一种用于防治根腐病的复合微生物菌剂的制备及应用的制作方法

有机化合物处理,合成应用技术1.本发明属于生物农药技术领域；具体是一种用于防治根腐病的复合微生物菌剂的制备及应用。背景技术：2.近年来，茄子和烟草的种植面积不断扩大，且其二者的根腐病的危害却越来越严重。每年当茄子和烟草定植后，根腐病大量发生。3.茄子根腐病是由土传病原菌侵染引起的，一般在定植后开始发病，发病初期白天叶片萎蔫，早晚复原。反复多日后，叶片逐渐变黄干枯，后整株枯黄而死，根部或根茎部表皮呈褐色腐烂。4.烟草根腐病主要危害幼苗，成株期也能发病。发病初期，仅仅是个别支根和须根感病，并逐渐向主根扩展，主根感病后，早期植株不表现症状，后随着根部腐烂程度的加剧，吸收水分和养分的功能逐渐减弱，地上部分因养分供应不求，新叶首先发黄，在中午前后光照强、蒸发量大时，植株上部叶片才出现萎蔫，单夜间又能恢复。病情严重时，萎蔫状况夜间也不能在恢复，整株叶片发黄、枯威。5.对此，目前现阶段采取的化学农药在且茄子根腐病和烟草根腐病的防治方面发挥了重要作用，但过度使用化学农药，容易使病菌产生抗药性、降低作物品质、污染环境、影响人体健康。因此采用高效、安全、环境友好型生物防治成为最佳选择。6.本发明为弥补上述现状的不足，一种用于防治植物根腐病的复合微生物菌剂，是一种绿色无害、无污染、且能够增添有益微生物的生防菌剂。其能够有效的防治植物根腐病，尤其是茄子根腐病和烟草根腐病的防治。所采用的地衣芽孢杆菌和球孢白僵菌是有益微生物菌株，不仅能保证了作物的质量，也符合农业可持续发展的需要，更是保障了人民健康和环境安全的需要，同时也是贯彻绿色植保理念的需要。技术实现要素：7.本发明的目的在于提供一种用于防治根腐病的复合微生物菌剂的制备及应用。8.为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：一种用于防治根腐病的复合微生物菌剂的制备，制备过程包括斜面培养、液体种子培养、种子液配比、液体菌剂的配制以及固体粉剂的制备，所述制备过程具体如下：9.步骤一：将菌种地衣芽孢杆菌和球孢白僵菌在无菌条件下分别接种于斜面培养基中；10.步骤二：调节温度至29℃，使斜面培养基在29℃下培养3天；11.步骤三：将步骤二的斜面培养基中的菌种地衣芽孢杆菌和球孢白僵菌在无菌条件下分别接种于装有液体培养基的液体三角瓶中；12.步骤四：调节温度至29℃，并将液体三角瓶放置在150r/min的摇床中，培养2天；13.步骤五：将步骤四的液体三角瓶中培养出的地衣芽孢杆菌和球孢白僵菌的种子液按照一定的重量百分比进行配比混合；14.步骤六：将步骤五中配比好的液体种子接种到液体发酵罐中，发酵培养64小时，且发酵液中的活菌数≥20亿/ml时，停止发酵，即得液体菌剂；15.步骤七：将步骤六中制备好的液体菌剂作为原药，与粉碎的灭菌有机肥、白炭黑做载体混合，混合后产物放入干燥室进行常温风干干燥，干燥后进行粉碎，包装即得固体粉状生物菌剂。16.步骤一中所述斜面培养基组分按照重量百分比分为：葡萄糖0.5％、酵母浸粉0.8％、蛋白胨0.5％以及氯化钠1.0％，所述斜面培养基的ph为7.1。17.步骤三中所述液体培养基组分按照重量百分比分为：蛋白胨2％、酵母浸膏1.0％、氯化钠1.0％、葡萄糖0.5％以及余量的水，所述液体培养基的ph为7.0。18.步骤五中的地衣芽孢杆菌和球孢白僵菌的种子液以各50％的重量百分比进行配比。19.步骤六中的发酵培养基组分按照重量百分比分为：糖蜜1.2％、葡萄糖0.8％、玉米淀粉1.3％、豆粕粉1.5％、硫酸镁0.03％、木醋酸1.5％、尿素0.12％、磷酸二氢钾0.04％、蛋白胨0.1％、酵母粉0.05％以及余量水，液体种子接种到液体发酵罐中的接种量为15％，其接种条件为:培养温度为29℃，转速190r/min，液体种子与发酵培养基通气量为1：0.6。20.步骤七中的载体有机肥和白炭黑的比例为3:1，固体粉碎至70目。21.所述地衣芽孢杆菌以及球孢白僵菌均保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心内。22.一种用于防治根腐病的复合微生物菌剂的应用，所述复合微生物菌剂具体应用于防治茄子根腐病以及烟草根腐病。23.所述复合微生物菌剂的应用具体如下：24.步骤1：向搅拌容器内加入一定量的复合微生物菌剂；25.步骤2：向步骤1的搅拌容器中加入液态水，且液态水与复合微生物菌剂的比例为100:1，之后进行搅拌混合；26.步骤3：将步骤2中混合得到的液体进行灌根处理。27.与现有技术相比，本发明的有益效果是：本发明的原料成本低，工艺简单，通过斜面培养、液体种子培养再发酵复合培养基，多重培养，将球孢白僵菌和地衣芽孢杆菌同罐发酵复合培养，使他们互生或共存，最终通过干燥粉碎成粉剂。其作用机理通过占位以及两种有益微生物菌的分泌出的活性物质进行杀菌，除病，且是一种绿色无害无污染的生防菌剂，在防治过程中不不会产生污染以及对土地造成过重负担，且在一定程度上会增加土壤中的有益微生物，是土壤的肥力在一定程度上得到提升，进而能够影响作物的品质。附图说明28.为了更清楚地说明本发明实施例的技术方案，下面将对实施例描述所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。29.图1是本发明一种用于防治根腐病的复合微生物菌剂的制备的流程模块图。具体实施方式30.下面将结合对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其它实施例，都属于本发明保护的范围。31.实施例132.一种用于防治植物根腐病的复合微生物菌剂的制备33.步骤一：将菌种地衣芽孢杆菌和球孢白僵菌在无菌条件下分别接种于斜面培养基中；34.步骤二：调节温度至29℃，使斜面培养基在29℃下培养3天；35.步骤三：将步骤二的斜面培养基中的菌种地衣芽孢杆菌和球孢白僵菌在无菌条件下分别接种于装有液体培养基的液体三角瓶中；36.步骤四：调节温度至29℃，并将液体三角瓶放置在150r/min的摇床中，培养2天；37.步骤五：将步骤四的液体三角瓶中培养出的地衣芽孢杆菌和球孢白僵菌的种子液按照一定的重量百分比进行配比混合；38.步骤六：将步骤五中配比好的液体种子接种到液体发酵罐中，发酵培养64小时，且发酵液中的活菌数≥20亿/ml时，停止发酵，即得液体菌剂；39.步骤七：将步骤六中制备好的液体菌剂作为原药，与粉碎的灭菌有机肥、白炭黑做载体混合，混合后产物放入干燥室进行常温风干干燥，干燥后进行粉碎，包装即得固体粉状生物菌剂。40.步骤一中所述斜面培养基组分按照重量百分比分为：葡萄糖0.5％、酵母浸粉0.8％、蛋白胨0.5％以及氯化钠1.0％，所述斜面培养基的ph为7.1。41.步骤三中所述液体培养基组分按照重量百分比分为：蛋白胨2％、酵母浸膏1.0％、氯化钠1.0％、葡萄糖0.5％以及余量的水，所述液体培养基的ph为7.0。42.步骤五中的地衣芽孢杆菌和球孢白僵菌的种子液以各50％的重量百分比进行配比。43.步骤六中的发酵培养基组分按照重量百分比分为：糖蜜1.2％、葡萄糖0.8％、玉米淀粉1.3％、豆粕粉1.5％、硫酸镁0.03％、木醋酸1.5％、尿素0.12％、磷酸二氢钾0.04％、蛋白胨0.1％、酵母粉0.05％以及余量水，液体种子接种到液体发酵罐中的接种量为15％，其接种条件为:培养温度为29℃，转速190r/min，液体种子与发酵培养基通气量为1：0.6。44.步骤七中的载体有机肥和白炭黑的比例为3:1，固体粉碎至70目。45.实施例246.一种用于防治植物根腐病的复合微生物菌剂在防治茄子根腐病的应用47.1、试验地选区：48.试验地为普通菜地，将其同一片茄子菜地均分为3块，标为1-3号，其中1号区域使用本发明的复合微生物菌剂，2号区域使用普通市售防治植物根腐病的制剂，3号地为ck地，使用同等量的水；49.2、试验制剂准备：50.采购市售的根腐病制剂，使用在实施例1条件下制得本发明复合微生物菌粉与水1：100充分混合后使用。51.3、试验方法：52.1-3号区域都采用灌根的处理方式进行培育。53.4、试验结果：如表1所示54.表1各种防治剂对茄子根腐病的防治效果55.区域根腐病发病率(％)防治效果(％)1号区域3.0184.352号区域8.9653.413号区域19.23—56.如表1所示结果可以看出，本发明的一种用于防治植物根腐病的复合微生物菌剂对茄子根腐病的防治效果非常明显，其有效的抑制了其根腐病的发病率，防治效果达84.35％，较市售防治剂提高30.94％。57.实施例358.一种用于防治植物根腐病的复合微生物菌剂在防治烟草根腐病的应用59.1、试验方式：60.进行盆栽试验，采用普通烟草地的土壤均分9盆，分别编号为1-9号，1-3号为一组，4-6号为一组，7-9号为一组，将普通品种的烤烟幼苗移植盆栽。61.2、试验处理：62.1-3号盆栽移植前使用本名的复合微生物菌剂的100倍稀释液，进行根部浸泡，4-6号采用市售的防治植物根腐病的制剂进行根部浸泡，7-9号的使用清水作为对照。63.移植结束后，进行试验观察。多次重复试验，防止试验偶然误差，取得最终结果。64.3、试验结果：如表2所示：65.表2各种处理下对烟草根腐病的防治效果66.组别根腐病发病率(％)防治效果(％)1-3号组5.3379.404-6号组15.8638.727-9号组25.88—67.通过表2，我们可以看出，本发明一种用于防治植物根腐病的复合微生物菌剂在防治烟草根腐病方面有着明显的效果，防治效果达79.40％，较市售防治剂提高40.68％。且无危害，无污染的高效的，防治植物根腐病。68.以上内容仅仅是对本发明结构所作的举例和说明，所属本技术领域的技术人员对所描述的具体实施例做各种各样的修改或补充或采用类似的方式替代，只要不偏离发明的结构或者超越本权利要求书所定义的范围，均应属于本发明的保护范围。69.在本说明书的描述中，参考术语“一个实施例”、“示例”、“具体示例”等的描述意指结合该实施例或示例描述的具体特征、结构、材料或者特点包含于本发明的至少一个实施例或示例中。在本说明书中，对上述术语的示意性表述不一定指的是相同的实施例或示例。而且，描述的具体特征、结构、材料或者特点可以在任何的一个或多个实施例或示例中以合适的方式结合。70.以上公开的本发明优选实施例只是用于帮助阐述本发明。优选实施例并没有详尽叙述所有的细节，也不限制该发明仅为所述的具体实施方式。显然，根据本说明书的内容，可作很多的修改和变化。本说明书选取并具体描述这些实施例，是为了更好地解释本发明的原理和实际应用，从而使所属技术领域技术人员能很好地理解和利用本发明。本发明仅受权利要求书及其全部范围和等效物的限制。









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