((2S)-3-([1，1’-联苯]-4-基)-2-((羟基((1R)-1-(((1-(异丁酰氧基)乙氧基)羰基)氨基)乙基)磷酰基)甲基)丙酰基)-L-丙氨酸的二钠盐的工业制备方法与流程

有机化合物处理,合成应用技术((2s)-3-([1，1’‑联苯]-4-基)-2-((羟基((1r)-1-(((1-(异丁酰氧基)乙氧基)羰基)氨基)乙基)磷酰基)甲基)丙酰基)-l-丙氨酸的二钠盐的工业制备方法发明领域[0001]本发明涉及从(s)-1-苯乙胺制备((2s)-3-([1,1’‑联苯]-4-基)-2-((羟基((1r)-1-(((1-(异丁酰氧基)乙氧基)羰基)氨基)乙基)磷酰基)甲基)丙酰基)-l-丙氨酸的二钠盐的新颖工业方法。背景技术：[0002]指定为下式的化合物(i)的((2s)-3-([1,1’‑联苯]-4-基)-2-((羟基((1r)-1-(((1-(异丁酰氧基)乙氧基)羰基)氨基)乙基)磷酰基)甲基)丙酰基)-l-丙氨酸的二钠盐：[0003][0004]是((2s)-3-([1,1’‑联苯]-4-基)-2-((((r)-1-氨基乙基)(羟基)磷酰基)甲基)丙酰基)-l-丙氨酸氨基次膦酸(本说明书中指定的化合物(e))的前药，其是中性氨肽酶(nap)和脑啡肽酶(nep)的选择性双重抑制剂。[0005]化合物(i)已被bonnard等人在pharmacol.res.perspect.,2015,3(2),e00116中描述为具有重要的镇痛作用。[0006]化合物(i)及其作为镇痛剂的用途首次被描述于专利申请wo 2010/010106中。该申请中说明的方法使得能够从二苯甲胺盐酸盐在4个步骤中制备((r)-1-(((苄氧基)羰基)氨基)乙基)次膦酸(实施例1，步骤3)。该氨基次膦酸接下来与2-([1,1’‑联苯]-4-基甲基)丙烯酸反应，在另外6个步骤中得到化合物(i)。这种合成方法特别需要在最后一步进行冻干。[0007]与合成特别相关的技术方面，特别是冻干、当量的数量、使用某些难以处理的试剂和/或该过程中涉及的纯化技术，使得要将wo 2010/010106中所描述的合成路线达到产业规模是不可能的。特别地：[0008]-该方法第二步获得的外消旋化合物的(r)-甲基苄胺化学拆分步骤(参见实施例1，步骤3)强烈影响该步骤的产率，因为如baylis等人,j.chem.soc.,perkin trans.i 1984,p.2846-2853的出版物中所述，至少有一半的产物损失(86％的正确立体异构体被回收，占起始外消旋混合物的50％，即该步骤正确立体异构体的总产率为43％)；[0009]-还进行了皂化步骤(参见实施例3，步骤2)。这种特殊的反应难以在工业规模上实施，特别是由于产生了大量的苯甲醇，使分离变得困难并引入了重要杂质的形成；[0010]-必须在强酸性介质(于乙酸中的hbr 33％)中进行脱保护，以得到实施例3步骤2中所述的化合物。这种脱保护需要大量难以除去的腐蚀性酸；[0011]-硅胶柱纯化以除去步骤3的副产物(4-硝基苯酚)，从而得到实施例3步骤3中所述的化合物；[0012]-必须在倒数第二步期间将实施例3的步骤4的化合物脱保护以得到实施例4的化合物，然后在最后一步中将该实施例4的化合物成盐以得到化合物(i)；[0013]-此外，这种合成需要使用二苯甲胺作为起始产物，这对原材料的成本具有非常必然性的冲击。[0014]开发大规模有机合成的重要目标是找到完全可转换到工业条件的合成方法。在这方面，可以优化合成的不同参数，例如特别是溶剂，优选尽可能低的挥发性，以便易于回收；和使用的温度，最好在容易达到的温度范围内。不同中间体和产物的纯化可以以容易的方式和在与大规模相容的条件下进行也是有利的。最后，反应的混合物和产物优选是被分离的和热稳定的。[0015]良好生产规范(good manufacturing practices，gmp)已被定义用于制备可施用于人类或动物的药品。gmp指令要求采用质量方法进行制造，从而使企业能够最大限度地减少或消除污染、混淆和错误的情况。[0016]据发明人所知，迄今为止还没有描述可以合成化合物(i)的工业方法。因此，需要开发合成化合物(i)的方法，该方法可以容易且有效地适应工业规模，特别是不使用有毒溶剂、柱色谱和冻干的方法。此外，令人感兴趣的是，这种合成方法可以减少步骤数和相关原材料的成本。技术实现要素：[0017]本发明涉及工业制备具有下式(i)的((2s)-3-([1,1’‑联苯]-4-基)-2-((羟基((1r)-1-(((1-(异丁酰氧基)乙氧基)羰基)氨基)乙基)磷酰基)甲基)丙酰基)-l-丙氨酸的二钠盐的方法：[0018][0019]其中符号(1r)和(2s)表示它们在分子中所指的原子的位置以及它们的绝对构型。符号*表示手性碳。[0020]本发明的方法包括以下连续步骤：[0021](1)下式(a)化合物的制备：[0022][0023]通过：[0024](1a)极性和质子溶剂中的(s)-1-苯乙胺在与次磷酸h3po2和乙醛的水溶液在相对于(s)-1-苯乙胺的摩尔当量(多或少于0.1当量)的盐酸存在下反应，然后[0025](1b)用环氧丙烷处理由步骤(1a)得到的盐，然后[0026](1c)使用极性和质子溶剂结晶并通过过滤回收式(a)化合物，[0027](2)下式(b)化合物的制备：[0028][0029]通过：[0030](2a)在三甲基甲硅烷基源的存在下，源自步骤(1)的式(a)化合物与(2-(4-联苯)甲基)丙烯酸苄酯反应，然后[0031](2b)式(b)化合物的回收，其通过：[0032](2b.1)使用非极性非质子溶剂和水的混合物结晶，然后过滤，或[0033](2b.2)在丙酮中研磨，过滤并蒸发滤液。[0034](3)下式(c)化合物的制备：[0035][0036]其中p’是胺官能团的保护基团，[0037]通过：[0038](3a)式(b)化合物在氢气气氛下在相对于式(b)化合物重量10重量％的pd/c存在下氢解，然后[0039](3b)用保护基p’保护由步骤(3a)产生的胺并回收式(c)化合物，[0040](4)下式(e)化合物的制备：[0041][0042]通过：[0043](4a)式(c)化合物与(l)-丙氨酸的叔丁酯的肽偶联和下式(d)化合物的回收：[0044][0045](4b)n-末端位置的保护基p’和c-末端位置的叔丁基的去保护和式(e)化合物的回收，[0046](5)下式(f)化合物的制备：[0047][0048]其通过式(e)化合物与酰氧基烷基n-羟基琥珀酰亚胺在碱的存在下反应，然后[0049](6)通过在弱碱钠盐存在下在非极性非质子溶剂中沉淀来回收式(i)化合物。[0050]本发明的另一目的涉及工业制备式(e)的((2s)-3-([1,1’‑联苯]-4-基)-2-((((1r)-1-氨基乙基)(羟基)磷酰基)甲基)丙酰基)-l-丙氨酸，其包括如上定义的连续步骤(1)至(4)。[0051]本发明还涉及本发明式(e)化合物的工业制备方法的中间体的非对映异构体富集方法。[0052]本发明的另一个目的涉及例如如上所述的式(b)的合成中间体。[0053]发明详述[0054]在以下描述中，除非另有说明，所有百分比均以摩尔百分比表示。[0055]本发明涉及工业制备((2s)-3-([1,1’‑联苯]-4-基)-2-((((1r)-1-氨基乙基)(羟基)磷酰基)甲基)丙酰基)-l-丙氨酸和进一步的式(i)的((2s)-3-([1,1’‑联苯]-4-基)-2-((羟基((1r)-1-(((1-(异丁酰氧基)乙氧基)羰基)氨基)乙基)磷酰基)甲基)丙酰基)-l-丙氨酸的多步骤合成。[0056]“本发明的第一替代方案”指定这样的替代方案：根据该替代方案，式(b)化合物的合成涉及有利地直接在步骤(2a)之后进行实施步骤(2b.1)。因此不进行步骤(2b.2)。根据该替代方案，源自步骤(2b)的式(b)化合物的光学纯度(2s/2r)大于或等于95/5。接下来在合成化合物(c)、(d)和(e)的每个步骤(3)和(4)的过程中这种对映体富集被保留。因此，根据该第一替代方案，化合物(b)、(c)、(d)和(e)中的每一种对应于非对映异构体，例如在相应的式中表示的非对映异构体过量严格大于95％，更优选大于99％。[0057]“本发明的第二替代方案”指定这样的替代方案：根据该替代方案，式(b)化合物的合成涉及有利地直接在步骤(2a)之后进行步骤(2b.2)。因此不进行步骤(2b.1)。根据该替代方案，源自步骤(2b)的式(b)化合物的光学纯度(2s/2r)严格大于50/50且小于或等于95/5，特别是介于51/49和60/40之间。根据该第二替代方案，可以在步骤(3)和(4)中的每一个之后进行非对映异构体富集步骤，以增加化合物(c)和(e)中的每一种的非对映异构体过量。[0058]根据本发明，除非另有说明，否则化合物(a)、(f)和(i)对应于对映异构体或非对映异构体，例如在相应式中表示的对映异构体或非对映异构体过量有利地严格大于95％，更优选大于99％。[0059]应注意术语“对映异构体过量”或“非对映异构体过量”可与术语“光学纯度”和“手性纯度”互换。“大于y/z的光学纯度(xr/xs)”在本发明的意义上是指在x位的原子是手性中心，该手性中心被发现有y％呈r型以及有z％呈s型。[0060]“光学纯度xr/xs严格大于50/50”在本发明的意义上是指发现对映异构体xr的比例严格大于对映异构体xs。[0061]“浓盐酸”在本发明的意义上是指包含按重量计33％至37％的盐酸的盐酸水溶液，优选地，它是按重量百分比计37％的浓溶液。[0062]“三甲基甲硅烷基源”在本发明的意义上是指能够提供一个或多个式-si(ch3)3的三甲基甲硅烷基(tms)基团的化合物。换言之，当它与另一种化合物反应时，tms源化合物可以将一个或多个tms基团传递给所述化合物。这些tms源化合物通常用作用tms基团保护官能团(例如羟基或胺)的试剂。tms源化合物的实例是n,o-双(三甲基甲硅烷基)乙酰胺(bsa)、tms氯化物(tmscl)、tms三氟甲磺酸酯(tmsotf)和六甲基二硅氮烷(hmds)。[0063]“室温”在本发明的意义上是指介于15℃和30℃之间、优选在18℃和25℃之间的温度。[0064]除非另有说明，否则本说明书中的词语“当量”指定摩尔当量。[0065]“保护基”在本发明的意义上是指能够保护反应性化学官能团免受不希望的反应的基团，例如t.w.greene,“protective groups in organic synthesis”,(john wiley&sons,new york(1981))以及harrison等人“compendium of synthetic organic methods”,vols.1to 8(j.wiley&sons,1971至1996)中描述的基团。[0066]“部分外消旋化”在本发明的意义上是指将所谓的“纯”对映异构体(即具有对映异构体过量至少95％，优选至少99％)转化为同一化合物的两种对映异构体的混合物，两种对映异构体的数量不等，相较于另一者，具有占多数的对映异构体，这与两种对映异构体将以相同数量存在的总外消旋化不同(然后指定为外消旋混合物)。[0067]在本发明中，表述“在第二个碳上”是指根据iupac标记法在2位上标注的碳，例如上面式(b)、(c)、(d)、(e)、(f)和(i)中表示的带有甲基-联苯基。[0068]在本说明书中使用以下缩写：[0069]bn：苄基，[0070]hplc：高效液相色谱，[0071]tms：三甲基甲硅烷基，[0072]bsa：n,o-双(三甲基甲硅烷基)乙酰胺，[0073]tmsotf：tms三氟甲磺酸酯，[0074]hmds：六甲基二硅氮烷，[0075]mtbe：甲基叔丁基醚，[0076]thf：四氢呋喃，[0077]dmf：二甲基甲酰胺，[0078]boc：叔丁氧羰基，[0079]cbz：苄氧羰基，[0080]tbtu：2-(1h-苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基胺鎓四氟硼酸盐，[0081]hatu：(二甲基氨基)-n,n-二甲基(3h-[1,2,3]三唑并[4,5-b]吡啶-3-基氧基)甲亚胺鎓六氟磷酸盐，[0082]bop：苯并三唑-1-基氧基三(二甲基氨基)鏻六氟磷酸盐，[0083]pybop：苯并三唑-1-基氧基三吡咯烷基鏻六氟磷酸盐，[0084]hobt：羟基苯并三唑，[0085]dcc：二环己基碳二亚胺，[0086]edc：1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺，[0087]dipea：二异丙基乙基胺，[0088]pd/c：钯/碳。[0089]式(e)的化合物的制备的方法[0090]本发明的目的涉及工业制备下式(e)的((2s)-3-([1,1’‑联苯]-4-基)-2-((((r)-1-氨基乙基)(羟基)磷酰基)甲基)丙酰基)-l-丙氨酸的方法：[0091][0092]包括下列步骤：[0093][0094]步骤(1)：通过(s)-1-苯乙胺与次磷酸h3po2和乙醛的溶液在摩尔当量的浓盐酸存在下反应然后用环氧丙烷处理来合成化合物(a)；[0095]步骤(2)：通过式(a)化合物与(2-(4-联苯)甲基)丙烯酸苄酯反应合成式(b)化合物；[0096]步骤(3)：通过式(b)化合物在pd/c存在下氢解并用基团p’保护所得胺来合成式(c)化合物；[0097]步骤(4)：通过式(c)化合物与(l)-丙氨酸的叔丁酯的肽偶联然后保护基团的脱保护来合成式(e)化合物。[0098]步骤(1)[0099]式(a)化合物已在hamilton等人，tet.lett.,1995,36,4451-4454，氨基膦酸的一般合成中被引述，但在所述出版物中没有作为实例进行描述。据发明人所知，式(a)化合物因此从未被预先表征过。该出版物的作者指出，对于这个特定实例，所使用的反应条件“产生了深色溶液，无法从中分离出任何产物”。该出版物描述了水解-氧化方法以合成α-氨基膦酸而不是如本技术中的氨基次膦酸。还表明，通过氢解去除有机磷化合物的胺官能团上的保护基团可能是有问题的。[0100]本发明的发明人以令人惊讶的方式发现，在步骤(1a)期间使用一当量的hcl可以避免反应混合物的降解。[0101]一当量的hcl(多或少于0.1当量)的存在是本发明合成的基本参数。在其不存在的情况下，观察到降解。[0102]本发明方法的步骤(1)包括如上文和下图中所述的步骤(1a)至(1c)。[0103][0104]在申请wo2010/010106中，意在与(2-(4-联苯)甲基)丙烯酸苄酯反应的(1r)(1-苄氧基羰基氨基-乙基)-次膦酸手性前体通过以下4步获得：在(r)(+)α-甲基苄胺存在下拆分外消旋次膦酸，总收率为28％(参见实施例1)。在(r)(+)α-甲基苄胺存在下通过外消旋化合物的重结晶来拆分的步骤是造成总产率低的显著原因，因为根据定义，对应于不希望的对映异构体的产物的50％没有回收。此外，将这种类型的手性拆分转换为工业规模并不可能提高产率。[0105]在本发明中，手性在合成开始时由步骤(1a)中的起始试剂(s)-1-苯乙胺直接诱导。本发明中使用的(s)-1-苯乙胺是市售品(例如sigma-aldrich出售)，手性纯度至少为98％，优选为99％。根据本发明，手性纯度至少为90％的(s)-1-苯乙胺也可用于引入手性。[0106](s)-1-苯乙胺与次磷酸h3po2和无水乙醛(即化学纯度大于或等于99％)的水溶液在相对于(s)-1-苯乙胺的量的摩尔当量的盐酸存在下在极性和质子溶剂中反应。[0107]步骤(1a)中使用的盐酸有利地对应于浓盐酸的水溶液，这尤其可以避免反应混合物的稀释。优选地，该溶液是37重量％的浓盐酸。[0108]根据优选的实施方案，步骤(1a)的极性和质子溶剂选自醇类，例如甲醇、乙醇、正丙醇、异丙醇、正丁醇、叔丁醇及其混合物。优选地，其是乙醇。[0109]优选地，步骤(1a)首先包括将盐酸溶液(有利地浓缩的)添加到(s)-1-苯乙胺在如上文所定义的极性和质子溶剂中的溶液中，然后向(s)-1-苯乙胺与盐酸的混合物中添加次磷酸溶液，最后在(s)-1-苯乙胺、盐酸和次磷酸的混合物中加入无水乙醛。[0110]有利地，次磷酸水溶液是50重量％的溶液。有利地，次磷酸的加入量相对于(s)-1-苯乙胺介于1和2当量之间，优选在1.1和1.5当量之间，更优选1.1当量。[0111]相对于(s)-1-苯乙胺，乙醛的添加量优选介于1和2当量之间，优选在1.2和1.5当量之间，更优选1.2当量。通常使用无水乙醛。[0112]在一个有利的实施方案中，在添加浓盐酸溶液和次磷酸溶液期间，(s)-1-苯乙胺溶液的温度介于-5℃和5℃之间，优选为0℃。[0113]将所得反应混合物搅拌足够时间，以使(s)-1-苯乙胺的转化率大于或等于90％。反应的监测通过hplc得到显著保证。优选地，该时间包括介于1h和8h之间，优选地在3h和6h之间，更优选地在3h和4h之间。所述搅拌有利地在所用溶剂的沸点温度(多或少于5℃)进行。[0114]步骤(1a)优选在惰性气氛下进行，例如在氮气或氩气气氛下。[0115]在步骤(1b)中，将环氧丙烷加入到由步骤(1a)产生的反应混合物中。因此，步骤(1b)通常包括以下连续步骤：[0116](1b.1)将环氧丙烷添加到源自步骤(1a)的反应混合物中并获得悬浮液，[0117](1b.2)搅拌源自步骤(1b.1)的悬浮液，[0118](1b.3)通过过滤来自步骤(1b.2)的悬浮液回收固体。[0119]相对于(s)-1-苯乙胺，环氧丙烷的加入量有利地介于1和4当量之间，优选在1.5和3当量之间，更优选2当量。该添加优选在介于0℃和15℃之间的温度进行，特别是在10℃。所得混合物通常搅拌持续介于5小时和25小时之间，优选8小时和18小时之间，特别是10小时和14小时之间的时间，特别是在室温搅拌。[0120]在步骤(1b)结束时通过过滤回收固体。然后通过悬浮在极性和质子溶剂中使所述固体结晶。通常，其与步骤(1a)中使用的溶剂相同。[0121]有利地，结晶步骤(1c)包括以下连续步骤：[0122](1c.1)将源自步骤(1b)的固体稀释在极性和质子溶剂中，优选选自醇类，例如甲醇、乙醇、正丙醇、异丙醇、正丁醇、叔丁醇及其混合物，有利地乙醇，[0123](1c.2)将由步骤(1c.1)产生的混合物冷却至介于10℃和20℃之间的温度，[0124](1c.3)在过滤和干燥后，特别是在真空下回收化合物(a)。[0125]在具体实施方案中，在步骤(1b)结束时通过过滤直接回收化合物(a)，而无需步骤(1c)。[0126]在另一个实施方案中，任选地重复步骤(1c)，特别是一次。[0127]在另一个具体实施方案中，得自步骤(1b)的固体用极性和质子溶剂洗涤，然后干燥，特别是在真空下干燥，得到式(a)化合物的第一部分。根据该实施方案，来自步骤(1b)的过滤的滤液被浓缩，特别是在真空下，得到湿浆液，其本身根据上述步骤(1c.1)至(1c.3)结晶。[0128]根据本发明，与在wo2010/010106中描述方法相比(其中意在与(2-(4-联苯)甲基)丙烯酸苄酯反应的手性前体(1r)(1-苄氧基羰基氨基-乙基)-次膦酸在4个反应步骤后的总产率为28％)反应中得到意在与(2-(4-联苯)甲基)丙烯酸苄酯反应的次膦酸手性前体衍生物的平均产率为38-40％。[0129]在步骤(1)结束时获得的式(a)化合物的光学纯度(1r/1s)大于95/5，优选大于96/4，更优选大于97/3，甚至更优选大于98/2，甚至更优选大于99/1。[0130]步骤(2)[0131]本发明方法的步骤(2)包括如上文和下图中所述的步骤(2a)和(2b)。[0132][0133]在步骤(2a)中，源自步骤(1)的式(a)化合物因此与(2-(4-联苯)甲基)丙烯酸苄酯在三甲基甲硅烷基源的存在下反应。有利地，该三甲基甲硅烷基源选自n,o-双(三甲基甲硅烷基)乙酰胺(bsa)、tms氯化物(tmscl)、tms三氟甲磺酸酯(tmsotf)和六甲基二硅氮烷(hmds)，优选为n,o-双(三甲基甲硅烷基)乙酰胺(bsa)。三甲基甲硅烷基源使得可以在仲胺和式(a)化合物的羟基官能团上引入tms基团，以使磷原子是唯一与2-(4-联苯)甲基)丙烯酸苄基酯的丙烯酸酯官能团反应的原子。[0134](2-(4-联苯)甲基)丙烯酸苄酯是根据申请wo2010/010106(参见实施例2，该方法使用organic synthesis coll..第3卷第337页中所描述的方案)中描述的方法获得的。[0135]优选地，步骤(2a)首先包括将式(a)化合物与(2-(4-联苯)甲基)丙烯酸苄酯混合，然后将三甲基甲硅烷基源添加到所述混合物中。[0136]有利地，三甲基甲硅烷基源的添加量相对于式(a)化合物介于2当量和6当量之间，优选3当量和4.5当量之间，更优选3.2当量。根据本发明，使用的三甲基甲硅烷基源(通常是bsa)的量因此受到限制，这在成本和去除未反应的试剂的量或由这些量产生的杂质方面是有利的，这与其中bsa用作溶剂，因此大大过量的申请wo2010/010106不同。[0137](2-(4-联苯)甲基)丙烯酸苄酯的加入量相对于式(a)化合物优选介于1和2当量之间，优选在1和1.5当量之间，更优选1当量。[0138]将包含式(a)化合物、(2-(4-联苯)甲基)丙烯酸苄酯和三甲基甲硅烷基源的反应混合物搅拌足够时间，以使式(a)化合物的转化大于或等于90％。hplc尤其确保了对反应的监测。优选地，该时间介于1h和8h之间，优选地在3h和6h之间，更优选地在3h和4h之间。所述搅拌有利地在介于40℃和120℃之间、优选在60℃和100℃之间、更优选在75℃和85℃之间的温度进行。[0139]步骤(2a)优选在惰性气氛下进行，例如在氮气或氩气气氛下。[0140]接着在步骤(2b)期间回收式(b)化合物。[0141]根据本发明的第一替代方案，步骤(2b)对应于结晶步骤(2b.1)。根据该替代方案，因此有利地直接在步骤(2a)之后是步骤(2b.1)。在该第一替代方案中，不进行步骤(2b.2)。[0142]结晶步骤(2b.1)通常包括以下连续步骤：[0143](2b.1.1)将源自步骤(2a)的反应混合物冷却至介于20℃和40℃之间的温度，[0144](2b.1.2)用非极性非质子溶剂和水的混合物稀释所述反应混合物并形成悬浮液，[0145](2b.1.3)通过过滤源自步骤(2b.1.2)的悬浮液并干燥，特别是在真空下，回收式(b)的化合物。[0146]根据该替代方案，式(b)化合物因此在非极性非质子溶剂和水的混合物中结晶。非极性非质子溶剂特别选自烃，例如己烷、庚烷、醚例如乙醚、二异丙醚、甲基叔丁基醚(mtbe)和四氢呋喃(thf)，以及它们的混合物。特别是mtbe。步骤(2b.1.2)的结晶溶剂因此优选为mtbe/水混合物，特别是比例为5/3。[0147]反应混合物中水的存在尤其使得有可能脱保护tms官能团。在沉淀步骤之前，溶液中的化合物(b)未富集或略微富集非对映异构体(1r，2s)。第二个碳上的非对映异构体的比例(1r，2s/1r，2r)例如通过13p nmr测定为60/40。[0148]在步骤(2b.1.2)期间，将稀释在非极性非质子溶剂和极性溶剂的混合物中的所述反应混合物搅拌足够时间以使化合物(b)沉淀，该时间通常介于2h和24h之间，优选12h。[0149]在所述条件中，步骤(2b.1.2)的结晶是非对映选择性的，这表明与非对映异构体(1r，2r)相比，所需的构型(1r，2s)的非对映异构体以大多数方式沉淀。因此，在步骤(2)结束时获得的式(b)化合物大部分为(1r，2s)。[0150]“大部分”或“以大多数方式”在本发明的意义上是指以与非对映异构体(1r，2r)相比严格大于50％的比例获得的非对映异构体(1r，2s)。[0151]根据本发明的第一替代方案，源自步骤(2b.1)的式(b)化合物在第二个碳上的光学纯度(2s/2r)大于95/5，优选大于96/4，更优选大于97/3，甚至更优选大于98/2，甚至更优选大于99/1。[0152]根据本发明，由与(2-(4-联苯)甲基)丙烯酸苄酯反应得到的式(b)化合物的平均收率为54％。与在申请wo 2010/010106中描述的源自与(2-(4-联苯)甲基)丙烯酸苄酯的反应的化合物的结晶步骤的79％相比(参见实施例3，步骤1)，考虑到在步骤(2a)结束时获得的60/40量级的第二个碳的非对映异构体比率(2s/2r)，结晶步骤(2b.1)的平均产率为90％量级。[0153]根据本发明的第二替代方案，步骤(2b)对应于步骤(2b.2)。因此，有利地步骤(2a)之后直接为步骤(2b.2)。在该第二替代方案中，不进行步骤(2b.1)。[0154]步骤(2b.2)通常包括以下连续步骤：[0155](2b.2.1)蒸发源自步骤(2a)的反应混合物并回收固体，[0156](2b.2.2)在丙酮中研磨源自步骤(2b.2.1)的固体，过滤并通过蒸发回收滤液中的式(b)化合物。[0157]通常，源自步骤(2b.2.1)的固体对应于所谓“原”式(b)的化合物，即具有第二个碳的光学纯度(2s/2r)有利地严格大于50/50且小于或等于95/5，通常介于51/49和70/30之间，特别是57/43。[0158]步骤(2b.2.2)对应于式(b)化合物的非对映异构体富集步骤。[0159]根据优选实施方案，步骤(2b.2.2)的研磨进行介于30min和2h之间的持续时间，通常为1小时。所述步骤的温度明显等于室温。[0160]在该研磨步骤期间，构型(1r，2r)的非对映异构体以大多数方式沉淀，并且所需的构型(1r，2s)的非对映异构体以大多数方式在滤液中回收。[0161]通常，在步骤(2b.2.2)结束时，在滤液中获得的式(b)化合物在第二碳(2s/2r)上的光学纯度介于70/30和90/10之间，优选在80/20和90/10之间，特别是81/19。[0162]步骤3[0163]本发明方法的步骤3包括如上文和下图中所述的步骤(3a)和(3b)。[0164][0165]步骤(3a)包括在钯碳(pd/c)存在下的氢解，使得存在于式(b)化合物上的苄基和1-苯乙基可以脱保护。在申请wo2010/010106中，3-[(2-苄氧基羰基-3-联苯基-4-基-丙基)-羟基-磷酰基]丁酸苄基酯的苄基和羧基苄基的脱保护通过在大量氢氧化钠存在下进行皂化(参见实施例3，步骤2)完成。然而，这种皂化难以在工业规模上实施，因为产生的苯甲醇的量会产生三相介质，使得反应中间体的分离变得困难并且可能产生必然量的杂质。[0166]根据本发明，通过氢解脱保护不会产生苯甲醇，而是容易通过减压蒸发除去的副产物，例如甲苯和乙苯，因此证明更适合工业规模的合成。[0167]根据本发明的苄基和1-苯乙基的连续脱保护如下图所示：[0168][0169]其中x+表示源自所用碱的抗衡离子。[0170]有利地，步骤(3a)包括以下连续步骤：[0171](3a.1)制备包含式(b)化合物在质子溶剂或质子溶剂混合物中的悬浮液，[0172](3a.2)向步骤(3a.1)制备的悬浮液中添加碱，[0173](3a.3)向由步骤(3a.2)产生的悬浮液中添加相对于式(b)化合物的重量为10重量％的pd/c，并用h2吹扫所得反应混合物，[0174](3a.4)过滤和浓缩反应混合物。[0175]根据优选实施方案，步骤(3a.1)在选自水、乙酸、醇例如甲醇、乙醇、正丙醇、异丙醇、正丁醇、异丁醇和叔丁醇及其混合物的质子溶剂中进行。优选地，其是水/醇混合物，特别是水/乙醇。[0176]有利地，步骤(3a.2)中的碱选自三乙胺、三甲胺、二异丙基乙胺、氢氧化钠(naoh)、氢氧化钾(koh)、氢氧化锂(lioh)、二氢氧化钡(ba(oh)2)、二氢氧化钙(ca(oh)2)和二氢氧化铯(cs(oh)2)，优选为氢氧化钠，特别是1n氢氧化钠。[0177]根据优选实施方案，在添加所述强碱期间，源自步骤(3a.1)的悬浮液处于介于-10℃和10℃之间，优选-5℃和5℃之间的温度，更优选在0℃。[0178]强碱有利地以相对于式(b)化合物介于1和2当量之间、优选1和1.5当量之间、更优选1当量的量添加到源自步骤(3a.1)的悬浮液中。[0179]由步骤(3a.2)产生的混合物通常在室温搅拌足以观察到完全溶解的时间，尤其是介于1小时和5小时之间的时间。[0180]在向反应混合物中加入pd/c之后，所述混合物有利地用氮气或氩气吹扫，然后用h2吹扫。[0181]根据一个实施方案，将由步骤(3a.3)产生的反应混合物在介于15℃和40℃之间，优选在20℃和30℃之间的温度搅拌介于15h和30h之间，优选18h和25h之间，更优选18h的时间。该搅拌通常在1巴h2的压力下进行。[0182]在一个具体的实施方案中，在足以使苄基脱保护的时间之后但在苯乙基的脱保护发生之前停止搅拌由步骤(3a.3)产生的反应混合物。在这种情况下，胺官能团仍然受到苯乙基的保护，步骤(3b)不是必需的。[0183]在步骤(3a.4)期间，过滤反应混合物以除去pd/c。接着例如在真空下浓缩滤液以除去部分溶剂，特别是醇。[0184]在文献中有所描述，例如在baylis等人，j.chem.soc.,perkin trans.i 1984,p.2846-2853的出版物中，次膦酸是一种pd催化剂毒物。这就是为什么需要使用大量的pd/c，如wo2010/010106中所述用于合成实施例4(pl265)，其中使用50重量％的10％pd/c。这么大的量有时会导致p-c键的氢化。在本发明的情况下，对于式(c)化合物的合成，使用例如上述步骤(3a.2)所述的碱控制碱性ph，使得能够使用仅10重量％的钯/碳。[0185]步骤(3b)在于使用标记为p’的保护基保护存在于源自步骤(3a)的反应中间体上的伯胺官能团。该保护是根据本领域技术人员熟知的方法进行的。[0186]根据优选实施方案，保护步骤(3b)在碱性介质中进行，优选通过添加强碱如naoh、lioh、koh、ba(oh)2、ca(oh)2或csoh。特别地，反应的ph值介于10和11之间。过酸的ph值可能导致形成极性杂质，而高于11的ph值会使试剂降解，从而可能引入保护基团p’。[0187]有利地，基团p’选自苄氧羰基(cbz)和叔丁氧羰基(boc)基团，分别产生下式(c-a)和(c-b)的化合物：[0188][0189]cbz基团特别地用相应的氯化物cbzcl引入到式(b)化合物上。使用酸酐boc2o在式(b)化合物上特别地引入boc基团。[0190]根据本发明，式(c)化合物以介于50％至85％之间的产率获得。具体而言，式(c-a)化合物以73％的平均产率获得，式(c-b)化合物以84％的平均产率获得。[0191]根据如上所述的本发明的第一替代方案，即根据如上所述进行步骤(3a)和(3b)同时在步骤(3a)中使用在步骤(2b.1)之后获得并具有光学纯度(2s/2r)大于95/5的式(b)化合物。根据该第一替代方案，在步骤(3b)之后直接获得的具有构型(1r，2s)的式(c)化合物在第二个碳上的光学纯度(2s/2r)大于95/5，优选大于96/4，更优选大于97/3，甚至更优选大于98/2，甚至更优选大于99/1。[0192]根据本发明的该第一替代方案，式(c)化合物特别以介于70％和85％之间的产率获得。具体而言，式(c-a)化合物以73％的平均产率获得，式(c-b)化合物以84％的平均产率获得。[0193]根据该第一替代方案，式(c)化合物在步骤(3b)结束时被回收并直接用于随后的步骤(4)中而无需纯化且无需其他中间步骤。[0194]根据本发明的第二替代方案，如上所述进行步骤(3a)和(3b)同时在步骤(3a)中使用在步骤(2b.2)结束时获得并且具有在第二个碳上的光学纯度(2s/2r)严格大于50/50且低于95/5，通常介于70/30和90/10之间，特别是81/19的式(b)化合物。。[0195]根据该第二替代方案，另外的式(c)化合物的非对映异构富集步骤在步骤(3b)之后进行。因此，本发明的方法可以直接在步骤(3b)之后包括以下另外的步骤(3c)：[0196](3c)将式(c)化合物在水/mtbe混合物中研磨，然后过滤并干燥。[0197]根据优选实施方案，步骤(3c)的研磨进行介于30min和2h之间的持续时间，通常进行1h。所述步骤的温度特别地等于室温。[0198]步骤(3c)中水/mtbe混合物的体积比通常介于1/5和1/1之间，优选3/5。[0199]通常，根据本发明的第二替代方案，在步骤(3c)结束时获得的式(c)化合物在第二个碳上的光学纯度(2s/2r)介于80/20和99/1之间，优选在90/10和95/5之间，特别是93/7。根据本发明的第二替代方案，式(c)化合物以53％量级的产率获得。[0200]第4步[0201]本发明方法的步骤4包括如上文和下图中所述的步骤(4a)和(4b)。[0202][0203]有利地，步骤(4a)包括以下连续步骤：[0204](4a.1)将(l)-丙氨酸叔丁酯和肽偶联剂添加到包含溶解在dmf或thf/dmf混合物中的式(c)化合物的溶液中，[0205](4a.2)向由步骤(4a.1)产生的反应混合物中加入碱，[0206](4a.3)回收下式(d)化合物：[0207][0208]其中p’如上所定义或对应于苯乙基。[0209]在步骤(4a.1)中引入的肽偶联剂通常选自tbtu、hatu、edc、hobt、bop、pybop、dcc及其组合。[0210]步骤(4a.1)优选在室温进行。当在步骤(4a.1)中使用thf/dmf混合物时，其优选是1/1体积的混合物。[0211]步骤(4a.2)中引入的碱优选选自三乙胺、二异丙基乙胺(dipea)和2,2,6,6-四甲基哌啶，其优选为dipea。[0212]根据优选的实施方案，在步骤(4a.2)加入碱期间，源自步骤(4a.1)的反应混合物的温度介于0℃和15℃之间，优选5℃和10℃之间。在加入碱期间(通常放热)保持所述温度.[0213]根据有利的实施方案，将由步骤(4a.2)产生的反应混合物搅拌足够的时间使得式(c)化合物的转化率大于或等于95％。hplc尤其确保了对反应的监测。优选地，该时间介于30min和2h之间，优选30min和1h之间，更优选45min，温度介于0℃和15℃之间，优选5℃和10℃之间。[0214]在本领域技术人员熟知的酸-碱洗涤、有机相萃取和过滤操作后回收式(d)化合物。[0215]在优选的方式中，式(d)化合物对应于以下化合物(d-a)和(d-b)：[0216][0217]以介于60％和90％之间的产率获得式(d)化合物。[0218]基团p’的脱保护步骤(4b)优选在惰性气氛下，例如在氮气或氩气气氛下进行。[0219]在具体实施方案中，当p’是cbz基团时，步骤(4b)包括以下连续步骤：[0220](4b.1)下式化合物(d-a)与乙酸中的hbr反应：[0221][0222]然后[0223](4b.2)使用选自乙酸乙酯、乙酸异丙酯、醚及其混合物的溶剂进行沉淀，并通过过滤回收式(e)化合物。[0224]在优选方式中，步骤(4b.1)包括以下连续步骤：[0225](4b.1.1)将式(d-a)化合物与乙酸混合，[0226](4b.1.2)以hbr在乙酸中的溶液形式添加氢溴酸，[0227](4b.1.3)将所得混合物搅拌足够时间以使式(d-a)化合物的转化率大于或等于95％。[0228]相对于化合物(d-a)，氢溴酸hbr的添加量优选介于6和10当量之间，优选6和8当量之间，更优选为6当量。在浓缩过程中，大于10当量的氢溴酸的量会导致产物部分外消旋。需要最少6个当量，以便完全脱保护。相比之下，在申请wo2010/010106(参见实施例3，步骤2)中使用在乙酸中的hbr的类似脱保护步骤使用了28当量的hbr。本发明中使用的量尤其能够更容易地去除剩余的酸，尤其是通过蒸发。[0229]在优选的实施方案中，在添加氢溴酸期间，由步骤(4b.1.1)产生的混合物的温度介于5℃和20℃之间，优选10℃和15℃之间。在添加hbr期间和步骤(4b.1.3)期间，温度保持在20℃以下，优选在15℃和20℃之间。高于20℃的温度会导致所得产物的部分外消旋化。[0230]将由步骤(4b.1.2)产生的反应混合物搅拌足够的时间以使(s)-1-苯乙胺的转化率大于或等于95％。hplc尤其确保了对反应的监测。优选地，该时间介于2h和8h之间，优选地在3h和6h之间，更优选地在5h和6h之间。[0231]步骤(4b.2)中的醚优选选自二异丙醚、四氢呋喃、甲基叔丁基醚、二噁烷、二乙醚、石油醚及其混合物。[0232]优选地，步骤(4b.2)的溶剂对应于二异丙醚。[0233]在另一个具体的实施方案中，当p’是boc基团时，步骤(4b)包括以下连续步骤：[0234](4b.1’)下式化合物(d-b)与甲酸反应：[0235][0236]形成油状物，[0237](4b.2’)将步骤(4b.1’)产生的油状物在非极性非质子溶剂中研磨并通过过滤回收式(e)化合物。[0238]在优选方式中，步骤(4b.1’)包括以下连续步骤：[0239](4b.1’.1)将式(d-b)化合物与甲酸混合，[0240](4b.1’.2)在介于40℃和60℃之间、优选于50℃的温度搅拌所得溶液介于1h和4h之间、优选2h的时间，[0241](4b.1’.3)浓缩溶液，特别是在真空下，直到获得油状物。[0242]在步骤(4b.1’.1)中，甲酸优选以相对于式(d-b)化合物介于20和40当量之间，优选20和30当量之间，更优选26当量的比例添加。所用的甲酸通常是88体积％甲酸的水溶液。[0243]甲酸的优点是酸性不强，腐蚀性不强，易于去除，因此特别适合工业规模合成。[0244]在有利的方式中，步骤(4b.2’)的非极性非质子溶剂选自己烷、庚烷、二异丙醚、mtbe及其混合物，优选为mtbe。[0245]式(e)化合物通常以介于90％和95％之间的产率获得。[0246]根据如上所述的本发明的第一替代方案，包括进行步骤(2b.1)，其中不进行步骤(2b.2)和(3c)，并且根据第一替代方案，进行如上所述的步骤(4b)和(4b)同时在步骤(4a)中使用源自步骤(3b)并且在第二个碳上具有的光学纯度(2s/2r)大于95/5，优选大于96/4，更优选大于97/3，甚至更优选大于98/2，甚至更优选大于99/1的式(c)化合物。根据该第一替代方案，构型(1r，2s，l-ala)的式(d)化合物在第二个碳上的光学纯度(2s/2r)大于95/5，优选大于96/4，更优选大于97/3，甚至更优选大于98/2，甚至更优选大于99/1，并且构型(1r，2s，l-ala)的式(e)化合物在第二个碳上具有的光学纯度(2s/2r)也大于95/5，优选大于96/4，更优选大于97/3，甚至更优选大于98/2，甚至更优选大于99/1。[0247]根据如上所述的本发明的第二替代方案，包括进行步骤(2b.2)和另外的步骤(3c)，其中不进行步骤(2b.1)，并且其中进行如上所述的步骤(4a)和(4b)同时在步骤(4a)中使用源自步骤(3c)并且在第二个碳上具有的光学纯度(2s/2r)严格大于50/50且小于或等于95/5，优选介于90/10和95/5之间，特别地93/7的式(c)化合物。根据该第一替代方案，构型(1r，2s，l-ala)的式(d)化合物的光学纯度介于80/20和99/1之间，优选90/10和95/5之间。[0248]根据该第二替代方案，式(e)化合物的非对映异构富集的另外的步骤在步骤(4b)之后进行。因此，本发明的方法可以直接在步骤(4b)之后包括以下另外的步骤(4c)：[0249](4c)在二氯甲烷中研磨式(e)化合物。[0250]根据优选实施方案，步骤(4c)的研磨进行介于30min和2h之间的持续时间，通常为1h。所述步骤的温度特别地等于室温。[0251]通常，在步骤(4c)结束时获得的式(e)化合物在第二个碳上的光学纯度(2s/2r)介于90/10和99/1之间，特别是94/6。[0252]式(i)化合物的制备方法[0253]本发明的另一目的涉及工业化制备下式(i)的((2s)-3-([1,1’‑联苯]-4-基)-2-((羟基((1r)-1-(((1-(异丁酰氧基)乙氧基)羰基)氨基)乙基)磷酰基)甲基)丙酰基)-l-丙氨酸的二钠盐的方法：[0254][0255]包括下列步骤：[0256][0257]步骤(1)至(4)：如前所述，[0258]步骤(5)：式(f)化合物的合成，其通过式(e)化合物与酰氧基烷基n-羟基琥珀酰亚胺在碱的存在下反应；[0259]步骤(6)：通过在弱碱钠盐存在下在非极性非质子溶剂中沉淀来回收式(i)化合物。[0260]因此，式(i)化合物的工业制备方法包括如上文所定义的连续步骤(1)至(4)(根据上述第一和第二替代方案中的一个或另一个)以及直接地在步骤(4)之后，于以下更详细地报导的步骤(5)和(6)。[0261]步骤5[0262]根据本发明的步骤5包括使式(e)化合物与酰氧基烷基n-羟基琥珀酰亚胺在碱存在下反应生成式(f)化合物，如下图所述：[0263][0264]步骤(5)有利地包括以下连续步骤：[0265](5a)式(e)化合物与酰氧基烷基n-羟基琥珀酰亚胺在碱存在下在极性非质子溶剂中反应，[0266](5b)使用非质子非极性溶剂结晶并通过过滤回收式(f)化合物。[0267]在优选的方式中，步骤(5a)包括以下连续步骤：[0268](5a.1)将式(e)化合物在极性非质子溶剂中溶解，[0269](5a.2)将酰氧基烷基n-羟基琥珀酰亚胺加入到由步骤(5a.1)产生的溶液中，[0270](5a.3)将碱添加到由步骤(5a.2)产生的溶液中。[0271]式(e)化合物与酰氧基烷基n-羟基琥珀酰亚胺(cas 860035-3-10-5)反应生成副产物n-羟基琥珀酰亚胺，其容易通过水洗除去。酰氧基烷基的引入不需要通过几乎不适合工业规模合成的硅胶柱纯化，这与申请wo2010/010106中描述的其中产生4-硝基苯酚并因此需要在硅胶上纯化的合成不同。[0272]在步骤(5a.1)中，式(e)化合物的溶解优选在室温进行。[0273]极性非质子溶剂特别地选自dmf、dmso、丙酮和乙酸乙酯，优选dmf。[0274]有利地，将酰氧基烷基n-羟基琥珀酰亚胺以相对于式(e)化合物介于1和2当量之间，优选1和1.5当量之间，更优选1当量的量加入到由步骤(5a.1)产生的溶液中。[0275]优选地，加入n-羟基琥珀酰亚胺期间，由步骤(5a.1)产生的溶液的温度介于0℃和15℃之间，优选5℃和10℃之间。[0276]在步骤(5a.3)期间引入的碱尤其选自三乙胺、二异丙基乙胺(dipea)和2,2,6,6-四甲基哌啶，特别是三乙胺。[0277]在加入碱期间，反应混合物的温度保持在低于15℃，优选在10℃和15℃之间的温度。[0278]优选地，与式(e)的化合物相比，将碱以介于1和4当量之间、优选2和3当量之间、特别是2和2.5当量之间的量添加到由步骤(5a.2)产生的溶液中。[0279]将由步骤(5a.3)产生的反应混合物搅拌足够时间以使式(f)化合物的转化率大于或等于95％。hplc尤其确保了对反应的监测。优选地，该时间介于1h和8h之间，优选地在4h和6h之间，更优选地在4h和5h之间。所述搅拌有利地在介于10℃和20℃之间、优选在15℃和20℃之间的温度进行。[0280]可以在步骤(5a)和(5b)之间进行本领域技术人员熟知的酸-碱洗涤(特别是酸性洗涤)和在有机相中萃取的操作。[0281]用于步骤(5b)中结晶的非极性非质子溶剂通常选自烃类，例如己烷、庚烷、醚例如乙醚、二异丙醚、甲基叔丁基醚(mtbe)和四氢呋喃(thf)以及它们的混合物。特别是二异丙醚。[0282]通常，结晶在室温进行。[0283]在特别有利的方式中，在步骤(5b)之前，将极性非质子溶剂如dmf、dmso、丙酮、乙酸乙酯、乙酸异丙酯及其混合物，优选乙酸乙酯或乙酸异丙酯，特别是乙酸异丙酯，添加到由步骤(5b)产生的混合物可以引发结晶。根据该实施方案，在将反应混合物搅拌介于30min和1小时之间，优选30分钟的时间(通常在室温)，所述极性非质子溶剂被去除至80％(多或少于5％)(例如通过在真空下浓缩)，并且所得残余物与如上文定义的非极性非质子结晶溶剂混合。[0284]结构(1r，2s，l-ala)的式(f)化合物有利地在第二个碳上具有的光学纯度(2s/2r)大于或等于95/5，优选大于96/4，更优选大于97/3，甚至更优选大于98/2，甚至更优选大于99/1。[0285]式(f)化合物通常以89％的平均产率获得。[0286]步骤(6)[0287]步骤(6)对应于式(f)化合物的钠盐化以产生式(i)的二钠盐。[0288]弱碱的钠盐具有电离羟基官能团和提供钠抗衡离子以获得式(i)盐的任务。弱碱的钠盐优选为碳酸氢钠。[0289]有利地，相对于式(f)的化合物，弱碱的钠盐的添加量介于2(多或少于0.2)当量之间。[0290]根据优选实施方案，步骤(6)包括以下连续步骤：[0291](6a)将式(f)化合物溶解在可与水混溶并具有低沸点的溶剂，例如醚，特别是thf或二噁烷，优选thf中，[0292](6b)向由步骤(6a)产生的溶液中加入水和弱碱钠盐，[0293](6c)除去步骤(6a)的溶剂，特别是通过真空浓缩，[0294](6d)添加用于使式(i)化合物沉淀的非极性非质子溶剂，[0295](6e)通过过滤和干燥回收式(i)化合物。[0296]将由步骤(6b)得到的混合物特别地搅拌介于15分钟和1小时之间的时间，优选该时间为30分钟。当使用碳酸氢钠作为钠离子源时，将所述混合物搅拌足够的时间，以使因添加碳酸氢钠引起的气体释放消失。这种气体释放是由在nahco3与式(f)化合物反应期间形成co2引起的。[0297]优选地，在步骤(6c)之后和步骤(6d)之前，进行几次thf的添加-去除操作，以通过共沸蒸馏去除水。[0298]优选地，步骤(6d)的非极性非质子溶剂选自醚，特别是选自二异丙醚和乙醚。更优选地，其是二异丙醚。[0299]在优选的方式中，步骤(6d)分两个阶段进行。首先，将1/4体积的所述非极性非质子溶剂加入到由步骤(6c)产生的残余物中，然后将所得混合物浓缩(特别是在真空下)以除去有机相。其次，将剩余的3/4体积的所述非极性非质子溶剂加入到由第一次浓缩产生的残余物中。所得悬浮液通常搅拌介于30分钟和2小时之间，优选1小时的时间(特别是在室温)，然后过滤。[0300]结构(1r，2s，l-ala)的式(i)化合物有利地在第二个碳上具有的光学纯度(2s/2r)大于或等于95/5，优选大于96/4，更优选大于97/3，甚至更优选大于98/2，甚至更优选大于99/1。[0301]式(i)化合物通常以91％的步骤(6)的平均产率获得。[0302]根据本发明，式(i)化合物因此通过在非质子非极性溶剂中沉淀而不是通过如wo2010/010106中描述的不太适合工业规模合成的冻干获得。[0303]非对映异构体富集方法[0304]本发明还涉及本发明式(e)化合物的工业制备方法的中间体的非对映异构体富集方法。[0305]所述非对映异构体富集方法在于当式(b)、(c)和(e)化合物中的每一种在第二个碳上的光学纯度(2s/2r)小于或等于95/5时，对它们进行非对映异构体富集。为此，当式(b)、(c)和(e)的化合物在第二个碳上的光学纯度(2s/2r)小于或等于95/5时，在如上所述步骤(2)、(3)和(4)的每一个中进行在合适溶剂中的研磨步骤。[0306]因此，包括根据本发明的非对映异构体富集方法的式(e)化合物的制备方法由如上所述的所谓“原”式(b)化合物进行，该“原”式(b)化合物对应于源自上述步骤(2b.2.1)并且具有在第二个碳上的光学纯度(2s/2r)严格大于50/50且小于或等于95/5，通常在51/49和60/40之间，特别是57/43的固体，涉及非对映异构富集方法的式(e)化合物的制备方法包括以下步骤：[0307](2b.2.2)在丙酮中研磨由步骤(2b.2.1)产生的固体，过滤并通过蒸发回收滤液中的式(b)化合物。[0308](3c)在如上所述的步骤(3b)之后，将式(c)化合物在水/mtbe混合物中研磨，然后过滤并干燥，[0309](4c)在如上所述的步骤(4b)之后，将式(e)化合物在二氯甲烷中研磨，然后过滤并干燥。[0310]通常，在步骤(2b.2.2)结束时获得的式(b)化合物在第二个碳上的光学纯度(2s/2r)介于70/30和90/10之间，优选在80/20和90/10之间，特别是81/19。[0311]通常，在步骤(3c)结束时获得的式(c)化合物在第二个碳上的光学纯度(2s/2r)介于80/20和99/1之间，优选在90/10和95/5之间，特别是93/7。[0312]通常，在步骤(4c)结束时获得的式(e)化合物在第二个碳上的光学纯度(2s/2r)介于90/10和99/1之间，特别是94/6。[0313]根据优选的实施方案，步骤(2c)、(3c)和(4c)的研磨进行介于30min和2h之间的持续时间，通常为1h。所述步骤的温度特别地等于室温。[0314]在根据本发明的涉及非对映异构体富集方法的式(e)化合物的制备方法中，不进行如上所述的步骤(2b.1)，而是由步骤(2b.2)代替。[0315]当在步骤(2b)、(3b)和(4b)的每一个结束时化合物(b)、(c)和(d)在第二个碳上的光学纯度(2s/2r)大于95/5时不进行这些研磨步骤(2b.2.2)、(3c)和(4c)。[0316]式(b)化合物[0317]本发明还涉及具有构型(1r，2s)的下式(b)的化合物：[0318]实施例[0319]以下实施例可以说明本发明而不是对其进行限制。[0320]使用了以下缩写：[0321]tlcꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ薄层色谱[0322]hplcꢀꢀꢀꢀꢀꢀ高效液相色谱[0323]dmsoꢀꢀꢀꢀꢀꢀ二甲亚砜[0324]eq.ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ当量[0325]esiꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ电喷雾电离[0326]minꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ分钟[0327]nmrꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ核磁共振[0328]tfaꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ三氟乙酸[0329][1r-[(1s-苯基乙基)氨基]乙基]-次膦酸(化合物a)[0330]浓hcl(8.14g；1当量)然后50％h3po2水溶液(12.1g；1.1当量)被连续地添加到冷却于冰中的(s)-1-苯乙胺(10g；82.5mmol)于etoh(40ml,4体积)中的溶液。在使用n2吹扫之后，加入无水乙醛(4.36g；1.2当量)。该混合物被加热以在80℃回流。在3小时之后，该混合物通过hplc分析：如果该胺成为化合物(a)的转化低于90％，那么加入0.2当量的乙醛，而该混合物再次进行回流1小时。该溶液接下来被冷却至10℃，通过环氧丙烷(9.57g；2当量)处理，并使其恢复至室温。[0331]将悬浮液在20℃搅拌过夜，然后过滤。固体用etoh(5ml；0.5体积)洗涤，然后真空干燥，得到白色固体(一级，产率：20.5％；1r/1s＝98/2)。滤液用ibuoac稀释(10体积与水形成共沸物)，然后浓缩成浓稠的白色浆液，用etoh(4体积)稀释，在20℃搅拌1小时。将第二级过滤，用etoh(5ml；0.5体积)洗涤，然后干燥，得到白色固体(产率：17.8％，1r/1s＝92/8)，总产率为38-40％，光学纯度(1r/1s)》95/5。[0332]nmr(dmso d6+tfa),1h(400mhz)：1.27(dd,3h,ch3)；1.57(d,3h,nchch3)；3.06(m,1h)；4.72(m,1h,nch)；6.33和7.72(2s,1h,ph)；7.44(m,3h,芳香)和7.55(m,2h,芳香)。31p 19.91(0.02p)；20.89(0.98p)。[0333][(1s)-1-[[(1r)-1-[[(2s)-3-苄氧基-3-氧代-2-[(4-苯基苯基)甲基]丙基]-羟基-磷酰基]乙基]氨基]乙基]化合物(b)[0334]在用n2吹扫的反应器中n,o-双(三甲基甲硅烷基)乙酰胺(bsa)(10.67g；3.2当量)加入到化合物(a)(3.5g；16.4mmol；1当量)和(2-(4-联苯)甲基)丙烯酸苄酯(5.38g；1当量)中。将浓稠的悬浮液从40℃(最小搅拌能力)加热至80℃(在75℃完全溶解)，然后搅拌3小时。通过hplc分析溶液(转化率》90/10)，然后冷却至20-40℃并用mtbe(20体积)和h2o(3.5ml；12当量，放热反应)稀释。在几个小时内形成悬浮液。将其搅拌最少2至3小时(优选过夜，缓慢沉淀)。将悬浮液过滤并干燥，得到白色固体结构(1r，2s)(5.11g；产率：54％；(2s/2r＝96/4)。[0335]nmr(dmso d6+tfa)1h(400mhz)：d 1.24(dd,3h,c(2)ch3)；1.54(d,3h,nchch3)；1.91和2.18(2m,2h,c(4)h2)；2.89(m,1h,c(2)h)；3.0(m,2h,c(5)ch2)；3.09(m,1h,c(5)h)；4.71(m,1h,nch)；5.0(m,2h,och2bn)；7.15-7.66(m,19h,芳香)。31p 39.61(0.96p；2s非对映异构体)和39.87(0.04p；2r非对映异构体)。[0336](2s)-2-[[[(1r)-1-(苄氧基羰基氨基)乙基]-羟基-磷酰基]甲基]-3-(4-苯基苯基)次膦酸(化合物c-a)[0337]将1n naoh(2.77ml；1当量)加入到在冰浴中冷却的化合物(b)(1.5g；2.77mmol)在etoh(22.5ml；15体积)和h2o(18ml；12体积)中的悬浮液中(监测ph值以供参考，《11)。混合物在室温搅拌至完全溶解。添加10％pd/c(0.15g；相对于化合物(b)10重量％和50％湿度)。将反应混合物用n2吹扫然后用h2吹扫(3个循环vac/n2然后3个循环vac/h2)并在20-30℃、1巴h2下搅拌18h。记录ph值以供参考(7-8量级的ph)。将反应混合物在0.45μm上过滤，然后部分浓缩以除去etoh。加入1n naoh(2.77ml；1当量，ph》10)，然后加入cbzcl(0.472g；1当量)，然后加入1n naoh(2.77ml；1当量)，混合物在室温搅拌2h。反应通过hplc定量，酸-碱洗涤后的化合物原样用于以下步骤(0.975g；产率：73％；(2s/2r)＝95/5)。[0338]nmr(dmso d6+tfa)1h(400mhz)d 1.21(dd,3h,c(2)-ch3),1.75和1.98(2m,1h+1h,c(4)h2)；2.89-3.02(m,3h,c(5)h和c(5)-ch2)；3.76(m,1h,c(2)h)；5.03(m,2h,och2bn)；7.25-7.63(m,15h,芳香和nh)。31p 45.04(0.05p,2r非对映异构体)和45.70(0.95p,2s非对映异构体)。[0339][(1r)-1-(苄氧基羰基氨基)乙基]-[(2s)-3-[[(1s)-2-叔丁氧基-1-甲基-2-氧代-乙基]氨基]-3-氧代-2-[(4-苯基苯基)甲基]丙基]次膦酸(化合物d-a)[0340]将8.4l dmf中的1.685kg化合物(c-a)在室温(20～25℃)搅拌直至获得澄清溶液，然后在室温加入763g(4.2摩尔)h-ala-otbu.hcl和3372g(10.5摩尔)的tbtu。将混合物冷却至～5℃并加入2263g(17.5摩尔)的diepa，同时将温度保持在5～10℃。添加后，将混合物在5～10℃搅拌45min。在5℃加入8.4l的乙酸乙酯以及10l的1n hcl水溶液。将混合物在室温搅拌10min。水相用乙酸乙酯(1×8.4l)萃取，合并有机相，用10％nahco3水溶液(3×6l)、3l的1n hcl溶液和3l盐水洗涤。将在有机相中沉淀的产物在搅拌下在8l的乙酸乙酯中加热至45～50℃，直至获得澄清溶液。在其冷却后，通过连续沉淀获得白色固体形式的准确非对映异构体(1.314kg)(产率：62％；hplc纯度为100％)。[0341]nmr(dmso d6+tfa)：1h(400mhz)d 1.17(m,c(2)ch3,3h)；1.22(d,3h,c(8)h3)；1.36(s,9h,tbu)；1.61和1.93(2m,1h+1h,c(4)h2)；2.79(m,1h,c(5)h)；2.98(m,2h,c(5)ch2)；3.72(m,1h,c(2)h)；4,11(m,1h,c(8)h)；5,01(m,2h,och2bn)；7.25-7.63(m,15h,芳香和n(1)h)和8.29(d,1h,n(7)h)。31p 45.95(0.96p,2s非对映异构体)和46.22(0.04p,2r非对映异构体)。[0342]((2s)-3-([1,1’‑联苯]-4-基)-2-((((r)-1-氨基乙基)(羟基)磷酰基)甲基)丙酰基)-l-丙氨酸(化合物e(pl254.hbr))[0343]在氮气流下将1250g(2.054摩尔)化合物(d-a)在2.5l乙酸中混合。将混合物在室温(15～20℃)搅拌直至所有固体溶解，然后冷却至10～15℃并缓慢加入2.99kg(33％,12.32摩尔hbr)hbr在乙酸中的溶液，同时保持温度在16～20℃。加完5小时后，在通过hplc监测反应进程的同时，将混合物在18～20℃真空浓缩以除去约400～500ml乙酸并加入6l的乙酸乙酯。将混合物在室温(15～20℃)搅拌30min，然后过滤以分离固体产物。将其用乙酸乙酯(3x 2l)和二异丙醚(1x 3l)洗涤，然后在空气流下于35℃干燥过夜，得到950g固体产物(产率：92.7％；hplc纯度：99.5％)[0344]nmr(dmso d6+tfa)：1h(400mhz)d 1.22(dd,3h,c(2)ch3)；1.30(d,3h,c(8)h3)；1.64和2.19(2m,1h+1h,c(4)h2)；2.74(m,1h,c(5)h)；3.06(m,2h,c(5)ch2)；3.26(m,1h,c(2)h)；4.23(m,1h,c(8)h)；7.36(m,3h,芳香)；7.45(m,2h,芳香)；7.60(d,2h,芳香)；7.66(d,2h,芳香)；7.70(m,9h,芳香)；8.07(br s,3h,n(1)h3+)和8.53(d,1h,n(9)h)。31p 41.51(0.98p,2s非对映异构体)和42.13(0.02p,2r非对映异构体)。[0345]hplc纯度(254nm,kromasil c18.250mm x 4.6mm,5μm)h2o(0.01％tfa)–ch3cn(0.01％tfa)90/10于2分钟期间内，然后在14min内10/90和4分钟期间内10/90：99.5％；tr 10.31和11.25min。[0346](2s)-2-[[[(1r)-1-(叔丁氧基羰基氨基)乙基]-羟基-磷酰基]甲基]-3-(4-苯基苯基)次膦酸(化合物c-b)[0347]将1n naoh(2.2ml；1当量)添加到在冰浴中冷却的化合物(b)(1g；2.21mmol；2r/2s 4/96)在etoh(15ml，15体积)和h2o(12ml，12体积)中的悬浮液。混合物在室温搅拌直至完全溶解。添加10％pd/c(0.15g；相对于化合物(b)10重量％和50％湿度)。将反应混合物用n2吹扫然后用h2吹扫(3个循环vac/n2然后3个循环vac/h2)并在20-30℃、1巴h2下搅拌18小时。记录ph值以供参考(7-8量级的ph)。将反应混合物在0.45μm上过滤。依次加入1n naoh(2.2ml,1当量)、boc2o(0.5g,1当量)然后1n naoh(2.2ml,1当量)。将混合物在室温搅拌2h，然后部分浓缩以除去etoh。水相用1n hcl处理至ph《1(0.655g；3当量)。将悬浮液用ibuoac(1.28g；5当量)处理并混合2小时，得到固体。过滤固体，然后减压干燥，得到化合物(c-b)(0.837g，84％)。[0348]nmr(dmso d6+tfa)：1h(400mhz)d 1.17(m,3h,c(2)-ch3)；1.36(s,9h,tbu)；1.71和1.97(2m,1h+1h,c(4)h2)；2.9-3.1(m,3h,c(5)h和c(5)-ch2)；3.70(m,1h,c(2)h)；7.01(d,1h,nh)；7.27(d,2h,芳香)；7.34(m,1h,芳香)；7.45(m,2h,芳香)；7.57(d,2h,芳香)和7.64(d,2h,芳香)。31p 46.4(仅检测到2s非对映异构体)。[0349][(1r)-1-(叔丁氧基羰基氨基)乙基]-[(2s)-3-[[(1s)-2-叔丁氧基-1-甲基-2-氧代-乙基]氨基]-3-氧代-2-[(4-苯基苯基)甲基]丙基]次膦酸(化合物d-b)[0350]在0℃，将tbtu(0.862g；3当量)然后dipea(0.578g，5当量)依次添加到在dmf(2ml,5体积)中的化合物(c-b)(0.4g；0.895mmol)和alaotbu盐酸盐(0.195g；1.2当量)中。将反应混合物搅拌1h，然后加入acoet(5ml，10体积)和1n hcl(2.55ml；2.85当量)，使混合物恢复至室温。水相用ibuoac(2x 2ml,2x 5体积)萃取。合并有机相并用10％nahco3(3x 2ml,3x 5体积)、1n hcl(2ml,5体积)和10％nacl(2ml,5体积)洗涤，然后浓缩并减压干燥，得到固体形式的化合物(d-b)(0.356g；0.62mmol；69％)。[0351]nmr(dmso d6+tfa)：1h(400mhz)d 1.13(m,c(2)ch3,3h)；1.23(d,3h,c(8)h3)；1.36(br s,18h,2x tbu)；1.59和1.91(2m,1h+1h,c(4)h2)；2.8(m,1h,c(5)h)；3.0(m,2h,c(5)ch2)；3.65(m,1h,c(2)h)；4.11(m,1h,c(8)h)；6.80(d,1h,n(1)h)；7.31和7.34(m,3h,芳香)；7.45(m,2h,芳香)；7.54(d,2h,芳香)；7.62(d,2h,芳香)和8.30(d,1h,n(7)h)。31p 46.5(仅检测到2s非对映异构体)。[0352]((2s)-3-([1,1’‑联苯]-4-基)-2-((((r)-1-氨基乙基)(羟基)磷酰基)甲基)丙酰基)-l-丙氨酸(化合物e(pl254))[0353]将88％hco2h(1ml,12体积)添加至化合物(d-b)(85mg；0.148mmol)。将该溶液在搅拌下加热至50℃保持2小时，然后浓缩得到油状物，将其在mtbe(2ml，24体积)中研磨。过滤产物，然后减压干燥，得到化合物(e)(58mg，94％)。[0354]nmr(dmso d6+tfa)：1h(400mhz)d 1.22(dd,3h,c(2)ch3)；1.30(dd,3h,c(8)h3)；1.64和2.18(2m,1h+1h,c(4)h2)；2.73(m,1h,c(5)h)；3.06(m,2h,c(5)ch2)；3.25(m,1h,c(2)h)；4.23(m,1h,c(8)h)；7.30-7.70(m,9h,芳香)；8.08(br s,3h,n(1)h3+)和8.52(d,1h,n(9)h)。31p 41.2(仅检测到2s非对映异构体)。[0355]hplc纯度(254nm,kromasil c18,250mm x 4.6mm,5μm)h2o(0.01％tfa)–ch3cn(0.01％tfa)90/10持续2min，然后在14min内10/90和10/90持续4min：97.70％；tr：10.29min.[0356]在不同步骤中通过连续富集合成化合物(e)[0357]从例如源自如上所述的步骤(2b.2.1)的“原”化合物(b)(2s/2r)57/43开始，已经表明可以在不同的步骤中富集所需的非对映异构体。[0358]化合物(b)(2s/2r：81/19)[0359]将“原”化合物(b)(2s/2r)57/43悬浮在ibuoac(50ml,5体积)和水(50ml,5体积)中并搅拌2小时。过滤悬浮液得到湿饼(12g)。用丙酮(50ml，5体积)处理固体并在过滤器上悬浮几分钟，然后过滤，真空干燥，得到不正确的非对映异构体(1r，2r)(1.26g，产率24％，比率2r/2s 31p 79/21)。将滤液浓缩至干，得到正确的固体形式的非对映异构体(b)(3.18g，产率60％，(2s/2r)：81/19)。[0360]nmr d6 dmso+tfa,31p 39.37(0.81p，非对映异构体2s)和39.60(0.19p，非对映异构体2r)。[0361]化合物(c-b)(2s/2r：93/7)[0362]将1n naoh(4.43ml；1当量)添加到先前获得的在冰浴中冷却的化合物(b)(2g；4.43mmol；2s/2r 81/19)在etoh(30ml，15体积)和h2o(15ml,7.5体积)中的悬浮液中。混合物在室温搅拌直至完全溶解。添加10％pd/c(0.20g；相对于化合物(b)10重量％和50％湿度)。将反应混合物用n2然后用h2吹扫(3个循环vac/n2然后3个循环vac/h2)并在20-30℃、1巴h2下搅拌18小时。记录ph值以供参考(7-8量级的ph)。将反应混合物在0.45μm上过滤。依次加入1n naoh(4.4ml,1当量)、boc2o(1.05g,1当量)然后1nnaoh(4.4ml,1当量)。将混合物在室温搅拌2h，然后部分浓缩以除去etoh。水相用mtbe(10ml，5体积)洗涤，然后用1n hcl(1.75ml，4当量)洗涤。分离有机相并浓缩至干得到固体。将其悬浮在mtbe(10ml，5体积)和h2o(0.24ml，3体积)中1小时。过滤悬浮液，然后真空干燥，得到化合物(c-b)(1.05g，产率53％，2s/2r＝93/7)。[0363]nmr d6 dmso+tfa,31p 46.20(非对映异构体2r；0.07p)和46.37(非对映异构体2s；0.93p)。[0364]化合物(d-b)(2s/2r92/8)[0365]在0℃，将tbtu(1.96g；3当量)然后dipea(1.316克，5当量)依次加入到在dmf(5ml，5体积)中的先前获得的化合物(c-b)(0.91g；2.04mmol)和alaotbu盐酸盐(0.44g；1.2当量)中。将反应混合物搅拌1h，然后加入etoac(5ml，5体积)和1n hcl(6ml；3当量)，使混合物恢复至室温。水相用etoac(4ml，2体积)萃取。合并有机相，然后用10％nahco3(3x 4ml,3x 2体积)、1n hcl(4ml,2体积)和10％nacl(4ml,2体积)洗涤。将溶液浓缩并真空干燥，得到固体形式的化合物(c-b)(1.058g，1.84mmol，产率90％，2s/2r＝92/8)。[0366]nmr d6 dmso+tfa,31p 46.56(0.92p，非对映异构体2s)和46.88(0.08p，非对映异构体2r)。[0367]化合物(e)(2s/2r 93/7)[0368]将88％hco2h(5ml，12体积)添加到先前获得的化合物(d-b)(1.06；1.84mmol)中。将该溶液在搅拌下加热至50℃持续2h，然后浓缩得到油状物，将其在mtbe(8ml，8体积)中研磨。将混合物浓缩并真空干燥，得到化合物(e)(0.62g，产率80％，(2s/2r)：93/7)。[0369]nmr d6 dmso+tfa,31p 41.33(非对映异构体2s；0.93p)和41.97(非对映异构体2r；0.07p)[0370]当化合物(e)(0.5g)悬浮在ch2cl2(4ml，8体积)中时，将其搅拌1小时。将稀悬浮液过滤并真空干燥，得到化合物(e)(0.45mg，产率72％，(2s/2r)：94/6)。[0371]hplc(254nm,kromasil c18,250mm x 4.6mm,5μm)h2o(0.01％tfa)–ch3cn(0.01％tfa)90/10持续2min，然后在14min内10/90和10/90持续4min)纯度98.2％；tr：10.31min。[0372]((2s)-3-([1,1’‑联苯]-4-基)-2-((羟基((1r)-1-(((1-(异丁酰氧基)乙氧基)羰基)氨基)乙基)磷酰基)甲基)丙酰基)-l-丙氨酸(化合物f)[0373]将900g(1.8摩尔)化合物(e)溶解在2.7l的dmf中，并将混合物在室温(15～20℃)搅拌直至获得澄清溶液。然后将其冷却至5～10℃，分批加入492.4g(1.8摩尔)酰氧基烷基氨基甲酸酯，将混合物在5～10℃搅拌直至获得澄清溶液。缓慢加入382.3g(3.79摩尔)三乙胺，同时保持温度低于15℃。添加后，将混合物在15～20℃搅拌4小时，同时通过hplc监测反应。加入4.5l的乙酸乙酯，将混合物冷却至5～10℃，加入1n hcl水溶液以缓慢调节ph至2至3，同时保持温度低于25℃(nb：使用约2.2l的1n hcl水溶液)。加入3.2l水并将混合物在室温搅拌10min。分离产物的有机相，水相用乙酸乙酯(1×4.5l)萃取。将有机相混合并用水(4x 3.6l)和盐水(1x 3.6l)洗涤。将有机相在40～45℃减压浓缩，除去约90％的乙酸乙酯。向残余物中加入2.7l乙酸乙酯并将混合物在45～50℃搅拌30分钟。将混合物在40～45℃真空浓缩以除去约80％的乙酸乙酯。将2.7升二异丙醚加入到残余物中并继续浓缩混合物以除去剩余的乙酸乙酯。然后加入9l的二异丙醚并将混合物在室温(～20℃)搅拌1小时。分离固体产物并在空气流下于30～35℃干燥过夜，得到925g化合物(f)，为淡黄色固体形式(hplc纯度98.1％)。[0374]((2s)-3-([1,1’‑联苯]-4-基)-2-((羟基((1r)-1-(((1-(异丁酰氧基)乙氧基)羰基)氨基)乙基)磷酰基)甲基)丙酰基)-l-丙氨酸的双钠盐(化合物(i))[0375]将136.27g(0.24mol)化合物(f)溶解在683ml的thf中并将混合物在室温(15～25℃)搅拌直至获得澄清溶液。向溶液中加入137ml水，然后在室温(15～25℃)在n2下过滤，然后在室温(15～25℃)加入碳酸氢钠(39.71g)。将混合物在室温(15～25℃)搅拌至少30min，直至释放的气体消失。在20～25℃减压浓缩溶液。将残余物用1.0l的thf稀释，然后在20～25℃减压浓缩的操作进行数次以除去水。向残余物中加入1.4l的二异丙醚。将悬浮液在机械搅拌下于15～25℃搅拌1h，然后过滤得到的固体，洗涤然后干燥，得到133.9g化合物(i)，为灰白色固体形式(收率：91％；hplc纯度：98.6％)。









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