一种荧光仪质控条及其制备方法与流程

测量装置的制造及其应用技术1.本发明涉及生化检测技术领域，尤其涉及一种荧光仪质控条及其制备方法。背景技术：2.荧光检测方法无需与检测样品接触，可避免操作人员暴露在高传染性的环境下，对检测样品进行非破坏性的定量或定性的检测，因此在生化领域上，采用干式免疫荧光分析仪来进行样品的检测得到广泛应用。3.干式荧光免疫分析仪是用于定量和定性荧光免疫层析试纸，因此需具备高稳定性、可重复性的特点，同时要确保仪器的检测质量。因此仪器需要具备校正功能，来确保仪器正常运行和检测的正确性，此功能称为仪器的质检。4.对仪器的质检，需要仪器中配件质控id卡和质控荧光条配合使用。通常用户在分析仪使用前，需使用质控id卡和质控荧光条，用于对分析仪质检，以便验证分析仪正常运行、检测结果是有效的。质控id卡，内存有质控荧光条的c值位置、t值位置、c值范围左值、c值范围右值、t/c靶值和t/c阈值的参数信息。质控荧光条的荧光值与质控id 卡所设置的参数相匹配。验证时，将质控id卡插入分析仪id卡插口，质控荧光条插入分析仪试剂卡插入口，点击《质检》按键，分析仪自动质检。完成后，若分析仪检测的数据结果与质控id卡内的数据信息相符，则表示分析仪运行正常，分析仪的界面显示为pass，仪器能正常使用，否则界面显示为failed，仪器不能正常使用。5.可见质控荧光条的优劣直接影响仪器的检测精度。仪器在每次使用前进行质检，每次质检都会使用荧光仪质控条，而当前使用的荧光仪质控条包括thermo公司提供的羧基修饰荧光微粒的液体，荧光微球浓度值为10mg/ml，artorius公司提供的型号为cn140硝酸纤维素膜，这种荧光微球在365nm紫外光照射后，产生615nm荧光辐射，它的辐射强弱，就是仪器显示的荧光强度t值和c值大小。由于此荧光微球制作的质控条，使用一次它的荧光强度会衰减一次，多次使用后仪器的质检就不正确，质控条往往随时间的衰减程度不一致，很难保证长期使用后，维持稳定的线性关系。6.在仪器生产调试中，校正仪器的线性及仪器测试范围的一致性，也需要使用荧光仪质控条，它的荧光衰减，给生产调试仪器带来不便，产生仪器线性度不一致，造成在检测时同一种试剂条，不同仪器，检测结果不一样。为了确保仪器的一致性，荧光仪质控条使用的次数受到了限制，使用过2到3次就换新的荧光仪质控条，这些用过得质控条就报废，生产成本就有所提高。技术实现要素：7.鉴于目前荧光质控条使用时其荧光物质稳定性差，会荧光衰减，给生产调试仪器、质检带来不便，产生仪器线性度不一致，本发明提供一种荧光仪质控条及其制备方法，质控条荧光辐射光强稳定、结构合理、可稳定保存，生产成本降低，提高了荧光免疫分析仪的检测准确性。8.为达到上述目的，本发明的实施例采用如下技术方案：9.一种荧光仪质控条，包括外壳和试剂条，所述外壳上设有观察孔，所述试剂条包括nc膜和底板，所述nc膜设置在所述底板上，所述nc 膜上设有检测线和质控线，所述检测线和质控线均划有荧光组合物，所述荧光组合物包括紫外荧光粉、pbs缓冲液和蔗糖。10.所述紫外荧光粉为无色或浅白色，在紫外光(200～400nm)照射下，依颜料中金属和活化剂种类、含量的不同，而呈现出各种颜色的可见光(400～800nm)。按激发光源的波长不同，又可分为短波紫外线激发荧光颜料(激发波长为254nm)、长波紫外线激发荧光颜料(激发波长为365nm)。本系列产品在可见光光源下，呈现白色或接近透明色，在不同波长光源下(254nm、365nm、850nm)显现一种或多种荧光色泽。具体的，本实施例中所述质控条使用的紫外激发波长是365nm，荧光辐射的波长为615nm红色光。11.依照本发明的一个方面，所述试剂条还包括样品垫、吸水垫，所述样品垫位于所述nc膜左侧，所述吸水垫位于所述nc膜右侧，所述外壳上设有加样孔。所述样品垫右侧设有标记垫。12.依照本发明的一个方面，所述底板为pvc垫，所述nc膜为硝酸纤维素薄膜。13.一种荧光仪质控条的制备方法，包括以下步骤：14.用缓冲液将荧光液原液稀释成若干份稀释液待用，得到荧光粉稀释液；15.用划膜仪在贴好硝酸纤维素薄膜的pvc底板上的相应位置分别划上制备的荧光粉稀释液，形成检测线和质控线；16.将划好线的pvc底板烘干后，冷却；17.取干燥过后的pvc底板，将底板切成合适宽度的试剂条；18.打开外壳，将切好的试剂条分别组装在外壳中，每根质控条的检测线、质控线位置离观察孔的距离要保持一致，盖上外壳，得到荧光仪质控条。19.依照本发明的一个方面，所述荧光仪质控条用铝箔袋密封，所述铝箔袋内装有干燥剂。20.依照本发明的一个方面，所述检测线位于所述硝酸纤维素薄膜顶部左侧，所述质控线位于所述硝酸纤维素薄膜顶部右侧。21.依照本发明的一个方面，所述划膜仪参数调整为0.5-1.0μl/cm，线宽1mm。22.依照本发明的一个方面，所述质控线与所述检测线之间的间距为 3-8mm。23.依照本发明的一个方面，所述质控线与所述检测线之间的间距为5mm。24.依照本发明的一个方面，所述烘干温度为45℃，烘干时间为2h。25.本发明实施的优点：所述质控条的发光物质稳定、结构合理、可稳定保存。荧光辐射光强稳定不易随时间衰减，线宽精度高，一致性好，能定量判断仪器重复性、稳定性、准确性和线性相关性且可进行溯源。所述质控条用于荧光分析仪校准、质检、调试时，能有效延长荧光仪质控条的使用次数，大幅减少荧光仪质控条的更换周期，降低成本，节省了仪器的调试时间。所述制备方法制作工艺简单，可操作性强，没有复杂配制过程，对操作人员专业性要求低。紫外荧光粉颗粒细，呈圆球状，易分散，耐热性良好，不会污染，无毒性，使用周期长，重复性好。根据仪器提供的参数可适用各种荧光免疫分析仪质检要求，可以将质控条作为荧光仪的标准条。将荧光仪质控条设定为1-10级浓度或面积梯度，采用具有不同浓度或面积梯度的荧光仪质控条对荧光免疫分析仪校准测试，能有效进行重复性测试、稳定性测试、准确性测试和线性相关测试。附图说明26.为了更清楚地说明本发明实施例中的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。27.图1为本发明所述的一种荧光仪质控条的结构示意图；28.图2为本发明试剂条的结构示意图；29.图3为本发明另一实施例的试剂条的结构示意图；30.图4为本发明试剂条中荧光粉含量对应仪器测试的荧光强度的平均值的线性拟合图。31.图1-3中，1、外壳；2、加样孔；3、观察孔；4、试剂条；5、检测线；6、控制线；7、样品垫；8、标记垫；9、nc膜；10、吸水垫； 11、底板；12、大板贴纸。具体实施方式32.下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。33.如图1、图2、图3所示，一种荧光仪质控条，包括外壳1和试剂条4，所述外壳1上设有观察孔3，所述试剂条4包括nc膜9和底板 11，所述nc膜9设置在所述底板11上，所述nc膜9上设有检测线5 和质控线6，所述检测线5和质控线6均划有荧光组合物，所述荧光组合物包括紫外荧光粉、pbs缓冲液和蔗糖。34.所述紫外荧光粉为无色或浅白色，在紫外光(200～400nm)照射下，依颜料中金属和活化剂种类、含量的不同，而呈现出各种颜色的可见光(400～800nm)。按激发光源的波长不同，又可分为短波紫外线激发荧光颜料(激发波长为254nm)，长波紫外线激发荧光颜料(激发波长为365nm)。本系列产品在可见光光源下，呈现白色或接近透明色，在不同波长光源下(254nm、365nm、850nm)显现一种或多种荧光色泽。具体的，本实施例中所述质控条使用的紫外激发波长可选择为365nm，荧光辐射的波长为615nm红色光。35.所述荧光仪质控条荧光辐射光强稳定，不易随时间衰减，线宽精度高，可用于干式荧光免疫分析仪的质检，作为标准卡使用一致性好，能提高荧光仪生产成本，节省了仪器的调试时间。荧光仪质控条的制作采用隐形荧光粉，所述隐形荧光粉颗粒细，圆球状易分散，耐热性良好，不会污染，无毒性，使用周期长，重复性好，成本低，有利于对荧光免疫分析仪进行校准和质控，提高了荧光免疫分析仪的检测准确性，同时能够实现标准卡的溯源，能够可靠保证荧光标准卡在制作和使用过程中能够受控。因此，所述质控条可应用于分析仪校准、质检、调试。36.本实施例中，所述nc膜9是整个试剂条免疫反应的载体。具体的，材料可选择硝酸纤维素膜，具体可选择德国sartorius、美国millipore 和印度mdi。通常选择德国sartorius，其主要包括cn180、cn150、cn140、 cn140unbacked、cn110、cn95六种型号，数字越大膜孔径越小，流速越慢，材料要根据不同试剂产品选择。原料在包被到nc膜上之前需要稀释到合适的浓度，包被的稀释液相对来说较为简单一些，pb或者pbs 缓冲液最为常用，这两者的缓冲体系对包被的抗原抗体都有较好的适应性。进一步的，为了解决某些特殊异常还可添加一些化学试剂。如为了保持良好的稳定性添加海藻糖和蔗糖；为了减轻部分反白现象添加tween 20和edta；为了对膜进行封闭选择bsa和casein作为封闭剂。37.进一步的，所述试剂条还可根据实际需要设置样品垫7、吸水垫 10，具体的，所述样品垫7位于所述nc膜9左侧，所述吸水垫10位于所述nc膜9右侧。进一步的，所述试剂条上设置样品垫7时，在所述外壳1上设置加样孔2，所述加样孔2在用于荧光仪质控条时作用，在检测时不需加任何样品。38.实际应用中，所述样品垫7用于分离过滤样品中的杂质，对样品进行前处理，平衡待测试样品的ph和调整盐离子强度，使样品在层析过程中保持一定的均一性和可控性。所述样品垫7的材料主要选择玻纤、无纺布和滤纸，通常选择ahlstrom的8964玻纤。样品垫7一般需要经过前期处理才能使用，处理液一般包含缓冲液、表面活性剂和其它生物原料。具体的，根据产品使用的样本类型选择合适的缓冲液，缓冲液主要包括tris、硼砂和磷酸盐缓冲液。尿液样本中硼砂缓冲液用的多一些，血液样本tris和磷酸盐缓冲液用的多一些。表面活性剂用的较多的包括tween 20、triton x-100、tetronic 1307等，一般优先选择非离子表面活性剂。其它生物原料的加入是为了解决跑板过程中出现的异常，如加入聚乙烯吡咯烷酮增加亲水性，bsa、异嗜性抗体和酪蛋白可以特异性吸附杂蛋白，降低可能出现的假阳性，edta可以减少轨线和消除部分反白作用等。处理液还需要加入防腐剂叠氮钠，最后调节合适的ph，处理在玻纤上，烘干即可。39.实际应用中，吸收垫10选择要求不高，具有良好的亲水性和保水性即可，一般都是选用滤纸。40.进一步的，所述样品垫7右侧还可设有标记垫8。41.实际应用中，标记垫8是胶体金颗粒附着的载体，具备非特异性、吸附力低、标记物复溶和释放力好的材料均可用于标记垫8。所述标记垫8主要用的材料是聚酯膜、玻纤和无纺布，其中芬兰ahlstrom的6613 聚酯膜较为常用，项目前期可直接先用它来初筛原料。与样品垫7一样，标记垫8在喷点金标之前一般也需要进行前处理，处理液与上述相似，可根据具体项目配置合适的处理液。42.本实施例中，所述检测线5位于所述nc膜9顶部左侧，所述质控线6位于所述nc膜9顶部右侧。43.实际应用中，所述底板11主要是用于承载和黏合其它物料。所述底板11需要粘性好、加烘后不易变形。具体可选择pvc垫。当激发光从下至上时，就需要使用透明材料的pvc垫。44.本实施例中，所述质控线5与所述检测线6之间的间距为3-8mm。优选的，所述质控线5与所述检测线6之间的间距为5mm。45.一种荧光仪质控条的制备方法，包括以下步骤：46.用缓冲液将荧光液原液稀释成若干份稀释液待用，得到荧光粉稀释液；47.用划膜仪在贴好硝酸纤维素薄膜的pvc底板上的相应位置分别划上制备的荧光粉稀释液，形成检测线和质控线；48.将划好线的pvc底板烘干后，冷却；49.取干燥过后的pvc底板，将底板切成合适宽度的试剂条；50.打开外壳，将切好的试剂条分别组装在外壳中，每根质控条的t 线、c线位置离观察孔的距离要保持一致，盖上外壳，得到荧光仪质控条。51.优选的，所述荧光仪质控条用铝箔袋密封，所述铝箔袋内装有干燥剂。52.优选的，所述划膜仪参数调整为0.5-1.0μl/cm，线宽1mm。53.优选的，所述质控线与所述检测线之间的间距为3-8mm。54.优选的，所述质控线与所述检测线之间的间距为5mm。55.优选的，所述烘干温度为45℃，烘干时间为2h。56.优选的，所述缓冲液为0.01m pbs+2％蔗糖。57.实际应用中，荧光仪质控条在上述试剂条制作上，结合质控条作为对仪器校准和质检以及仪器调试使用，制作时只保留试剂条上的nc 膜，大板贴纸12不拆掉，即大板上原样品垫、标记垫、吸水垫位置的贴纸不拆掉并保留在大板上。58.其制作工艺简单，可操作性强，没有复杂配制过程，对操作人员专业性要求低。根据仪器提供的参数可适用各种荧光免疫分析仪质检要求，可建立一系列荧光分析仪的标准条，来评估仪器的线性的相关性，稳定性、重复性和准确性的技术指标。59.以下为具体实施例。60.实施例1：一种荧光仪质控条的制备方法61.1.荧光粉溶液的配制：62.取100mg荧光液，用1mg包被液进行稀释，所述包被液为0.01m pbs+2％蔗糖，得到荧光粉溶液含量为100mg的原液。按下面的梯度稀释配制成10种不同荧光粉含量的工作液。63.1#质控条工作液：取荧光粉溶液含量为100mg的原液，用包被液进行10倍的稀释，混匀后制成荧光粉含量为10mg的溶液。它的荧光粉每毫升含量10mg。64.2#质控条工作液，取等体积的1#质控条工作溶液和3#质控条工作溶液进行混合，制成荧光粉含量为5.5mg。65.3#质控条工作液，取制成的1#质控条工作溶液，用包被液进行10 倍的稀释，制成荧光粉含量为1mg的溶液。66.4#质控条工作液，取等体积的3#质控条工作溶液和5#质控条工作溶液进行混合，制成荧光粉含量为0.55mg的溶液。67.5#质控条工作液，取制成的3#质控条工作溶液，用包被液进行10 倍的稀释，制成荧光粉含量为0.1mg的溶液68.6#质控条工作液，取等体积的5#质控条工作溶液和7#质控条工作溶液进行混合，制成荧光粉含量为0.055mg的溶液。69.7#质控条工作液，取制成的5#质控条工作溶液，用包被液进行10 倍的稀释，制成荧光粉含量为0.01mg的溶液。70.8#质控条工作液,取等体积的7#质控条工作溶液和9#质控条工作溶液进行混合，制成荧光粉含量为0.0055mg的溶液。71.9#质控条工作液,取制成的7#质控条工作溶液，用包被液进行10 倍的稀释，制成荧光微球含量为0.001mg的溶液。72.10#质控条工作液,取等体积的9#质控条工作溶液，再取制成的9# 质控条工作溶液，用包被液进行10倍的稀释，制成荧光粉含量为 0.0001mg的溶液，二者工作溶液进行混合，制成荧光粉含量为0.00055mg 的溶液。73.2.空白膜制备74.取大板pvc背板，拆除贴nc膜位置的贴纸，用贴膜机粘贴10张空白硝酸纤维素膜，大板规格每张为300mm×60mm。75.3.荧光粉工作液固化76.1)用划膜仪将配制好的荧光粉质控条工作液1#～10#，固化在硝酸纤维素膜上。调整划膜仪参数为1.0μl/cm，线宽1mm，t线于c线的位置为5mm，每种荧光粉工作液固化在1张硝酸纤维素膜上，依次在大板上分别编号，按1#质控条工作液到10#质控条工作液对应标识好。在紫外光照射下，每张得到的荧光强度不同。77.2)在空白膜上将已经划上10种不同工作液的10张硝酸纤维素膜，均匀平放在45℃烘箱内，烘干时间2小时，取出后常温下冷却1小时，荧光粉工作液固化结束。78.4.荧光仪质控条组装79.1)把固化荧光粉的10张硝酸纤维素膜，分别按1#到10#质控工作液的大板，用裁条仪切剪成3.97mm*60mm的条，放置在标识1#到10#质控条的盒子里。80.2)在试剂条外壳上分别标识1#到10#，以此区分不同荧光强度质控条。打开试剂条外壳，将1#到10#质控条分别组装在塑料卡壳中，每根质控条的t线c线位置离观察孔的距离要保持一致，盖上外壳，荧光仪质控条制成，将每根质控条放置在密封并装有干燥剂的铝箔袋内，铝箔袋依次标注1#～10#编号，以便区分。81.6.性能检测82.用1#到5#质控条，分别对荧光分析仪准确度、线性度、稳定性、重复性进行测试。83.1)质控条准确度验证84.为了更精确地得到测试结果，排除仪器本身的线性误差，测试选在仪器最佳线性范围进行测定，将1#到5#质控条的对应荧光强度的t值进行测试，所得数据如下表1：[0085][0086]表1[0087]表中可见，仪器的荧光强度的线性范围为85000±850到1100±11，能够满足使用需求。[0088]2)质控条线性度验证[0089]用上述选的1#到5#质控条来线性关系评估，设荧光仪质控条的荧光粉含量值为x，仪器测试值的平均值为y，进行直线拟合。每根质控条的荧光粉含量已知，测试每根质控条经过10次测试的值，求出平均值，测试结果如下表2：[0090][0091]表2[0092]1#到5#荧光仪质控条的荧光粉含量对应仪器测试的荧光强度的平均值的关系，如下表3所示：[0093][0094]表3[0095]将上述表3中数据的对应关系，用电子软件excel做线性拟合，如附图4所示：图中可见，r2＝0.9984，因此，制作的荧光仪质控条的线性度符合要求。[0096]3)质控条稳定性验证[0097]首先将荧光检测仪开机15分钟，使仪器处于稳定工作状态。同样用 1#到5#荧光仪质控条，每种质控条重复测试3次，计算测定的t检测区 (t值)和c控制区(c值)的荧光强度的平均值，再分别过2小时、4小时、8小时后，每个时间点重复测试3次，同样计算检测区(t值)和控制区(c值)的荧光强度的平均值，以第一次的测定结果作为基准值，按公式(1)分别计算检测区(t值)和控制区(c值)的相对偏倚(a，％)，测试结果应:≤5％。[0098][0099]式中：[0100]xn‑‑‑‑第2h、4h、第8h检测区(t值)/质控区(c值)荧光测定值的均值；[0101]x1‑‑‑‑检测区(t值)/质控区(c值)第一次荧光测定值的均值；[0102]a‑‑‑检测区(t值)/质控区(c值)的相对偏倚。[0103]测试计算得到的数据如下表4：[0104][0105][0106]表4[0107]对1#～5#荧光仪质控条的检测区(t值)和控制区(c值)的荧光值的稳定性的测试数据分析，所得到的检测结果均小于±5％，满足设定的稳定性指标，能够符合稳定性指标的设计要求。[0108]4)质控条重复性验证[0109]荧光仪质控条的的重复性验证，是评估本发明制作的荧光仪质控条，在多频次的测试，它的荧光强度的衰减是否，是否满足重复性的变异系数。验证方法，使用1～5#荧光仪质控条，重复测试10次，记录测试得到的平均荧光强度(t值)。[0110]按公式(2)、﹙3﹚、﹙4﹚计算变异系数(cv，％)，所得测试结果应≤5％。[0111][0112][0113]cv％＝α/μ×100％…………………﹙4﹚[0114]式中：[0115]μ——荧光测定值的平均值[0116]xi——荧光测定值[0117]α——标准差[0118]n——测试次数[0119]cv——变异系数[0120]测试计算得到的数据如下表5：[0121][0122]表5[0123]从表中可知1#～5#荧光仪质控条的变异系数都小于5％，能够符合重复度指标的要求。[0124]通过对1#到5#荧光仪质控条的准确性、线性度、稳定性、重复性的验证测试，可见本发明的荧光仪质控条，能满足荧光仪各项性能的检测要求，提高了仪器生产调试的可靠性和保证仪器的质量。所述荧光仪质控条可用于分析仪校准、质检、调试工作。[0125]本发明实施的优点：所述质控条的发光物质稳定、结构合理、可稳定保存。荧光辐射光强稳定不易随时间衰减，线宽精度高，一致性好，能定量判断仪器重复性、稳定性、准确性和线性相关性且可进行溯源。所述质控条用于荧光分析仪校准、质检、调试时，能有效延长荧光仪质控条的使用次数，大幅减少荧光仪质控条的更换周期，降低成本，节省了仪器的调试时间。所述制备方法制作工艺简单，可操作性强，没有复杂配制过程，对操作人员专业性要求低。紫外荧光粉颗粒细，呈圆球状，易分散，耐热性良好，不会污染，无毒性，使用周期长，重复性好。根据仪器提供的参数可适用各种荧光免疫分析仪质检要求，可以将质控条作为荧光仪的标准条。将荧光仪质控条设定为1-10级浓度或面积梯度，采用具有不同浓度或面积梯度的荧光仪质控条对荧光免疫分析仪校准测试，能有效进行重复性测试、稳定性测试、准确性测试和线性相关测试。[0126]以上所述，仅为本发明的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本领域技术的技术人员在本发明公开的技术范围内，可轻易想到的变化或替换，都应涵盖在本发明的保护范围之内。因此，本发明的保护范围应以所述权利要求的保护范围为准。









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