用于心力衰竭的纳米疫苗的制作方法

有机化合物处理,合成应用技术用于心力衰竭的纳米疫苗1.本技术要求2019年11月18日提交的美国临时申请号62/936,876的权益，所述临时申请以引用的方式整体并入本文。i.背景技术：2.1.目前，心力衰竭对全球发病率和死亡率有很大影响，并且据估计全世界至少有2600万人受到影响。目前的疗法主要集中在肾素-血管紧张素-醛固酮系统(raas)或直接针对心肌收缩性，尽管取得了进展，但死亡率/发病率仍然很高，并且受影响的患者生活质量较差。目前唯一明确的治愈是心脏移植，由于供体器官的可用性低，目前在美国每年进行的心脏移植限于约50,000例。所需要的是用于心力衰竭和其他使人衰弱的心脏损伤的新型非侵入性治疗。ii.技术实现要素：3.2.公开了与hsp60肽疫苗相关的方法和组合物。4.3.在一个方面，本文公开了包含hsp60肽(例如像kfgadaralmlqgvd(seq id no:1)、lmlqgvdlladavav(seq id no:2)、ekkdrvtdalnatra(seq id no:3)、iqsivpaleianahr(seq id no:4)、aelkkqskpvt(seq id no:5)、evvegmqfdrgylsp(seq id no:6)、keekdpgmgamggmg(seq id no:7)、vtdalnatraaveeg(seq id no:8)、tlvlnrlkvglqvvavk(seq id no:9)、eeiaqvatisang(seq id no:10)、avkapghfdnrkn(seq id no:11)、kkqskpvttpee(seq id no:12)、eipkeekdpgmgamg(seq id no:13)或eiiegmkfdrgyisp(seq id no:15))和佐剂(例如像明矾、氢氧化铝、磷酸铝、混合铝盐、非离子嵌段共聚物(例如像crl-1005)、佐剂系统04(as04)或佐剂系统03(as03))的组合物。例如，本文公开了包含hsp60肽(例如像kfgadaralmlqgvd(seq id no:1)、lmlqgvdlladavav(seq id no:2)、ekkdrvtdalnatra(seq id no:3)、iqsivpaleianahr(seq id no:4)、aelkkqskpvt(seq id no:5)、evvegmqfdrgylsp(seq id no:6)、keekdpgmgamggmg(seq id no:7)、vtdalnatraaveeg(seq id no:8)、tlvlnrlkvglqvvavk(seq id no:9)、eeiaqvatisang(seq id no:10)、avkapghfdnrkn(seq id no:11)、kkqskpvttpee(seq id no:12)、eipkeekdpgmgamg(seq id no:13)或eiiegmkfdrgyisp(seq id no:15))和明矾的组合物。5.4.本文还公开了包含hsp60肽和任何前述方面的佐剂的组合物，其中hsp60肽与佐剂缀合。6.5.在一个方面，本文公开了治疗、减少、抑制、降低、改善和/或预防受试者的心力衰竭、心脏病或心脏功能障碍进展为慢性心力衰竭的方法，其包括向受试者施用任何前述方面的组合物。例如，在一个方面，本文公开了治疗、减少、抑制、降低、改善和/或预防受试者的心力衰竭、心脏病或心脏功能障碍进展为慢性心力衰竭的方法，其包括向受试者施用包含hsp60肽(例如像kfgadaralmlqgvd(seq id no:1)、lmlqgvdlladavav(seq id no:2)、ekkdrvtdalnatra(seq id no:3)、iqsivpaleianahr(seq id no:4)、aelkkqskpvt(seq id no:5)、evvegmqfdrgylsp(seq id no:6)、keekdpgmgamggmg(seq id no:7)、vtdalnatraaveeg(seq id no:8)、tlvlnrlkvglqvvavk(seq id no:9)、eeiaqvatisang(seq id no:10)、avkapghfdnrkn(seq id no:11)、kkqskpvttpee(seq id no:12)、eipkeekdpgmgamg(seq id no:13)或eiiegmkfdrgyisp(seq id no:15))和佐剂(例如像明矾、氢氧化铝、磷酸铝、混合铝盐、非离子嵌段共聚物(例如crl-1005)、佐剂系统04(as04)或佐剂系统03(as03))的组合物。7.6.在一个方面，本文公开了前述方面中任一项的治疗、减少、抑制、降低、改善和/或预防心力衰竭、心脏病或心脏功能障碍进展为慢性心力衰竭的方法，其中所述心脏病或功能障碍包括冠状动脉疾病、心肌梗塞、高血压、心肌病、心肌炎、先天性心脏缺陷、缺血再灌注损伤、心肌缺血、心肌再灌注、心内膜下缺血、高安氏动脉炎、心房颤动、出血性中风、短暂性缺血发作或心律失常。8.7.本文还公开了前述方面中任一项的治疗、减少、抑制、降低、改善和/或预防心力衰竭、心脏病或心脏功能障碍进展为慢性心力衰竭的方法，其中所述心力衰竭是急性心力衰竭。9.8.在一个方面，本文公开了前述方面中任一项的治疗、减少、抑制、降低、改善和/或预防心力衰竭、心脏病或心脏功能障碍进展为慢性心力衰竭的方法，其中所述心力衰竭是手术引起的(例如像在为移植而保存器官期间或在心脏手术期间(包括冠状动脉搭桥手术、支架植入术、心脏瓣膜置换术、肌切除术、心肌血管重建术、先天性心脏病手术、血管成形术、斑块切除术和/或心肌成形术)发生的手术引起的缺血/再灌注事件)。10.9.本文还公开了前述方面中任一项的治疗、减少、抑制、降低、改善和/或预防心力衰竭、心脏病或心脏功能障碍进展为慢性心力衰竭的方法，其中组合物在心力衰竭发作之前施用于受试者，其中心力衰竭是急性心力衰竭并且组合物在与心力衰竭相关的症状发作之后施用于受试者。在一些情况下，其中心力衰竭是手术引起的，包含hsp60肽和佐剂的组合物在手术前、手术期间或手术后施用。11.10.在一个方面，本文公开了治疗、减少、抑制、降低、改善和/或预防受试者的心力衰竭、心脏病或心脏功能障碍的方法，其包括向受试者施用任何前述方面的组合物。例如，在一个方面，本文公开了治疗、减少、抑制、降低、改善和/或预防受试者的心力衰竭、心脏病或心脏功能障碍的方法，其包括向受试者施用包含hsp60肽(例如像kfgadaralmlqgvd(seq id no:1)、lmlqgvdlladavav(seq id no:2)、ekkdrvtdalnatra(seq id no:3)、iqsivpaleianahr(seq id no:4)、aelkkqskpvt(seq id no:5)、evvegmqfdrgylsp(seq id no:6)、keekdpgmgamggmg(seq id no:7)、vtdalnatraaveeg(seq id no:8)、tlvlnrlkvglqvvavk(seq id no:9)、eeiaqvatisang(seq id no:10)、avkapghfdnrkn(seq id no:11)、kkqskpvttpee(seq id no:12)、eipkeekdpgmgamg(seq id no:13)或eiiegmkfdrgyisp(seq id no:15))和佐剂(例如像明矾、氢氧化铝、磷酸铝、混合铝盐、非离子嵌段共聚物(例如crl-1005)、佐剂系统04(as04)或佐剂系统03(as03))的组合物。12.11.在一个方面，本文公开了前述方面中任一项的治疗、减少、抑制、降低、改善和/或预防心力衰竭、心脏病或心脏功能障碍的方法，其中心脏病或功能障碍包括冠状动脉疾病、心肌梗塞、高血压、心肌病、心肌炎、先天性心脏缺陷、缺血再灌注损伤、心肌缺血、心肌再灌注、心内膜下缺血、高安氏动脉炎、心房颤动、出血性中风、短暂性缺血发作或心律失常。13.12.本文还公开了前述方面中任一项的治疗、减少、抑制、降低、改善和/或预防的心力衰竭、心脏病或心脏功能障碍的方法，其中所述心力衰竭是急性心力衰竭或慢性心力衰竭。14.13.在一个方面，本文公开了前述方面中任一项的治疗、减少、抑制、降低、改善和/或预防心力衰竭、心脏病或心脏功能障碍的方法，其中所述心力衰竭是手术引起的(例如像在为移植而保存器官期间或在心脏手术期间(包括冠状动脉搭桥手术、支架植入术、心脏瓣膜置换术、肌切除术、心肌血管重建术、先天性心脏病手术、血管成形术、斑块切除术和/或心肌成形术)发生的手术引起的缺血/再灌注事件)。15.14.本文还公开了前述方面中任一项的治疗、减少、抑制、降低、改善和/或预防心力衰竭、心脏病或心脏功能障碍的方法，其中组合物在心力衰竭发作之前施用于受试者，其中心力衰竭是慢性心力衰竭并且组合物在心力衰竭发作之后施用于受试者，或其中心力衰竭是急性心力衰竭并且组合物在与心力衰竭相关的症状发作之后施用于受试者。在一些情况下，其中心力衰竭是手术引起的，包含hsp60肽和佐剂的组合物在手术前、手术期间或手术后施用。16.15.iii.附图说明17.16.并入并且构成本说明书一部分的附图示出多个实施方案并且与说明书一起示出所公开的组合物和方法。18.17.图1示出了有或没有hsp60肽+明矾治疗的心脏射血分数。19.18.图2示出了在治疗(hsp60肽+明矾)和未治疗的组织中的纤维化染色。20.19.图3示出了在治疗(hsp60肽+明矾)和未治疗的组织中纤维化的定量。21.20.图4示出了在治疗(hsp60肽+明矾)和未治疗的组织之间通过隧道染色测量的细胞凋亡比较。iv.具体实施方式22.21.在公开并且描述本发明化合物、组合物、制品、装置和/或方法之前，应了解除非另外规定，否则其不限于特定合成方法或特定重组生物技术方法，或除非另外规定，否则不限于具体试剂，因为此类项目当然可变化。还应理解，本文使用的术语仅出于描述具体实施方案的目的并且不意图具有限制性。23.a.定义24.22.在本说明书和下面的权利要求书中，将提及多个术语，所述术语应被定义为具有以下含义：25.23.如在说明书和所附权利要求中所用，除非上下文另外明确规定，否则单数形式“一个(a)”、“一种(an)”和“所述(the)”包括复数指示物。因此，例如，提及“药物载剂”包括两种或更多种此类载剂的混合物等。26.24.可在本文中将范围表达为从“约”一个具体值和/或至“约”另一具体值。当表达这种范围时，另一个实施方案包括从所述一个具体值和/或至所述另一个具体值。相似地，在通过使用先行词“约”将值表达为近似值时，应理解具体值形成另一个实施方案。应进一步理解，范围中的每一个的端值相对于另一端值以及独立于另一端值都是有意义的。还应理解，本文公开了多个值，并且每个值除所述值本身之外在本文中还公开为“约”所述具体值。例如，如果公开了值“10”，那么也公开了“约10”。还应理解，当一个值被公开时，那么也公开了“小于或等于”所述值、“大于或等于所述值”和介于值之间的可能范围，如本领域技术人员所适当地理解。例如，如果公开值“10”，那么也公开了“小于或等于10”以及“大于或等于10”。还应理解，在整个申请中，数据以多个不同格式来提供，并且此数据代表端点和起始点，和数据点的任何组合的范围。例如，如果公开具体数据点“10”和具体数据点15，应理解认为公开了大于、大于或等于、小于、小于或等于以及等于10和15以及10与15之间。还应理解，还公开了两个具体单位之间的每个单位。例如，如果公开了10和15，那么也公开了11、12、13和14。27.25.“任选的”或“任选地”意指随后描述的事件或情形可发生或可不发生，并且所述描述包括其中所述事件或情形发生的情况和其中所述事件或情形不发生的情况。28.26.“降低”可以指导致更少量的症状、疾病、组合物、病状或活性的任何变化。当具有此物质的基因产物的遗传输出相对于不具有此物质的基因产物的输出较少时，物质也被理解为降低基因的遗传输出。又例如，降低可以是病症症状的改变，使得症状比先前观察到的要少。降低可以是病状、症状、活性、组合物中的任何个体、中值或平均值降低了统计学显著的量。因此，降低可以是1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或100％的降低，只要降低在统计学上显著即可。29.27.“抑制(inhibit/inhibiting/inhibition)”意指降低活性、响应、病状、疾病或其他生物参数。这可以包括但不限于完全消除活性、响应、病状或疾病。这还可包括与固有或对照水平相比，例如，活性、响应、病状或疾病的10％减少。因此，与固有或对照水平相比，减少可以是10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、100％，或介于其之间的任何减少量。30.28.“减少(reduce)”或所述词语的其他形式，诸如“减少(reducing)”或“减少(reduction)”意指事件或特征(例如，肿瘤生长)的下降。应理解，这通常是相对于一些标准或预期值，换句话说，它是相对的，但是它对于待提及的标准或相对值来说并不总是必需的。例如，“减少肿瘤生长”意指相对于标准或对照减少肿瘤生长速度。31.29.如本文所用，“治疗(treat/treating/treatment)”及其语法变体包括以部分或完全预防、延迟、治愈、愈合、缓解、减轻、改变、补救、改善、改进、稳定、缓和和/或减少一种或多种疾病或病状、疾病或病状的症状、或疾病或病状的根本原因的强度或频率的意图或目的施用组合物。根据本发明的的治疗可预防地(preventively)、预防地(prophylactically)、姑息地或矫正地应用。预防性治疗在发作之前(例如，在明显的癌症体征之前)、在早期发作期间(例如，在初始癌症体征和症状时)或在建立的癌症发展之后向受试者施用。预防性施用可在显现感染症状之前的几天至几年发生。32.30.“预防(prevent)”或所述词语的其他形式，诸如“预防(preventing)”或“预防(prevention)”意指终止具体的事件或特征，稳定或延迟具体事件或特征的发展或进展，或使具体事件或特征发生的机会最小化。预防不需要与对照比较，因为它通常比例如减少更绝对。如本文所用，某事可以被减少但不可预防，但是被减少的某事也可以得到预防。同样地，某事可以被预防但是不可减少，但是被预防的某事也可以得到减少。应理解，使用减少或预防时，除非另外具体指出，否则也明确地公开其他词语的使用。33.31.“生物相容的”一般指代材料及其任何代谢物或降解产物，其一般对接受者无毒并且不对受试者造成显著的不良作用。34.32.“包含”意图是指组合物、方法等，包括所述要素，但不排除其他要素。“基本上由……组成”在用于定义组合物和方法时应当意指包括所述要素，但排除对于组合具有任何重要意义的其他要素。因此，基本由本文定义的要素组成的组合物将不排除来自分离和纯化方法的痕量杂质和药学上可接受的载剂，诸如磷酸盐缓冲盐水、防腐剂等等。“由……组成”应当意指排除超过痕量的其他成分的要素和用于施用本公开的组合物的基本方法步骤。由这些过渡术语中的每一个所限定的实施方案落入本公开的范围内。35.33.“对照”是用于比较目的的实验中使用的可替代受试者或样品。对照可以是“阳性”或“阴性”。36.34.术语“受试者”是指作为施用或治疗目标的任何个体。受试者可以是脊椎动物，例如哺乳动物。在一个方面，受试者可以是人、非人灵长类动物、牛、马、猪、犬或猫。受试者也可以是豚鼠、大鼠、仓鼠、兔、小鼠或鼹鼠。因此，受试者可以是人或兽类患者。术语“患者”是指接受临床医生例如医师治疗的对象。37.35.剂的“有效量”是指以提供所需的效果的剂的足够量。“有效”的剂的量将因受试者而异，这取决于许多因素诸如受试者的年龄和总体状况、具体的一种或多种剂等。因此，并不总是能够指定定量的“有效量”。然而，本领域普通技术人员可使用常规实验确定在任何受试者情况下的适当“有效量”。另外，如本文所用，并且除非另外具体说明，否则“有效量”也可以指覆盖治疗有效量和预防有效量两者的量。实现治疗效果所必需的剂的“有效量”可根据诸如受试者的年龄、性别和体重等因素而变化。可调整剂量方案以提供最佳的治疗性响应。例如，可每日施用若干分次剂量或可如治疗情况的紧急程度所指示地按比例减少所述剂量。38.36.“药学上可接受的”组分可以指不是生物学上或其他方面不希望的组分，即，所述组分可掺入到本公开提供的药物制剂中并如本文所述施用于受试者而不导致显著的不希望的生物作用或以有害方式与含有所述组分的制剂中的任何其他组分相互作用。当用于与施用于人有关时，此术语一般表示所述组分符合毒理学和生产测试所要求的标准或包括在由美国食品和药品管理局制定的非活性成分指南中。39.37.“药学上可接受的载剂”(有时称为“载剂”)意指可用于制备一般来说安全且无毒的药物或治疗性组合物的载剂或赋形剂并且包括对于兽医和/或人类药物或治疗用途可接受的载剂。术语“载剂”或“药学上可接受的载剂”可以包括但不限于磷酸盐缓冲盐水溶液、水、乳剂(诸如水包油或油包水乳剂)和/或各种类型的润湿剂。如本文所用，术语“载剂”涵盖但不限于任何赋形剂、稀释剂、填充剂、盐、缓冲剂、稳定剂、增溶剂、脂质、稳定剂或本领域熟知的用于药物制剂的其他物质，并且如本文进一步所述。40.38.如在“药理学上活性的”衍生物或类似物中的“药理学上活性的”(或简单地“活性的”)可以指具有与母体化合物相同类型并且在程度上大约相等的药理学活性的衍生物或类似物(例如，盐、酯、酰胺、缀合物、代谢物、异构体、片段等)。41.39.“治疗剂”是指具有有益的生物作用的任何组合物。有益的生物作用包括治疗作用，例如，治疗病症或其他不希望的生理病状，和预防作用，例如，预防病症或其他不希望的生理病状(例如，非免疫原性癌症)。此术语还涵盖本文具体提及的有益剂的药学上可接受的、药理学上活性的衍生物，包括但不限于盐、酯、酰胺、前剂(proagent)、活性代谢物、异构体、片段、类似物等。当使用术语“治疗剂”时，或者当具体鉴定具体的剂时，应理解此术语包括剂本身以及药学上可接受的、药理学上活性的盐、酯、酰胺、前剂、缀合物、活性代谢物、异构体、片段、类似物等。42.40.组合物(例如包含剂的组合物)的“治疗有效量”或“治疗有效剂量”是指有效达到所需的治疗结果的量。在一些实施方案中，所需的治疗结果是控制i型糖尿病。在一些实施方案中，所需的治疗结果是控制肥胖。给定治疗剂的治疗有效量通常关于诸如以下的因素而变化：正在治疗的病症或疾病的类型和严重性以及受试者的年龄、性别和体重。此术语还可以指有效促进所需的治疗效果(诸如疼痛减轻)的治疗剂的量，或治疗剂的递送速率(例如，随时间推移的量)。精确所需的治疗效果将根据以下变化：待治疗的病状、受试者的耐受性、待施用的剂和/或剂制剂(例如，治疗剂的效力、制剂中剂的浓度等)、以及本领域普通技术人员了解的各种其他因素。在一些情况下，在数天、数周或数年的时间段内向受试者施用多剂量的组合物后实现所需的生物学或医学响应。43.41.术语“治疗”是指医学管理患者旨在治愈、改善、稳定或预防疾病、病理病状或病症。此术语包括积极治疗，即治疗直接具体针对疾病、病理病状或病症的改善；以及包括病因治疗，即治疗针对于去除相关疾病、病理病状或病症的病因。另外，此术语包括姑息治疗，即治疗设计用来减轻症状，而不是治愈疾病、病理病状或病症；预防性治疗，即治疗针对于使相关疾病、病理病状或病症的发展减到最小或部分或完全抑制相关疾病、病理病状或病症的发展；以及支持治疗，即治疗用以补充针对改善相关疾病、病理病状或病症的另一特定疗法。44.42.贯穿本技术，引用了各种出版物。这些出版物的公开内容特此以引用的方式整体并入到本技术中以便更全面地描述本技术所涉及的现有技术水平。所公开的参考文献针对其中包含的材料也单独且具体地以引用的方式并入本文，所述材料在参考文献所依据的句子中讨论。45.b.组合物46.43.公开了用于制备所公开组合物的组分以及将在本文公开的方法内使用的组合物本身。本文公开这些和其他材料，并且应当理解当公开这些材料的组合、子集、相互作用、群组等时，虽然可能未明确地公开这些化合物的每个不同个别和共同组合以及排列的具体提及，但是其各自在本文中具体地预期并描述。例如，如果公开并讨论一种具体hsp60肽并且讨论可以对包括所述hsp60肽的许多分子进行的许多修饰，除非明确相反地指明，否则具体地预期hsp60肽和可能的修饰的每个和各个组合和排列。因此，如果公开一类分子a、b和c以及一类分子d、e和f，并且公开组合分子的实例a-d，则即使未单独叙述每个组合，也应单独和共同预期每个组合，这意味着考虑公开组合a-e、a-f、b-d、b-e、b-f、c-d、c-e以及c-f。同样地，还公开了这些分子的任何子集或组合。因此，例如，会考虑公开a-e、b-f和c-e的子组。此概念适用于本技术的所有方面，包括但不限于，制备和使用所公开组合物的方法中的步骤。因此，如果有可执行的各种另外步骤，应理解这些另外步骤各自可与所公开方法的任何特定实施方案或实施方案组合一起执行。47.44.本文显示hsp60在终末期心力衰竭中翻倍。在心力衰竭中，hsp60在质膜部分、细胞表面和血浆中。膜hsp60与细胞凋亡增加相关。hsp60的释放还可以激活先天免疫系统，促进促炎状态，包括tnf-α的增加。因此，hsp60向细胞表面的异常运输可能是心肌细胞丢失和心力衰竭进展的早期触发因素。此外，hsp60在细胞凋亡中起作用。通过用hsp60肽对患有心力衰竭或具有心力衰竭风险的受试者进行免疫，这些肽不仅可以竞争性抑制全长hsp60蛋白，还可用于产生抗hsp60抗体，所述抗体可抑制细胞凋亡并在心脏功能障碍、心脏病和/或心力衰竭部位结合hsp60。在一个方面，本文公开了包含hsp60肽(例如像kfgadaralmlqgvd(seq id no:1)、lmlqgvdlladavav(seq id no:2)、ekkdrvtdalnatra(seq id no:3)、iqsivpaleianahr(seq id no:4)、aelkkqskpvt(seq id no:5)、evvegmqfdrgylsp(seq id no:6)、keekdpgmgamggmg(seq id no:7)、vtdalnatraaveeg(seq id no:8)、tlvlnrlkvglqvvavk(seq id no:9)、eeiaqvatisang(seq id no:10)、avkapghfdnrkn(seq id no:11)、kkqskpvttpee(seq id no:12)、eipkeekdpgmgamg(seq id no:13)或eiiegmkfdrgyisp(seq id no:15))的组合物。在一些方面，组合物包含治疗有效量的hsp60肽。48.45.应当理解并且本文预期了所公开的组合物包含将诱导对hsp60的免疫响应的肽疫苗。所公开的肽包含设计的表位是较大hsp60蛋白内的抗原决定簇，这些肽被认为足以激活适当的细胞和体液响应，同时消除任何潜在的过敏原和/或反应原响应。此外，本文公开的hsp60肽疫苗可用于通过配制多个非连续免疫显性表位和/或在不同血清型之间保守的表位来诱导针对多种血清学变体的广谱免疫。然而，由于肽的尺寸相对较小，单独的hsp60肽通常本身具有弱免疫原性，并且因此需要载剂分子来增加化学稳定性以及佐剂，以诱导稳健的免疫响应。49.46.因此，在一个方面，本文公开了包含hsp60肽佐剂的组合物。如本文所用，佐剂可以包括可增强对弱免疫原性抗原的免疫响应的任何物质。可用于人类使用并与所公开的hsp60肽组合的佐剂的实例包括但不限于明矾、氢氧化铝、磷酸铝、混合铝盐、非离子嵌段共聚物(例如像crl-1005)、佐剂系统04(as04)(氢氧化铝和单磷酰脂质a(mpl)的组合)或佐剂系统03(as03)(由油性化合物d,l-α-生育酚(维生素e)和角鲨烯以及乳化剂聚山梨醇酯80组成)。因此，在一个方面，本文公开了包含hsp60肽(例如像kfgadaralmlqgvd(seq id no:1)、lmlqgvdlladavav(seq id no:2)、ekkdrvtdalnatra(seq id no:3)、iqsivpaleianahr(seq id no:4)、aelkkqskpvt(seq id no:5)、evvegmqfdrgylsp(seq id no:6)、keekdpgmgamggmg(seq id no:7)、vtdalnatraaveeg(seq id no:8)、tlvlnrlkvglqvvavk(seq id no:9)、eeiaqvatisang(seq id no:10)、avkapghfdnrkn(seq id no:11)、kkqskpvttpee(seq id no:12)、eipkeekdpgmgamg(seq id no:13)或eiiegmkfdrgyisp(seq id no:15))的组合物，其包括但不限于治疗有效量的hsp60肽和佐剂(例如像明矾、氢氧化铝、磷酸铝、混合铝盐、非离子嵌段共聚物(例如像例如crl-1005)、佐剂系统04(as04)或佐剂系统03(as03))。例如，本文公开了包含hsp60肽(例如像kfgadaralmlqgvd(seq id no:1)、lmlqgvdlladavav(seq id no:2)、ekkdrvtdalnatra(seq id no:3)、iqsivpaleianahr(seq id no:4)、aelkkqskpvt(seq id no:5)、evvegmqfdrgylsp(seq id no:6)、keekdpgmgamggmg(seq id no:7)、vtdalnatraaveeg(seq id no:8)、tlvlnrlkvglqvvavk(seq id no:9)、eeiaqvatisang(seq id no:10)、avkapghfdnrkn(seq id no:11)、kkqskpvttpee(seq id no:12)、eipkeekdpgmgamg(seq id no:13)或eiiegmkfdrgyisp(seq id no:15))和明矾的组合物。50.47.应当理解并且本文预期肽和佐剂可以是相同组合物的一部分，作为单独的组分或连接在一起。在一个方面，本文公开了包含本文公开的任何hsp60肽和佐剂的组合物，其中hsp60肽与佐剂缀合。51.1.序列相似性52.48.应当理解，如本文所讨论的，术语同源性和同一性的使用与相似性意味着相同的事物。因此，例如，如果在两个非天然序列之间使用同源性一词，则应理解这不一定表示这两个序列之间的进化关系，而是着眼于它们的核酸序列之间的相似性或相关性。许多用于确定两个进化相关分子之间同源性的方法常规应用于任何两个或更多个核酸或蛋白质，用于测量序列相似性的目的，无论它们是否进化相关。53.49.一般而言，应理解定义本文公开的基因和蛋白质的任何已知变体和衍生物或可能出现的变体和衍生物的一种方式是通过根据与特定已知序列的同源性来定义变体和衍生物。本文公开的对具体序列的这种鉴定也在本文别处讨论。一般而言，本文公开的基因和蛋白质的变体通常与所述序列或天然序列具有至少约70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％的同源性。本领域技术人员容易理解如何确定两种蛋白质或核酸(诸如基因)的同源性。例如，可以在比对两个序列后计算同源性，使同源性处于最高水平。54.50.另一种计算同源性的方法可以通过公开的算法来执行。用于比较的序列的最佳比对可以通过smith和watermanadv.appl.math.2:482(1981)的局部同源性算法、通过needleman和wunsch,j.mol biol.48:443(1970)的同源性比对算法、通过pearson和lipman,proc.natl.acad.sci.u.s.a.85:2444(1988)的相似性方法的研究、通过这些算法(在wisconsin genetics software package,genetics computer group,575science dr.,madison,wi中的gap、bestfit、fasta和tfasta)的计算机化实施或通过检查来进行。55.51.应当理解，通常可以使用任何方法，并且在某些情况下，这些不同方法的结果可能不同，但本领域技术人员理解，如果发现用这些方法中的至少一种发现了同一性，那么可以说这些序列具有所述的同一性，并在本文公开。56.52.例如，如本文所用，叙述为与另一序列具有具体百分比同源性的序列是指具有如通过上述任何一种或多种计算方法计算的叙述的同源性的序列。例如，如果使用zuker计算方法计算出第一序列与第二序列具有80％的同源性，那么如本文所定义第一序列与第二序列具有80％的同源性，即使通过任何其他计算方法计算出第一序列与第二序列不具有80％的同源性。作为另一个实例，如果使用zuker计算方法和pearson和lipman计算方法两者计算出第一序列与第二序列具有80％的同源性，那么如本文所定义第一序列与第二序列具有80％的同源性，即使通过smith和waterman计算方法、needleman和wunsch计算方法、jaeger计算方法或任何其他计算方法计算出第一序列与第二序列不具有80％的同源性。作为又另一个实例，如果使用每种计算方法计算出第一序列与第二序列具有80％的同源性(尽管在实践中，不同的计算方法通常会导致不同的计算同源性百分比)，那么如本文所定义第一序列与第二序列具有80％的同源性。57.53.所公开的组合物可以各种方式递送至靶细胞。例如，可以通过电穿孔、或通过脂质转染、或通过磷酸钙沉淀来递送组合物。选择的递送机制将部分取决于靶向细胞的类型以及递送是在例如体内还是体外发生。58.54.因此，除了所公开的hsp60肽和佐剂之外，组合物还可以包含例如脂质，诸如脂质体，诸如阳离子脂质体(例如，dotma、dope、dc-胆固醇)或阴离子脂质体。如果需要，脂质体可以进一步包含有助于靶向具体细胞的蛋白质。包含化合物和阳离子脂质体的组合物的施用可施用至传入靶器官的血液或吸入呼吸道以靶向呼吸道的细胞。关于脂质体，参见例如brigham等人am.j.resp.cell.mol.biol.1:95-100(1989)；felgner等人proc.natl.acad.sci usa 84:7413-7417(1987)；美国专利号4,897,355。此外，化合物可以作为微胶囊的组分施用，所述微胶囊可以靶向特定的细胞类型，诸如巨噬细胞，或者其中化合物的扩散或化合物从微胶囊的递送被设计用于特定的速率或剂量。59.55.材料可在溶液、悬浮液中(例如，掺入微粒、脂质体或细胞中)。这些材料可经由抗体、受体或受体配体来靶向具体的细胞类型。以下参考文献是使用此技术将特定蛋白质靶向肿瘤组织的示例(senter,等人,bioconjugate chem.,2:447-451,(1991)；bagshawe,k.d.,br.j.cancer,60:275-281,(1989)；bagshawe,等人,br.j.cancer,58:700-703,(1988)；senter,等人,bioconjugate chem.,4:3-9,(1993)；battelli,等人,cancer immunol.immunother.,35:421-425,(1992)；pietersz和mckenzie,immunolog.reviews,129:57-80,(1992)；以及roffler,等人,biochem.pharmacol,42:2062-2065,(1991))。这些技术可用于各种其他特定细胞类型。媒介物，诸如“隐形(stealth)”和其他抗体缀合脂质体(包括脂质介导药物靶向输送至结肠癌)、经由细胞特异性配体的受体介导靶向输送dna、淋巴细胞引导肿瘤靶向，和在体内高度特异性治疗性逆转录病毒靶向鼠科神经胶质瘤细胞。以下参考文献是使用该技术将特定蛋白质靶向肿瘤组织的实例(hughes等人,cancer research,49:6214-6220,(1989)；以及litzinger和huang,biochimica et biophysica acta,1104:179-187,(1992))。一般而言，受体涉及组成性或配体诱导的胞吞途径。这些受体群集于网格蛋白涂布的坑中、经由网格蛋白涂布的小泡来进入细胞、穿过受体在其中得以分选的酸化内涵体，然后再循环至细胞表面、变得在细胞内存储，或在溶酶体中降解。内在化途径满足各种功能，诸如营养物吸收、移除活化蛋白质、清除大分子、病毒和毒素的伺机进入、配体的解离和降解，和受体水平调控。许多受体遵循一个以上的细胞内途径，这取决于细胞类型、受体浓度、配体类型、配体效价和配体浓度。已经综述受体介导胞吞的分子和细胞机制(brown和greene,dna and cell biology 10:6、399-409(1991))。60.56.已探索用于递送抗原的与脂质体类似的胶体组是病毒体、传递体(transfersome)、古细菌体(archeosome)、囊泡(niosome)和脂质卷(cochleate)。囊泡由非离子表面活性剂制成，被认为比传统脂质体更稳定。病毒体由组装的病毒膜蛋白组成，这使得它们增强了与apc的结合并促进了细胞溶质的传递。在结构上，病毒体包含70％的天然磷脂和30％的包膜磷脂，这些磷脂来源于流感病毒。已知将抗原病毒体递送至apc可增强mhc i类和mhc ii类呈递并诱导b细胞和t细胞响应。病毒体是极好的佐剂系统，可生物降解、无毒，并且不会诱导针对自身的抗体。61.57.在一些方面，本文公开的hsp60肽(例如像seq id no:1、seq id no:2、seq id no:3、seq id no:4、seq id no:5、seq id no:6、seq id no:7、seq id no:8、seq id no:9、seq id no:10、seq id no:11、seq id no:12、seq id no:13和/或seq id no:15)有或没有其他佐剂也可以在水凝胶中递送或微胶囊化以控制释放，减少肽的降解，并提供一些佐剂效果。包含本文公开的所述hsp60肽的水凝胶、纳米颗粒和微胶囊可以使用任何合适的可生物降解聚合物制备。“聚合物”是指天然或合成的相对高分子量的有机化合物，其结构可由重复的小单元、即单体表示。聚合物的非限制性实例包括聚乙烯、橡胶、纤维素。合成的聚合物通常通过单体的加成或缩聚反应来形成。术语“共聚物”是指由两种或更多种不同的重复单元(单体残基)形成的聚合物。作为实例而非限制，共聚物可以是交替共聚物、无规共聚物、嵌段共聚物或接枝共聚物。还应考虑，在某些方面，嵌段共聚物的各种嵌段片段本身可以包含共聚物。术语“聚合物”涵盖所有形式的聚合物，包括但不限于天然聚合物、合成聚合物、均聚物、杂聚物或共聚物、加成聚合物等。62.58.在一个方面，水凝胶可包含生物相容性聚合物(例如像藻酸盐)。此类聚合物还可用于将本文公开的任何hsp60肽和佐剂缓慢释放到组织中。如本文所用，生物相容性聚合物包括但不限于多糖；亲水性多肽；聚(氨基酸)，诸如聚-l-谷氨酸(pgs)、γ-聚谷氨酸、聚-l-天冬氨酸、聚-l-丝氨酸或聚-l-赖氨酸；聚亚烷基二醇和聚环氧烷，例如聚乙二醇(peg)、聚丙二醇(ppg)和聚(环氧乙烷)(peo)；聚(氧乙基化多元醇)；聚(烯醇)；聚乙烯吡咯烷酮)；聚(羟烷基甲基丙烯酰胺)；聚(甲基丙烯酸羟烷基酯)；多糖；聚(羟基酸)；聚(乙烯醇)、聚羟基酸诸如聚(乳酸)、聚(乙醇酸)和聚(乳酸-共-乙醇酸)；聚羟基链烷酸酯，诸如聚3-羟基丁酸酯或聚4-羟基丁酸酯；聚己内酯；聚(原酸酯)；聚酸酐；聚(磷腈)；聚(丙交酯-共-己内酯)；聚碳酸酯，诸如酪氨酸聚碳酸酯；聚酰胺(包括合成和天然聚酰胺)、多肽和聚(氨基酸)；聚酯酰胺；聚酯；聚(二噁烷酮)；聚(亚烷基烷基化物)；疏水性聚醚；聚氨酯；聚醚酯；聚缩醛；聚氰基丙烯酸酯；聚丙烯酸酯；聚甲基丙烯酸甲酯；聚硅氧烷；聚(氧乙烯)/聚(氧丙烯)共聚物；聚缩酮；多磷酸盐；多羟基戊酸酯；聚草酸亚烷基酯；聚亚烷基琥珀酸酯；聚(马来酸)及其共聚物。生物相容性聚合物还可以包括聚酰胺、聚碳酸酯、聚亚烷基、聚亚烷基二醇、聚环氧烷、聚对苯二甲酸亚烷基酯、聚乙烯醇(pva)、甲基丙烯酸酯pva(m-pva)、聚乙烯醚、聚乙烯酯、聚卤乙烯、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙交酯、聚硅氧烷、聚氨酯及其共聚物、烷基纤维素、羟烷基纤维素、纤维素醚、纤维素酯、硝化纤维素、丙烯酸和甲基丙烯酸酯的聚合物、甲基纤维素、乙基纤维素、羟丙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、羟丁基甲基纤维素、醋酸纤维素、丙酸纤维素、醋酸丁酸纤维素、醋酸邻苯二甲酸纤维素、羧乙基纤维素、三醋酸纤维素、纤维素硫酸钠盐、聚(甲基丙烯酸甲酯)、聚(甲基丙烯酸乙酯)、聚(甲基丙烯酸丁酯)、聚(甲基丙烯酸异丁酯)、聚(甲基丙烯酸己酯)、聚(甲基丙烯酸异癸酯)、聚(甲基丙烯酸月桂酯)、聚(甲基丙烯酸苯酯)、聚(丙烯酸甲酯)、聚(丙烯酸异丙酯)、聚(丙烯酸异丁酯)、聚(丙烯酸十八烷基酯)、聚乙烯、聚丙烯、聚(乙二醇)、聚(环氧乙烷)、聚(对苯二甲酸乙二酯)、聚(乙烯醇)、聚(醋酸乙烯酯、聚氯乙烯、聚苯乙烯和聚乙烯吡咯烷酮、它们的衍生物、它们的直链和支化共聚物和嵌段共聚物，以及它们的共混物。示例性的可生物降解聚合物包括聚酯、聚(原酸酯)、聚(乙烯胺)、聚(己内酯)、聚(羟基丁酸酯)、聚(羟基戊酸酯)、聚酸酐、聚(丙烯酸)、聚乙交酯、聚(氨基甲酸酯)、聚碳酸酯、聚磷酸酯、聚磷腈、它们的衍生物、它们的直链和支化共聚物和嵌段共聚物，以及它们的共混物。63.59.在一些实施方案中，颗粒含有生物相容性和/或可生物降解的聚酯或聚酸酐，诸如聚(乳酸)、聚(乙醇酸)和聚(乳酸-共-乙醇酸)。颗粒可以包含一种或多种以下聚酯：包括乙醇酸单元(在本文中称为“pga”)和乳酸单元(诸如聚-l-乳酸、聚-d-乳酸、聚-d,l-乳酸、聚-l-丙交酯、聚-d-丙交酯和聚-d,l-丙交酯5，在本文中统称为“pla”)，以及己内酯单元(诸如聚(e-己内酯)，在本文中统称为“pcl”)的均聚物；和包括乳酸和乙醇酸单元的共聚物，诸如各种形式的聚(乳酸-共-乙醇酸)和聚(丙交酯-共-乙交酯)，其特征在于乳酸:乙醇酸的比率，在本文中统称为“plga”；以及聚丙烯酸酯及其衍生物。示例性聚合物还包括聚乙二醇(peg)和上述聚酯的共聚物，诸如各种形式的plga-peg或pla-peg共聚物，在本文中统称为“peg化聚合物”。在某些实施方案中，peg区可以与聚合物共价缔合以通过可切割的接头产生“peg化聚合物”。在一个方面，聚合物包含至少60％、65％、70％、75％、80％、85％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98或99％的缩醛侧基。64.60.本文公开的三嵌段共聚物包含核心聚合物，例如像聚乙二醇(peg)、聚醋酸乙烯酯、聚乙烯醇、聚乙烯吡咯烷酮(pvp)、聚环氧乙烷(peo)、聚(乙烯吡咯烷酮-共-醋酸乙烯酯)、聚甲基丙烯酸酯、聚氧乙烯烷基醚、聚氧乙烯蓖麻油、聚己内酰胺、聚乳酸、聚乙醇酸、聚(乳酸-乙醇酸)、聚(乳酸共-乙醇)酸(plga)、纤维素衍生物，诸如羟甲基纤维素、羟丙基纤维素等。65.61.用于递送hsp60肽的其他微粒系统(有或没有另外的佐剂)包括碳纳米管、二氧化硅纳米颗粒、树枝状大分子、铁蛋白纳米颗粒、肽纳米载剂、金纳米颗粒、脂质体-聚阳离子-dna(lpd)复合物、寡糖酯衍生物(oed)微粒和组合系统，例如脂质体和w/o乳液。66.2.肽67.a)蛋白质变体68.62.如本文所讨论的，有许多已知的和本文预期的hsp60蛋白和肽的变体。除了已知的功能性hsp60菌株变体之外，还有hsp60蛋白和肽的衍生物，它们也在所公开的方法和组合物中起作用。蛋白质变体和衍生物为本领域技术人员所熟知并且可以涉及氨基酸序列修饰。例如，氨基酸序列修饰通常属于三种类别中的一种或多种：取代变体、插入变体或缺失变体。插入包括氨基和/或羧基末端融合以及单个或多个氨基酸残基的序列内插入。插入通常会比氨基或羧基末端融合的插入更小，例如，以一到四个残基的数量级计。免疫原性融合蛋白衍生物，诸如实施例中描述的那些，通过融合足够大的多肽以通过体外交联赋予靶序列免疫原性或通过用编码融合物的dna转化的重组细胞培养物来制备。缺失的特征在于从蛋白质序列中去除一个或多个氨基酸残基。通常，在蛋白质分子内的任何一个位点缺失不超过约2至6个残基。这些变体通常通过对编码蛋白质的dna中的核苷酸进行位点特异性诱变来制备，从而产生编码此变体的dna，然后在重组细胞培养物中表达此dna。用于在具有已知序列的dna中在预先确定的位点处进行取代突变的技术是熟知的，例如m13引物诱变和pcr诱变。氨基酸取代通常是单个残基，但是也可同时在多个不同位置处发生；插入通常以约1至10个氨基酸残基的数量级计；并且缺失的范围是约1至30个残基。缺失或插入优选地在相邻的对中进行，即2个残基缺失或2个残基插入。取代、缺失、插入或它们的任何组合可以进行组合以得到最终的构建体。突变不可以将序列置于阅读框外，并且优选地将不创建可以产生二级mrna结构的互补区。取代变体是其中至少一个残基已被去除并在其位置插入不同残基的变体。此类取代一般根据下表1和表2进行并且被称为保守取代。69.表1：氨基酸缩写[0070][0071]表2：氨基酸取代[0072]原始残基示例性保守替代，其他在本领域中是已知的。[0073][0074][0075]63.通过选择比表2中的那些更不保守的取代，即选择在其维持(a)取代区域中的多肽骨架的结构，例如以片或螺旋构象形式，(b)分子在靶位点的电荷或疏水性，或(c)侧链的大部分的作用方面更显著不同的残基来造成在功能或免疫学同一性方面的实质性变化。一般而言预期会在蛋白质性质上产生最大变化的取代将是如下取代，其中(a)亲水残基，例如丝氨酰基或苏氨酰基，取代疏水残基，例如为亮氨酰基、异亮氨酰基、苯丙氨酰基、缬氨酰基或丙氨酰基(或被该疏水残基取代)；(b)半胱氨酸或脯氨酸取代任何其他残基(或被任何其他残基取代)；(c)具有正电侧链的残基，例如赖氨酰基、精氨酰基或组氨酰基取代具有负电性电荷的残基例如谷氨酰基或天冬氨酰基(或被该具有负电性电荷的残基取代)；或(d)具有庞大侧链的残基，例如苯丙氨酸取代不具有这种侧链的残基例如甘氨酸(或被不具有这种侧链的残基取代)，在这种情况下，(e)通过增加硫酸化和/或糖基化位点的数量来进行。[0076]64.例如，用生物学和/或化学上相似的另一个氨基酸残基替换一个氨基酸残基对于本领域技术人员来说是已知的保守取代。例如，保守取代将用一个疏水残基替换另一个，或用一个极性残基替换另一个。取代包括例如像gly、ala；val、ile、leu；asp、glu；asn、gln；ser、thr；lys、arg；以及phe、tyr的组合。每个明确公开的序列的此类保守取代的变体包括在本文提供的镶嵌多肽中。例如，seq id no:15的公开保守衍生物在seq id no:6中示出，其中2、3位的异亮氨酸(i)变为缬氨酸(v)，13位的异亮氨酸(i)变为亮氨酸(l)，并且残基7处的赖氨酸(k)已变为谷氨酰胺(q)。[0077]65.可以采用取代或缺失诱变来插入n-糖基化(asn-x-thr/ser)或o-糖基化(ser或thr)的位点。也可能需要缺失半胱氨酸或其他不稳定残基。潜在蛋白水解位点(例如arg)的缺失或取代例如通过缺失碱性残基中的一个或用谷氨酰胺基或组氨酰基残基取代一个残基来完成。[0078]66.某些翻译后衍生化是重组宿主细胞对所表达多肽的作用的结果。谷氨酰胺酰基和天冬酰胺酰基残基经常在翻译后脱去酰氨基成对应的谷氨酰基和天冬氨酰基残基。或者，这些残基在温和的酸性条件下被脱酰胺。其他翻译后修饰包括脯氨酸和赖氨酸的羟基化、丝氨酰或苏氨酰残基的羟基基团磷酸化、赖氨酸、精氨酸和组氨酸侧链的邻氨基基团甲基化(t.e.creighton,proteins:structure and molecular properties,w.h.freeman&co.,san francisco第79-86页[1983])，n-末端氨基的乙酰化，以及在某些情况下，c-末端perkin trans.i 307-314(1982)(‑‑ch‑‑ch‑‑,cis and trans)；almquist等人j.med.chem.23:1392-1398(1980)(‑‑coch2‑‑)；jennings-white等人tetrahedron lett 23:2533(1982)(‑‑coch2‑‑)；szelke等人european appln,ep 45665ca(1982):97:39405(1982)(‑‑ch(oh)ch2‑‑)；holladay等人tetrahedron.lett 24:4401-4404(1983)(‑‑c(oh)ch 2‑‑)；以及hruby life sci 31:189-199(1982)(‑‑ch 2‑‑s‑‑)中，所述文献中的每一个都以引用的方式并入本文。特别优选的非肽键是-ch2nh‑‑。应当理解肽类似物可以在键原子之间具有一个以上的原子，诸如b-丙氨酸、g-氨基丁酸等。[0086]74.氨基酸类似物和类似物以及肽类似物通常具有增强的或所需的特性，诸如更经济的生产、更大的化学稳定性、增强的药理学特性(半衰期、吸收、效力、功效等)，改变的特异性(例如，广谱的生物活性)、降低的抗原性等。[0087]75.d-氨基酸可用于产生更稳定的肽，因为d氨基酸不被肽酶等识别。用相同类型的d-氨基酸系统性取代共有序列的一个或多个氨基酸(例如，d-赖氨酸代替l-赖氨酸)可以用于生成更稳定的肽。半胱氨酸残基可以用于将两个或更多个肽环化或附接在一起。这有利于将肽限制在具体的构象中。[0088]3.药物载剂/药物产品的递送[0089]76.如上所述，组合物还可在药学上可接受的载剂中在体内施用。“药学上可接受”是指不是生物学上或其他方面不希望的材料，即，所述材料可与核酸或载体一起施用至受试者，而不导致任何不希望的生物作用或以有害方式与含有所述材料的药物组合物中的任何其他组分相互作用。载剂将如本领域的技术人员熟知的自然地选择以使活性成分的任何降解最小化并且使受试者中的任何不利的副作用最小化。[0090]77.组合物可经口、肠胃外(例如，静脉内)、通过肌肉内注射、通过腹膜内注射、经皮、体外、局部等来施用，包括局部鼻内施用或通过吸入剂来施用。如本文所用，“局部鼻内施用”意指经由一个或两个鼻孔将组合物递送至鼻子和鼻部通道并且可包括通过喷雾机构或液滴机构，或经由核酸或载体的气雾化来递送。通过吸入剂来施用组合物可通过喷雾或液滴机构经鼻或口来递送。也可以通过插管直接递送到呼吸系统的任何区域(例如肺)。所需要的组合物的确切量在各个受试者之间不同，这取决于受试者的物种、年龄、体重和一般情况、所治疗的过敏病症的严重性、所使用的具体核酸或载体、其施用模式等。因此，不可能指定每一种组合物的确切量。然而，在给出本文中的教义的情况下，适当量可由本领域普通技术人员仅使用常规实验即可确定。[0091]78.肠胃外施用组合物，如果使用，一般由注射来表征。注射剂可以常规形式来制备，以液体溶液或悬浮液形式、适合于在注射之前溶解悬浮于液体中的固体形式，或以乳液形式。肠胃外施用的最近改进方法涉及使用缓慢释放或持续释放系统以使得维持恒定剂量。参见例如美国专利号3,610,795，其以引用的方式并入本文。[0092]79.材料可在溶液、悬浮液中(例如，掺入微粒、脂质体或细胞中)。这些材料可经由抗体、受体或受体配体来靶向具体的细胞类型。以下参考文献是使用此技术将特定蛋白质靶向肿瘤组织的示例(senter,等人,bioconjugate chem.,2:447-451,(1991)；bagshawe,k.d.,br.j.cancer,60:275-281,(1989)；bagshawe,等人,br.j.cancer,58:700-703,(1988)；senter,等人,bioconjugate chem.,4:3-9,(1993)；battelli,等人,cancer immunol.immunother.,35:421-425,(1992)；pietersz和mckenzie,immunolog.reviews,129:57-80,(1992)；以及roffler,等人,biochem.pharmacol,42:2062-2065,(1991))。媒介物，诸如“隐形”和其他抗体缀合脂质体(包括脂质介导药物靶向输送至结肠癌)、经由细胞特异性配体的受体介导靶向输送dna、淋巴细胞引导肿瘤靶向，和在体内高度特异性治疗性逆转录病毒靶向鼠科神经胶质瘤细胞。以下参考文献是使用该技术将特定蛋白质靶向肿瘤组织的示例(hughes等人,cancer research,49:6214-6220,(1989)；以及litzinger和huang,biochimica et biophysica acta,1104:179-187,(1992))。一般而言，受体涉及组成性或配体诱导的胞吞途径。这些受体群集于网格蛋白涂布的坑中、经由网格蛋白涂布的小泡来进入细胞、穿过受体在其中得以分选的酸化内涵体，然后再循环至细胞表面、变得在细胞内存储，或在溶酶体中降解。内在化途径满足各种功能，诸如营养物吸收、移除活化蛋白质、清除大分子、病毒和毒素的伺机进入、配体的解离和降解，和受体水平调控。许多受体遵循一个以上的细胞内途径，这取决于细胞类型、受体浓度、配体类型、配体效价和配体浓度。已经综述受体介导胞吞的分子和细胞机制(brown和greene,dna and cell biology10:6,399-409(1991))。[0093]a)药学上可接受的载剂[0094]80.包括抗体的组合物可与药学上可接受的载剂组合来用于治疗。[0095]81.合适的载剂及其制剂描述于remington:the science and practice of pharmacy(第19版)a.r.gennaro编,mack publishing company,easton,pa 1995中。通常，适当量的药学上可接受的盐用于制剂中以使得制剂等渗。药学上可接受的载剂的实例包括但不限于盐水、林格氏溶液和葡萄糖溶液。溶液的ph优选地是约5至约8，并且更优选地约7至约7.5。其他载剂包括持续释放制剂诸如含有抗体的固体疏水性聚合物的半渗透性基质，所述基质以成形制品形式，例如，薄膜、脂质体或微粒。本领域技术人员将显而易见，取决于例如施用途径和所施用组合物的浓度，某些载剂可能是更优选的。[0096]82.药物载剂是本领域技术人员已知的。这些最通常将用于向人施用药物的标准载剂包括溶液，诸如无菌水、盐水和生理ph的缓冲溶液。组合物可以肌肉内或皮下施用。其他化合物将根据本领域技术人员使用的标准程序来施用。[0097]83.除了所选择的分子以外，药物组合物可包括载剂、增稠剂、稀释剂、缓冲剂、防腐剂、表面活性剂等。药物组合物还可包括一种或多种活性成分诸如抗微生物剂、抗炎剂、麻醉剂等。[0098]84.药物组合物可取决于是否需要局部或全身治疗，以及待治疗的区域来以许多方法施用。施用可为局部(包括眼、阴道、直肠、鼻内)、经口、通过吸入或肠胃外，例如通过静脉内滴注、皮下、腹膜内或肌肉内注射。所公开的抗体可静脉内、腹膜内、肌肉内、皮下、腔内或经皮施用。[0099]85.用于胃肠外施用的制剂包括无菌水性或非水性溶液、悬浮液以及乳液。非水性溶剂的实例为丙二醇、聚乙二醇、植物油(诸如橄榄油)和可注射有机酯(诸如油酸乙酯)。水性载剂，包括水、醇/水性溶液、乳液或悬浮液，包括盐水和缓冲介质；肠胃外媒介物包括氯化钠溶液、林格氏葡萄糖、葡萄糖和氯化钠、乳酸林格氏溶液或不挥发性油。静脉内媒介物包括流体和营养补充剂、电解质补充剂(诸如基于林格氏葡萄糖的那些补充剂)等。防腐剂和其他添加剂也可存在于例如像抗微生物剂、抗氧化剂、螯合剂和惰性气体等中。[0100]86.局部施用的制剂可包括软膏、洗剂、乳膏、凝胶、滴剂、栓剂、喷雾剂液体和粉末。常规药物载剂、水性、粉末或油性基质、增稠剂等可以是必需或所需的。[0101]87.经口施用的组合物包括粉末或颗粒、水或非水性介质中的悬浮液或溶液、胶囊、囊剂或片剂。增稠剂、调味料、稀释剂、乳化剂、分散助剂或粘合剂可以是所需的。[0102]88.一些组合物可潜在地以药学上可接受的酸或碱加成盐形式来施用，所述盐通过与无机酸如盐酸、氢溴酸、高氯酸、硝酸、硫氰酸、硫酸和磷酸，和有机酸如甲酸、醋酸、丙酸、乙醇酸、乳酸、丙酮酸、草酸、丙二酸、琥珀酸、马来酸和富马酸反应，或与无机碱如氢氧化钠、氢氧化铵、氢氧化钾和有机碱如单、二、三烷基和芳基胺和取代乙醇胺反应来形成。[0103]b)治疗用途[0104]89.可以凭经验确定施用组合物的有效剂量和时间表，并且做出此类决定是在本领域的技术范围内的。组合物施用的剂量范围是大到足以产生影响病症症状的所需效果的那些剂量范围。剂量不应如此大以致于产生不利的副作用，诸如不必要的交叉反应、过敏反应等。一般而言，剂量将随着患者的年龄、病状、性别和疾病程度、施用途径，或是否方案中包含其他药物而变化，并且可由本领域技术人员确定。在有任何禁忌症的情况下，可以由个别医生调整剂量。剂量可变化，并且可以每日一个或多个剂量施用来施用，历时一天或几天。关于给定类别药物产品的适当剂量，指导可发现于文献中。例如，选择抗体的适当剂量的指导可发现于关于抗体的治疗性使用的文献中，例如handbook of monoclonal antibodies,ferrone等人,编,noges publications,park ridge,n.j.,(1985)第22章和第303-357页；smith等人,antibodies in human diagnosis and therapy,haber等人,编,raven press,new york(1977)第365-389页。取决于以上提到的因素，单独使用的抗体的通常每日剂量可在每天约1μg/kg直至100mg/kg体重或更多的范围内。[0105]c.治疗心力衰竭的方法[0106]90.应当理解并且在本文中预期到减少由hsp60引起的炎性损伤的能力可以降低、抑制、减少、改善和/或预防心力衰竭、心脏病或心脏功能障碍和/或与此相关的任何症状(例如像，呼吸急促(呼吸困难)；疲劳和虚弱；腿部、脚踝和脚部肿胀(水肿)；心跳加快或不规则；运动能力降低；持续咳嗽或喘息，并伴有白色或粉红色带血的痰；腹部肿胀(腹水)；和/或胸痛)。因此，本文公开了治疗、减少、抑制、降低、改善和/或预防受试者的心力衰竭、心脏病或心脏功能障碍进展为慢性心力衰竭的方法，其包括向受试者施用本文公开的任何包含hsp60和佐剂的组合物。例如，在一个方面，本文公开了治疗、减少、抑制、降低、改善和/或预防受试者的心力衰竭、心脏病或心脏功能障碍的方法，其包括向受试者施用包含hsp60肽(例如像kfgadaralmlqgvd(seq id no:1)、lmlqgvdlladavav(seq id no:2)、ekkdrvtdalnatra(seq id no:3)、iqsivpaleianahr(seq id no:4)、aelkkqskpvt(seq id no:5)、evvegmqfdrgylsp(seq id no:6)、keekdpgmgamggmg(seq id no:7)、vtdalnatraaveeg(seq id no:8)、tlvlnrlkvglqvvavk(seq id no:9)、eeiaqvatisang(seq id no:10)、avkapghfdnrkn(seq id no:11)、kkqskpvttpee(seq id no:12)、eipkeekdpgmgamg(seq id no:13)或eiiegmkfdrgyisp(seq id no:15))和佐剂(例如像明矾、氢氧化铝、磷酸铝、混合铝盐、非离子嵌段共聚物(例如像crl-1005)、佐剂系统04(as04)(氢氧化铝和单磷酰脂质a(mpl)的组合)或佐剂系统03(as03)(由油性化合物d,l-α-生育酚(维生素e)和角鲨烯以及乳化剂聚山梨醇酯80组成))的组合物。[0107]91.此外，减少由hsp60引起的炎症损伤的能力可以减少、抑制、降低、改善和/或预防心力衰竭、心脏病或心脏功能障碍进展为慢性心力衰竭。正如本技术通篇所指出的，急性心力衰竭通常会导致死亡或进展为慢性心力衰竭，而慢性心力衰竭本身除了心脏移植外也没有确定性治疗。目前单次心力衰竭住院后的1年死亡率为36％，并且随着个体一生中每次住院而增量式增加。在一个方面，本文公开了治疗、减少、抑制、降低、改善和/或预防受试者的心力衰竭、心脏病或心脏功能障碍进展为慢性心力衰竭的方法，其包括向受试者施用本文公开的任何包含hsp60和佐剂的组合物。例如，在一个方面，本文公开了治疗、减少、抑制、降低、改善和/或预防受试者的心力衰竭、心脏病或心脏功能障碍进展为慢性心力衰竭的方法，其包括向受试者施用包含hsp60肽(例如像kfgadaralmlqgvd(seq id no:1)、lmlqgvdlladavav(seq id no:2)、ekkdrvtdalnatra(seq id no:3)、iqsivpaleianahr(seq id no:4)、aelkkqskpvt(seq id no:5)、evvegmqfdrgylsp(seq id no:6)、keekdpgmgamggmg(seq id no:7)、vtdalnatraaveeg(seq id no:8)、tlvlnrlkvglqvvavk(seq id no:9)、eeiaqvatisang(seq id no:10)、avkapghfdnrkn(seq id no:11)、kkqskpvttpee(seq id no:12)、eipkeekdpgmgamg(seq id no:13)或eiiegmkfdrgyisp(seq id no:15))和佐剂(例如像明矾、氢氧化铝、磷酸铝、混合铝盐、非离子嵌段共聚物(例如像crl-1005)、佐剂系统04(as04)(氢氧化铝和单磷酰脂质a(mpl)的组合)或佐剂系统03(as03)(由油性化合物d,l-α-生育酚(维生素e)和角鲨烯以及乳化剂聚山梨醇酯80组成))的组合物。[0108]92.在一些情况下，可以使用所公开的方法治疗的心力衰竭可能是心脏病或功能障碍造成的损伤增加的结果。应当理解并且在本文中预期到，本文公开的包含hsp60肽和佐剂的组合物可用于治疗、减少、抑制、降低、改善和/或预防心脏病或心脏功能障碍进展为心力衰竭，从而降低心力衰竭的风险，降低心力衰竭的严重性，和/或另外抑制或治疗心力衰竭。因此，本文公开了治疗、减少、抑制、降低、改善和/或预防心力衰竭、心脏病、功能障碍的方法，以及治疗、减少、抑制、降低、改善和/或预防心力衰竭、心脏病、功能障碍进展为慢性心力衰竭的方法；其中心脏病或心脏功能障碍包括冠状动脉疾病、心肌梗塞、高血压、心肌病、心肌炎、先天性心脏缺陷、缺血再灌注损伤、心肌缺血、心肌再灌注、心内膜下缺血、高安氏动脉炎、心房颤动、出血性中风、短暂性缺血发作或心律失常。此外，糖尿病、hiv、甲状腺功能亢进、甲状腺功能减退或铁(血色素沉着症)或蛋白质(淀粉样变性)积聚、攻击心肌的病毒、严重感染、过敏反应、肺部血块、使用某些药物或任何影响全身的疾病都可能导致心力衰竭。[0109]93.还应理解，通过所公开的方法治疗的心力衰竭不一定是疾病或功能障碍导致的心脏损伤的结果，也可以是医学治疗导致的心脏损伤的结果。例如，心力衰竭是手术引起的(例如像在为移植而保存器官期间或在心脏手术期间(包括冠状动脉搭桥手术、支架植入术、心脏瓣膜置换术、肌切除术、心肌血管重建术、先天性心脏病手术、血管成形术、斑块切除术和/或心肌成形术)发生的手术引起的缺血/再灌注事件)。因此，在一个方面，本文公开了治疗、减少、抑制、降低、改善和/或预防心力衰竭、心脏病、功能障碍的方法，以及治疗、减少、抑制、降低、改善和/或预防心力衰竭、心脏病或心脏功能障碍进展为慢性心力衰竭；其中心力衰竭是手术引起的(例如像在为移植而保存器官期间或在心脏手术期间(包括冠状动脉搭桥手术、支架植入术、心脏瓣膜置换术、肌切除术、心肌血管重建术、先天性心脏病手术、血管成形术、斑块切除术和/或心肌成形术)发生的手术引起的缺血/再灌注事件)。[0110]94.所公开的方法在一个方面被设计为预防心脏病，最终抑制、减少或预防心力衰竭的发生、严重性或延迟其发作、进展为慢性心力衰竭或对心脏的进一步损伤。在这种情况下，可以在存在心脏病或功能障碍之后但在心力衰竭发作或完全心力衰竭发生之前施用本文公开的包含hsp60肽和佐剂的组合物。相似地，在由于医疗程序而具有心力衰竭的风险或可导致心力衰竭的增加的损伤的情况下，可以在任何手术程序前、手术期间、或手术后但在任何心力衰竭或其症状之前施用本文公开的包含hsp60肽和佐剂的组合物。在一个方面，包含hsp60肽和佐剂的组合物可以施用于具有心力衰竭风险、正在经历具有增加的心力衰竭风险的医疗程序(例如像在为移植而保存器官期间或在心脏手术期间(包括冠状动脉搭桥手术、支架植入术、心脏瓣膜置换术、肌切除术、心肌血管重建术、先天性心脏病手术、血管成形术、斑块切除术和/或心肌成形术)发生的手术引起的缺血/再灌注事件)的受试者，其中包含hsp60肽和佐剂的组合物在手术时或经历增加心力衰竭风险或增加导致心力衰竭的心脏损伤风险的医疗程序之前至少1小时、2小时、3小时、4小时、5小时、6小时、7小时、8小时、9小时、10小时、11小时、12小时、13小时、14小时、15小时、16小时、17小时、18小时、19小时、20小时、21小时、22小时、23小时、24小时、26小时、28小时、30小时、32小时、34小时、35小时、36小时、38小时、40小时、42小时、44小时、46小时、48小时、54小时、60小时、66小时、72小时、78小时、84小时、90小时、96小时、5天、6天、7天、8天、9天、10天、11天、12天、13天、14天、15天、16天、17天、18天、19天、20天、21天、22天、23天、24天、25天、26天、27天、28天、29天、30天、31天、35天、42天、49天、54天、60天、63天、70天、77天、84天、90天、93天、4个月、5个月、6个月、7个月、8个月、9个月、10个月、11个月或12个月施用。[0111]95.在一个方面，应当理解并且在本文中预期了心力衰竭可以是急性的或慢性的。因此，并非所有的治疗都必须是预防性的，但是所公开的方法也可以在心力衰竭发作之后或在已经检测到心力衰竭的一种或多种症状之后用于治疗。因此，本文公开了治疗、减少、抑制、降低、改善和/或预防心力衰竭、心脏病、功能障碍的方法和/或治疗、减少、抑制、降低、改善和/或预防心力衰竭、心脏病或心脏功能障碍进展为慢性心力衰竭的方法，其中心力衰竭是慢性心力衰竭并且组合物在心力衰竭发作之后施用于受试者，或其中心力衰竭是急性心力衰竭并且组合物在与心力衰竭相关的症状发作之后施用于受试者。在一些情况下，其中心力衰竭是手术引起的，包含hsp60肽和佐剂的组合物在手术后至少1小时、2小时、3小时、4小时、5小时、6小时、7小时、8小时、9小时、10小时、11小时、12小时、13小时、14小时、15小时、16小时、17小时、18小时、19小时、20小时、21小时、22小时、23小时、24小时、26小时、28小时、30小时、32小时、34小时、35小时、36小时、38小时、40小时、42小时、44小时、46小时、48小时、54小时、60小时、66小时、72小时、78小时、84小时、90小时、96小时、5天、6天、7天、8天、9天、10天、11天、12天、13天、14天、15天、16天、17天、18天、19天、20天、21天、22天、23天、24天、25天、26天、27天、28天、29天、30天、31天、35天、42天、49天、54天、60天、63天、70天、77天、84天、90天、93天、4个月、5个月、6个月、7个月、8个月、9个月、10个月、11个月或12个月施用。[0112]96.虽然目前的疗法集中在慢性心力衰竭的神经激素系统上，但它们仍然仅显示进展减缓，并且没有解决在急性情形中发生的初始发作和潜在过程。显著导致预后恶化的潜在机制是细胞凋亡或程序性细胞死亡。虽然此类细胞凋亡发生在所有形式的心力衰竭中，并导致收缩细胞的损失，但它还可以另外地激活神经激素系统，并被证明是最终导致慢性心力衰竭和死亡的潜在原因之一。早期阻断这种激活可以产生长期影响，并且阻止或延迟慢性心力衰竭的发作。因此，在一些方面，本文公开了治疗、减少、抑制、降低、改善和/或预防受试者的与心力衰竭、心脏病或心脏功能障碍相关的细胞凋亡的方法，其包括向受试者施用包含hsp60肽(例如像，kfgadaralmlqgvd(seq id no:1)、lmlqgvdlladavav(seq id no:2)、ekkdrvtdalnatra(seq id no:3)、iqsivpaleianahr(seq id no:4)、aelkkqskpvt(seq id no:5)、evvegmqfdrgylsp(seq id no:6)、keekdpgmgamggmg(seq id no:7)、vtdalnatraaveeg(seq id no:8)、tlvlnrlkvglqvvavk(seq id no:9)、eeiaqvatisang(seq id no:10)、avkapghfdnrkn(seq id no:11)、kkqskpvttpee(seq id no:12)、eipkeekdpgmgamg(seq id no:13)或eiiegmkfdrgyisp(seq id no:15))和佐剂(例如像明矾、氢氧化铝、磷酸铝、混合铝盐、非离子嵌段共聚物(例如像crl-1005)、佐剂系统04(as04)(氢氧化铝和单磷酰脂质a(mpl)的组合)或佐剂系统03(as03)(由油性化合物d,l-α-生育酚(维生素e)和角鲨烯以及乳化剂聚山梨醇酯80组成))的组合物。[0113]d.实施例[0114]97.提出以下实施例以便向本领域的普通技术人员提供对如何制造和评价本文要求保护的化合物、组合物、制品、装置和/或方法的完整公开和描述，并且意图仅是示例性的而不意图限制本公开。已经努力确保关于数字(例如，量、温度等)的准确性，但是应该考虑一些误差和偏差。除非另外指出，否则份数是重量份，温度是以℃计或在环境温度下，并且压力是大气压下或接近大气压。[0115]1.实施例1[0116]98.使用来自移植时移植的心脏的人体组织和小鼠心力衰竭模型，确定了与心力衰竭密切相关的几种关键蛋白质。本文公开的疫苗集中于这些分子中的一个，hsp60，它是心力衰竭如何继续恶化的关键。因此，目前提出的疗法与所有其他已批准的疗法不同，因为它关注于在hsp60分子能引起心脏的进一步损伤前通过使用天然免疫系统吸收hsp60分子来阻断该分子。[0117]99.最初的测试是在由血压升高诱导的心力衰竭的小鼠模型上进行的。这种诱导类似于人的非缺血性心力衰竭，并且约占所有心力衰竭病例的50％。最初，注射了与明矾分子复合的整个hsp60分子。将这种hsp60和明矾的复合分子给予正常小鼠，以通过识别针对hsp60整个分子的igg特异性抗体的存在来确定诱导最大免疫响应的最佳递送方法。然后，在小鼠动物模型中使用的心力衰竭方案开始之前，使用这种递送方法来“疫苗接种”小鼠。然后通过磁共振成像(mri)对动物进行成像，以确定与正常小鼠(对照)和仅经历心力衰竭(心力衰竭)诱导而没有疫苗的小鼠相比，疫苗(心力衰竭+明矾-hsp60)对心脏收缩特性的任何影响。如图1所示，心脏的射血分数在心力衰竭组中降低，但在那些用疗法治疗的动物中仍然较高。另外的指标，诸如舒张末期直径和lv质量与观察到的功能改善一致。这表明那些给予疫苗的动物的功能得到了显著的保留。[0118]100.根据mri数据，研究了心脏中众所周知的其他心力衰竭标志物，包括纤维化，这是心力衰竭的组织学标志。纤维化不仅是诊断性的，而且通过增加僵硬度和降低心脏在心动周期中收缩和放松的能力来增加对心脏的额外应力。图2示出了每组中两只代表性动物的纤维化染色(蓝色)。纤维化的定量在图3中示出，并清楚地证明了心力衰竭中纤维化的增加，这种增加在疫苗处理的动物中大大减少。这证明了疫苗对通常与心力衰竭相关的纤维化的抑制。[0119]101.当进展为心力衰竭时，心脏的大小也会增加，这会进一步降低其收缩和泵送足够血液以维持器官适当灌注的能力。在心力衰竭的小鼠模型中，心脏重量非常显著增加，如图4所示，并且这种重量增加通过使用明矾-hsp60疫苗来部分阻断。[0120]102.已进行了额外的实验以确定已知在心力衰竭中高发的细胞凋亡是否响应于疫苗治疗而降低。如下图4中所示，疫苗组(心力衰竭+明矾-hsp60)的细胞凋亡降低。[0121]103.此外，衍生自hsp60序列的肽可与明矾组合使用，可以提供比上述初步数据中使用的全蛋白的使用更强大和更具特异性的疫苗。用全hsp60蛋白免疫在心力衰竭的动物模型中是有效的。然而，如果呈递的抗原是全长蛋白质的较小子集，则疫苗更有可能更具特异性和更有效。肽响应可以降低副作用，同时提高疫苗的有效性。考虑到这一点，设计了最有可能产生响应并且可以优先于全蛋白使用的肽序列区。为了实现这一目标，使用了智能设计技术，以使用从美国国家过敏和传染病研究所(抗体表位预测)、美国国家医学图书馆(blast序列比对)和蛋白质折叠预测数据库获得的工具来预测哪些肽最具抗原性。[0122]e.序列[0123]seq id no:1[0124]kfgadaralmlqgvd[0125]seq id no:2[0126]lmlqgvdlladavav[0127]seq id no:3[0128]ekkdrvtdalnatra[0129]seq id no:4[0130]iqsivpaleianahr[0131]seq id no:5[0132]aelkkqskpvt[0133]seq id no:6[0134]evvegmqfdrgylsp[0135]seq id no:7[0136]keekdpgmgamggmg[0137]seq id no:8[0138]vtdalnatraaveeg[0139]seq id no:9[0140]tlvlnrlkvglqvvavk[0141]seq id no:10[0142]eeiaqvatisang[0143]seq id no:11[0144]avkapghfdnrkn[0145]seq id no:12[0146]kkqskpvttpee[0147]seq id no:13[0148]eipkeekdpgmgamg[0149]seq id no:14：人hsp60的氨基酸序列[0150][0151]seq id no:15[0152]eiiegmkfdrgyisp









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