提出新的挑战。强、弱势粒灌浆差异在禾谷类作物中普遍存在，其中水稻大穗型品种以及在高氮种植环境下这一差异表现的更为明显。例如超级稻强势粒的结实率和千粒重分别比弱势粒高出20.7％和7.2g，而常规稻则分别为6.3％和3.0g，从而导致在灌浆效率上超级稻的灌浆率要明显低于常规稻的灌浆率，综上，强、弱势粒灌浆差异对水稻产量形成有着不可忽视的影响弱势粒灌浆差已成为制约水稻发挥高产潜力的主要原因之一。3.种子活力直接影响着幼苗的生长状况，水稻种子在储藏过程中其活力会逐渐下降，每年我国因种子老化而造成巨大的经济损失。此外，更为严重的是，老化后的种子，种子活力降低，发芽率下降；而且水稻起源于热带及亚热带地区，对冷胁迫尤为敏感。高纬度及高海拔地区的低温严重制约了水稻的生产，此外，长江中下游稻区早稻季的倒春寒，这一极端低温天气，对早稻生产影响很大，尤其是对直播早稻生产限制颇多。因此提高种子耐老化抗性对种子储藏和幼苗的耐寒能力对农业生产具有重要意义。技术实现要素：4.为了解决上述问题，本发明提供了osaba8ox2基因在调控弱势粒灌浆、提高种子耐老化及幼苗耐冷性的应用。本发明通过敲除osaba8ox2基因，使osaba8ox2蛋白质不能正常表达，能够达到调控水稻弱势粒灌浆，提高种子耐老化及幼苗耐冷性的效果。5.为了实现上述目的，本发明提供如下技术方案：6.本发明提供了osaba8ox2基因在作为基因编辑水稻的靶标基因中的应用，所述osaba8ox2基因的核苷酸序列如seq id no:2所示。7.优选的，所述核苷酸序列还包括与上述的osaba8ox2基因具有80％以上同一性的核苷酸序列。8.优选的，所述osaba8ox2基因编码的蛋白质的氨基酸序列如seq id no:1所示。9.本发明提供了一种靶向敲除或沉默osaba8ox2基因的sgrna序列，所述sgrna序列的核苷酸序列如seq id no.3所示。10.本发明提供了一种靶向敲除或沉默osaba8ox2基因的crispr/cas9载体，所述crispr/cas9载体中含有上述sgrna序列。11.本发明提供了抑制osaba8ox2基因表达在如下中的应用，其特征在于，所述应用包括：a：调控水稻弱势粒灌浆，b为提高种子耐老化，c为幼苗耐冷性。12.优选的，所述抑制的方法包括rnai干扰、基因定点编辑、同源重组或crispr/cas9基因敲除。13.优选的，所述应用的方法为向水稻中导入上述crispr/cas9载体。14.有益效果：本发明提供了osaba8ox2基因在作为基因编辑水稻的靶标基因中的应用，所述osaba8ox2基因的核苷酸序列如seq id no:2所示。本发明通过敲除osaba8ox2基因，使osaba8ox2基因不能正常表达，植物体内aba降解受阻，导致水稻弱势粒aba含量升高，弱势粒灌浆速率提高，弱势粒粒重增加，产量提高；可以使植物体内aba降解受阻，导致水稻籽粒aba含量升高，种子耐老化性提高，更耐储藏；还能导致水稻幼苗aba含量提高，在苗期遭遇低温胁迫时幼苗更耐冷，存活率提高。osaba8ox2基因是新发现的一个导致水稻强弱势粒灌浆差异的关键基因，同时也是籽粒aba降解的主要基因，通过遗传改良可以提高弱势粒粒重，获得强弱势粒灌浆一致，同时种子耐储藏及幼苗耐冷的新品种，应用前景广阔。附图说明15.图1为osaba8ox2基因在水稻强弱势粒中的表达差异，其中*和**分别表示在0.05和0.01水平差异显著；16.图2为osaba8ox2基因敲除(ko-3，ko-11)株系鉴定；17.图3为osaba8ox2基因敲除突变体ko-3花后9d弱势粒aba含量，其中**表示ko-3和zh11在0.01水平差异显著；18.图4为osaba8ox2基因敲除(ko-3，ko-11)株系强弱势粒长宽，其中(a)和(b)野生型及osaba8ox2不同转基因株系强弱势粒宽和长，(c)野生型及osaba8ox2不同转基因株系稻穗，红色箭头为表示osaba8ox2基因过表达株系oe-26穗子上退化的弱势粒。19.图5为osaba8ox2基因敲除及过表达(ko-3，ko-11，oe-26)株系的弱势粒粒重及单株产量，其中(a)为弱势粒粒重，(b)为单株产量；20.图6为osaba8ox2转基因材料其他农艺性状，其中(a)为野生型及osaba8ox2不同转基因株系强势粒粒重，(b)为结实率，(c)为株高，(d)为有效分蘖，(e)为每穗粒数，*表示与zh11相比在0.05水平差异显著，**表示与zh11相比在0.01水平差异显著；21.图7为osaba8ox2基因敲除(ko-3，ko-11)株系灌浆动态及灌浆速率，其中(a)为灌浆动态，(b)为灌浆速率；22.图8为osaba8ox2基因敲除(ko-3，ko-11)株系和zh11种子老化存活率；23.图9为osaba8ox2基因敲除及过表达(ko-3，ko-11，oe-26)株系和zh11低温处理前后对比图，其中(a)为osaba8ox2不同转基因株系处理前表型，(b)为4℃处理48h后表型，(c)为正常培养7天后表型；24.图10为osaba8ox2基因敲除(ko-3，ko-11)株系和zh11种子低温胁迫后的存活率。具体实施方式25.本发明提供了osaba8ox2基因在作为基因编辑水稻的靶标基因中的应用，所述osaba8ox2基因的核苷酸序列如seq id no:2所示：atggctttcttgctcttctttgtctttgtgacagctgcagtgctgtgcttcgtcgtcccggcgttcttgctgctctgcacgagcgtgcagaggaggagagatgttggacagggtggagggcgagattggcagaagaagaagaagctcaggcttcctccgggatccatgggctggccgtacgtcggcgagacgctccagctctactcccaggaccccaacgtcttcttcgcctccaagcagaagaggtacggcgagatattcaagacgaatctgctggggtgcccgtgcgtgatgctggcgagcccggaggcggcgaggttcgtgctggtgtcgcaggcgaggctgttcaagccgacgtacccgccgagcaaggagcggatgatcgggccgtcggcgctcttcttccaccagggcgagtaccacctccgcctccgccgcctcgtccaggccgccctcgccccggactccctccgcgccctcgtcccggacgtcgacgccgccgtcgccgccacgctcgccgcctggtccggcggccacgtcgccagcaccttccacgccatgaagaagctctcgttcgacgtcggcgtcgtgaccatcttcggcggccggctcggccgccggcacagggaggagctgaggacgaactactccgtcgtggagagaggctacaactgcttccccaaccgcttcccggggacgctctaccacaaggcgatccaggcgaggaagcggctgcgcgcgatcctgagcgagatcgtggcggagcggcgggcgcgcggcggcggcggcggcggcggcggcgacgacctcctcggcggcctcatgcggtcgcgcgacgacggcaccgccggcgcggtggcgctgctcaccgacgaccagatcgccgacaacgtcgtcggcgtgctgttcgcggcgcaggacaccaccgccagcgtcctcacctggatcctcaagtacctccacgactcgccgaagcttctcgaagccgtcaaggcggagcagatggcgatctacgtggccaacgagggcgggaagcggccgctgacgtggacgcagacgaggagcatgacactcacgcatcaggttatactggagagcttgaggatggcgagcataatctccttcacgttcagagaggcagtcgccgacgtggagtacaaaggtttcctgattccaaaggggtggaaggtgatgcctctgttcaggaacatccatcacaacccggactacttccaggatccacaaaagtttgatccttctagattcaaggtggcgccgcgtccaagcacgttcctgccgttcgggagcggcgtgcacgcgtgcccgggcaacgagctggccaagctggagatgctcgtcctcgtccaccgcctcgtcaccgcctacaggtgggagatcgtcggggcgagcgacgaggtggagtacagcccgttcccggtgccgaggggcgggctcaacgccaagctgtggaagcaggaggcggaggaggacatgtacatggccatgggcaccatcacagcagcaggtgcttga；所述osaba8ox2基因编码的蛋白质的氨基酸序列如seq id no:1所示：met ala phe leu leu phe phe val phe val thr ala ala val leu cys phe val val pro ala phe leu leu leu cys thr ser val gln arg arg arg asp val gly gln gly gly gly arg asp trp gln lys lys lys lys leu arg leu pro pro gly ser met gly trp pro tyr val gly glu thr leu gln leu tyr ser gln asp pro asn val phe phe ala ser lys gln lys arg tyr gly glu ile phe lys thrasn leu leu gly cys pro cys val met leu ala ser pro glu ala ala arg phe val leu val ser gln ala arg leu phe lys pro thr tyr pro pro ser lys glu arg met ile gly pro ser ala leu phe phe his gln gly glu tyr his leu arg leu arg arg leu val gln ala ala leu ala pro asp ser leu arg ala leu val pro asp val asp ala ala val ala ala thr leu ala ala trp ser gly gly his val ala ser thr phe his ala met lys lys leu ser phe asp val gly val val thr ile phe gly gly arg leu gly arg arg his arg glu glu leu arg thr asn tyr ser val val glu arg gly tyr asn cys phe pro asn arg phe pro gly thr leu tyr his lys ala ile gln ala arg lys arg leu arg ala ile leu ser glu ile val ala glu arg arg ala arg gly gly gly gly gly gly gly gly asp asp leu leu gly gly leu met arg ser arg asp asp gly thr ala gly ala val ala leu leu thr asp asp gln ile ala asp asn val val gly val leu phe ala ala gln asp thr thr ala ser val leu thr trp ile leu lys tyr leu his asp ser pro lys。26.在本发明中，除上述序列外，所述核苷酸序列优选还可以是经过定向进化和点突变后的序列，以及经过人工修饰的或与所述osaba8ox2基因具有80％以上同一性的核苷酸序列，如osaba8ox3基因。27.本发明提供了一种靶向敲除或沉默osaba8ox2基因的sgrna序列，所述sgrna序列的核苷酸序列如seq id no.3所示：gaggcttcctccgggatcca。28.本发明提供了一种靶向敲除或沉默osaba8ox2基因的crispr/cas9载体，所述crispr/cas9载体中含有上述sgrna序列。29.强、弱势粒灌浆差异对禾本科作物产量形成有着不可忽视的影响，弱势粒灌浆差已成为制约水稻发挥高产潜力的主要原因之一。在籽粒灌浆过程中aba含量呈现出先升后降的趋势，且强势粒中aba含量高于弱势粒。aba通过提高蔗糖向淀粉转化相关酶的活性来促进淀粉的合成，其含量和籽粒灌浆速率、粒重等指标相关性极高，是调控籽粒灌浆最为重要的植物激素。所以通过提高籽粒内源aba含量或外源喷施低浓度aba均能有效提高弱势粒灌浆速率和粒重。aba 8’‑羧化酶隶属osaba8ox基因家族，其编码蛋白是aba分解的关键酶，参与调控植物体内aba的稳态。osaba8ox2是籽粒aba主要降解基因，在弱势粒中表达显著高于强势粒(图1)，导致强弱势粒aba含量的差异。本发明的通过改变osaba8ox2蛋白质在水稻籽粒中的表达情况，在一定程度上提高内源aba含量，能够有效促进弱势粒灌浆，提高产量；种子休眠对于植物来说是一种有益的生物学过程，是种子抵御不良环境的一种自我保护机制，这种适应性是植物在长期进化过程中自然选择的结果。研究表明，种子成熟过程中aba诱导种子休眠，同时抑制种子萌发。种子在储藏过程中，种子中的aba不断被分解，种子活力逐渐丧失，老化后的种子，种子活力降低，发芽率下降。水稻幼苗在低温环境下，aba含量会逐渐增加，耐冷性品种较敏感性品种具有更高的aba含量。外施aba能够提高水稻幼苗的抗冷性，提高存活率。30.本发明的通过敲除osaba8ox2基因，获得的敲除水稻株系中所述的osaba8ox2基因的含量和/或活性降低，使籽粒、种子在内的各器官均具有较高的aba含量，从而提高水稻子代弱势粒灌浆速率，粒重增加，产量提高，同时种子耐老化特性和幼苗的耐冷抗性提高。31.因此，通过抑制osaba8ox2基因表达能够调控水稻弱势粒灌浆、提高种子耐老化和幼苗耐冷性。32.本发明提供了抑制osaba8ox2基因表达在如下中的应用，其特征在于，所述应用包括：a：调控水稻弱势粒灌浆，b为提高种子耐老化，c为幼苗耐冷性。在本发明中，所述抑制的方法优选包括rnai干扰、基因定点编辑、同源重组和crispr/cas9基因敲除。33.本发明所述抑制osaba8ox2基因表达在调控水稻弱势粒灌浆、提高种子耐老化和幼苗耐冷性中的应用的方法优选为向水稻中导入上述重组载体。本发明对导入的方式没有任何限定，采用本领域技术人员所熟知的方式即可。34.本发明具体实施例试验结果证明构建osaba8ox2基因的敲除载体并转化水稻，使水稻osaba8ox2基因不能正常表达，抑制aba降解，促使水稻植株、籽粒各器官aba含量提高，得到弱势粒灌浆速率及粒重增加，产量提高，并且种子耐老化和幼苗耐低温的有益效果。本发明在不影响水稻正常生长发育甚至可以促进灌浆，提高作物耐性的条件下，以osaba8ox2基因为出发点，提供了一种能同时促进弱势粒灌浆，同时提高种子耐老化和幼苗耐冷抗性的方法，为水稻育种提供了资源。35.为了进一步说明本发明，下面结合附图和实施例对本发明提供的osaba8ox2基因在调控弱势粒灌浆、提高种子耐老化及幼苗耐冷性的应用进行详细地描述，但不能将它们理解为对本发明保护范围的限定。36.实施例137.osaba8ox2基因敲除突变体获得及鉴定38.为了获得osaba8ox2(loc_os08g36860)基因的crispr/cas9突变体，利用biogle crispr/cas kit(bgk03,http://www.biogle.cn/)，并根据说明书构建crispr/cas9载体。靶点序列如seq id no:4所示：5’‑caggcttcctccgggatcca-3’在osaba8ox2基因全长cds序列(seq id no:2)的147～166bp处，grna序列如seq id no:3所示。按照8ox2-ko-up和8ox2-ko-low序列(表1)合成oligo。制备oligo二聚体，并将二聚体构建至crispr/cas载体，转化大肠杆菌，获得crispr/cas9载体pbgk03-osaba8ox2转化到农杆菌eha105并转化野生型中花11(zh11)，遗传转化由杭州百格生物技术有限公司完成。39.将t0代收的转基因种子进行种植，得到t1代植株，采用8ox2-t0-f和8ox2-t0-r(表1)对t1代进行pcr，并经测序获得ko-3和ko-11两个纯合突变体(图2)。ko-3在全长的cds序列的162bp处缺失1个a，导致移码突变，在291bp处形成终止密码子。ko-11在163bp和164bp之间插入一个t，也在1255bp处形成终止密码子。如图2和图3所示，突变后的氨基酸序列如seq id no:5(atggctttcttgctcttctttgtctttgtgacagctgcagtgctgtgcttcgtcgtcccggcgttcttgctgctctgcacgagcgtgcagaggaggagagatgttggacagggtggagggcgagattggcagaagaagaagaagctcaggcttcctccgggtccatgggctggccgtacgtcggcgagacgctccagctctactcccaggaccccaacgtcttcttcgcctccaagcagaagaggtacggcgagatattcaagacgaatctgctggggtgcccgtgcgtgatgctggcgagcccggaggcggcgaggttcgtgctggtgtcgcaggcgaggctgttcaagccgacgtacccgccgagcaaggagcggatgatcgggccgtcggcgctcttcttccaccagggcgagtaccacctccgcctccgccgcctcgtccaggccgccctcgccccggactccctccgcgccctcgtcccggacgtcgacgccgccgtcgccgccacgctcgccgcctggtccggcggccacgtcgccagcaccttccacgccatgaagaagctctcgttcgacgtcggcgtcgtgaccatcttcggcggccggctcggccgccggcacagggaggagctgaggacgaactactccgtcgtggagagaggctacaactgcttccccaaccgcttcccggggacgctctaccacaaggcgatccaggcgaggaagcggctgcgcgcgatcctgagcgagatcgtggcggagcggcgggcgcgcggcggcggcggcggcggcggcggcgacgacctcctcggcggcctcatgcggtcgcgcgacgacggcaccgccggcgcggtggcgctgctcaccgacgaccagatcgccgacaacgtcgtcggcgtgctgttcgcggcgcaggacaccaccgccagcgtcctcacctggatcctcaagtacctccacgactcgccgaagcttctcgaagccgtcaaggcggagcagatggcgatctacgtggccaacgagggcgggaagcggccgctgacgtggacgcagacgaggagcatgacactcacgcatcaggttatactggagagcttgaggatggcgagcataatctccttcacgttcagagaggcagtcgccgacgtggagtacaaaggtttcctgattccaaaggggtggaaggtgatgcctctgttcaggaacatccatcacaacccggactacttccaggatccacaaaagtttgatccttctagattcaaggtggcgccgcgtccaagcacgttcctgccgttcgggagcggcgtgcacgcgtgcccgggcaacgagctggccaagctggagatgctcgtcctcgtccaccgcctcgtcaccgcctacaggtgggagatcgtcggggcgagcgacgaggtggagtacagcccgttcccggtgccgaggggcgggctcaacgccaagctgtggaagcaggaggcggaggaggacatgtacatggccatgggcaccatcacagcagcaggtgcttga，ko-3)和seq id no:6(atggctttcttgctcttctttgtctttgtgacagctgcagtgctgtgcttcgtcgtcccggcgttcttgctgctctgcacgagcgtgcagaggaggagagatgttggacagggtggagggcgagattggcagaagaagaagaagctcaggcttcctccgggattccatgggctggccgtacgtcggcgagacgctccagctctactcccaggaccccaacgtcttcttcgcctccaagcagaagaggtacggcgagatattcaagacgaatctgctggggtgcccgtgcgtgatgctggcgagcccggaggcggcgaggttcgtgctggtgtcgcaggcgaggctgttcaagccgacgtacccgccgagcaaggagcggatgatcgggccgtcggcgctcttcttccaccagggcgagtaccacctccgcctccgccgcctcgtccaggccgccctcgccccggactccctccgcgccctcgtcccggacgtcgacgccgccgtcgccgccacgctcgccgcctggtccggcggccacgtcgccagcaccttccacgccatgaagaagctctcgttcgacgtcggcgtcgtgaccatcttcggcggccggctcggccgccggcacagggaggagctgaggacgaactactccgtcgtggagagaggctacaactgcttccccaaccgcttcccggggacgctctaccacaaggcgatccaggcgaggaagcggctgcgcgcgatcctgagcgagatcgtggcggagcggcgggcgcgcggcggcggcggcggcggcggcggcgacgacctcctcggcggcctcatgcggtcgcgcgacgacggcaccgccggcgcggtggcgctgctcaccgacgaccagatcgccgacaacgtcgtcggcgtgctgttcgcggcgcaggacaccaccgccagcgtcctcacctggatcctcaagtacctccacgactcgccgaagcttctcgaagccgtcaaggcggagcagatggcgatctacgtggccaacgagggcgggaagcggccgctgacgtggacgcagacgaggagcatgacactcacgcatcaggttatactggagagcttgaggatggcgagcataatctccttcacgttcagagaggcagtcgccgacgtggagtacaaaggtttcctgattccaaaggggtggaaggtgatgcctctgttcaggaacatccatcacaacccggactacttccaggatccacaaaagtttgatccttctagattcaaggtggcgccgcgtccaagcacgttcctgccgttcgggagcggcgtgcacgcgtgcccgggcaacgagctggccaagctggagatgctcgtcctcgtccaccgcctcgtcaccgcctacaggtgggagatcgtcggggcgagcgacgaggtggagtacagcccgttcccggtgccgaggggcgggctcaacgccaagctgtggaagcaggaggcggaggaggacatgtacatggccatgggcaccatcacagcagcaggtgcttga，ko-11)所示，致使osaba8ox2基因不能正常表达，导致突变体弱籽粒aba含量在灌浆高峰期(花后9d)显著高于野生型中花11(zh11)。40.表1实施例1所需引物[0041][0042]实施例2[0043]osaba8ox2转基因材料弱势粒灌浆及产量性状统计[0044]2020年春、秋两季在湖南长沙正常种植osaba8ox2转基因材料(ko-3和ko-11两个突变株系)，为反向证明osaba8ox2基因在弱势粒灌浆中的作用，除突变体外，种植了osaba8ox2过表达材料(oe-26)。[0045]在水稻始花期，对生长均匀一致同日开花的稻穗进行挂牌标记，每个材料标记300穗。从花后到成熟收获，各处理每3天取样1次，每个处理取8穗，共计3次重复，用于灌浆动态及灌浆速率计算。强、弱势粒被单独收获。稻穗顶部一次枝梗最先开花的为籽粒强势粒，稻穗基部二次枝梗最晚开花的籽粒为弱势粒。成熟期，每处理收获10～15个单株，用于统计产量性状，包括有效穗数，每穗粒数、结实率、强弱势粒粒重和单株产量，结果如表2、表3、图4～图7所示。[0046]表2 osaba8ox2转基因材料春季农艺性状统计[0047][0048]表3 osaba8ox2转基因材料秋季农艺性状统计[0049][0050]osaba8ox2敲除突变体ko-3和ko-11的弱势粒在粒宽(图4中的(a))及粒长(图4中的(b))均较zh11提高，osaba8ox2基因过表达材料oe-26则表现出灌浆不良的情况，而且部分弱势粒发生严重退化情况(图4中的(c))。在早、晚两季种植中，农艺性状如表2、表3、图5和图6所示，osaba8ox2基因突变体弱势粒粒重提高7.09％～20.26％，达到显著或极显著水平，最终单株产量提高6.71％～12.46％，而oe-26弱势粒降低10.41％，产量降低12.59％。osaba8ox2敲除突变体ko-3和ko-11主要是弱势粒充实度提高，对强势粒无显著影响。突变体结实率在早稻中无差异，但做晚稻种植时，其结实率显著提高10.26％～12.53％。突变体ko-3和ko-11株高均较zh11降低10.46％～16.79％，达极显著水平，而过表达材料oe-26则相反，较zh11显著提高19.93％。相关材料在分蘖及穗粒数方面没有差异。[0051]对野生型以及osaba8ox2敲除突变体ko-3、ko-11两个株系弱势粒粒重动态(图7中的(a))进行统计，并利用richards方程进行了拟合，得到灌浆速率曲线(图7中的(b))。可以看出osaba8ox2敲除突变体ko-3、ko-11株系弱势粒粒重较zh11显著增加，灌浆速率较zh11提高，且灌浆高峰期较zh11提早3天左右。说明敲除osaba8ox2基因可以提高弱势粒灌浆速率，提高粒重，增加产量。[0052]实施例3[0053]osaba8ox2突变体耐老化特性分析[0054]我们对野生型(中花11，zh11)及osaba8ox2突变体(ko-3和ko-11两个突变株系)新收获种子在42℃烘箱干燥3天，用以平衡水分及打破休眠。采用人工老化方法进行老化试验，具体是保温盒内加水，种子平铺于隔水培养皿内，放置恒温培养箱，50℃，100％湿度，老化处理。在72h和96h取样进行发芽试验，在铺有滤纸培养皿内放置50粒种子，加水保持湿润，放置于28℃，70％相对湿度，光照与黑暗交替14h/10h的培养箱进行发芽，每个处理设3重复，7天后统计发芽率，计算存活率，结果见表4和图8。[0055]表4种子老化存活率(％)[0056]品种72h96hzh1168.33±5.200ko-387.5±2.5*45.0±6.61**ko-1186.67±10.41*44.17±8.04**[0057]由表4和图8记载的可知，对野生型zh11及osaba8ox2基因敲除材料进行人工老化处理发现，敲除突变体种子耐老化能力增强，种子人工老化处理72h后，野生型种子存活率降低至68.33％，突变体仍保持85％以上的存活率；老化96h后，野生型zh11完全失活，突变体仍保持45％左右的存活率，说明其更耐储藏。[0058]实施例4[0059]osaba8ox2蛋白质调控幼苗耐冷抗性[0060]为探究osaba8ox2蛋白质在幼苗耐冷抗性中的作用，将osaba8ox2突变体及过表达材料(oe-26)及野生型中花11(zh11)同时浸种催芽后，放置于28℃，70％相对湿度，光照为黑暗交替14h/10h的培养箱进行正常水培。7天后幼苗被转移4℃光照培养箱低温处理48h，并恢复室温培育7d后统计存活率，结果见表5和图9和图10。[0061]表5幼苗低温处理存活率(％)[0062]品种存活率zh114.17±4.17ko-354.17±12.5**ko-1152.78±8.67**[0063]由表5、图9和图10记载的可知，osaba8ox2突变体ko-11对低温胁迫具有更强的耐性，而过表达材料oe-26对低温胁迫更敏感。对osaba8ox2突变体重复试验，统计存活率发现，ko-3和ko-11突变体存活率较zh11极显著提高。由此说明，敲除osaba8ox2基因可以提高水稻幼苗对低温胁迫的抗性。[0064]虽然本发明已以较佳的实施例公开如上，但其并非用以限定本发明，任何熟悉此技术的人，在不脱离本发明的精神和范围内，都可以做各种改动和修饰，因此本发明的保护范围应该以权利要求书所界定的为准。









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