用于纯化生物过程和细胞群的过滤器设备和方法与流程

有机化合物处理,合成应用技术用于纯化生物过程和细胞群的过滤器设备和方法背景技术：1.生物反应器广泛用于生物制药工业内，所述生物反应器是可以在实验室或工业规模上进行生物反应或过程的设备。生物反应器可以用于分批应用中，其中供应到生物反应器的生物材料保留在生物反应器中直到反应时间结束。可替代地，生物反应器可以用于灌注应用中，其中包含在生物反应器内的流体培养基被周期性地或连续地取出并且重新供应到生物反应器中，以便补充包含在流体培养基中的营养素并且用于可能地去除在过程期间产生的有害副产物。2.生物反应器例如用于生产生物制剂，所述生物制剂是从活生物体中生产的生物药物。生物反应器还用于免疫疗法，所述免疫疗法是一种增强患者免疫系统以对抗癌症、感染和其它疾病的治疗方法。免疫疗法过程例如可以包含产生t细胞和/或天然自然杀伤(nk)细胞。例如，在t细胞疗法期间，从患者的血液中取出t细胞。然后将t细胞送到生物反应器中并扩增或培养。另外，可以改变t细胞，使得t细胞具有称为受体的特定蛋白质。t细胞上的受体被设计成识别和靶向身体内的不想要的细胞，如癌细胞。经修饰的t细胞在生物反应器中培养，以实现某一细胞密度，并且然后供应给患者的身体以对抗癌症或其它疾病。t细胞疗法通常被称为嵌合抗原受体(car)t细胞疗法。由于在对抗血液疾病方面取得巨大成功，因此t细胞在car疗法中的使用最近激增。3.类似地，nk细胞可以在生物反应器中培养和扩增，以用于输注到患者体内。nk细胞是一种可以找出并且破坏体内的感染细胞的细胞毒性淋巴细胞。nk细胞可以显示非常快速的免疫反应应答。因此，nk细胞在抗癌疗法中的使用已经得到了极大的关注和普及。然而，哺乳动物血液中的nk细胞数量有限，这要求nk细胞在生物反应器中生长至相对高的细胞密度。4.在用于生产生物制剂的t细胞、nk细胞或其它哺乳动物细胞的扩增期间，生物反应器的流体培养基中的关键代谢物的调节可以对所产生的产物的质量产生直接影响。例如，在细胞生长和活力期间，应当小心控制和监测营养素水平、乳酸盐浓度、溶解氧、ph等。5.除了将细胞维持在小心控制的环境中之外，培养供人使用的细胞还需要从接种到患者体内使用的稍微复杂的过程。例如，当产生car t细胞时，通常首先激活细胞并且然后经受基因编辑。一旦细胞被编辑，细胞被扩增以实现某一细胞密度。扩增例如可能需要多于15天，如多于20天。在扩增之后，通过去除不想要的生物副产物和不可用的细胞来对细胞进行纯化。在过程期间，还需要洗涤细胞，并且将细胞从生长培养基中取出。此过程也可能需要多个循环。最后，将细胞与缓冲液组合并施用于患者或置于容器中进行冷冻。6.在过程期间，浓缩治疗性细胞并且将治疗性细胞从一种溶液转移到另一种溶液中可以在多个阶段发生，并且还可能需要大量的时间和人力。然而，洗涤和分离治疗性细胞可能是细胞疗法的总体功效的重要部分，并且可以防止患者的不良副作用。7.应当理解，上述过程或方法不仅需要大量时间，而且还可能需要大量的人工处理。然而，当治疗癌症患者时，时间是至关重要的。因此，需要一种用于生产治疗性细胞和生物制剂的简化过程。8.另外，许多过去的方法无法扩展。因此，上述过程中的许多过程发生在小生物反应器中，如小于2升的体积。因此，还需要一种用于培养治疗性细胞和生物制剂的过程和方法，所述过程和方法是可扩展的以便在相同的时间内产生更大量的产物。9.还需要用于培养细胞和/或生产生物制剂的过程和方法，所述过程和方法也可以是自动化的以减少人力的使用。例如，需要一种用于培养和纯化细胞，如t细胞和nk细胞的封闭系统。技术实现要素：10.通常，本公开涉及一种过滤器设备，所述过滤器设备能够在不损害生物反应器或包含在反应器内的细胞的情况下从生物反应器中取出流体培养基。更具体地，本公开涉及一种过滤器设备，所述过滤器设备被特别地设计成用于以相对高的流速从生物反应器中取出流体培养基。如下面将更详细地描述的，所述过滤器设备特别好地适合于在不取出或伤害包含在生物反应器中的细胞的情况下取出流体。本公开还涉及一种用于促进生物反应器系统中的细胞生长的方法，在所述生物反应器系统中，所述过滤器设备用于取出流体培养基，用于细胞的补充和进一步生长和/或用于纯化。11.一方面，例如，本公开涉及一种用于纯化细胞群的方法。所述方法包含在流体培养基中扩增生物细胞群。所述生物细胞群包括处于非负载状态的生物细胞，这意味着所述细胞没有附着到任何邻近表面。包含在所述生物反应器中的所述生物细胞群的细胞密度为至少1×106个细胞/毫升。根据本公开，从所述生物反应器中取出并过滤所述流体培养基。更具体地，所述流体培养基通过包括过滤器构件的过滤器设备进行过滤。所述过滤器构件的孔径在所述流体培养基被抽出时抑制所述生物细胞从所述生物反应器中抽出。所述方法进一步包含向所述生物细胞群中添加缓冲介质，以替换抽出的流体培养基的步骤。通过这一过程，用所述缓冲介质洗涤所述生物细胞群，同时所述方法也非常适于去除可以与所述生物细胞群一起存在的生物副产物。所述过滤器构件的孔径例如可以允许被抽出的所述流体培养基内的所述生物副产物通过，而不取出或伤害所述生物细胞。所述生物副产物例如可以包括蛋白质、血清以及其混合物。例如，在从所述生物反应器中抽出所述流体培养基之后，所述生物细胞群含有的生物副产物(或任何上述单独的副产物)的量可以小于约0.1重量％。12.在上述方法中，大于约40％，如大于约50％，如大于约60％，如大于约70％，如大于约80％体积的流体培养基可以被抽出并且至少部分地被所述缓冲介质替换。例如，所述生物细胞群和所述流体培养基在所述生物反应器中的体积在一个实施例中可以为约1l到约10l或在另一个实施例中为约5l到约75l。可以以一定流速从所述生物反应器中抽出所述流体培养基，使得所述生物反应器中的至少50％体积的所述流体培养基在小于约1小时的时间段内被抽出。本公开的过滤器设备例如可以在相对高的流速下操作，而不会在所述过滤器设备的外表面上形成堵塞。13.如上文所述，上述方法可以洗涤所述生物细胞群并去除所述生物副产物。所述方法可以重复多次以便纯化细胞。例如，所述方法可以重复约2个循环到约5个循环。14.在已经如上所述纯化所述生物细胞之后，可以将所述生物细胞群和所述缓冲介质放入柔性袋容器中进行低温储存。一方面，低温缓冲介质也可以与所述生物细胞群组合。15.可以根据如上所述的方法纯化所有不同类型的生物细胞。例如，所述生物细胞可以包括任何合适的哺乳动物细胞。本公开的方法特别好地适于扩增和纯化t细胞和nk细胞。16.在一些应用中，所述生物细胞群可以含有不同的细胞类型，如第一细胞和第二细胞。细胞类型中的一种可以特别好地适于施用于患者，而另一种细胞类型可能具有其它用途或可能以被丢弃。本公开的方法提供了一种用于将第一细胞类型与第二细胞类型分离的有效方式，以便进一步纯化生物细胞群。17.例如，可以将含有至少两种不同细胞类型的生物细胞群置于生物反应器内与一个或多个微载体接触。可以将微载体添加到含有生物细胞群的流体培养基中。微载体可以被设计成使得第一细胞附着并结合到微载体的表面，而所述第二细胞不附着并结合到微载体的表面。根据本公开，所述生物反应器内的所述流体培养基可以被取出并且通过第二过滤器设备进行过滤。所述第二过滤器设备的孔径可以允许所述第二细胞通过，但抑制所述微载体通过以将所述第一细胞与所述第二细胞分离。18.一旦与所述第一细胞分离，然后就可以使所述第二细胞经受如上所述的进一步纯化和洗涤步骤，并且然后投入使用或储存起以供将来使用。19.所述第一细胞也可以根据需要隔离和使用。例如，在一个实施例中，添加到所述生物反应器中的所述微载体可以是可溶解的。所述微载体例如可以在所述流体培养基中是可溶解的，或当与添加到所述流体培养基中的溶解剂接触时可以溶解。一旦所述微载体已经溶解，所述第一细胞就以非负载状态保留在所述生物反应器中。然后可以根据上述方法纯化和洗涤所述第一细胞，并且根据需要使用。20.如上所述，本公开的方法使用过滤器设备来进行。在一个实施例中，所述过滤器设备可以包含用于过滤来自生物反应器的流体的中空管状构件。21.所述中空管状构件可以具有足以插入到生物反应器中的长度。例如，所述中空管状构件可以具有足以朝向生物反应器的底部延伸的长度。所述中空管状构件可以延伸穿过所述生物反应器的顶部或侧面中的端口。所述中空管状构件具有限定第一开口的第一端和限定第二开口的第二相对端。所述第二开口用于插入到生物反应器中的流体培养基中并且用于抽出所述流体培养基。所述中空管状构件的所述第二开口可以具有被设计成能够从所述生物反应器中抽出期望的体积流速的横截面面积。22.根据本公开，所述过滤器设备进一步包含过滤器构件，所述过滤器构件位于所述中空管状构件的所述第二端处。所述过滤器构件可以完全围绕并围封所述第二开口。所述过滤器构件限定内表面和外表面。所述过滤器构件包括多孔材料。根据本公开，所述多孔材料的绝对孔径为约1微米到约9微米，如约1微米到约6微米。已经发现上述孔径允许流体培养基从所述生物反应器中抽出而不取出所述生物细胞。一方面，所述过滤器构件包括多孔网。另一方面，所述过滤器构件包括由烧结金属纤维形成的非织造网。所述烧结金属纤维例如可以包括不锈钢。可替代地，所述过滤器构件(和中空管状构件)也可以由聚合物材料制成。例如，所述过滤器构件可以由聚合物网或非织造物制成。所述聚合物材料可以包括例如聚酰胺或聚烯烃。23.所述过滤器设备的所述过滤器构件可以具有足够的表面积以允许相对高的体积流体流速。例如，所述表面积可以大于约0.5in2。例如，所述外表面的所述表面积可以大于约3in2，如大于约4in2，如大于约6in2，并且通常小于约50in2。所述过滤器构件的长度可以取决于各种因素。一方面，所述过滤器构件沿着所述中空管状构件的轴向方向的长度可以为约2英寸到约8英寸。24.所述中空管状构件和所述第二开口的直径通常可以大于约2mm，如大于约4mm，如大于约8mm，如大于约10mm，如大于约12mm，如大于约14mm，如大于约16mm，如大于约18mm，如大于约20mm。所述中空管状构件的直径通常小于约50mm，如小于约30mm，如小于约20mm，如小于约14mm。25.所述第二开口的横截面面积与所述过滤器构件的所述表面积之间的比率通常可以为约1∶5到约1∶200，如约1∶15到约1∶100。26.一方面，所述过滤器构件的所述内表面的绝对孔径可以与所述过滤器构件的所述外表面的绝对孔径不同。例如，所述过滤器构件的所述内表面的孔径可以大于所述外表面的孔径。所述外表面的孔径例如可以为约1微米到约9微米，而所述过滤器构件的所述内表面的所述绝对孔径可以为约5微米到约20微米。27.如上所述，在一个实施例中，可以使用第二种类型的过滤器设备，所述过滤器设备允许第一类型细胞通过，同时防止可能与微载体结合的第二类型细胞通过。在此应用中，所述过滤器设备可以如上所述，但可以具有更大的孔径。例如，所述过滤器设备的所述过滤器构件的绝对孔径可以大于约60微米，如大于约70微米，如大于约80微米，如大于约90微米，并且通常小于约150微米，如小于约130微米，如小于约120微米，如小于约110微米。28.此外，一方面，本公开总体上涉及一种过滤器设备，所述过滤器设备包含用于过滤来自生物反应器的流体的中空管状构件。所述中空管状构件可以具有足以插入到生物反应器中的长度。例如，所述中空管状构件可以具有足以朝向生物反应器的底部延伸的长度。所述中空管状构件可以延伸穿过所述生物反应器的顶部或侧面中的端口。所述中空管状构件具有限定第一开口的第一端和限定第二开口的第二相对端。所述第二开口用于插入到生物反应器中的流体培养基中并且用于抽出所述流体培养基。所述中空管状构件的所述第二开口可以具有被设计成能够从所述生物反应器中抽出期望的体积流速的横截面面积。29.所述过滤器设备的所述过滤器构件可以具有足够的表面积以允许相对高的体积流体流速。例如，所述表面积可以大于约0.5in2。例如，所述外表面的所述表面积可以大于约3in2，如大于约4in2，如大于约6in2，并且通常小于约50in2。所述过滤器构件的长度可以取决于各种因素。一方面，所述过滤器构件沿着所述中空管状构件的轴向方向的长度可以为约2英寸到约8英寸。30.在一个实施例中，所述中空管状构件从所述第一端到所述第二端是直的。在替代性实施例中，所述中空管状结构可以具有这样的形状，使得所述第二端不干扰可以在所述生物反应器中旋转的叶轮。例如，在一个实施例中，所述中空管状构件可以包含第一笔直段、第二笔直段以及定位于所述第一笔直段与所述第二笔直段之间的角段。所述成角度段可以以约25°到约45°的角度从所述第一笔直段延伸。类似地，所述成角度段可以以约25°到约45°的角度从所述第二笔直段延伸。在一个实施例中，所述第一笔直段和所述第二笔直段平行于延伸穿过所述生物反应器的竖直轴线。31.在一个实施例中，所述中空管状构件还可以包含位于所述第二端处的角构件。所述中空管状构件可以包含过渡到所述角构件的笔直构件。所述角构件可以与所述笔直段成约50°到约90°的角度。例如，在一个实施例中，所述角构件在所述中空管状构件的端处形成直角。在这方面，当所述过滤器设备延伸到生物反应器中时，所述角构件可以朝向所述生物反应器的底部定位并且可以与所述生物反应器的底表面大致平行。例如，在一个实施例中，所述角构件可以被设计成将所述过滤器构件放置在包含在所述生物反应器内的叶轮下方。32.在一个实施例中，所述中空管状构件和所述过滤器构件可以完全围封，以便无菌封闭连接到所述生物反应器的端口。塑料的柔性波纹管可以围封所述中空管状构件和所述过滤器构件。无菌连接端口可以附接到所述波纹管的一端。所述生物反应器端口可以具有匹配的无菌连接器。当所述生物反应器的匹配的无菌连接器与所述波纹管连接时，所述波纹管可以被折叠，并且所述过滤器构件和所述中空管状构件可以插入到所述生物反应器端口中。33.在一个实施例中，所述过滤器设备可以包含在所述生物反应器的侧壁或底壁上的过滤器构件。所述过滤器构件可以是所述生物反应器的侧壁或底壁上的网片。柔性锥体可以将所述网片连接到中空管状构件，用于从所述生物反应器输出流体。34.本公开还涉及一种用于培养细胞生长的方法。所述方法包含将生物细胞，如t细胞或nk细胞接种到生物反应器中。所述生物反应器含有用于细胞生长的流体培养基。通过将如上所述的过滤器设备插入到所述生物反应器中来灌注所述流体培养基。所述过滤器设备的所述过滤器构件的孔径在所述流体培养基被抽出时抑制所述生物细胞从所述生物反应器中抽出。所述方法进一步包含补充所述生物反应器内的所述流体培养基以促进细胞活力的步骤。35.例如，在一个实施例中，所述过滤器设备可以被设计成以每天大于约0.5l的速率取出所述流体培养基，如每天大于约1l，如每天大于约2l，如每天大于约5l，如每天大于约10l，如每天大于约15l，如每天大于约25l。36.根据本公开，所述过滤器设备进一步包含过滤器构件，所述过滤器构件位于所述中空管状构件的所述第二端处。所述过滤器构件可以完全围绕并围封所述第二开口。所述过滤器构件限定内表面和外表面。所述过滤器构件包括多孔材料。根据本公开，所述多孔材料的绝对孔径为约1微米到约9微米，如约1微米到约6微米。一方面，所述过滤器构件包括多孔网。另一方面，所述过滤器构件包括由烧结金属纤维形成的非织造网。所述烧结金属纤维例如可以包括不锈钢。可替代地，所述过滤器构件(和中空管状构件)也可以由聚合物材料制成。例如，所述过滤器构件可以由聚合物网或非织造物制成。所述聚合物材料可以包括例如聚酰胺或聚烯烃。37.本公开还涉及一种用于培养细胞的方法。所述方法包含将生物细胞接种到生物反应器中。所述生物反应器包括搅拌釜生物反应器。所述生物反应器含有用于细胞生长的流体培养基，所述流体培养基在细胞生长期间被搅动。所述生物细胞以非负载状态存在于所述生物反应器中。根据本公开，所述流体培养基是通过与所述生物反应器内的所述流体培养基接触的所述过滤器设备从所述生物反应器灌注的。所述过滤器设备包括过滤器构件，所述过滤器构件的孔径在所述流体培养基被抽出时抑制所述生物细胞从所述生物反应器中抽出。在所述流体培养基从所述生物反应器中被抽出时，补充所述生物反应器内的流体培养基以促进细胞活力。38.包含在所述生物反应器内的所述生物细胞可以包括任何合适的细胞，如任何合适的哺乳动物细胞。在某些方面，所述生物细胞是t细胞或nk细胞。接种后的初始细胞密度通常小于约0.5×106个细胞/毫升，如小于约0.4×106个细胞/毫升，如小于约0.3×106个细胞/毫升。所述初始细胞密度通常大于约0.1×104个细胞/毫升。39.一方面，在所述生物反应器中的所述生物细胞已经达到期望的细胞密度之后，开始灌注。例如，可以在所述生物细胞达到大于约1×106个细胞/毫升，如大于约1.5×106个细胞/毫升，如大于约1.7×106个细胞/毫升的细胞密度之后开始灌注。例如，可以在用生物细胞接种生物反应器之后至少4天，如至少7天的时间段之后开始灌注。40.在过程期间，所述生物细胞可以快速且显著地扩增。例如，所述生物反应器内的所述生物细胞的细胞密度可以达到至少约1×107个细胞/毫升，如至少1.2×107个细胞/毫升。可以在约14天之后，如在约13天之后从所述生物反应器中收获所述细胞。41.在过程期间，由于所述生物反应器的操作的方式，可以控制各种参数水平。例如，所述流体培养基内的葡萄糖水平可以保持高于4g/l，如大于约5g/l。另一方面，在整个过程期间，乳酸盐水平可以保持低于约1.5g/l，如低于约1.3g/l。一方面，在过程期间，所述流体培养基内的溶解氧快速下降至0或几乎为0。据信，溶解氧的减少可以增加期望表型。例如，可以操作过程，使得表型成比例增加，这是特别期望的。表型例如可以包括tscm细胞。42.在灌注过程中，使用具有绝对孔径为约1微米到约9微米，如约1微米到约6微米的过滤器构件的过滤器设备，从所述生物反应器中抽出所述流体培养基。所述过滤器构件的表面积通常可以大于约0.5in2，如大于约2in2，并且通常小于约10in2。在灌注期间，每24小时灌注并替换所述生物反应器内的至少约30％，如至少约40％，如至少约50％，如至少约60％，如至少约70％体积的所述流体培养基。43.下面更详细地讨论本公开的其它特征和方面。附图说明44.在说明书的其余部分(包含参考附图)中更具体地阐述本公开的完整且能够实现的公开内容，在附图中：45.图1是根据本公开的生物反应器系统的一个实施例的横截面视图；46.图2是根据本公开制造的过滤器设备的一个实施例的侧视图；47.图3是根据本公开制造的过滤器设备的另一个实施例的侧视图；48.图4a是附接到根据本公开的过滤器设备的过滤器构件的一个实施例的透视图；49.图4b是图4a中所展示的过滤器构件的侧视图；50.图4c是图4a中所展示的过滤器构件的另一个侧视图；51.图5a是根据本公开制造的过滤器设备的另一个实施例的侧视图；52.图5b是图5a中所展示的过滤器设备的部分侧视图；53.图6是根据本公开的生物反应器系统的另一个实施例的透视图；54.图7a到7c是生物反应器系统的一个实施例的透视图，所述生物反应器系统在生物反应器与过滤器设备之间具有无菌封闭连接；55.图8a是根据本公开的生物反应器系统的另一个实施例的透视图；56.图8b是可以与图8a中所展示的生物反应器系统一起使用的过滤器设备的侧视图；57.图9是根据本公开的生物反应器系统的另一个实施例的侧视图；58.图10是根据本公开的可以使用的过滤器设备的另一个实施例的侧视图；59.图11-17是在下述实例中获得的结果的图形表示；60.图18是展示了用于分离不同类型的细胞的根据本公开的方法的生物反应器的横截面视图；61.图19a和19b是在使用磁珠作为微载体之前和之后根据本公开获得的结果的表示；62.图19c、19d和19e是在根据图19a和19b的使用磁珠作为微载体之前和之后根据本公开获得的结果的表示；63.图20a-20c是在存在磁体的情况下使用磁珠作为微载体根据本公开获得的结果的表示；64.图20d-20e是在去除图20a-20c的磁体之后24小时，使用磁珠作为微载体根据本公开获得的结果的表示；并且65.图21a-b展示了根据本公开的具有过滤撇渣器的生物反应器的横截面视图。66.在本说明书和附图中重复使用附图标记旨在表示本发明的相同或相似的特征或元件。具体实施方式67.本领域的普通技术人员应当理解，本讨论仅是对示例性实施例的描述，并且不旨在限制本公开的更广泛的方面。68.通常，本公开涉及用于在生物反应器中培养和繁殖细胞和/或细胞产物的方法和系统。生物反应器含有流体培养基，如流体生长培养基中的生物细胞群。在合适的条件下并且在合适的培养基中培养生物细胞，以促进细胞的繁殖和生长，直到可以从生物反应器中收获期望量的细胞。69.根据本公开，生物反应器被设计成在细胞培养期间以灌注模式运行。具体地，在选定时间，连续地或至少周期性地取出并补充包含在生物反应器内的流体培养基。在过去，在不显著伤害或损害包含在生物反应器中的细胞的情况下，在从生物反应器中取出流体培养基方面已经遇到了好多问题。因此，在过去，生物反应器通常在静态条件下或在摇摆型生物反应器中以分批模式操作。已经发现这些系统在扩增细胞群方面是极其低效的。现有系统也不是可扩展的，并且因此仅在小生物反应器体积中操作。70.本公开涉及一种改进的生物反应器系统，其包含搅拌釜生物反应器与过滤器设备的组合。根据本公开，过滤器设备能够快速从生物反应器中取出流体培养基，而不会同时取出生物细胞群、不损害细胞和/或不存在与结垢相关的问题。搅拌釜生物反应器与本公开的过滤器设备的组合可以提供许多益处和优点。例如，通过本公开的系统和过程，与过去的生物反应器系统相比，细胞培养物，特别是t细胞培养物和nk细胞培养物可以快速且有效地扩增。例如，本公开的过程可以达到使用过去的设备和方案不可能实现的细胞密度并且特别是活细胞密度。另外，本公开的过程和系统还允许小心控制生物反应器内的参数和代谢物，这进一步促进了细胞生长以及细胞的健康和活力。例如，在搅拌釜反应器中将细胞维持处于非负载状态(即，未负载在微载体上)的能力以及以灌注模式操作的能力允许除了控制ph、溶解氧和其它参数之外，小心控制乳酸盐水平、包含葡萄糖水平在内的营养素水平、氨水平的控制。特别有利的是，可以在封闭系统中小心控制和监测所有上述参数，所述封闭系统消除对细胞或维持细胞的流体培养基的手动操作。71.还发现与过去使用的系统相比，本公开的过程和系统提供了各种其它的优点和益处。例如，本公开的过程和系统是完全可扩展的，并且不仅可以在小生物反应器中而且可以在更大的生物反应器中实现类似的结果。例如，结合到过程中的生物反应器的体积可以大于1升，如大于3升，如大于5升，如大于10升，如大于15升，如大于20升，如大于30升，如大于40升，并且甚至大于50升。由于完全可扩展，可以进行同种异体细胞疗法过程以产生更大量的产物，从而用于施用于许多患者，只需要过去过程所需要的时间的一部分。72.关于本发明系统和过程的使用，细胞生长的启动也更加简单和自动化。例如，本发明系统和过程消除了在过去的生物反应器系统中，如在摇杆型生物反应器中所必需的2d激活/种子制备(seed train)。相反，可以直接激活/扩增本发明系统中培养的生物细胞群。73.然而，一方面，生物细胞可以在用于根据本公开的系统或过程之前仍经受2d种子制备激活和/或扩增。一方面，可以将生物细胞解冻到2d种子制备烧瓶中。生物细胞可以以约0.1×106个细胞/cm2到约1.5×106个细胞/cm2的种子密度接种，如约0.25×106个细胞/cm2到约1.25×106个细胞/cm2，如约0.5×106个细胞/cm2到约1×106个细胞/cm2或其之间的任何范围或值。74.如本文所使用的，营养素培养基或基质是指可以增加生物产品的质量的任何流体、化合物、分子或物质，如生物体可以用来生存、生长或以其它方式增加生物质的任何物质。例如，营养素补料可以包含用于呼吸或任何类型的新陈代谢的气体，如氧气或二氧化碳。其它营养素培养基可以包含碳水化合物源。碳水化合物源包含复合糖和单糖，如葡萄糖、麦芽糖、果糖、半乳糖以及其混合物。营养素培养基还可以包含氨基酸。氨基酸可以包括甘氨酸、丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、甲硫氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、丝氨酸、苏氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、酪氨酸、半胱氨酸、赖氨酸、精氨酸、组氨酸、天冬氨酸和谷氨酸、其单一立体异构体以及其外消旋混合物。术语“氨基酸”还可以指已知的非标准氨基酸，例如，4-羟基脯氨酸、ε-n，n，n-三甲基赖氨酸、3-甲基组氨酸、5-羟基赖氨酸、o-磷酸丝氨酸、γ-羧基谷氨酸、γ-n-乙酰基赖氨酸、ω-n-甲基精氨酸、n-乙酰基丝氨酸、n，n，n-三甲基丙氨酸、n-甲酰甲硫氨酸、γ-氨基丁酸、组胺、多巴胺、甲状腺素、瓜氨酸、鸟氨酸、β-氰基丙氨酸、高半胱氨酸、重氮丝氨酸和s-腺苷甲硫氨酸。在一些实施例中，氨基酸是谷氨酸、谷氨酰胺、赖氨酸、酪氨酸或缬氨酸。75.营养素培养基还可以含有一种或多种维生素。可以包含在营养素培养基中的维生素包含b族维生素，如b12。其它维生素包含维生素a、维生素e、核黄素、硫胺素、生物素以及其混合物。营养素培养基还可以含有一种或多种脂肪酸和一种或多种脂质。例如，营养素培养基补料可以包含胆固醇、类固醇以及其混合物。营养素培养基还可以向生物反应器供应蛋白质和肽。蛋白质和肽包含例如白蛋白、转铁蛋白、纤连蛋白、胎球蛋白以及其混合物。本公开内的生长培养基还可以包含生长因子和生长抑制剂、痕量元素、无机盐、水解产物以及其混合物。可以包含在生长培养基中的痕量元素包含痕量金属。痕量金属的实例包含钴、镍等。例如，并且仅举例来说，一方面，营养素培养基/基质可以是由龙沙公司(lonza)出售的x-vivotm基质培养基。76.尽管如此，将经解冻的生物细胞接种到具有营养素培养基的2d种子制备烧瓶中用于生长，并且维持在2d种子制备烧瓶中直到生物细胞达到约200万个细胞/毫升或更大的t细胞密度。例如，一方面，可以将生物细胞在2d种子制备烧瓶中维持约3天到约9天，如约4天到约8天，如约5天到约7天，以便实现期望的细胞密度。77.在获得期望的细胞密度之后，可以使用传代溶液收获包含在2d种子制备中的生物细胞。无论所选择的传代溶液如何，所收获的生物细胞可以用于接种本文所述的过程或系统。78.尽管如此，如所讨论的，一方面，不使用2d种子制备激活和/或扩增，并且替代地，使用本发明系统和/或过程激活和/或扩增细胞。79.当扩增t细胞或nk细胞群时，本公开的过程和系统还可以在达到期望的细胞密度之后促进许多下游过程。例如，本公开的过滤器设备可以极大地提高洗涤细胞、从细胞中分离副产物、纯化细胞和/或将细胞转移到低温储存容器中的效率。因此，本公开的系统和过程特别好地适于扩增细胞疗法群体，如t细胞群和nk细胞群。系统和过程不仅可以用于促进自体细胞疗法的生长，而且还可以用于促进同种异体细胞疗法的生长。关于自体细胞疗法，本公开的系统和过程可以显著地减少达到期望的活细胞密度所需要的时间量。80.当产生同种异体car t细胞或nk细胞时，本公开的过程和系统可以向许多患者提供立即现成的(immediate off the shelf)细胞疗法，同时显著降低成本。过程和系统也是特别有效的，并且非常适于从最终细胞培养物中去除不需要的生物副产物，如蛋白质、血清和t细胞受体，并且极大地提高了最终产物的纯度，这不仅立即转化为更好的患者护理，而且转化为以更大的细胞密度储存产物的能力。当产生病毒特异性t细胞和car nk细胞时，也实现了类似的益处和优点。81.参考图1，示出了根据本公开的生物反应器系统的一个实施例。生物反应器系统包含生物反应器10。生物反应器10包括中空器皿或容器，所述中空器皿或容器包含用于收纳悬浮在流体生长培养基中的细胞培养物的生物反应器体积12。根据本公开，包含在生物制品10中的生物细胞可以以非负载状态悬浮在流体生长培养基中，这意味着细胞不附着于任何邻近表面，如微载体。在非负载状态下加工细胞的能力被认为增加了细胞培养物的扩增速率并且允许系统是可扩展的。如图1所示，生物反应器系统可以进一步包含联接到搅动器，如叶轮16的可旋转轴14。82.生物反应器10可以由各种不同的材料制成。例如，在一个实施例中，生物反应器10可以由金属，如不锈钢制成。金属生物反应器通常被设计成待再使用。83.可替代地，生物反应器10可以包括由柔性聚合物膜制成的单次使用生物反应器。膜或适形材料可以是流体不可渗透的，并且可以具有内部亲水表面。在一个实施例中，生物反应器10可以由柔性聚合物膜制成，所述柔性聚合物膜被设计成插入到刚性结构中，如用于呈现期望形状的金属容器。可以用于制造柔性聚合物膜的聚合物包含聚烯烃聚合物，如聚丙烯和聚乙烯。可替代地，柔性聚合物膜可以由聚酰胺制成。在仍另一个实施例中，柔性聚合物膜可以由多层不同的聚合物材料形成。在一个实施例中，柔性聚合物膜可以是被γ辐射的。84.因为过程是可扩展的，所以生物反应器10可以具有任何合适的体积。例如，生物反应器10的体积可以为100ml到约10,000l或更大。例如，生物反应器10的体积12可以大于约0.5l，如大于约1l，如大于约2l，如大于约3l，如大于约4l，如大于约5l，如大于约6l，如大于约7l，如大于约8l，如大于约10l，如大于约12l，如大于约15l，如大于约20l，如大于约25l，如大于约30l，如大于约35l，如大于约40l，如大于约45l。生物反应器10的体积通常小于约20,000l，如小于约15,000l，如小于约10,000l，如小于约5,000l，如小于约1,000l，如小于约800l，如小于约600l，如小于约400l，如小于约200l，如小于约100l，如小于约50l，如小于约40l，如小于约30l，如小于约20l，如小于约10l。例如，在一个实施例中，生物反应器的体积可以为约1l到约5l。在替代性实施例中，生物反应器的体积可以为约25l到约75l。在仍另一个实施例中，生物反应器的体积可以为约1,000l到约5,000l。85.除了叶轮16之外，生物反应器10可以包含允许培养和繁殖生物细胞的各种另外的设备，如挡板、喷雾器、气体供应、端口等。另外，生物反应器系统可以包含用于测量和监测压力、泡沫、ph、溶解氧、溶解二氧化碳等的各种探针。86.在一个实施例中，生物反应器10包含限定多个端口的顶部。端口可以允许供应管线和进给管线进出生物反应器12，用于添加和取出流体和其它材料。另外，生物反应器系统可以与测压元件相关联地放置，用于测量生物反应器10内的培养物的质量。87.在替代性实施例中，所述多个端口可以位于生物反应器10上的不同位置处。例如，在一个实施例中，端口可以位于生物反应器的侧壁上，如图6-8所示。在另一个实施例中，端口可以位于生物反应器的底部处，如图9所示。例如，由柔性聚合物膜制成的生物反应器可以包含位于器皿的底部上的端口。88.如图1所示，生物反应器10可以包含附接到至少一个叶轮16的可旋转轴14。可旋转轴14可以联接到用于使轴14和叶轮16旋转的马达。叶轮16可以由任何合适的材料，如金属或生物相容性聚合物制成。适用于生物反应器系统的叶轮的实例包含水翼叶轮、高稠度斜叶叶轮(high-solidity pitch-blade impeller)、高稠度水翼叶轮、rushton叶轮、斜叶叶轮、柔和的船用叶片叶轮(gentle marine-blade impeller)等。另外，如图1所示，可旋转轴14可以联接到单个叶轮16或可以联接到两个或更多个叶轮。当含有两个或更多个叶轮时，叶轮可以沿着旋转轴14间隔开。在一个实施例中，叶轮16旋转的量足以维持包含在生物反应器10中的生物细胞悬浮在流体培养基中而不损害生物细胞。89.由所述一个或多个搅动器赋予流体培养基的能量的量可以对细胞活力和细胞生长产生影响。一方面，发现当推进器16以约35rpm或更大，如约40rpm或更大，如约50rpm或更大，如约60rpm或更大，如约70rpm或更大的速率并且通常以小于约200rpm的速率，如以小于约120的速率，如以小于约100rpm的速率旋转时，维持生物反应器内的最佳条件。叶轮的尖端速度例如可以大于约0.07米/秒，如大于约0.09米/秒，如大于约0.1米/秒，如大于约0.12米/秒，并且通常小于约0.4米/秒，如小于约0.3米/秒。就1l搅拌釜生物反应器的功率输入而言，这相当于功率输入大于0.0012瓦，并且通常小于0.0143瓦，如小于约0.006瓦。90.在一个实施例中，生物反应器系统还可以包含控制器，所述控制器可以包括一个或多个可编程装置或微处理器。控制器可以用于维持生物反应器10内的最佳条件以促进细胞生长。例如，控制器可以连通并控制热循环器、测压元件、控制泵，并且从各种传感器和探针接收信息。例如，控制器可以控制和/或监测ph、溶解氧张力、溶解二氧化碳、温度、搅动条件、碱性条件、流体生长培养基条件、压力、泡沫水平等。例如，基于ph读数，控制器可以被配置成通过添加必需量的酸或碱来调节ph水平。控制器还可以使用二氧化碳气体供应来降低ph。类似地，控制器可以接收温度信息并且控制进给到围绕生物反应器的水套的流体以增加或降低温度。91.一方面，可以使用拉曼光谱监测包含在生物反应器中的各种参数。拉曼光谱装置例如可以测量包含在生物反应器内的生物质浓度和/或各种其它参数。然后，可以将这些信息馈送到控制器，所述控制器可以对生物反应器的进给速率和抽出速率进行自动调整，以将各种参数维持在受控限制内。例如在美国专利公开第2019/0137338号中描述了拉曼光谱在监测细胞培养中的使用，所述美国专利通过引用并入本文。92.根据本公开，生物反应器10还可以与一个或多个过滤器设备20连通，如图1所示。过滤器设备20可以延伸穿过生物反应器10的顶部内的端口。如图所示，过滤器设备20可以延伸到生物反应器10中，并且邻近生物反应器的底部放置而不干扰叶轮16。过滤器设备20用于连续地或周期性地从生物反应器10中抽出流体培养基，而不抽出包含在生物反应器内的生物细胞。例如，本公开的过滤器设备20可以以相对高的流速抽出流体，而不同时取出或损害细胞。93.参考图2、4a、4b和4c，示出了根据本公开的可以使用的过滤器设备20的一个实施例。参考图2，过滤器设备20包含中空管状构件22。中空管状构件22可以包含限定第一开口的第一端24和限定第二开口的第二相对端26。中空管状构件22可以由与细胞培养物生物相容的任何合适的材料制成。例如，中空管状构件22可以由金属，如不锈钢制成。94.在替代性实施例中，中空管状构件可以由聚合物制成。例如，在一个实施例中，过滤器设备20可以被设计成在一次使用之后被丢弃。在此实施例中，中空管状构件22可以由聚合物材料制成。例如，中空管状构件可以由聚烯烃，如聚丙烯或聚乙烯制成。可替代地，中空管状构件22可以由聚酰胺制成。在其它方面，中空管状构件22可以由可以被γ辐射的塑料材料制成。95.中空管状构件22可以是柔性的或刚性的。中空管状构件22、第一开口和第二开口通常可以具有针对特定应用和需要从生物反应器10抽出的流体的量而确定大小的直径。例如，中空管状构件22的直径通常可以大于约2mm，如大于约4mm，如大于约6mm，如大于约8mm，如大于约10mm。中空管状构件22的直径通常小于约60mm，如小于约40mm，如小于约20mm，如小于约15mm，如小于约11mm，如小于约10mm，如小于约8mm。96.中空管状构件22的第一端24可以包含用于将中空管状构件22连接到塑料管的管连接件。管连接件可以是各种可焊接管类型中的任何一种。第一端24的管连接件的外径通常可以具有针对特定应用和需要从生物反应器抽出的流体的量而确定大小的外径。例如，管连接件的外径通常可以为约3mm或更大，如约6mm或更大，如约13mm或更大，如约19mm或更大，如为约26mm。管连接件的外径通常为约26mm或更小。97.中空管状构件22可以由单件材料制成或可以由连接在一起的多件制成。中空管状构件22从第一端24到第二端26可以是直的。可替代地，中空管状构件22可以包含角构件28，如图2所示。在图2中所展示的实施例中，角构件28从生物反应器10延伸，用于引导流体在期望的方向上流出生物反应器。如图所示的角构件28与中空管状构件22的笔直段30总体上成直角。然而，角构件28可以相对于中空管状构件22的笔直段或竖直段30成任何合适的角度。98.当用于从生物反应器10中取出流体时，过滤器设备应具有足够的长度，使得中空管状构件22的第二端26邻近生物反应器10的底表面。在这方面，过滤器设备20的笔直段30的长度通常大于生物反应器10的长度(或深度)。例如，笔直段30的长度可以大于生物反应器10的长度的约110％，如大于约120％，如大于约150％。通常，笔直段30小于生物反应器10的长度的约500％，如小于300％，如小于约200％。99.根据本公开，过滤器设备20进一步包含过滤器构件32，所述过滤器构件定位于中空管状构件22的第二端26处。图4a、4b和4c中更详细地示出了过滤器构件32。根据本公开，过滤器构件32的孔径和表面积允许流体培养基以相对高的流速通过过滤器设备20同时抑制生物细胞流过过滤器构件32。例如，在一个实施例中，过滤器构件32可以由多孔网，如不锈钢非织造材料、针织材料或织造材料制成。一方面，过滤器构件32可以由烧结金属纤维，如不锈钢纤维形成的非织造网制成。可替代地，过滤器构件32可以由聚合物材料制成。例如，在一个实施例中，过滤器构件32可以由聚酰胺筛网，如非织造材料制成。例如，与由金属制成的过滤器构件相比，聚合物网可以是更柔性的且更不易于损坏。具有聚合物中空管状构件22和过滤器构件32的过滤器设备20可以进一步包含围绕过滤器构件32的聚合物外壳(未示出)。100.过滤器构件32的孔径通常取决于包含在生物反应器内的细胞的大小。例如，过滤器构件32的孔径足以允许流体培养基流动，而不允许生物细胞与流体培养基一起被抽出。过滤器构件32上方的孔径可以是均匀的或不均匀的。一方面，过滤器构件32的平均孔径小于约12微米，如小于约10微米，如小于约9微米，如小于约8微米，如小于约7微米，如小于约6微米，如小于约5微米，如小于约4微米。过滤器构件32的平均孔径通常大于约1微米，如大于约2微米，如大于约3微米，如大于约4微米。当然，虽然到目前为止已经将孔径描述为平均孔径，但应该理解，上述孔径的范围还可以参考标称孔径或绝对孔径。例如，举例来说并且如本领域已知的，5微米的标称孔径将捕集约99％的孔径大于5微米的颗粒。相反，5微米的绝对孔径将指示所有孔的大小不大于5微米，使得所有或基本上所有大小大于5微米的颗粒将被过滤器捕集。因此，一方面，根据本公开的过滤器构件32的孔径具有根据上述范围的绝对孔径。101.过滤器构件32包含与包含在生物反应器内的流体培养基直接接触的外表面和相对的内表面。过滤器构件32在外表面上的孔径可以与过滤器构件32在内表面上的孔径不同。例如，一方面，内表面上的孔径可以大于外表面上的孔径。例如，外表面上的绝对孔径可以为约1微米到约9微米，而过滤器构件32的内表面上的绝对孔径可以为约4微米到约20微米，如约6微米到约15微米。例如，内表面上的绝对孔径可以比外表面上的绝对孔径大约至少20％，如大至少约40％，如大至少约60％，如大至少约80％。以此方式，穿过过滤器构件32的孔可以具有漏斗状形状，所述漏斗状形状可以允许通过过滤器构件的更大流速并且可以防止结垢和堵塞。102.如图所示，在图4a、4b和4c中，过滤器构件32附接到中空管状构件22的第二端26。例如，在所展示的实施例中，过滤器构件32完全围绕并围封位于中空管状构件22的第二端26处的开口。过滤器构件32可以使用任何合适的方法或技术附接到中空管状构件22。例如，过滤器构件32可以焊接到中空管状构件22，可以粘附到中空管状构件22或可以机械地附接到中空管状构件。例如，在一个特定实施例中，过滤器构件32可以树脂焊接到中空管状构件22。103.如图4a、4b和4c所示，过滤器构件32的长度被设计成优化表面积和围封体积，以确保过滤器构件32可以维持期望的流速。围封体积34的大小可以取决于系统的流量要求，并且可以与第二端26的开口的横截面面积成比例。例如，围封体积34的大小可以足以允许足够的流体流过过滤器构件并且进入中空管状构件22中，这对于特定应用可能是期望的。围封体积34例如增加了过滤器构件32的表面积并且因此为流体进入过滤器构件提供了更大的面积，并且允许更大流速通过中空管状构件22。104.例如，在一个实施例中，第二端26处的开口的横截面面积与过滤器构件32的表面积之间的比率可以大于约1∶5，如大于约1∶10，如大于约1∶15，如大于约1∶20，如大于约1∶25，如大于约1∶30，如大于约1∶35，如大于约1∶40。第二端26的开口的横截面面积与过滤器构件32的表面积34之间的比率通常可以小于约1∶1000，如小于约1∶500，如小于约1∶200，如小于约1∶150，如小于约1∶100，如小于约1∶80。例如，当第二端26的第二开口的直径为约2mm到约20mm时，过滤器构件32的长度l通常可以大于约20mm，如大于约50mm，如大于约100mm，如大于约500mm，并且通常小于约1000mm，如小于约500mm，如小于约200mm。105.过滤器构件32的外表面的表面积通常大于约0.5in2。例如，过滤器构件32的表面积可以大于约1in2，如大于约1.5in2，如大于约2in2，如大于约2.5in2，如大于约3in2，如大于约3.5in2，如大于约4in2，如大于约5in2。表面积通常小于约100in2，如小于10in2。106.在图4a所展示的实施例中，过滤器构件32具有终止于倾斜端38的细长形状。然而，应当理解，过滤器构件32可以具有任何合适的形状。过滤器构件32的形状例如可以取决于使表面积最大化同时能够方便地放置在生物反应器10中的形状。然而，应该理解，过滤器构件32的长度可以远大于上述期望的长度。例如，几乎整个管状构件都可以由过滤器构件32制成。107.例如，图5a和5b中展示了过滤器构件的替代性形状。参考图5a和5b，展示了包含连接到过滤器构件232的中空管状构件222的过滤器设备220。在此实施例中，过滤器构件232具有无孔端233。当插入生物反应器或从生物反应器取出时，封闭端233可以保护过滤器构件232免受损坏。108.根据本公开，中空管状构件22的横截面面积、过滤器构件32的围封体积34和过滤器构件32的孔径全部被选择以优化流速。具体地，本公开的过滤器设备20被设计成允许相对高流速地流出生物反应器10。例如，在一个实施例中，通过过滤器设备20的流速可以取决于生物反应器10的体积。例如，过滤器设备20可以被设计成抽出每天(24小时)大于约40％的生物反应器体积，如大于约50％的生物反应器体积，如大于约60％的生物反应器体积，如大于约70％的生物反应器体积，如大于约80％的生物反应器体积，如大于约100％的生物反应器体积，如大于约110％的生物反应器体积，如大于约120％的生物反应器体积，如大于约130％的生物反应器体积，如大于约140％的生物反应器体积，如大于约150％的生物反应器体积。通常，通过过滤器设备20的流速通常每天小于约500％的生物反应器体积，如每天小于约200％的生物反应器体积。109.在一个特定实例中，过滤器设备20被设计成从生物反应器10中抽出每天大于约0.5l的流体，如每天大于约1l的流体，如每天大于约2l的流体，如每天大于约5l的流体，如每天大于约10l流体，如每天大于约20l流体，如每天大于约30l流体，如每天大于约40l流体，并且通常每天小于约100l每流体。通过过滤器设备20的流速例如可以大于约10毫升/分钟，如大于约15毫升/分钟，如大于约20毫升/分钟，如大于约30毫升/分钟，如大于约40毫升/分钟，如大于约50毫升/分钟，如大于约100毫升/分钟，如大于约200毫升/分钟，并且通常小于约每分钟2升，如小于约每分钟1升。110.如图2所示的过滤器设备20的实施例包含旨在插入到生物反应器10中的笔直段或竖直段30。一旦插入到生物反应器10中，笔直段或竖直段30保持与生物反应器的竖直轴线和/或与可旋转轴14基本上平行。因此，笔直段或竖直段30的长度至少与生物反应器10的长度或深度一样长。然而，在一个实施例中，笔直段或竖直段30可以干扰包含在生物反应器10内的叶轮16。因此，在其它实施例中，过滤器设备20的形状可以被改变以在生物反应器内提供更好的配合。111.例如，参考图3，示出了过滤器设备120的另一个实施例。过滤器设备120包含中空管状构件122，所述中空管状构件包含第一端124以及第二相对端126。根据本公开制造的过滤器构件132附接到第二端126。中空管状构件122进一步包含定位于第一端124处的角构件128。112.在图3中所展示的实施例中，过滤器设备120包含第一笔直段140、第二笔直段142和角段144。角段144定位于第一笔直段140与第二笔直段142之间。如图1所示，角段144可以包含在中空管状构件22中，以防止过滤器设备120干扰包含在生物反应器10内的叶轮16。具体地，角段144将中空管状构件122的第二端126定位成邻近生物反应器10的壁。在一个实施例中，角段144可以与第一笔直段140形成约10°到约80°，如约25°到约45°的角度。例如，角段144与第一笔直段140之间的角度通常可以大于约20°，如大于约30°，如大于约40°，并且通常小于约60°，如小于约50°。类似地，角段144与第二笔直段142之间的角度可以为约10°到约80°，如约25°到约45°。113.笔直段140和142的长度以及角段144的长度也可以根据生物反应器10的几何形状和各种其它因素而变化。例如，在一个实施例中，角段144可以大于第一笔直段140、第二笔直段142和角段144加起来的总长度的约5％，如大于约10％，如大于约15％，如大于约20％，并且通常小于约50％，如小于约40％，如小于约30％，如小于约20％。114.参考图5a，示出了根据本公开制造的过滤器设备220的仍另一个实施例。过滤器设备220包含中空管状构件222，所述中空管状构件包含第一端224以及第二相对端226。过滤器构件232附接到中空管状构件222的第二端226。中空管状构件222包含第一笔直段250、第二笔直段242以及定位于第一笔直段240与第二笔直段242之间的角段244。过滤器设备220进一步包含第一角构件228，所述第一角构件定位于中空管状构件222的第一端224处。115.在图5a中所展示的实施例中，过滤器设备220进一步包含第二角构件250，所述第二角构件定位于中空管状构件222的第二端226处。第二角构件250用于将过滤器构件232定位成邻近生物反应器10的底部。例如，第二角构件250可以与第一笔直段240形成通常大于约40°，如大于约50°，如大于约60°，如大于约70°，如大于约80°并且通常小于约120°，如小于约100°的角度。例如，如图5a所示，在一个实施例中，第二角构件250与中空管状构件222的第一笔直段240形成直角。以此方式，过滤器设备220可以放置在生物反应器中以避免干扰叶轮。另一方面，第二角构件250允许过滤器构件232根据特定应用沿着生物反应器的底部朝向生物反应器的中心或朝向生物反应器的壁延伸。因此，第二角构件250可以具有适合于将过滤器构件232放置在期望位置处的长度。例如，在一个实施例中，第二角构件250的长度通常可以大于约20mm，如大于约30mm，如大于约40mm，如大于约50mm，如大于约60mm，如大于约70mm，如大于约80mm，如大于约90mm，如大于约100mm，并且通常小于约500mm，如小于约300mm，如小于约200mm，如小于约180mm，如小于约160mm，如小于约140mm。然而，第二角构件250的长度可以取决于生物反应器10的大小和体积。因此，长度可以大于或小于上面提供的尺寸。116.参考图6，示出了根据本公开制造的生物反应器系统的又另一个实施例。生物反应器系统包含生物反应器310，所述生物反应器具有位于生物反应器的侧壁上的端口318。生物反应器系统进一步包含过滤器设备320，所述过滤器设备具有中空管状构件322和过滤器构件332。过滤器设备320可以插入到端口318中。过滤器构件332类似于图4a、4b和4c中更详细地示出的过滤器构件。过滤器设备320可以使生物反应器中占据的空间量最小化，这在一些实施例中可以允许过滤器构件332包含具有更大表面积的更长网。如图6所示，与通过例如如图1所示的生物反应器的顶部的端口插入的过滤器设备的实施例相比，允许过滤器设备320在底部侧壁处进入生物反应器310减少了渗透到生物反应器310中的材料的总量。117.现在参考图7a到7c，示出了根据本公开制造的生物反应器系统的另一个实施例。生物反应器系统包含生物反应器410，所述生物反应器具有位于生物反应器的下侧壁上的端口418。图7a到7c的实施例进一步包含过滤器设备420，所述过滤器设备具有中空管状构件422和过滤器构件432。118.在图7a到7c中所示的实施例中，过滤器设备420进一步包含用于完全封闭、无菌进入的可折叠波纹管结构440。波纹管420可以是塑料的。中空管状结构422和过滤器构件432完全封装在波纹管440中。波纹管440形成围封环境，所述围封环境可以被灭菌以容纳中空管状结构422和过滤器构件432。过滤器设备420进一步包含在波纹管440内的通向无菌连接端口442的刚性通道446。无菌连接端口442可以是与生物反应器410相容的任何可商购获得的无菌连接端口。例如，无菌连接端口可以是由颇尔生物科技公司(pall biotech)制造的kleenpaktm无菌连接器、由赛多利斯公司(sartorius)制造的无菌连接器、由ge医疗生命科学部(ge healthcare life sciences)制造的readymate单次使用连接器或其它可商购获得的无菌连接器。生物反应器410包含在生物反应器壁上的端口418中的匹配的无菌连接器444。119.如图7b所示，过滤器设备420和生物反应器410的无菌连接件442和444首先相互连接。在无菌连接件442与444之间形成密封。然后，如图7c所示，在无菌连接件442与444之间形成开口。波纹管440然后可以被折叠，并且中空管状构件422可以被推入到生物反应器410中，从而将过滤器构件432延伸到生物反应器410中。当中空管状构件422和过滤器构件432被推入到生物反应器中时，波纹管440是折叠的。120.参考图8a和8b，示出了根据本公开制造的生物反应器系统的仍另一个实施例。生物反应器系统包含具有锥形过滤器设备520的生物反应器510。过滤器设备520的过滤器构件532在生物反应器510的壁511上形成网片。如图8b所示，网片可以位于生物反应器510的侧壁511上。过滤器设备520具有由锥体536形成的围封体积534，所述锥体从过滤器构件532通向出口中空管状构件522。在一些实施例中，锥体536可以是柔性的。121.参考图9，示出了根据本公开制造的生物反应器系统的另一实施例。生物反应器系统包含具有锥形过滤器设备620的生物反应器610，所述锥形过滤器设备可以用作生物反应器610的过滤排放管。过滤器设备620的过滤器构件632在生物反应器610的底壁上形成网片。过滤器设备620具有由锥体636形成的围封体积634，所述锥体从过滤器构件632通向出口中空管状构件622。在一些实施例中，锥体636可以是柔性的。图9中所示的实施例的设计允许最大量的液体从生物反应器中排出。122.参考图10，示出了根据本公开制造的过滤器设备720的另一个实施例。在此实施例中，过滤器设备720包含中空管状构件722，所述中空管状构件附接到根据本公开并且如上所述制造的过滤器构件732。然而，在此实施例中，过滤器设备720包含内部中空管740，所述内部中空管包含流动允许段742。在操作期间，如箭头所示，外部管状构件722附接到马达并旋转。因此，外部管状构件722和过滤器构件732旋转，而内部管状构件740保持静止。旋转外部管状构件722可以防止结垢和堵塞。123.尽管本公开的过滤器设备通常抗结垢和其它堵塞，但也可以使用各种方法和技术来防止或破坏流动堵塞。例如，一方面，过滤器设备可以以反冲洗模式周期性地操作。例如，当从生物反应器中抽出流体培养基时，流体培养基的流动可以以周期性间隔逆转。例如，一方面，通过过滤器设备的流动可以以约30分钟到约4小时的周期性时间间隔，如以约45分钟到约90分钟的周期性时间间隔逆转。在预定的时间间隔下，通过过滤器设备的流动可以被逆转持续短时间量，如小于约10分钟，如小于8分钟，如小于5分钟的时间量并且通常持续大于约2秒的时间。以此方式，正向流动可以在大于过滤器设备处于操作期间的约80％的时间内发生，如大于约85％的时间，如大于约90％的时间，如大于约95％的时间，而反向流动在小于15％的时间内发生，如小于约10％的时间，如小于约5％的时间。周期性地保留通过设备的流动流体可以去除已经积聚在过滤器构件的外表面上的任何物质或碎屑。124.本公开的过滤器设备并且特别是与搅拌釜生物反应器的组合可以用于许多不同的过程中，以提高生物细胞群的活力和/或纯化或以其它方式收获生物细胞。例如，在一种应用中，生物反应器可以首先填充有流体培养基，如含有生物细胞的食物源的生长培养基。在将生物细胞添加到生物反应器中之前，可以校准与生物反应器相关的各种参数监测装置。例如，生物反应器可以与用于测量溶解氧、ph、温度、二氧化碳和/或氧气的探针相关联地放置。另外，生物反应器可以被放置成与空气源、氮气源、氧气源和/或二氧化碳气体源流体连通。生物反应器可以包含可以用于搅动或混合流体培养基的叶轮。例如，叶轮可以以约40rpm到约100rpm，如约85rpm到约93rpm的速度旋转。125.一旦ph/溶解氧和/或温度探针已经校准并且生物反应器内的ph、溶解氧和温度已经稳定，就可以用生物细胞接种生物反应器。根据本公开，可以将任何合适的生物细胞，如哺乳动物细胞添加到生物反应器中。例如，本公开的过程和系统特别好地适于接受包含t细胞和nk细胞在内的治疗性细胞。126.用于接种生物反应器的生物细胞的源可以有所不同。一方面，生物细胞可以从需要在接种之前解冻并稀释的低温袋获得。当用t细胞接种时，可以凭经验确定作为t细胞的pbmc的比例，这可以用于估计之后的产量。127.在接种期间，生物细胞的细胞密度可以根据细胞类型、生物反应器类型和各种其它因素而变化。通常，当扩增细胞群时，生物反应器内的初始细胞密度小于约4×106个细胞/毫升，如小于约2×106个细胞/毫升，如小于约1.5×106个细胞/毫升，如小于约1×106个细胞/毫升，如小于约0.7×106个细胞/毫升，如小于约0.5×106个细胞/毫升，如小于约0.3×106个细胞/毫升，并且通常大于约1×103个细胞/毫升，如大于1×104个细胞/m/l，如大于1×105个细胞/毫升。128.在接种期间，生物反应器内的搅动速率可以降低。例如，叶轮可以以小于约79rpm，如小于约65rpm，并且通常大于约40rpm的速率旋转。129.经接种的细胞以非负载状态包含在生物反应器中，悬浮在流体培养基，如含有如葡萄糖等食物源的生长培养基中。在某些实施例中，需要激活经接种的细胞以便进行细胞扩增。例如，t细胞激活发生在tcr复合物激活和cd80或cd86共刺激cd28之后。可以发生抗原依赖性或抗原非依赖性的刺激。例如，抗原依赖性激活仅扩增抗原特异性t细胞，而抗原非依赖性激活扩增生物细胞群中的所有t细胞。130.一方面，对于非负载的t细胞，通过向生物反应器中添加结合cd3和cd28细胞表面配体的可溶性四聚体抗体复合物来启动激活。抗体的添加导致cd3和cd28细胞表面配体的交联，由此为t细胞激活提供所需的初级信号和共信号。例如，一种可商购获得的激活剂是以名称immunocult人cd3/cd28 t细胞激活剂出售的。可以使用任何合适的方法，如通过使用无菌注射器将激活剂添加到生物反应器中。131.在细胞已经被接种并激活之后，生物反应器内的细胞生长得到促进。一方面，生物反应器以分批模式操作持续预定时间段，如持续大于约1天，如大于约2天，如大于约3天，如大于约4天，如大于约5天，并且通常小于约9天。例如，在特定时间段之后，使用本公开的过滤器设备激活灌注模式。可以例如在第5天、第6天、第7天或第8天启动灌注模式。一方面，当达到某一细胞密度时，激活灌注模式。例如，可以在细胞密度已经超过1×106个细胞/毫升，如大于约1.5×106个细胞/毫升，如大于约1.8×106个细胞/毫升，如大于约2×106个细胞/毫升，并且通常小于约5×106个细胞/毫升之后启动灌注模式。132.在分批模式期间，可以增加搅动速度以解决生物反应器内的较高培养基体积。例如，叶轮可以以大于约80rpm，如大于约85rpm，如大于约95rpm，并且通常小于约105rpm的速度旋转。133.在灌注模式期间，在将新培养基添加到生物反应器中以补充被抽出的培养基时，生物反应器内的流体培养基被取出。在灌注模式期间，每24小时取出并替换大于生物反应器中的约30％的流体体积，如大于生物反应器中的约40％的流体体积，如大于生物反应器中的约45％流体体积。通常，灌注速率小于每天生物反应器中的总培养基体积的100％，如小于约75％，如小于约60％。134.一方面，可以周期性地或连续地监测生物反应器的质量或重量，以确保包含在生物反应器中的流体培养基体积在细胞扩增过程期间变化不超过约10％，如不超过约5％。135.已经发现根据上述过程的生物细胞的扩增不仅显著提高了产物质量，而且还允许以完全可扩展的自动化方式控制流体培养基中的各种参数和代谢物。例如，根据本公开的过程可以在短时间段内，如在少于约15天，如少于约14天，如少于约13天，如少于约12天的时间段内实现显著高的细胞密度。可以实现大于约1×107个细胞/毫升，如大于约1.2×107个细胞/毫升，如大于约1.5×107个细胞/毫升，如大于约2×107个细胞/毫升的细胞密度。另外，细胞的活力可以大于约90％，如大于约92％，如大于约95％，如大于约96％。136.在过程期间，可以将生物反应器中的流体培养基内的葡萄糖水平控制到期望水平。例如，葡萄糖水平可以保持高于4g/l，如大于约4.5g/l，如大于约5g/l，并且通常小于约8g/l。另一方面，乳酸盐水平可以维持在相对低的水平。在过程期间的乳酸盐水平可以低于约1.5g/l，如小于约1.3g/l，如小于约1g/l。在过程期间，氨水平也可以保持相对低。氨水平可以低于约3mmol/l。137.在限定的时间段之后或在达到细胞密度之后，可以收获、洗涤、纯化生物反应器内的生物细胞群或使其经受各种其它过程。一方面，可以将生物细胞群分解成更小的量，任选地进行浓缩，并且进给到低温袋进行低温储存。例如，低温袋可以首先被冷冻并且然后移动到液氮气氛中进行长期储存。138.除了洗涤生物细胞群之外，在一些应用中，生物细胞群可以包含多种细胞类型。例如，生物细胞群可以包含可能期望的第一类型细胞和可能不期望的第二类型细胞。根据本公开，不同的细胞类型可以容易地且有效地彼此分离。139.例如，当产生car t细胞，如同种异体car t细胞时，所得生物细胞群可以含有tcr+细胞。在一种应用中，tcr+细胞应与car t细胞分离。例如，tcr+细胞可能对患者产生负面影响，并且导致移植物抗宿主病。类似地，当产生nk细胞时，所得生物细胞群可以含有也应从nk细胞中分离并取出的cd3+t细胞。cd3+t细胞还可能在患者体内产生不期望的副反应，如移植物抗宿主病。另外，在一些应用中，所得的经扩增生物细胞群还可以含有各种细胞亚群。例如，t细胞群可以含有cd4+细胞和cd8+细胞。另一方面，nk细胞群可以含有cd16+细胞。在一些应用中，还可能令人期望的是在将期望的细胞类型施用于患者之前分离上述鉴定不同的细胞亚群。140.因此，根据本公开，在如上所述将生物细胞群扩增到期望的细胞密度之后，在一些实施例中，可能令人期望的是分离出可以包含在细胞群内的不同细胞类型。图18中展示了根据本公开的用于分离生物细胞群的不同细胞类型的一种方法。如图18所示，生物反应器10含有期望细胞密度的生物细胞群。生物细胞群包含不同类型的细胞。在图18中，例如，生物细胞群包含第一细胞类型70和第二细胞类型72。细胞群包含在生物反应器10的流体培养基内。141.为了将第一细胞70与第二细胞72分离，将微载体74添加到生物反应器10中。微载体74由使第一细胞70附着并结合到微载体表面的材料制成。然而，第二细胞72未附着和结合到微载体74。例如，在一些方面，如图19所示，微载体可以是磁珠，如顺磁珠，所述磁珠可以包含一个或多个表面涂层或功能化。此外，应当理解，将第一细胞与第二细胞分离可以包含本领域所理解的阳性选择或阴性选择。142.包含磁珠微载体在内的微载体74例如可以包括抗体偶联珠。存在于珠上的抗体与细胞类型中的一种类型结合，而不与其它细胞类型结合。微载体74可以具有任何合适的粒度，如通常大于约0.5微米，如大于约1微米，如大于约，如大于约2微米，如大于约3微米，如大于约4微米，如大于约5微米，如大于约6微米，如大于约7微米，如大于约8微米，如大于约15微米，如大于约50微米，如大于约60微米，如大于约70微米，如大于约100微米，并且通常小于约500微米，如小于约200微米，如小于约175微米，如小于约150微米，如小于约125微米，如小于约100微米，如小于约75微米，如小于约50微米，如小于约25微米，如小于约15微米，或其之间的任何范围或值。143.如图18所示，为了在已经添加微载体74之后将第一细胞70与第二细胞72分离，可以将过滤器设备820插入到生物反应器10中。过滤器设备820类似于上面关于图2-10描述的过滤器设备。例如，如图所示，过滤器设备820包含与过滤器构件832流体连通的中空管状构件822。然而，在此实施例中，过滤器构件832的较大孔径允许第二细胞72通过，同时防止微载体74流过过滤器构件832。144.例如，过滤器设备820可以类似于美国专利第2019/0136173号中描述和公开的过滤器设备，所述美国专利通过引用并入本文。过滤器构件832的绝对孔径通常例如可以大于约5微米，如大于约10微米，如大于约20微米，如大于约60微米，如大于约70微米，如大于约80微米，如大于约90微米。过滤器构件832的绝对孔径通常小于约150微米，如小于约130微米，如小于约120微米，如小于约110微米。过滤器设备820可以快速地且有效地将第一细胞70与第二细胞72分离。145.另外地或可替代地，在微载体是磁珠的一方面中，包含但不限于钕磁体的磁体可以用于进一步分离生物反应器内的细胞。例如，一方面，磁体可以用于通过将磁体引入到生物反应器室中来分离细胞，如通过中空管状构件822，或者另外或可替代地，以磁体834的贴片836(例如，由图18中的836中的一个或多个示出)的形式安装到由不干扰磁体(例如，在本文中称为非反应性)的磁场的材料形成的生物反应器的外壁。146.在一个此类方面中，生物反应器可以由刚性或柔性非反应性塑料形成，其中磁体834安装在生物反应器10的侧壁838的一个或多个部分的外部部分上。具体地，本公开已经发现，当磁体以贴片836的形式施加到侧壁838的一个或多个部分时，可以产生沿着磁体的长度延伸的更均匀的磁场，而不是聚焦在尖端/远端附近。因此，可以使用同一大小的磁体获得更大的分离。此外，虽然以矩形的形式示出，但应当理解，贴片可以具有任何形状或横截面，如圆形、圆柱形、十字形(或x形)、正方形、三角形等。147.虽然应该理解，可以使用磁体834在生物反应器的外壁上形成任何图案，但是一方面，每个贴片836可以具有足以分离期望样品大小的大小。例如，一方面，具有相对小的表面积(例如，与生物反应器的外表面接触的面积)，如约0.4in2到约1.5in2，如约0.5in2到约1.4in2，如约0.6in2到约1.25in2，如约0.7in2到约1.2in2，如约0.8in2到约1.1in2，如在一方面约1in2的磁体或磁性贴片可以用于分离约5×109个或更多个磁珠，如约5.5×109个或更多个磁珠，如约6×109个或更多个磁珠，如约7×109个或更多个磁珠，如约8×109个或更多个磁珠，如约9×109个或更多个磁珠，如约10×109个或更多个磁珠，如约12×109个或更多个磁珠。因此，磁性贴片的大小可以基于待分离的微载体的数量而增加或减小。虽然上述大小可以参考贴片形式的磁体836使用或放置在管状构件822中，但是在一方面，上述磁体大小可以参考外部安装的贴片836。148.尽管如此，如图19和20所示，本公开已经发现，通过使用贴片836或将磁体834以根据上述大小的方式放置到管状构件822中，可以从接种物中分离较大比例的第一细胞，如约80％或更多个靶向第一细胞，如约85％或更多个，如约87.5％或更多个，如约90％或更多个，如约92.5％或更多个，如约95％或更多个，如约97.5％或更多个，如约99％或更多个，或其之间的任何范围或值。例如，参考图19a-c，在使用磁珠纯化之后，小于0.1％的cd4+细胞保留在从生物反应器取出的经纯化的第二细胞群中(例如，cd4+细胞保持与通过一个或多个磁体834保持在适当位置的微载体结合)。149.此外，如图19c-e所示，在磁性分离之后保留非常小比例的珠，如约10％或更少，如约5％或更少，如约2.5％或更少，如约2％或更少，如约1.5％或更少，如约1％或更少，或其之间的任何范围或值。这在图20a-e中进一步示出。例如，图20a-c示出了在存在磁体的情况下包含磁珠微载体的样品，其中较大的暗圈示出了磁珠，并且小的亮圈示出了t细胞。如图20a-c所示，非常少的磁珠保留在样品中，因为磁珠大部分被磁体捕获，从而允许未结合的细胞从生物反应器中去除。另外，图20d-e示出了在去除磁体之后24小时的相同样品，其中磁珠重新分散在样品中。因此，清楚的是，安置在生物反应器的侧面的一个或多个部分上的磁体可以有效地将微载体与接种物分离，并且在分离和过滤第二细胞之后，磁珠可以被重新释放以进行清洁或去除。150.在另外一方面，可以允许微载体74利用根据图21a和b的另外的过滤器或替代性过滤器进行再循环。例如，如图21a所示，微载体74和与其结合的任何细胞可以通过位于外部过滤器900的底表面906上的出口910再循环，所述外部过滤器可以与适当的生物反应器和本文讨论的任何其它组件共线，所述出口将微载体74和任何悬浮细胞再循环回适当的生物反应器中。在此方面，可以通过撇渣过滤器914过滤条件培养基912，从而减少撇渣过滤器914上发生的结垢量，因为由于微载体74的密度促使再循环的材料从撇渣过滤器914掉落，从而允许条件培养基912继续通过撇渣过滤器914，而不受微载体74或任何悬浮细胞的损害。这种撇渣过滤器914可以进一步防止在其它过滤方法期间有时经历的对微载体的损害。151.另外，参考图21b，一方面，撇渣过滤器914还可以包含挡板916。一方面，挡板916定位于入口918附近，所述入口可以从适当的生物反应器引入新培养基或再循环培养基。尽管如此，可以是实心或微孔的挡板916使微载体908或悬浮细胞朝向出口910偏转(使微载体和任何悬浮细胞返回到适当的生物反应器)，同时允许条件培养基912穿过撇渣过滤器914。一方面，挡板916可以是微孔的，但应该理解，微孔的平均直径小于微载体的平均直径。152.在过滤之后，生物反应器10含有附着到微载体74的第一细胞70。另一方面，第二细胞72可以转移到新的生物反应器。然后可以根据需要进一步纯化和洗涤每个细胞群(第一细胞和第二细胞)。如果第一细胞或第二细胞是不想要的，则也可以丢弃任一细胞群。153.上述过程可以将例如tcr+细胞与car t细胞(例如，通过与cd3+、cd4+选择性地结合)有效地且容易地分离或和/或将cd3+t细胞与nk细胞分离。154.在一种应用中，可以令人期望的是在第二细胞72已经与第一细胞分离之后将第一细胞70与微载体74分离。可以使用不同的方法和技术来将第一细胞70与微载体74分离。例如，在一个实施例中，可以将分离剂添加到生物反应器10中，所述分离剂使细胞与微载体分离。在分离之后，过滤器设备820然后可以用于从生物反应器10中取出第一细胞70并且将其与微载体74分离。155.在替代性实施例中，微载体74可以被设计成在包含在生物反应器10内的流体培养基内是可溶解的。例如，微载体74可以溶解在流体培养基中，或者可以将溶解剂添加到流体培养基中以溶解微载体74。一旦微载体已经溶解，第一细胞70就以非负载状态保留在生物反应器10内，并且可以被进一步洗涤和纯化。156.一旦期望的生物细胞群已经任选地从其它细胞中隔离和分离，就可以根据本公开的方法使用如关于图1-10示出和描述的过滤器设备洗涤和纯化细胞群。一方面，例如，使用本公开的过滤器设备，如过滤器设备20，将含有生物细胞群的流体培养基从生物反应器中抽出。例如，过滤器设备可以取出生物反应器内的至少约30％，如至少约40％，如至少约50％，如至少约60％，如至少约70％，如至少约80％体积的流体培养基。为了洗涤和纯化细胞，然后可以将缓冲介质添加到生物反应器中，以替换取出的流体培养基。157.在上述洗涤过程期间，通过从细胞和可能在流体培养基中的任何生物副产物或其它污染物中取出和分离流体培养基来纯化生物细胞群。例如，在细胞扩增期间，生物细胞可以产生如蛋白质等副产物。另外，血清还可以包含在流体培养基中。通过本公开的过程，如蛋白质和血清等此类生物副产物可以从细胞中去除和分离。洗涤过程可以进行多次(即，多次循环)，以便达到期望的纯度水平。例如，可以洗涤细胞，使所得细胞群含有的如蛋白质和血清等生物副产物的量小于0.1重量％。例如，可以通过上述方法洗涤细胞群大于1个循环，如大于2个循环，如大于3个循环，并且通常小于约10个循环，如小于约8个循环，如小于约6个循环，如小于约5个循环。158.特别有利的是，生物细胞群可以根据本公开以不需要离心或大量人力的自动化方式进行洗涤。另外，可以非常有效地且快速地进行洗涤。例如，流体培养基可以以一定流速从生物反应器中抽出，使得至少约50％体积的流体培养基，如至少约60％体积的流体培养基，如至少约70％体积的流体培养基可以在少于约4小时，如少于约3小时，如少于约2小时，如甚至少于约1小时内从生物反应器中取出。159.另外，所述方法是完全可扩展的。例如，根据本公开洗涤的细胞群可以包含在体积为约1l到约10l的较小生物反应器中，或可以存在于体积为约5l到约75l的较大生物反应器中。160.在将细胞群洗涤到期望的纯度水平之后，将细胞群包含在缓冲介质内。然后可以将所得产物转移到柔性袋容器中进行低温储存。在一个实施例中，也可以在冷冻之前将低温缓冲介质添加到细胞群中。低温缓冲介质例如可以是由生物生命解决方案公司(biolife solutions)出售的cryostor 10。低温缓冲介质可以是无血清的，并且含有烷基亚砜，如二甲亚砜。二甲亚砜可以以大于约5重量％的量和小于约25重量％的量存在于低温缓冲介质中。161.用于储存的细胞群可以具有相对高的纯度水平。因为过程是自动化的，所以可以在批次之间维持高纯度水平而没有出现波动。因此，由于高纯度水平，因此可以将更大密度的细胞冷冻和储存并且之后递送给患者。例如，柔性储存袋内的细胞密度可以大于每毫升约9,000,000个细胞，如大于每毫升约10,000,000个细胞，如大于每毫升约12,000,000个细胞。162.通过本公开的过程，细胞密度可以扩增大于200％，包含t细胞群和nk细胞群。一旦细胞群已经扩增，可以使用如上所述的方法将细胞与不期望的细胞分离和/或纯化。另外，根据本公开的过程可以产生具有更大成比例量的期望表型的细胞群。最终，可以获得纯度大于90％的细胞群。例如，可以获得纯度大于90％的cd4 t细胞和/或cd8 t细胞的细胞群。另外，过程可以在小于10％的总细胞损失和大于90％，如大于95％的细胞活力的情况下来进行。与过去的过程相比，细胞浓度可以增加至多3倍，这减少了所需要的渗滤介质的体积。另外，最终细胞产物可以含有少于0.1重量％的量的残余血清/蛋白质水平。最后，细胞的低温后活力可以大于90％，再激活后扩增大于30倍。163.可以参考以下实例更好地理解本公开。164.实例165.实例编号1166.进行以下实例以测试根据本公开制造的过滤器设备从搅拌釜生物反应器中抽出流体培养基而不同时抽出或损害包含在生物反应器中的生物细胞的能力。167.以下实验中使用的过滤器设备类似于图4a中所展示的设计。过滤器构件的长度为大约1.5in2，并且过滤器构件的外表面的表面积为0.65in2。过滤器构件由烧结不锈钢纤维制成，并且绝对孔径为3-4微米。附接到过滤器构件的管状构件的内径为6.35mm。168.将t细胞以3-6.5×106个细胞/毫升的密度接种到1升生物反应器中。生物反应器是搅拌釜生物反应器。将细胞培养物在生物反应器内维持1天，在此期间使用如上所述的过滤器设备从生物反应器中抽出流体培养基。169.过滤器设备在3个不同的流速下操作。流速包含5毫升/分钟到10毫升/分钟的第一流速，10毫升/分钟到15毫升/分钟的中间流速以及20毫升/分钟到25毫升/分钟的高流速。收集并分析从生物反应器中抽出的流体培养基样品。在所有三种流速下，生物反应器内的细胞损失小于2％。170.在单独的实验中，在间歇性灌注方案(每小时持续5分钟)下以低-中流速(每分钟5ml，超过5分钟＝每小时取出25ml)操作过滤器设备。初始接种密度为0.5×106个细胞/毫升，其中t细胞在接种后被激活并扩增。在t细胞接种和激活之后5天开始灌注(培养第5天)。培养第六天(例如，开始灌注之后24小时)，将522ml的流体培养基成功地灌注出生物反应器。在第十二天，将3,650m/l的流体培养基成功地灌注出生物反应器。在使用十二天之后，注意到有一些堵塞。在灌注模式期间，观察到细胞扩增。171.实例编号2172.在此实例中，将以分批模式操作的搅拌釜生物反应器与使用如实例编号1中描述的过滤器设备的根据本公开操作的搅拌釜生物反应器进行比较。173.对于两个生物反应器，将cd3+t细胞从pbmc中隔离并且接种到1升搅拌釜生物反应器中。ph设定点小于7.2。溶解氧设定点大于50％。在第0天，添加immunocult cd3/cd28激活剂。添加到生物反应器中的生长培养基是xvivo15、5％人血清、25iu il-2。初始培养基体积为400ml，并且初始细胞密度为220×106个细胞/毫升。174.每个生物反应器操作持续18天。在第3天，将800ml的新流体生长培养基添加到每个生物反应器中。对分批模式搅拌釜生物反应器没有进行进一步改变。175.关于根据本公开制造的生物反应器系统，在第5天开始灌注。在灌注期间，生物反应器内的大约一半体积的流体培养基被抽出并替换。使用间歇性灌注方案，其中在固定的5分钟间隔内每小时抽出25ml流体培养基。灌注持续9天，并且在第14天结束。176.图11到14中展示了结果。例如，图11展示了两种系统的活细胞密度和活力百分比。如图所示，根据本公开操作的生物反应器显示出显著的改进，尤其是在第12天之后。177.图12、13和14展示了实验过程中的溶解氧水平、葡萄糖水平、乳酸盐、氨水平和il-2浓度。如图13所示，使用本公开的生物反应器，葡萄糖和乳酸盐水平尤其更好地受到控制。178.实例编号3179.在此实例中，根据如上面关于实例编号2描述的同一过程，使用本公开的过滤器设备在搅拌釜生物反应器中扩增t细胞。然而，在此实例中，在t细胞群超过2×106m/l的细胞密度之后开始灌注。这发生在第8天。图15-18中展示了结果。如图15所示，在开始灌注之后细胞扩增显著增加。在整个过程期间，细胞活力也保持在96％以上。180.如图16所示，从第10天到第13天，溶解氧迅速降低至0。人们通常会认为，溶解氧的这种减少会对细胞生长产生负面影响。相反，细胞扩增在同一时间段期间迅速增加。181.如图17所示，在过程期间，葡萄糖、乳酸盐和氨水平被控制并维持在最佳水平。182.在第13天之后也对t细胞表型进行测试，并且将其与分批搅拌釜反应器过程进行比较。获得以下结果。[0183][0184][0185]如上所示，tscm细胞具有意外且显著的增加，这是优选的表型。尽管未知，据信tscm细胞的量的增加可能是由于较低的溶解氧水平导致的或可能与较低的溶解氧水平一起发生。[0186]本文所述的装置、设施和方法适用于培养任何期望的细胞系，包含原核和/或真核细胞系。另外，在实施例中，装置、设施和方法适用于培养悬浮细胞或贴壁依赖性(粘附)细胞，并且适用于被配置成生产制药和生物制药产物，如多肽产物、核酸产物(例如，dna或rna)或细胞和/或病毒，如用于细胞和/或病毒疗法的细胞和/或病毒的生产操作。[0187]在实施例中，细胞表达或产生产物，如重组治疗性或诊断性产物。如下面更详细地描述的，由细胞产生的产物的实例包含但不限于抗体分子(例如，单克隆抗体、双特异性抗体)、抗体模拟物(与抗原特异性结合但在结构上与抗体不相关的多肽分子，所述抗体如darpin、亲和体、adnectin或ignar)、融合蛋白(例如，fc融合蛋白、嵌合细胞因子)、其它重组蛋白(例如，糖基化蛋白、酶、激素)、病毒治疗剂(例如，抗癌溶瘤病毒、用于基因疗法和病毒免疫疗法的病毒载体)、细胞治疗剂(例如，多能干细胞、间充质干细胞和成体干细胞)、疫苗或脂质包封的颗粒(例如，外泌体、病毒样颗粒)、rna(例如，sirna)或dna(例如，质粒dna)、抗生素或氨基酸。在实施例中，装置、设施和方法可以用于生产生物仿制药。[0188]如上所述，在实施例中，装置、设施和方法允许产生真核细胞，例如哺乳动物细胞或低等真核细胞，例如酵母细胞或丝状真菌细胞或者原核细胞，如革兰氏阳性或革兰氏阴性细胞，和/或真核或原核细胞的产物，例如，由真核细胞以大规模方式合成的蛋白质、肽、抗生素、氨基酸、核酸(如dna或rna)。除非本文另有说明，否则装置、设施和方法可以包含任何期望的体积或生产能力，所述生产能力包含但不限于实验室规模、中试规模和全生产规模能力。[0189]此外并且除非本文另有说明，否则装置、设施和方法可以包含任何合适的反应器，所述反应器包含但不限于搅拌釜、气升、纤维、微纤维、中空纤维、陶瓷基质、流化床、固定床和/或喷射床生物反应器。如本文所使用的，“反应器”可以包含发酵罐或发酵单元或任何其它反应容器，并且术语“反应器”与“发酵罐”可互换地使用。例如，在一些方面，示例生物反应器单元可以执行以下中的一项或多项或全部：营养素和/或碳源的进给、合适的气体(例如，氧气)的注射、发酵或细胞培养基的入口和出口流动、气相和液相的分离、温度的维持、氧气和co2水平的维持、ph水平的维持、搅动(例如，搅拌)和/或清洁/灭菌。示例反应器单元，如发酵单元可以含有在单元内的多个反应器，例如所述单元可以具有在每个单元中的1个、2个、3个、4个、5个、10个、15个、20个、25个、30个、35个、40个、45个、50个、60个、70个、80个、90个或100个或更多个生物反应器和/或设施可以含有多个单元，所述多个单元具有在所述设施内的单个或多个反应器。在各个实施例中，生物反应器可以适用于分批、半补料分批、补料分批、灌注和/或连续发酵过程。可以使用任何合适的反应器直径。在实施例中，生物反应器的体积可以介于约100ml与约50,000l之间。非限制性实例的体积为100ml、250ml、500ml、750ml、1升、2升、3升、4升、5升、6升、7升、8升、9升、10升、15升、20升、25升、30升、40升、50升、60升、70升、80升、90升、100升、150升、200升、250升、300升、350升、400升、450升、500升、550升、600升、650升、700升、750升、800升、850升、900升、950升、1000升、1500升、2000升、2500升、3000升、3500升、4000升、4500升、5000升、6000升、7000升、8000升、9000升、10,000升、15,000升、20,000升和/或50,000升。另外，合适的反应器可以是多次使用的、单次使用的、一次性的或非一次性的，并且可以由任何合适的材料形成，包含金属合金，如不锈钢(例如，316l或任何其它合适的不锈钢)和inconel、塑料和/或玻璃。[0190]在实施例中并且除非本文另有说明，本文所述的装置、设施和方法还可以包含未以其它方式提及的任何合适的单元操作和/或设备，如用于分离、纯化和分离此类产物的操作和/或设备。可以使用任何合适的设施和环境，如传统的构件式设施、模块化的、移动的和临时的设施、或任何其它合适的构造、设施和/或布局。例如，在一些实施例中，可以使用模块化洁净室。另外并且除非另有说明，本文所述的装置、系统和方法可以容纳在单个位置或设施中和/或在所述单个位置或设施中执行，或者可替代地容纳在单独或多个位置和/或设施处和/或在所述单独或多个位置和/或设施处执行。[0191]作为非限制性实例但不限于，美国公开第2013/0280797号；第2012/0077429号；第2011/0280797号；第2009/0305626号；以及美国专利第8,298,054号；第7,629,167号；和第5,656,491号(所述美国公开特此通过引用整体并入)描述了可能合适的示例设施、设备和/或系统。[0192]在实施例中，细胞是真核细胞，例如哺乳动物细胞。哺乳动物细胞可以是例如人或啮齿动物或牛细胞系或细胞株。此类细胞、细胞系或细胞株的实例是例如小鼠骨髓瘤(nso)-细胞系、中国仓鼠卵巢(cho)-细胞系、ht1080、h9、hepg2、mcf7、mdbk jurkat、nih3t3、pc12、bhk(幼仓鼠肾细胞)、vero、sp2/0、yb2/0、y0、c127、l细胞、cos，例如cos1和cos7、qc1-3、hek-293、vero、per.c6、hela、eb1、eb2、eb3、溶瘤或杂交瘤细胞系。优选地，哺乳动物细胞是cho细胞系。在一个实施例中，细胞是cho细胞。在一个实施例中，细胞是cho-k1细胞、cho-k1 sv细胞、dg44 cho细胞、duxb11 cho细胞、chos、cho gs敲除细胞、cho fut8 gs敲除细胞、chozn或cho源性细胞。cho gs敲除细胞(例如，gsko细胞)是例如cho-k1sv gs敲除细胞。cho fut8敲除细胞是例如chok1 sv(龙沙生物有限公司(lonza biologics，inc.))。真核细胞也可以是禽类细胞、细胞系或细胞株，如细胞、eb14、eb24、eb26、eb66或ebv13。[0193]在一个实施例中，真核细胞是干细胞。干细胞可以是例如多能干细胞，包含胚胎干细胞(esc)、成体干细胞、诱导多能干细胞(ipsc)、组织特异性干细胞(例如，造血干细胞)和间充质干细胞(msc)。[0194]在一个实施例中，细胞是本文所述的任何细胞的分化形式。在一个实施例中，细胞是源自培养中的任何原代细胞的细胞。[0195]在实施例中，细胞是肝细胞，如人肝细胞、动物肝细胞或非实质细胞。例如，细胞可以是可铺板的代谢合格的人肝细胞、可铺板的诱导合格的人肝细胞、可铺板的qualyst transporter certifiedtm人肝细胞、悬浮合格的人肝细胞(包含10-供体和20-供体合并肝细胞)、人肝库弗细胞(human hepatic kupffer cell)、人肝星状细胞、狗肝细胞(包含单个和合并的比格尔肝细胞(beagle hepatocyte))、小鼠肝细胞(包含cd-1和c57bi/6肝细胞)、大鼠肝细胞(包含斯普拉格-杜勒(sprague-dawley)、威斯塔汉(wistar han)和威斯塔肝细胞、猴肝细胞(包含食蟹猴或恒河猴肝细胞)、猫肝细胞(包含家养短毛猫肝细胞)和兔肝细胞(包含新西兰白肝细胞)。示例肝细胞可从美国北卡罗来纳州科研三角园戴卫斯路6号的三角研究实验室有限责任公司27709(triangle research labs，llc，6davis drive research triangle park，north carolina，usa 27709)商购获得。[0196]在一个实施例中，真核细胞是低等真核细胞，如酵母细胞(例如，毕赤酵母属(例如，毕赤酵母(pichia pastoris)、甲醇毕赤酵母(pichia methanolica)、毕赤克鲁维酵母(pichia kluyveri)和安古斯毕赤酵母(pichia angusta))、驹形氏酵母属(komagataella genus)(例如，巴斯德驹形氏酵母(komagataella pastoris)、假巴斯德驹形氏酵母(komagataella pseudopastoris)或法夫驹形氏酵母(komagataella phaffii))、酵母属(saccharomyces genus)(例如，酿酒酵母(saccharomyces cerevisae)、酿酒酵母(cerevisiae)、克鲁维酵母(saccharomyces kluyveri)、葡萄汁酵母(saccharomyces uvarum))、克鲁维酵母属(kluyveromyces genus)(例如，乳酸克鲁维酵母(kluyveromyces lactis)、马克斯克鲁维酵母(kluyveromyces marxianus))、念珠菌属(candida genus)(例如，产朊假丝酵母(candida utilis)、可可假丝酵母(candida cacaoi)、博伊丁氏假丝酵母(candida boidinii))、地丝菌属(例如，发酵地霉(geotrichum fermentans))、多形汉逊酵母(hansenula polymorpha)、解脂耶氏酵母(yarrowia lipolytica)或粟酒裂殖酵母(schizosaccharomyces pombe)。优选的是毕赤酵母物种。毕赤酵母菌株的实例是x33、gs115、km71、km71h；和cbs7435。[0197]在一个实施例中，真核细胞是真菌细胞(例如，曲霉属(如黑曲霉、烟曲霉、米曲霉、巢曲霉)、枝顶头孢属(acremonium)(如嗜热枝顶抱(a.thermophilum))、毛壳属(chaetomium)(如嗜热毛壳菌(c.thermophilum))、金孢属(chrysosporium)(如嗜热金孢菌(c.thermophile))、虫草属(cordyceps)(如蛹虫草(c.militaris))、棒囊壳属(corynascus)、栉霉属(ctenomyces)、镰孢属(fusarium)(如尖孢镰孢菌(f.oxysporum))、小丛壳属(glomerella)(如大草莺属(g.graminicola))、肉座菌属(hypocrea)(如红褐肉座菌(h.jecorina))、稻瘟菌属(magnaporthe)(如稻瘟病菌(m.orzyae))、毁丝菌属(myceliophthora)(如嗜热毁丝菌(m.thermophile))、丛赤壳属(nectria)(如红球丛赤壳菌(n.heamatococca))、脉孢菌属(neurospora)(如粗糙脉孢菌(n.crassa))、青霉属(penicillium)、侧孢霉属(sporotrichum)(如嗜热侧孢霉(s.thermophile))、梭孢壳属(thielavia)(如太瑞斯梭孢壳霉(t.terrestris)、异梭孢壳霉(t.heterothallica))、木霉属(trichoderma)(如瑞氏木霉(t.reesei))或轮枝孢属(verticillium)(如大丽轮枝孢(v.dahlia)))。[0198]在一个实施例中，真核细胞是昆虫细胞(例如，sf9、mimictm sf9、sf21、高fivetm(bt1-tn-5b1-4)或bt1-ea88细胞)、藻类细胞(例如，双眉藻属(genus amphora)、硅藻纲(bacillariophyceae)、杜氏藻属(dunaliella)、小球藻属(chlorella)、衣藻属(chlamydomonas)、蓝藻门(cyanophyta)(蓝细菌(cyanobacteria))、微拟球藻属(nannochloropsis)、螺旋藻属(spirulina)或棕鞭藻属(ochromonas))或植物细胞(例如，来自单子叶植物(例如，玉米、水稻、小麦或狗尾草)的细胞，或来自双子叶植物(例如，木薯、马铃薯、大豆、番茄、烟草、紫花苜蓿(alfalfa)、小立碗藓(physcomitrella patens)或拟南芥(arabidopsis))的细胞。[0199]在一个实施例中，细胞细胞是细菌或原核细胞。[0200]在实施例中，原核细胞是革兰氏阳性细胞，如芽孢杆菌属、链霉菌属链球菌属、葡萄球菌属或乳杆菌属。可以使用的芽孢杆菌属是例如枯草芽孢杆菌(b.subtilis)、解淀粉芽孢杆菌(b.amyloliquefaciens)、地衣芽孢杆菌(b.licheniformis)、纳豆芽孢杆菌(b.natto)或巨大芽孢杆菌(b.megaterium)。在实施例中，细胞是枯草芽孢杆菌，如枯草芽孢杆菌3na和枯草芽孢杆菌168。芽孢杆菌可从例如俄亥俄州哥伦布西12街484号的生物科学556的芽孢杆菌遗传储存中心43210-1214(the bacillus genetic stock center，biological sciences 556，484west 12thavenue，columbus oh 43210-1214)获得。[0201]在一个实施例中，原核细胞是革兰氏阴性细胞，如沙门氏菌属(salmonella spp.)或大肠杆菌(escherichia coli)，例如tg1、tg2、w3110、dh1、dhb4、dh5a、hms 174、hms174(de3)、nm533、c600、hb101、jm109、mc4100、xl1-blue和origami，以及源自大肠杆菌b菌株的细胞，例如bl-21或bl21(de3)，所有这些都是可商购获得的。[0202]合适的宿主细胞可从例如培养物保藏中心，如dsmz(德国布伦瑞克的德意志微生物和细胞培养物保藏中心(deutsche sammlung von mikroorganismen and zellkulturen gmbh，braunschweig，germany))或美国典型培养物保藏中心(american type culture collection，atcc)商购获得。[0203]在实施例中，使用经培养的细胞来产生用于治疗用途的蛋白质，例如抗体，例如单克隆抗体，和/或重组蛋白。在实施例中，经培养的细胞产生肽、氨基酸、脂肪酸或其它有用的生化中间体或代谢物。例如，在实施例中，可以产生分子量为约4000道尔顿到大于约140,000道尔顿的分子。在实施例中，这些分子可以具有一定范围的复杂性，并且可以包含翻译后修饰，包含糖基化。[0204]在实施例中，蛋白质是例如botox、myobloc、neurobloc、dysport(或肉毒杆菌神经毒素的其它血清型)、阿葡糖苷酶α、达托霉素、yh-16、绒促性素α、非格司亭(filgrastim)、西曲瑞克(cetrorelix)、白介素-2、阿地白介素、替西白介素(teceleulin)、地尼白介素(denileukin diffitox)、干扰素α-n3(注射)、干扰素α-n1、dl-8234、干扰素、suntory(γ-1a)、干扰素γ、胸腺素α1、他索那敏(tasonermin)、digifab、viperatab、echitab、crofab、奈西立肽(nesiritide)、阿巴西普(abatacept)、阿法赛特(alefacept)、瑞贝夫(rebif)、美西替法α(eptoterminalfa)、特立帕肽(teriparatide)(骨质疏松症)、注射型降钙素(骨病)、降钙素(鼻、骨质疏松症)、依那西普(etanercept)、血红蛋白谷氨酰胺250(牛)、替加色罗α(drotrecogin alpha)、胶原酶、卡培立肽(carperitide)、重组人表皮生长因子(局部凝胶、伤口愈合)、dwp401、达贝泊汀α、依泊汀ω、依泊汀β、依泊汀α、地西卢定(desirudin)、来匹卢定(lepirudin)、比伐卢定(bivalirudin)、诺那凝血素α(nonacog alpha)、mononine、依他凝血素α(eptacog alpha)(激活的)、重组因子viii+vwf、重组体、重组因子viii、因子viii(重组)、alphnmate、辛凝血素α(octocog alpha)、因子viii、帕利夫明(palifermin)、indikinase、替奈普酶(tenecteplase)、阿替普酶(alteplase)、帕米普酶(pamiteplase)、瑞替普酶(reteplase)、那替普酶(nateplase)、孟替普酶(monteplase)、促卵泡素α、rfsh、hpfsh、米卡芬净(micafungin)、培非格司亭(pegfilgrastim)、来格司亭(1enograstim)、那托司亭(nartograstim)、舍莫瑞林(sermorelin)、胰高血糖素、艾塞那肽、普兰林肽、伊米苷酶(iniglucerase)、半乳糖加硫酶(galsulfase)、乐克托品(leucotropin)、莫革斯汀(molgramostirn)、醋酸曲普瑞林(triptorelin acetate)、组胺瑞林(histrelin)(皮下植入，hydron)、德舍瑞林(deslorelin)、组氨瑞林(histrelin)、那法瑞林(nafarelin)、亮丙瑞林缓释植入剂(leuprolide sustained release depot)(atrigel)、亮丙瑞林植入物(leuprolide implant)(duros)、戈舍瑞林(goserelin)、尤托品(eutropin)、kp-102程序、生长激素、美卡舍明(mecasermin)(生长不足)、恩法韦肽(enlfavirtide)、org-33408、甘精胰岛素(insulin glargine)、赖谷胰岛素(insulin glulisine)、胰岛素(吸入的)、赖脯胰岛素(insulin lispro)、地特胰岛素(insulin deternir)、胰岛素(口服的，rapidmist)、美卡舍明-林菲培(mecasermin rinfabate)、阿那白滞素(anakinra)、西莫白介素(celmoleukin)、99mtc-阿普西肽注射、骨髓脂(myelopid)、贝他费隆(betaseron)、醋酸格拉替雷(glatiramer acetate)、吉普顿(gepon)、沙格司亭(sargramostim)、奥普瑞白介素(oprelvekin)、人白细胞源性α干扰素、倍尔来福(bilive)、胰岛素(重组)、重组人胰岛素、门冬胰岛素、美加色宁(mecasenin)、罗氟酮-a、干扰素-α2、阿法芬龙(alfaferone)、复合干扰素-1(interferon alfacon-1)、干扰素α、阿温耐克斯重组人黄体生成素(avonex′recombinant human luteinizing hormone)、链道酶α、曲弗明(trafermin)、齐考诺肽(ziconotide)、他替瑞林(taltirelin)、地博特明a(diboterminalfa)、阿托西班(atosiban)、贝卡普勒明(becaplermin)、依替巴肽(eptifibatide)、泽莫拉(zemaira)、ctc-111、shanvac-b、hpv疫苗(四价)、奥曲肽(octreotide)、兰瑞肽(1anreotide)、阿斯替林(ancestirn)、阿加糖酶β、阿加糖酶α、拉罗奈德酶(1aronidase)、蓝铜胜肽(prezatide copper acetate)(局部凝胶)、拉布立酶(rasburicase)、兰尼单抗(ranibizumab)、actimmune、佩乐能(peg-intron)、采尼(tricomin)、重组屋尘螨过敏脱敏注射(recombinant house dust mite allergy desensitization injection)、重组人甲状旁腺激素(pth)1-84(sc，骨质疏松症)、依伯汀δ、转基因抗凝血酶iii、granditropin、透明质酸酶(vitrase)、重组胰岛素、干扰素-α(口服锭剂)、gem-21s、伐普肽(vapreotide)、艾杜硫酸酯酶(idursulfase)、奥马曲拉(omnapatrilat)、重组血清白蛋白、培戈赛妥珠单抗(certolizumab pegol)、谷卡匹酶(glucarpidase)、人重组c1酯酶抑制剂(血管性水肿)、拉诺替普酶(lanoteplase)、重组人生长激素、恩夫韦肽(无针注射，biojector 2000)、vgv-1、干扰素(α)、萤光素(lucinactant)、阿维普地尔(aviptadil)(吸入的，肺疾病)、艾替班特(icatibant)、艾卡拉肽(ecallantide)、奥米加南(omiganan)、奥罗格兰(aurograb)、乙酸培西加南(pexigananacetate)、adi-peg-20、ldi-200、地加瑞克(degarelix)、白介假单胞菌外毒素(cintredelinbesudotox)、favld、mdx-1379、isatx-247、利拉鲁肽(liraglutide)、特立帕肽(骨质疏松症)、替法可近(tifacogin)、aa4500、t4n5脂质体洗剂、卡妥索单抗(catumaxomab)、dwp413、art-123、克莱西林(chrysalin)、去氨普酶(desmoteplase)、安地普酶(amediplase)、绒促卵泡素α(corifollitropinalpha)、th-9507、替度鲁肽(teduglutide)、戴麦德(diamyd)、dwp-412、生长激素(缓释注射)、重组g-csf、胰岛素(吸入的，air)、胰岛素(吸入的，technosphere)、胰岛素(吸入的，aerx)、rgn-303、diapep277、干扰素β(丙型肝炎病毒感染(hcv))、干扰素a-n3(口服)、贝拉西普(belatacept)、透皮胰岛素贴剂、amg-531、mbp-8298、xerecept、奥培巴康(opebacan)、aidsvax、gv-1001、贝妥莫单抗(lymphoscan)、豹蛙酶(ranpirnase)、lipoxysan、卢舒普肽(lusupultide)、mp52(β-磷酸三钙载体、骨再生)、黑色素瘤疫苗、sipuleucel-t、ctp-37、insegia、vitespen、人凝血酶(冷冻，外科手术出血)、凝血酶、transmid、蛇毒纤溶酶(alfimeprase)、普瑞凯希(puricase)、特利加压素(静脉内，肝肾综合征)、eur-1008m、重组fgf-i(可注射，血管疾病)、bdm-e、罗替加肽(rotigaptide)、etc-216、p-113、mbi-594an、耐久霉素(吸入的，囊性纤维化)、scv-07、opi-45、内皮抑素、血管抑素、abt-510、bowman birk抑制剂浓缩物、xmp-629、99mtc-hynic-膜联蛋白v、kahalalide f、ctce-9908、替维瑞克(teverelix)(延时释放)、奥扎瑞克(ozarelix)、罗咪酯肽(rornidepsin)、bay-504798、白介素4、prx-321、佩斯坎(pepscan)、依波介素(iboctadekin)、乳铁蛋白(rhlactoferrin)、tru-015、il-21、atn-161、西仑吉肽(cilengitide)、白蛋白干扰素(albuferon)、biphasix、irx-2、ω干扰素、pck-3145、cap-232、帕斯雷肽(pasireotide)、hun901-dmi、卵巢癌免疫治疗疫苗、sb-249553、oncovax-cl、oncovax-p、blp-25、cervax-16、多表位肽黑色素瘤疫苗(mart-1，gp100，酪氨酸酶)、奈米肽(nemifitide)、raat(吸入的)、raat(皮肤学的)、cgrp(吸入的，哮喘)、培格森西普(pegsunercept)、胸腺素β4、普利地美辛(plitidepsin)、gtp-200、雷莫拉宁(ramoplanin)、graspa、obi-1、ac-100、鲑鱼降钙素(口服的，伊利根)、降钙素(口服的、骨质疏松症)、艾沙瑞林(examorelin)、卡普瑞林(capromorelin)、cardeva、维拉夫明(velafermin)、131i-tm-601、kk-220、t-10、乌拉立肽(ularitide)、地来司他(depelestat)、hematide、克黄素(chrysalin)(局部的)、rnapc2、重组因子v111(peg化脂质体)、bfgf、peg化重组葡萄球菌激酶变体、v-10153、sonolysis prolyse、neurovax、czen-002、胰岛细胞新生疗法、rglp-1、bim-51077、ly-548806、艾塞那肽(exenatide)(控释，medisorb)、ave-0010、ga-gcb、阿伏瑞林(avorelin)、acm-9604、利那肽乙酸酯(linaclotid eacetate)、ceti-1、hemospan、val(可注射)、快速作用胰岛素(可注射，viadel)、鼻内胰岛素、胰岛素(吸入的)、胰岛素(口服，艾力更)、重组甲硫氨酰人瘦蛋白(皮下注射匹拉克汀、湿疹)、匹拉克汀(pitrakinra)(吸入干粉，哮喘)、multikine、rg-1068、mm-093、nbi-6024、at-001、pi-0824、org-39141、cpn10(自身免疫性疾病/炎症)、塔尔乳铁蛋白(局部的)、rev-131(眼睛的)、rev-131(呼吸道疾病)、口服重组人胰岛素(糖尿病)、rpi-78m、奥普雷维金(oprelvekin)(口服)、cyt-99007ctla4-ig、dty-001、伐地格拉斯特(valategrast)、干扰素α-n3(局部的)、irx-3、rdp-58、tauferon、胆盐刺激性脂肪酶、梅里斯普酶(merispase)、碱性磷酸酶、ep-2104r、美拉诺坦(melanotan)-ii、布美诺肽(bremelanotide)、atl-104、重组人微纤维蛋白溶酶、ax-200、semax、acv-1、xen-2174、cjc-1008、强啡肽a、si-6603、lab ghrh、aer-002、bgc-728、疟疾疫苗(病毒颗粒，pevipro)、altu-135、细小病毒b19疫苗、流感疫苗(重组神经氨酸酶)、疟疾/hbv疫苗、炭疽疫苗、vacc-5q、vacc-4x、hiv疫苗(口服)、hpv疫苗、tat类毒素、yspsl、chs-13340、pth(1-34)脂质体乳膏(novasome)、ostabolin-c、pth类似物(局部的，牛皮癣)、mbri-93.02、mtb72f疫苗(结核病)、mva-ag85a疫苗(结核病)、fara04、ba-210、重组鼠疫fiv疫苗、ag-702、oxsodrol、rbetv1、der-p1/der-p2/der-p7变应原靶向疫苗(尘螨过敏症)、pr1肽抗原(白血病)、突变ras疫苗、hpv-16e7脂肽疫苗、labyrinthin疫苗(腺癌)、cml疫苗、wt1-肽疫苗(癌症)、idd-5、cdx-110、pentrys、norelin、cytofab、p-9808、vt-111、艾罗卡肽(icrocaptide)、替柏明(telbermin)(皮肤病，糖尿病足溃疡)、卢普立韦(rupintrivir)、网状细胞增生(reticulose)、rgrf、ha、α-半乳糖苷酶a、ace-011、altu-140、cgx-1160、血管紧张素治疗性疫苗、d-4f、etc-642、app-018、rhmbl、scv-07(口服，结核病)、drf-7295、abt-828、erbb2特异性免疫毒素(抗癌剂)、dt3ssil-3、tst-10088、pro-1762、combotox、肠促胰酶肽-b/胃泌素-受体结合肽、111in-hegf、ae-37、曲尼珠单抗-dm1、拮抗剂g、il-12(重组)、pm-02734、imp-321、rhigf-bp3、blx-883、cuv-1647(局部)、基于l-19的放射免疫治疗剂(癌症)、re-188-p-2045、amg-386、dc/1540/klh疫苗(癌症)、vx-001、ave-9633、ac-9301、ny-eso-1疫苗(肽)、na17.a2肽、黑色素瘤疫苗(脉冲抗原治疗剂)、前列腺癌疫苗、cbp-501、重组人乳铁蛋白(干眼)、fx-06、ap-214、wap-8294a(可注射)、acp-hip、sun-11031、肽yy[3-36](肥胖症，鼻内)、fgll、阿他西普(atacicept)、br3-fc、bn-003、ba-058、人甲状旁腺激素1-34(鼻，骨质疏松症)、f-18-ccr1、at-1100(乳糜泻/糖尿病)、jpd-003、pth(7-34)脂质体乳膏(novasome)、耐久霉素(眼睛的，干眼)、cab-2、ctce-0214、糖聚乙二醇化促红细胞生成素、epo-fc、cnto-528、amg-114、jr-013、因子xiii、氨基茚满(aminocandin)、pn-951、716155、sun-e7001、th-0318、bay-73-7977、替维瑞克(速释)、ep-51216、hgh(控释，biosphere)、ogp-i、西夫韦肽(sifuvirtide)、tv4710、alg-889、org-41259、rhcc10、f-991、胸腺五肽(肺疾病)、r(m)crp、肝选择性胰岛素、亚蛋白、l19-il-2融合蛋白、弹力素(elafin)、nmk-150、altu-139、en-122004、rhtpo、促血小板生成素受体激动剂(血小板减少性病症)、al-108、al-208、神经生长因子拮抗剂(疼痛)、slv-317、cgx-1007、inno-105、口服特立帕肽(艾力更)、gem-os1、ac-162352、prx-302、lfn-p24融合疫苗(therapore)、ep-1043、肺炎链球菌儿科疫苗、疟疾疫苗、脑膜炎奈瑟氏球菌b组疫苗、新生儿b组链球菌疫苗、炭疽疫苗、hcv疫苗(gpe1+gpe2+mf-59)、中耳炎介质疗法、hcv疫苗(核心抗原+iscomatrix)、hpth(1-34)(透皮，viaderm)、768974、syn-101、pgn-0052、阿维库明(aviscumnine)、bim-23190、结核病疫苗、多表位酪氨酸酶肽、癌症疫苗、恩卡斯替母(enkastim)、apc-8024、gi-5005、acc-001、tts-cd3、血管靶向的tnf(实体瘤)、去氨加压素(口腔控释)、奥那西普和tp-9201。[0205]在一些实施例中，多肽是阿达木单抗(humira)、英夫利昔单抗(remicadetm)、利妥昔单抗(rituxantm/mab theratm)、依那西普(enbreltm)、贝伐单抗(avastintm)、曲妥珠单抗(herceptintm)、培格司亭(pegrilgrastim)(neulastatm)或任何其它合适的多肽，包含生物仿制药和生物改良药。[0206]其它合适的多肽是下面和在us2016/0097074的表1中列出的多肽：[0207]表1[0208][0209]表1[0210][0211]表1[0212][0213]表1[0214][0215]表1[0216][0217]在实施例中，多肽是激素、凝血/凝血因子、细胞因子/生长因子、抗体分子、融合蛋白、蛋白疫苗或肽，如表2所示。[0218]表2：示例性产物[0219][0220][0221]在实施例中，蛋白质是多特异性蛋白质，例如表3中所示的双特异性抗体。[0222]表3：双特异性形式[0223][0224][0225][0226][0227][0228]在不背离本发明的精神和范围的情况下，本领域的普通技术人员可以对本发明进行这些和其它修改和变化，本发明的精神和范围在所附权利要求中更具体地阐述。另外，应当理解，各个实施例的方面可以整体或部分地互换。此外，本领域的普通技术人员将理解，前述描述仅通过举例的方式说明，并且不旨在限制在所附权利要求中进一步描述的本发明。









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